本发明涉及上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的应用及其制备方法。通过对上皮细胞的培养、鉴定，上皮细胞活性肽的获取，与番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至油精油合成复合物，利用纳米脂质载体技术(nlc)逆相蒸发-冷冻干燥法制备上皮细胞活性肽复合物柔性纳米微脂囊，达到与相关受体结合，诱导细胞间连接通讯，将内信号传到通路开放，显著激活表型相关细胞活性，淬灭单线态氧和清出过氧化自由基，有效抑制淀粉样蛋白(aβ)介导的氧化应激和细胞凋亡。促进表皮细胞修复、再生；利用其无毒安全、天然防腐、容易实现工业化生产等优点，提供一种因多种原因引起的皮肤、组织损害修复、再生的化妆品和组织修复剂。
背景技术：
作为人体与外环境间第一道屏障的皮肤，是人体最大的器官，有助阻断外来物质入侵、防止理化损伤、阻止体液流失、感受外界刺激的器官；还具有调节体温、分泌多种活性物质等重要功能。同时皮肤也时刻与各种化学、物理和生物危害因素相接触，极易受到伤害、患病。一旦受到伤害而未得到修复将会使机体产生很大的影响甚至患病。
表皮组织在受到伤害后一般都能自行修复。但受到某些疾病、因素、自身基因的影响，阻碍了表皮细胞的分化、增殖，导致细胞组织长久不能修复、异常增殖或老化、变性(老年斑、淀粉样蛋白(aβ)介导)。基于人表皮活性因子的这些生物特性，hegf已广泛应用于医学临床领域，除了烧伤、烫伤、胃肠道的修复以外，还主要用于促进表皮的修复和再生，用于术后皮肤伤口的愈合、激光的伤口愈合、皮肤溃疡的愈合；上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊是将其活性物质包裹在类脂物质(黄豆卵磷脂)中的一种微小且空心的球状物质，其直径革命性地比传统护肤品缩小1000倍(以纳米为计算单位)，便可以轻易穿透毛孔和角质层细胞的间隙，进入皮肤深层，顺利把hegf、番茄红素树脂等有效成分送到真皮层和基底层，发挥其修复上皮组织、抑制淀粉样蛋白(aβ)介导的氧化应激和细胞凋亡的作用。具有护肤、修复、抗皱、抗衰、美白、防晒和晒后修复、抑制粉刺和痤疮、消斑等作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊，以解决上述技术问题中的至少一个方面。
本发明的第二个目的在于提供上述上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的制备方法，以解决上述技术问题中的至少一个方面。
本发明的第三个目的在于提供上述上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊应用，以解决上述技术问题中的至少一个方面。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊，主要利用逆相蒸发-冷冻干燥法制备神经干细胞活性因子复合柔性纳米微脂囊，微脂囊其其平均粒径应为(80.66±3.86)nm，zeta电位为(61.22±7.62)mv，平均包封率为(37.86±4.77)％；平均载药量为(6.58±1.27)％。所述的上皮细胞活性肽复合物至少有以下一种成分组成：上皮细胞活性肽、番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至精油复合而成：上皮细胞活性肽10μg/l20～30份、亚麻籽油番茄红素10～15份、薰衣草精油3～10份、牛至精油3～10份。
本发明的上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊，具有以下的有益效果：
(1)上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊是一种用特殊的脂质体(黄豆卵磷脂)包裹着的多种活性成分的微粒，直径只有30nm的微脂囊能顺利通过50nm的皮肤角质层，把有效成分送到真皮层和基底层。微脂囊没有固定的结构，是许多小分子聚集而成的聚合体。hegf表面带有正电荷与内皮细胞基膜上的负电荷相吸，使其聚集于上皮细胞周围，能促进细胞的开放；添加p糖蛋白抑制剂，抑制进入皮肤细胞泵出。有效地延长了hegf-脂质体在皮肤中的作用时间；
(2)上皮细胞活性肽系由多个氨基酸组成的多肽，其纳米微脂囊深入皮肤组织内，可促进细胞增殖、分裂，启动创伤修复过程，刺激内皮细胞、角化细胞、平滑肌细胞生成，促进透明质酸、糖蛋白、纤维连接蛋白等细胞外基质合成，增加皮肤血流量，改善其微循环，为表皮细胞修复创造良好的环境，避免代谢产物聚集，影响创面修复。
(3)通过微脂囊包覆技术将上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊活性成分包覆形成纳米级的微脂囊，一方面可以提高上皮细胞活性肽复合物的稳定性，使其具有长效持久的缓释功能，维持上皮细胞活性存在、促进上皮细胞分化、决定轴突生长方向、诱导突起生长；另一方面，在确保不破坏上皮细胞的前提下，将上皮细胞活性肽采用微脂囊包覆技术包覆形成微脂囊后，能提高上皮细胞活性肽复合物成分的相容性，使其更加方便地应用于制剂中。
(4)纳米微脂囊由于粒径处于纳米级范围，具有突出的纳米效应，即小尺寸效应和表面效应。小尺寸效应意味着其穿透生理组织、皮肤屏障能力很强，渗透力增强，可有效携带上皮细胞活性肽活性物质轻易穿透皮肤和基底组织，可增加皮肤羟脯氨酸表达，促进胶原合成，刺激表皮细胞增殖，提高其修复速率。。
(5)选择微脂囊混悬液、脂质体冻干粉和上皮细胞活性肽冻干粉。制备成脂质体或冻干粉末，都可提高其稳定性。
(6)在原料方面，所使用的亚麻籽油番茄红素树脂、薰衣草精油、牛至精油高抗氧化复合物活性成分均为纯天然植物提取物，牛至除抗氧化作用外，还是天然防腐剂，从而保证了原料的高效、无毒、防腐、安全；增加上皮细胞活性肽稳定性和互补性。
(7)在一些具体的实施方式中，微脂囊的包覆率可以为78.2～90.0％，载药量可以为20.0～25.0％。由此，可以使得微脂囊的上皮细胞再生效果更佳。
根据本发明的另一方面，本发明还提供了上述上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的制备方法，包括以下步骤：
(1)获取人上皮细胞-培养-鉴定-提纯-获取10μg/l上皮细胞活性肽；亚麻籽油番茄红素树脂：22％番茄固体物按1:1用微波萃取法制成570mg/l番茄红素的亚麻籽番茄油；蒸馏方法获取薰衣草精油；蒸馏方法获取牛至精油
(2)采用逆相蒸发－冷冻干燥法制备上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊；
(3)进行上皮细胞活性肽含量检测[酶联免疫吸附法(elisa)]；
(4)采用由fry等提出的sephadexg－50微柱离心法分离柔性纳米脂囊和游离上皮细胞活性肽；
(7)精确观察其形态；
(8)精确测定变形性：
(9)严格稳定性鉴定：
本发明的制备上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊的方法，采用特定的加入顺序，不仅可以保证上皮细胞活性肽复合物的复合结构，还可以使得绝大部分上皮细胞活性肽复合物被包裹，减少浪费高效利用。
根据本发明的又一方面，还提供了上述上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊在化妆品、医疗上的应用。将本发明的上皮细胞活性肽复合物纳米微脂囊添加多种化妆品(霜剂、膏剂、喷剂、面膜)、医用生物制剂中，一般按生物制剂总质量的20％～30％来添加，可以制成注射剂、口服剂、外用喷剂(涂抹膏、霜剂)等类型的生物制剂。