![用于治疗癌症的免疫调控性组合物和方法与流程](http://img.xjishu.com/img/zl/2021/12/17/q29hlo8l4.jpg)
用于治疗癌症的免疫调控性组合物和方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年3月15日提交的美国临时申请号62/818,942的权益,其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
3.本公开涉及使用联合疗法来治疗癌症的免疫调控性组合和方法。
背景技术:4.近几年,低剂量的环磷酰胺已在临床上作为单一药剂或作为联合疗法用于治疗急性髓性白血病(aml)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、卵巢癌和视网膜母细胞瘤。
5.低剂量的环磷酰胺的功效主要是由于除了其直接的抗肿瘤作用之外,还具有免疫调控能力。对调节性t细胞(treg)的作用与低剂量化学治疗剂治疗非常相关。treg是可以以细胞因子依赖性和细胞接触依赖性方式两者抑制抗原特异性免疫应答的cd4
+
cd25
+
foxp3
+
淋巴细胞。因此,treg可以通过抑制肿瘤特异性(cd8
+
细胞毒性t淋巴细胞和cd4
+
t辅助细胞)和肿瘤非特异性效应细胞(自然杀伤(nk)和nk t细胞)两者的活性来抑制抗肿瘤免疫应答。在多种人类癌症中,已发现treg细胞的比例增加,这与肿瘤进展和治疗反应的缺失有关。因此,通过特异性阻断或耗竭来损害treg活性是一种增强针对肿瘤相关抗原的免疫应答的方法。许多研究(临床前和临床)已记录了低剂量的环磷酰胺对treg细胞的作用。其减少treg细胞的数量,抑制treg细胞的功能,并增加淋巴细胞增殖和记忆t细胞两者。这种能力凸显了传统化学疗法和新型免疫疗法之间协同作用的潜力。
6.toll样受体(tlr)是先天性免疫的重要组成部分,是抵御病原体的第一道防线。瑞喹莫德是tlr7和tlr8的配体,且直接激活先天性免疫细胞,包括髓性树突状细胞、浆细胞样树突状细胞和单核细胞/巨噬细胞。这种激活可导致共刺激分子的激活、抗病毒细胞因子的产生以及细胞介导的nk和t细胞免疫应答的刺激。
技术实现要素:7.总体而言,本公开提供了一种用于治疗癌症的治疗组合和方法
8.在一方面,本公开提供了一种组合,其包含:有效量的免疫调控性化学治疗剂;和有效量的包含tlr7和/或tlr8激动剂活性的免疫治疗剂。即,免疫治疗剂是tlr7或tlr8或两者的激动剂。
9.在一些实施方式中,所述免疫治疗剂具有式(i)的结构:
[0010][0011]
其中虚线表示键或不存在键;
[0012]
x是s或
–
nr1,r1是
–
w0—w1—w2—w3—w4,
[0013]
w0是键、烷基、烯基、炔基、烷氧基或
–
烷基
‑
s
‑
烷基
–
,
[0014]
w1是键、
–
o
–
或
–
nr2–
,其中r2是氢、烷基或烯基,
[0015]
w2是键、
–
o
–
、
–
c(o)
–
、
–
c(s)
–
或
–
s(o)2–
,
[0016]
w3是键、
–
nr3–
,其中r3是氢、烷基或烯基,
[0017]
w4是氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂环基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、
–
nh2、硝基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
芳基、
–
烷基
‑
杂芳基、
–
烷基
‑
杂环基、
–
o
‑
r4、
–
o
‑
烷基
‑
r4、
–
烷基
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
s
‑
r4、
–
s(o)2‑
r4、
–
nh
‑
s(o)2‑
r4、
–
烷基
‑
s
‑
r4、
–
烷基
‑
s(o)2‑
r4、
–
nhr4、
–
nr4r4、
–
nh
‑
烷基
‑
r4、卤素、
–
cn、
–
no2和
–
sh,其中r4独立地是氢、烷基、烯基、
–
烷基
‑
羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基;
[0018]
z是氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基,其中的每一个可以被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、卤素、氰基、硝基、
–
n(r5)2、
–
烷氧基
‑
烷基、
–
烷氧基
‑
烯基、
–
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
o
‑
烷基、
–
o
‑
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
n(r5)2、芳基、杂芳基、
–
co
‑
芳基和
–
co
‑
杂芳基,其中每个r5独立地是氢、烷基、卤代烷基、
–
烷基
‑
芳基或
–
烷基
‑
杂芳基;
[0019]
r是氢、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、芳基、杂芳基、杂环基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、
–
nh2、硝基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
芳基、
–
烷基
‑
杂芳基、
–
烷基
‑
杂环基、
–
o
‑
r4、
–
o
‑
烷基
‑
r4、
–
烷基
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
r4、
–
c(o)
‑
nh
‑
r4、
–
c(o)
‑
nr4r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
o
‑
c(o)
‑
r4、
–
s
‑
r4、
–
c(o)
‑
s
‑
r4、
–
s
‑
c(o)
‑
r4、
–
s(o)2‑
r4、
–
nh
‑
s(o)2‑
r4、
–
烷基
‑
s
‑
r4、
–
烷基
‑
s(o)2‑
r4、
–
nhr4、
–
nr4r4、
–
nh
‑
烷基
‑
r4、卤素、
–
cn和
–
sh,其中r4独立地是氢、烷基、烯基、烷氧基、
–
烷基
‑
羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基;
[0020]
n是0、1、2、3或4;
[0021]
y是
–
nr6r7、
–
cr6r7r8或
–
烷基
‑
nh2,其中的每一个可以被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、
–
nh2、卤素、
–
n(r5)2、
–
烷氧基
‑
烷基、
–
烷氧基
‑
烯基、
–
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
o
‑
烷基、
–
c(o)
‑
n(r5)2、芳基、杂芳基、
–
co
‑
芳基和
–
co
‑
杂芳基,其中r6、r7和r8独立地是氢、烷基、烯基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、芳硫基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r9、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r9或
–
烷基
‑
o
‑
c(o)
‑
r9,其中每个r5独立地是氢、烷基、卤代烷基、
–
烷基
‑
芳基或
–
烷基
‑
杂芳基,其中r9是氢、烷基、烯基、卤
素或卤代烷基;
[0022]
x和z一起可以任选地形成(5
‑
9)元环。
[0023]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是选自以下的化合物:
[0024]2‑
丙基噻唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺胺、
[0025]1‑
(2
‑
甲基丙基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺、
[0026]4‑
氨基
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑
aa
‑
二甲基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
乙醇、
[0027]1‑
(4
‑
氨基
‑2‑
乙基氨基甲基咪唑并
‑
[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基)
‑2‑
甲基丙2
‑
醇、
[0028]
n
‑
[4
‑
(4
‑
氨基
‑2‑
乙基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基)丁基
‑
]甲磺酰胺、
[0029]4‑
氨基
‑2‑
乙氧基甲基
‑
aa
‑
二甲基
‑
6,7,8,9
‑
四氢
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
乙醇、
[0030]4‑
氨基
‑
aa
‑
二甲基
‑2‑
甲氧基乙基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
乙醇、
[0031]1‑
{2
‑
[3
‑
(苄氧基)丙氧基]乙基}
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺、
[0032]1‑
(2
‑
氨基
‑2‑
甲基丙基)
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺、
[0033]1‑
{4
‑
[(3,5
‑
二氯苯基)磺酰基]丁基}
‑2‑
乙基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺、
[0034]
n
‑
{3
‑
[4
‑
氨基
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]丙基}
‑
n'
‑
(3
‑
氰基苯基)硫脲、
[0035]
n
‑
[3
‑
(4
‑
氨基
‑2‑
丁基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基)
‑
2,2
‑
二甲基丙基]苯甲酰胺、
[0036]2‑
丁基
‑1‑
[3
‑
(甲基磺酰基)丙基]
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺、
[0037]
n
‑
{2
‑
[4
‑
氨基
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]
‑
1,1
‑
二甲基乙基}
‑2‑
乙氧基乙酰胺、
[0038]1‑
[4
‑
氨基
‑2‑
乙氧基甲基
‑7‑
(吡啶
‑4‑
基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙2
‑
醇、
[0039]1‑
[4
‑
氨基
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑7‑
(吡啶
‑3‑
基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙2
‑
醇、
[0040]
n
‑
{3
‑
[4
‑
氨基
‑1‑
(2
‑
羟基
‑2‑
甲基丙基)
‑2‑
(甲氧基乙基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑7‑
基]苯基}甲磺酰胺、
[0041]1‑
[4
‑
氨基
‑7‑
(5
‑
羟基甲基吡啶
‑3‑
基)
‑2‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙2
‑
醇、
[0042]3‑
[4
‑
氨基
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑7‑
(吡啶
‑3‑
基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]丙1,2
‑
二醇、
[0043]1‑
[2
‑
(4
‑
氨基
‑2‑
乙氧基甲基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基)
‑
1,1
‑
二甲基乙基]
‑3‑
丙基脲、
[0044]1‑
[2
‑
(4
‑
氨基
‑2‑
乙氧基甲基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基)
‑
1,1
‑
二甲基乙基]
‑3‑
环戊基脲、
[0045]1‑
[(2,2
‑
二甲基
‑
1,3
‑
二氧戊环
‑4‑
基)甲基]
‑2‑
(乙氧基甲基)
‑7‑
(4
‑
羟基甲基苯基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑4‑
胺、
[0046]4‑
[4
‑
氨基
‑2‑
乙氧基甲基
‑1‑
(2
‑
羟基
‑2‑
甲基丙基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑7‑
基]
‑
n
‑
甲氧基
‑
n
‑
甲基苯甲酰胺、
[0047]2‑
乙氧基甲基
‑
n1
‑
异丙基
‑
6,7,8,9
‑
四氢
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑
1,4
‑
二胺、
[0048]1‑
[4
‑
氨基
‑2‑
乙基
‑7‑
(吡啶
‑4‑
基)
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙2
‑
醇和
[0049]
n
‑
[4
‑
(4
‑
氨基
‑2‑
乙基
‑
1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]喹啉
‑1‑
基)丁基]甲磺酰胺。
[0050]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂包含瑞喹莫德。
[0051]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂的量能够:(1)在富集的人血dc中诱导ifn
‑
α;(2)在富集的人血dc中诱导tnf
‑
α;和/或(3)在富集的人血dc中诱导il
‑
12
‑
α。
[0052]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含抗肿瘤药剂,而其他实施方式不包含。在一些实施方式中,所述抗肿瘤药剂选自由蒽环类药物(anthracycline)、硼替佐米(bortezomib)、奥沙利铂(oxaliplatin)和环磷酰胺(cyclophosphamide)组成的组。一些实施方式特别包括一个或多个此类药剂,而其他实施方式特别排除了一个或多个或所有此类药剂。
[0053]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含treg抑制剂,而其他实施方式不包含。在一些实施方式中,所述treg抑制剂选自由达沙替尼(dasatinib)、环磷酰胺(cyclophoshamide)、替莫唑胺(temozolomide)、多西他赛(docetaxel)和5
‑
氟尿嘧啶(5
‑
fluorouracile)组成的组。一些实施方式特别包括一个或多个此类药剂,而其他实施方式特别排除了一个或多个或所有此类药剂。
[0054]
在一些实施方式中,其中所述免疫调控性化学治疗剂包含骨髓来源的抑制细胞(mdsc)抑制剂,而其他实施方式不包含。在一些实施方式中,所述mdsc抑制剂选自由紫杉醇(paclitaxel)、吉西他滨(gemcitabine)、5
‑
氟尿嘧啶、奥沙利铂、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、达沙替尼、舒尼替尼(sunitinib)和阿霉素(doxorubicin)组成的组。一些实施方式特别包括一个或多个此类药剂,而其他实施方式特别排除了一个或多个或所有此类药剂。
[0055]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含nk细胞激活剂,例如达沙替尼和伊马替尼,而其他实施方式不包含。一些实施方式特别包括一个或多个此类药剂,而其他实施方式特别排除了一个或多个或所有此类药剂。
[0056]
在一些实施方式中,所述组合被配置为用于系统性递送。在一些实施方式中,所述组合被配置为用于口服施用或肠胃外注射。在一些实施方式中,所述组合被配置为用于静脉注射或肿瘤内注射。
[0057]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是tlr7和tlr8两者的激动剂。
[0058]
在另一方面,本公开提供了一种用于在需要这种治疗的受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法,其包括向所述受试者施用本文提供的组合。
[0059]
在一些实施方式中,所述异常细胞增殖包含癌前病变。
[0060]
在一些实施方式中,所述异常细胞增殖是癌症细胞的。在一些实施方式中,所述癌症选自由急性髓性白血病(aml)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、卵巢癌和视网膜母细胞瘤组成的组。
[0061]
在一些实施方式中,所述方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/mg/kg、0.0007mg/
kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg至约0.02mg/kg,包括所有端点值的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂。在进一步的实施方式中,所述剂量的范围由前面列表中任何一对剂量限定。
[0062]
在一些实施方式中,所述方法包括以至少0.0001mg/kg但不少于或约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂。
[0063]
在一些实施方式中,所述方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.015mg/kg,包括所有端点值的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉制剂。在进一步的实施方式中,所述剂量的范围由前面列表中任何一对剂量限定。
[0064]
在一些实施方式中,所述方法包括以至少0.0001mg/kg但不少于或约0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg或0.01mg/kg的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉制剂。
[0065]
在一些实施方式中,所述受试者中的所述免疫治疗剂的局部浓度是约0.005μg/ml至约12μg/ml。
[0066]
在一些实施方式中,所述受试者中的所述免疫治疗剂的局部浓度是约0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml或0.4μg/ml至约0.5μg/ml。在进一步的实施方式中,所述浓度的范围由前面列表中任何一对剂量限定。
[0067]
在一些实施方式中,所述方法包括以约40
‑
50mg/kg的剂量在2
‑
5天内以分次剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0068]
在一些实施方式中,其中以2
‑
4周的间隔在1
‑
5天内反复施用所述组合。
[0069]
在一些实施方式中,所述方法包括以约10至15mg/kg的剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂,每7至10天给药所述剂量。
[0070]
在一些实施方式中,所述方法包括以约3至5mg/kg的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0071]
在一些实施方式中,所述方法包括以约60
‑
120mg/m2/天的剂量每天持续向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0072]
在一些实施方式中,所述方法包括以约400
‑
1000mg/m2的剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的口服制剂,在4
‑
5天内分次给药所述剂量。在一些实施方式中,以2
‑
4周的间隔重复这种施用。
[0073]
在一些实施方式中,所述方法包括以约50
‑
100mg/m2/天或1
‑
5mg/kg/天的剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。在一些实施方式中,以2
‑
4周的间隔重复这种施用。
[0074]
在进一步的方面,本公开提供了一种试剂盒,其包括本文提供的组合,且任选地具有说明书。
附图说明
[0075]
在随附的权利要求中具体阐述了本发明实施方式的新颖特征。通过参考以下阐述说明性实施方式的详细描述(其中使用了本发明的原理)及其附图,将更好地理解本发明的特征和优点:
[0076]
图1a
‑
d描绘了同基因肿瘤模型中环磷酰胺/tlrl联合疗法的抗肿瘤作用的评估。图1a:为了治疗c26肿瘤而开发的治疗方案的计划。在肿瘤激发后,在第10天以100
‑
120mm3的肿瘤大小开始治疗,并从第10天开始每周施用,持续3个周期。图1b:c26肿瘤模型中系统性tlrl(瑞喹莫德)的抗肿瘤作用。将4x105个细胞皮下接种到balb/c小鼠中。在允许肿瘤生长10天后,用媒介物(vehicle)或用1mg环磷酰胺的腹腔施用、或用静脉注射的1.6μg tlrl或以所示剂量进行的联合疗法来治疗8只小鼠的组。每周施用所述化合物,持续三个周期。数据由每组的中位肿瘤体积测量值表示。每组8只小鼠的数据表示为平均值
±
sd。使用student t检验来进行统计比较。图1c描绘了在用1.6μg瑞喹莫德i.v.与低剂量环磷酰胺i.p.每周治疗期间的中位肿瘤体积测量值。balb/c小鼠中,媒介物、1mg环磷酰胺、1.6μg tlrl(瑞喹莫德)或1.6μg tlrl(瑞喹莫德)与所示剂量下的各种剂量的环磷酰胺的c26肿瘤生长曲线。每周施用所述化合物,持续三个周期。这些数据由每组(n=8)的中位肿瘤体积测量值表示。图1d描绘了在用3.2μg瑞喹莫德i.v.与低剂量环磷酰胺i.p.治疗c26期间的中位肿瘤体积测量值。balb/c小鼠中,媒介物、1mg环磷酰胺、3.2μg tlrl(瑞喹莫德)或3.2μg tlrl(瑞喹莫德)与所示剂量下的各种剂量的环磷酰胺的肿瘤生长曲线。每周施用所述化合物三次。这些数据由每组(n=8)的中位肿瘤体积测量值表示。
[0077]
图2描绘了tlrl或tlrl/cyc治疗的肿瘤中激活的免疫细胞(cd45
+
)的浸润增加。在治疗的小鼠中进行cd45阳性细胞的组织学表征。从用tlrl、环磷酰胺或tlrl/环磷酰胺治疗的小鼠中获取肿瘤样本。用苏木精和伊红(h&e)复染组织切片。通过较深的(原始:棕色)颜色可视化cd45蛋白,其中一些由箭头指示。
[0078]
图3描绘了tlrl或tlrl/cyc治疗的肿瘤中增加的ifnα可诱导基因表达。治疗的小鼠的dln和脾脏中ifnα可诱导基因的表达。用tlrl或环磷酰胺或联合疗法第二次治疗后,从引流淋巴结和脾脏中分离rna,并通过定量rt
‑
pcr来测定ifnα可诱导基因mx2、isg15和irf7的相对表达。数值表示指定ifnα可诱导基因相对于管家基因肌动蛋白的mrna表达。
具体实施方式
[0079]
下面结合示例应用描述本发明实施方式的几个方面以供说明。应当理解,阐述了许多具体细节、关系和方法以帮助获得对本发明的充分理解。然而,相关领域的普通技术人员将容易地认识到,可以在没有一个或多个具体细节或通过其他方法的情况下实践本发明。本发明不受所说明的动作或事件的顺序的限制,因为一些动作可能以不同的顺序发生和/或与其他动作或事件同时发生。
[0080]
此外,实施根据本发明实施方式所述的方法并不要求所有说明的动作或事件。
[0081]
本文使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的,并不旨在限制本发明。如本文所用,单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”也旨在包括复数形式,除非上下文另有明确指示。此外,如果在具体实施方式和/或权利要求中使用术语“包括(including/includes)”、“有/具有(having/has/with)”或其变体,则此类术语旨在以类似于术语“包含
(comprising)”的方式包括在内。
[0082]
术语“约(about)”或“大约(approximately)”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内,这将部分取决于所述值是如何测量或确定的,即测量系统的限制。例如,根据本领域的实践,“约”可以表示在1个标准差以内或超过1个标准差。替代地,“约”可以表示给定值的至多20%、优选地至多10%、更优选地至多5%和更优选地仍旧至多1%的范围。替代地,特别是对于生物系统或过程,该术语可表示在某个值的一个数量级内,优选地5倍内,更优选地2倍内。在申请和权利要求中描述特定值处,除非另有说明,否则术语“约”的含义应假定在特定值的可接受误差范围内。
[0083]
i.定义和缩写
[0084]
除非另有定义,否则本文中使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明实施方式所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。通常,本文所用的命名法以及细胞培养、分子遗传学、有机化学和核酸化学及杂交中的实验室程序是本领域熟知和常用的那些。使用标准技术进行核酸和肽合成。这些技术和程序通常根据本领域的常规方法和本文通篇提供的各种一般参考文献进行。本文中使用的命名法和分析化学中的实验室程序以及下文描述的有机合成是本领域众所周知的和常用的那些。使用标准技术或其修改进行化学合成和化学分析。
[0085]
除非另有说明,否则术语“烷基”本身或作为另一取代基中的一部分表示直链或支链或环状烃基或其组合,其可以是完全饱和的、单不饱和的或多不饱和的,并且可以包含具有指定的碳原子数(即c1‑
c
10
表示一至十个碳)的二价和多价自由基。饱和的烃基自由基的实例包括但不限于例如以下的基团:甲基,乙基,正丙基,异丙基,正丁基,叔丁基,异丁基,仲丁基,环己基,(环己基)甲基,环丙基甲基,例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等的同系物和异构体。不饱和烷基基团是具有一个或多个双键或三键的烷基基团。不饱和烷基基团的实例包括但不限于乙烯基、2
‑
丙烯基、巴豆基、2
‑
异戊烯基、2
‑
(丁二烯基)、2,4
‑
戊二烯基、3
‑
(1,4
‑
戊二烯基)、乙炔基、1
‑
和3
‑
丙炔基、3
‑
丁炔基和更高的同系物和异构体。除非另有说明,否则术语“烷基”还意在包括以下更详细定义的那些烷基衍生物,例如“杂烷基”。限于烃基基团的烷基基团被称为“同烷基”。
[0086]
术语“亚烷基”本身或作为另一取代基中的一部分是指衍生自烷烃的二价自由基,例如,但不限于
–
ch2ch2ch2ch2‑
,并且进一步包括以下描述为“杂亚烷基”的那些基团。通常,烷基(或亚烷基)基团将具有1至24个碳原子,在本发明实施方式中优选具有10个或更少的碳原子的那些基团。“低级烷基”或“低级亚烷基”是较短链烷基或亚烷基基团,其通常具有八个或更少的碳原子。
[0087]
术语“烷氧基”、“烷基氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)以其常规含义使用,并且是指分别通过氧原子、氨基团或硫原子与分子的其余部分连接的那些烷基基团。
[0088]
除非另有说明,否则术语“杂烷基”本身或与另一术语的组合意为稳定的直链或支链、或环状烃基基团、或其组合,其由所述数量的碳原子和至少一个选自o、n、si和s的杂原子组成,并且其中氮和硫原子可以任选地被氧化,并且氮杂原子可以任选地被季铵化。杂原子o、n和s和si可以位于杂烷基基团的任何内部位置处或烷基基团连接至分子其余部分的位置处。实例包括但不限于
‑
ch2‑
ch2‑
o
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2‑
nh
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2‑
n(ch3)
‑
ch3、
‑
ch2‑
s
‑
ch2‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2,
‑
s(o)
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2‑
s(o)2‑
ch3、
‑
ch=ch
‑
o
‑
ch3、
‑
si(ch3)3、
‑
ch2‑
ch=n
‑
och3和
–
ch=ch
‑
n(ch3)
‑
ch3。至多两个杂原子可以是连续的,例如
‑
ch2‑
nh
‑
och3和
–
ch2‑
o
‑
si(ch3)3。类似地,术语“杂亚烷基”本身或作为另一取代基中的一部分是指衍生自杂烷基的二价自由基,例如但不限于
‑
ch2‑
ch2‑
s
‑
ch2‑
ch2‑
和
–
ch2‑
s
‑
ch2‑
ch2‑
nh
‑
ch2‑
。对于杂亚烷基基团,杂原子也可以占据链末端中的一者或两者(例如亚烷基氧基、亚烷基二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。仍进一步地,对于亚烷基和杂亚烷基连接基团,连接基团的分子式书写的方向没有暗示连接基团的方向。例如,式子
–
c(o)2r
’‑
表示
–
c(o)2r
’‑
和
–
r’c(o)2‑
两者。
[0089]
通常,“酰基取代基”也选自上述组。如本文所用,术语“酰基取代基”是指连接至并满足直接或间接连接至本发明实施方式的化合物的多环核的羰基碳的化合价的基团。
[0090]
除非另有说明,否则术语“环烷基”和“杂环烷基”本身或与其他术语组合分别代表“烷基”和“杂烷基”的环状形式。此外,对于杂环烷基,杂原子可占据杂环与分子其余部分连接的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1
‑
环己烯基、3
‑
环己烯基、环庚基等。杂环烷基的实例包括但不限于1
–
(1,2,5,6
‑
四氢吡啶基)、1
‑
哌啶基、2
‑
哌啶基、3
‑
哌啶基、4
‑
吗啉基、3
‑
吗啉基、四氢呋喃
‑2‑
基、四氢呋喃
‑3‑
基、四氢噻吩
‑2‑
基、四氢噻吩
‑3‑
基、1
–
哌嗪基、2
‑
哌嗪基等。
[0091]
除非另有说明,否则术语“卤代(halo)”或“卤素(卤素)”本身或作为另一取代基中的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外,诸如“卤代烷基”之类的术语意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如,术语“卤代(c1‑
c4)烷基”是指包括但不限于三氟甲基、2,2,2
‑
三氟乙基、4
‑
氯丁基、3
‑
溴丙基等。
[0092]
如本文所用,术语“卤代烷基”是指本文定义的烷基,其被一个或多个本文定义的卤基团取代。优选地,所述卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基或多卤代烷基,包括全卤代烷基。单卤代烷基可在所述烷基基团内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基在所述烷基内可具有两个或多个相同的卤原子或不同卤基团的组合。优选地,所述多卤代烷基包含至多12、10或8或6或4或3或2个卤素基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子都被卤原子取代的烷基。
[0093]
如本文所用,术语“杂芳基”是指具有1至8个选自n、o、s或se的杂原子的5
‑
14元单环或双环或稠合多环系统。优选地,所述杂芳基是5
‑
10元环系统。典型的杂芳基基团包括2
‑
或3
‑
噻吩基,2
‑
或3
‑
呋喃基,2
‑
或3
‑
吡咯基,2
‑
、4
‑
或5
‑
咪唑基,3
‑
、4
‑
或5
‑
吡唑基,2
‑
、4
‑
或5
‑
噻唑基,3
‑
、4
‑
或5
‑
异噻唑基,2
‑
、4
‑
或5
‑
噁唑基,3
‑
、4
‑
或5
‑
异噁唑基,3
‑
或5
‑
1,2,4
‑
三唑基,4
‑
或5
‑
1,2,3
‑
三唑基,四唑基,2
‑
、3
‑
或4
‑
吡啶基,3
‑
或4
‑
哒嗪基,3
‑
、4
‑
或5
‑
吡嗪基,2
‑
吡嗪基,2
‑
、4
‑
或5
‑
嘧啶基。
[0094]
术语“杂芳基”也指其中杂芳环与一个或多个芳基环、脂环族环或杂环烷基环稠合的基团,其中自由基或连接点在所述杂芳环上。非限制性实例包括但不限于1
‑
、2
‑
、3
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
吲哚嗪基,1
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
异吲哚基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
吲哚基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
吲唑基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
嘌呤基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
壁嗪基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
喹啉基,1
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
异喹啉基,1
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
酞嗪基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
或6
‑
萘啶基,2
‑
、3
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
喹唑啉基,3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
肉桂啉基,2
‑
、4
‑
、6
‑
或7
‑
蝶啶基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
4ah咔唑基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、
6
‑
、7
‑
或8
‑
咔唑基,1
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
咔啉基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
、9
‑
或10
‑
菲啶基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
吖啶基,1
‑
、2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
咟啶基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、8
‑
、9
‑
或10
‑
菲咯啉基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
吩嗪基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
、9
‑
或10
‑
吩噻嗪基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
、9
‑
或10
‑
啡噁嗪基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或l
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
、9
‑
或10
‑
苯并异喹啉基,2
‑
、3
‑
、4
‑
或5
‑
噻吩并[2,3
‑
b]呋喃基,2
‑
、3
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
、9
‑
、10
‑
或11
‑
7h
‑
吡嗪并[2,3
‑
c]咔唑基,2
‑
、3
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
2h
‑
呋喃[3,2
‑
b]
‑
吡喃基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、7
‑
或8
‑
5h
‑
吡啶并[2,3
‑
d]
‑
邻噁嗪基,1
‑
、3
‑
或5
‑
1h
‑
吡唑并[4,3
‑
d]
‑
噁唑基,2
‑
、4
‑
或54h
‑
咪唑并[4,5
‑
d]噻唑基,3
‑
、5
‑
或8
‑
吡嗪并[2,3
‑
d]哒嗪基,2
‑
、3
‑
、5
‑
或6
‑
咪唑并[2,1
‑
b]噻唑基,1
‑
、3
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
呋喃[3,4
‑
c]肉桂啉基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、8
‑
、9
‑
、10或11
‑
4h
‑
吡啶并[2,3
‑
c]咔唑基,2
‑
、3
‑
、6
‑
或7
‑
咪唑并[1,2
‑
b][1,2,4]三嗪基,7
‑
苯并[b]噻吩基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并噁唑基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并咪唑基,2
‑
、4
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并噻唑基,1
‑
、2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
或9
‑
苯并氧杂革基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
苯并噁噁嗪基,1
‑
、2
‑
、3
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
、8
‑
、9
‑
、10
‑
或11
‑
1h
‑
吡咯并[1,2
‑
b][2]苯并氮杂革基。典型的稠合杂芳基基团包括但不限于2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
喹啉基,1
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
、7
‑
或8
‑
异喹啉基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
吲哚基,2
‑
、3
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并[b]噻吩基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并噁噁唑基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并咪唑基,2
‑
、4
‑
、5
‑
、6
‑
或7
‑
苯并噻唑基。
[0095]
如本文所用,术语“杂环基”或“杂环”是指任选地取代的、完全饱和的或不饱和的、芳香族或非芳香族环状基团,例如,其为4至7元单环、7至12元双环或10至15元三环系统,所述系统在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子。含杂原子的杂环基团中的每个环可具有1、2或3个选自氮原子、氧原子和硫原子的杂原子,其中氮和硫杂原子也可任选地被氧化。所述杂环基团可以在杂原子或碳原子处连接。
[0096]
示例性的单环杂环基团包括吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑啶基、三唑基、噁噁唑基、噁噁唑烷基、异噁噁唑啉基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2
‑
氧代哌嗪基,2
‑
氧代哌啶基、2
‑
氧代吡咯烷基、2
‑
氧代氮杂基、氮杂基、4
‑
哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、四氢吡喃基、吗啉基、噻吗啉基、噻吗啉基亚砜、噻吗啉基砜、1,3
‑
二氧戊环和四氢
‑
1,1
‑
二氧噻吩基、1,1,4
‑
三氧
‑
1,2,5
‑
噻二唑啉
‑2‑
基等。
[0097]
示例性的双环杂环基团包括吲哚基,二氢吲哚基,苯并噻唑基,苯并噁嗪基,苯并噁唑基,苯并噻吩基,苯并噻嗪基,奎宁环基,喹啉基,四氢喹啉基,十氢喹啉基,异喹啉基,四氢异喹啉基,十氢异喹啉基,苯并咪唑基,苯并吡喃基,吲哚嗪基,苯并呋喃基,色酮基,香豆素基,苯并吡喃基,肉桂啉基,喹喔啉基,吲唑基,吡咯并吡啶基,呋喃吡啶基(例如呋喃[2,3
‑
c]吡啶基、呋喃[3,2
‑
b]
‑
吡啶基]或呋喃[2,3
‑
b]吡啶基),二氢异吲哚基,1,3
‑
二氧
‑
1,3
‑
二氢异吲哚
‑2‑
基,二氢喹唑啉基(例如3,4
‑
二氢
‑4‑
氧
‑
喹唑啉基),酞嗪基等。
[0098]
示例性的三环杂环基团包括咔唑基、二苯并氮杂基、二噻吩并氮杂基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、啡噁嗪基、吩噻嗪基、噻吨基、咔啉基等。
[0099]
术语“杂环基”还指本文所定义的被1、2或3个选自以下的取代基取代的杂环基团:
[0100]
(a)烷基;
[0101]
(b)羟基(或受保护的羟基);
[0102]
(c)卤;
[0103]
(d)氧,即=o;
[0104]
(e)氨基、烷基氨基或二烷基氨基;
[0105]
(f)烷氧基;
[0106]
(g)环烷基;
[0107]
(h)羧基;
[0108]
(i)杂环氧基,其中杂环氧基表示通过氧桥键合的杂环基团;
[0109]
(j)烷基
‑
o
‑
c(o)
–
;
[0110]
(k)巯基;
[0111]
(l)硝基;
[0112]
(m)氰基;
[0113]
(n)胺磺酰基或磺酰氨基;
[0114]
(o)芳基;
[0115]
(p)烷基
‑
c(o)
‑
o
–
;
[0116]
(q)芳基
‑
c(o)
‑
o
–
;
[0117]
(r)芳基
‑
s
–
;
[0118]
(s)芳氧基;
[0119]
(t)烷基
‑
s
–
;
[0120]
(u)甲酰基,即hc(o)
–
;
[0121]
(v)氨基甲酰基;
[0122]
(w)芳基
‑
烷基
–
;和
[0123]
(x)用烷基、环烷基、烷氧基、羟基、氨基、烷基
‑
c(o)
‑
nh
–
、烷基氨基、二烷基氨基或卤素取代的芳基。
[0124]
如本文所用,术语“烯基”是指具有2至20个碳原子且包含至少一个双键的直链或支链烃基团。所述烯基基团优选地具有约2至8个碳原子。
[0125]
除非另有说明,否则术语“芳基”是指多不饱和芳族烃取代基,其可以是稠合在一起或共价连接地单环或多环(优选地1至3个环)。术语“杂芳基”是指包含一至四个选自n、o和s的杂原子的芳基团(或环),其中所述氮和硫原子任选地被氧化,并且所述氮原子任选地季铵化。杂芳基基团可以通过杂原子连接到所述分子的其余部分。芳基和杂芳基基团的非限制性实例包括苯基、1
‑
萘基、2
‑
萘基、4
‑
联苯基、1
‑
吡咯基、2
‑
吡咯基、3
‑
吡咯基、3
‑
吡唑基、2
‑
咪唑基、4
‑
咪唑基、吡嗪基、2
‑
噁唑基、4
‑
噁唑基、2
‑
苯基
‑4‑
噁唑基、5
‑
噁唑基、3
‑
异噁唑基、4
‑
异噁唑基、5
‑
异噁唑基、2
‑
噻唑基、4
‑
噻唑基、5
‑
噻唑基、2
‑
呋喃基、3
‑
呋喃基、2
‑
噻吩基、3
‑
噻吩基、2
‑
吡啶基、3
‑
吡啶基、4
‑
吡啶基、2
‑
嘧啶基、4
‑
嘧啶基、5
‑
苯并噻唑基、嘌呤基、2
‑
苯并咪唑基、5
‑
吲哚基、1
‑
异喹啉基、5
‑
异喹啉基、2
‑
喹喔啉基、5
‑
喹喔啉基、3
‑
喹啉基和6
‑
喹啉基。上述标注为芳基和杂芳基环系统中的每个的取代基选自下述可接受的取代基组。
[0126]
为简洁起见,术语“芳基”在与其他术语(例如,芳氧基、芳硫氧基、芳基烷基)结合使用时包括上述定义的芳基和杂芳基环两者。因此,术语“芳基烷基”意为包括其中芳基基
团与烷基基团连接的那些自由基(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等),所述烷基基团包括其中碳原子(例如亚甲基基团)已被例如氧原子替换的那些烷基基团(例如苯氧基甲基、2
‑
吡啶基氧甲基、3
‑
(1
‑
萘基氧基)丙基等)。
[0127]
上述术语中的每个(例如“烷基”、“杂烷基”、“芳基”和“杂芳基”)包括指定自由基的取代和未取代形式两者。下文提供了每种类型的自由基的优选取代基。
[0128]
所述烷基和杂烷基自由基(包括常称为亚烷基、烯基、杂亚烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的那些基团)的取代基一般分别称为“烷基取代基”和“杂烷基取代基”,并且其可以是选自以下的各种基团中的一个或多个,但不受以下限制:
‑
or’、=o、=nr’、=n
‑
or’、
‑
nr’r”、
‑
sr’、
‑
卤素、
‑
sir’r”r
”’
、
‑
oc(o)r’、
‑
c(o)r’、
‑
co2r’、
‑
conr’r”、
‑
oc(o)nr’r”、
‑
nr”c(o)r’、
‑
nr
’‑
c(o)nr”r
”’
、
‑
nr”c(o)2r’、
‑
nr
‑
c(nr’r”r
’”
)=nr
””
、
‑
nr
‑
c(nr’r”)=nr
’”
、
‑
s(o)r’、
‑
s(o)2r’、
‑
s(o)2nr’r”、
‑
nrso2r’、
‑
cn和
–
no2,其数量范围是零至(2m’+1),其中m’是这种自由基中碳原子的总数。r’、r”、r
”’
和r
””
各自优选地独立地是指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的芳基(例如用1
‑
3个卤素取代的芳基)、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基基团或者芳基烷基基团。当本发明实施方式所述的化合物包含多于一个r基团,例如,就像当每个r’、r”、r
’”
和r
””
基团这些基团多于一个存在时那样,所述r基团中的每个被独立地选择。当r’和r”与相同氮原子连接时,其可以与所述氮原子组合以形成5、6或7元环。例如,
‑
nr’r”意为包括以下但不限于以下:1
‑
吡咯烷基和4
‑
吗啉基。从上文对取代基讨论,本领域技术人员将理解术语“烷基”意为包括这样的基团,所述基团包含与除氢基团之外的基团(例如卤代烷基(例如
‑
cf3和
–
ch2cf3)和酰基(例如
‑
c(o)ch3、
‑
c(o)cf3、
‑
c(o)ch2och3等))结合的碳原子。
[0129]
与针对所述烷基自由基描述的取代基类似,芳基取代基和杂芳基取代基一般分别称为是“芳基取代基”和“杂芳基取代基”,并且是不同的且选自例如:卤素、
‑
or’、=o、=nr’、=n
‑
or’、
‑
nr’r”、
‑
sr’、
‑
卤素、
‑
sir’r”r
”’
、
‑
oc(o)r’、
‑
c(o)r’、
‑
co2r’、
‑
conr’r”、
‑
oc(o)nr’r”、
‑
nr”c(o)r’、
‑
nr
’‑
c(o)nr”r
”’
、
‑
nr”c(o)2r’、
‑
nr
‑
c(nr’r”)=nr
’”
、
‑
s(o)r’、
‑
s(o)2r’、
‑
s(o)2nr’r”、
‑
nrso2r’、
‑
cn和
–
no2,
‑
r’、
‑
n3、
‑
ch(ph)2、氟(c1‑
c4)烷氧基和氟(c1‑
c4)烷基,数量范围是零至芳环系统上开放化合价的总数;并且其中r’、r”、r
”’
和r
””
优选地独立地选自氢、(c1‑
c8)烷基和杂烷基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)
‑
(c1‑
c4)烷基和(未取代的芳基)氧基
‑
(c1‑
c4)烷基。当本发明实施方式所述的化合物包含多于一个r基团时,例如,就像当每个r’、r”、r
’”
和r
””
基团这些基团多于一个存在时那样,所述r基团中的每个被独立地选择。
[0130]
所述芳基或杂芳基环的相邻原子上的芳基取代基中的两个可以任选地用式
–
t
‑
c(o)
‑
(crr’)
q
‑
u
‑
的取代基替换,其中t和u独立地是
–
nr
‑
、
‑
o
‑
、
‑
crr
’‑
或单键,并且q是0至3的整数。替代地,所述芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可以任选地用式
–
a
‑
(ch2)
r
‑
b
‑
的取代基替换,其中a和b独立地是
–
crr
’‑
、
‑
o
‑
、
‑
nr
‑
、
‑
s
‑
、
‑
s(o)
‑
、
‑
s(o)2‑
、
‑
s(o)2nr
’‑
或单键,并且r是1至4的整数。如此形成的新环的单键之一可以任选地被双键替换。替代地,所述芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两个可以任选地用式
–
(crr’)
s
‑
x
‑
(cr”r
’”
)
d
‑
的取代基替换,其中s和d独立地是0至3的整数,并且x是
–
o
‑
、
‑
nr
’‑
、
‑
s
‑
、
‑
s(o)
‑
、
‑
s(o)2‑
或
–
s(o)2nr
’‑
。取代基r、r’、r”和r
’”
优选地独立地选自氢或者取代或未取代的(c1‑
c6)烷基。
[0131]
如本文所用,术语“杂原子”包括氧(o)、氮(n)、硫(s)、磷(p)和硅(si)。
[0132]
如本文所用,术语“芳芳基团”是指
‑
o
‑
芳基团和o
‑
杂芳基基团两者,其中芳基和杂芳基在本文中定义。
[0133]
如本文所用,术语“药学上可接受的盐”是指保留了本发明实施方式所述的化合物的生物有效性和特性且在生物学上或其他方面并非不理想的盐。在许多情况下,由于存在氨基和/或羧基或与其相似的基团(例如苯酚或羟基酰胺酸),本发明实施方式所述的化合物能够形成酸和/或碱盐。可药用酸加成盐可以通过无机酸和有机酸形成。可衍生出盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可衍生成盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。可药用碱加成盐可以通过无机和有机碱形成。可衍生成盐的无机碱包括例如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等;特别优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可衍生成盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、包括天然存在的取代胺在内的取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等,特别是例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。本发明实施方式所述的化合物的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法从母体化合物、碱性或酸性部分合成。通常,此类盐可以通过将这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适当碱(例如na、ca、mg或k的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应,或通过使游离碱反应来制备这些化合物与化学计量量的适当酸形成的形式。此类反应通常在水或有机溶剂中或在两者的混合物中进行。通常,在可行的情况下,优选非水介质,如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。其他合适的盐的列表可以在例如remington'spharmaceutical sciences,第20版,mack publishing company,easton,pa.,(1985)中找到,该文献通过引用并入本文。
[0134]
如本文所用,术语“药学上可接受的载体/赋形剂”包括任何和所有溶剂,分散介质,包衣,表面活性剂,抗氧化剂,防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂),等渗剂,吸收延迟剂,盐,药物,药物稳定剂,粘合剂,赋形剂,崩解剂,润滑剂,甜味剂,调味剂,染料,例如本领域普通技术人员已知的材料及其组合(参见例如remington's pharmaceutical sciences,18th ed.mack printing company,1990,pp.1289
‑
1329,以引用方式并入本文)。除非任何常规载体与活性成分不相容,否则考虑其在治疗或药物组合物中的用途。
[0135]
如本文所用,术语“受试者”是指动物。优选地,所述动物是哺乳动物。受试者也指例如灵长类动物(例如人)、牛、羊、山羊、马、狗、兔、鼠、猫、鱼、鸟等。在优选的实施方式中,所述受试者是人。
[0136]
如本文所用,术语“治疗组合”或“组合”是一种或多种活性药物物质的组合,即具有治疗效用的化合物。通常,本发明实施方式所述的治疗组合中的每一种这样的化合物将存在于包含该化合物和药学上可接受的载体的药物组合中。本发明实施方式的治疗组合中的化合物可以作为治疗方案中的一部分同时或分开施用。
[0137]
ii.组合物
[0138]
总的来说,本公开提供了治疗组合、药物组合物和使用联合疗法治疗癌症的方法。更具体地说,免疫疗法(例如使用toll样受体配体“tlrl”),例如tlr7/8激动剂以激活先天性免疫中的dc,与低剂量的免疫调节化学疗法的联合。
[0139]
在一个方面,本公开提供了治疗组合或药物组合物,其包含:(i)有效量的免疫调
控性化学治疗剂;和(ii)有效量的包含tlr7和/或tlr8激动剂活性的免疫治疗剂。即,在各种实施方式中,所述免疫治疗剂是tlr7或tlr8或两者的激动剂。
[0140]
可以以单一药物组合物提供治疗组合以使所述免疫调控性化学治疗剂和所述免疫治疗剂可以一起施用。在替代的实施方式中,可以使用多于一种的药物组合物来提供治疗组合。在这样的实施方式中,可以以一种药物组合物来提供免疫调控性化学治疗剂,且可以以第二药物组合物来提供免疫治疗剂,以使所述两种化合物可以分开施用,例如在不同的时间、通过不同的施用途径等。因此,也可能以不同给药方案来提供所述免疫调控性化学治疗剂和所述免疫治疗剂。
[0141]
除非另有说明,否则对化合物的提及可以包括所述化合物的任何药学上可接受的形式,包括任何异构体(例如非对映异构体或对映异构体)、盐、溶剂化物、多晶型物等。特别地,如果化合物具有光学活性,对所述化合物的提及可以包括所述化合物的对映异构体中的每个以及所述对映异构体的外消旋混合物。
[0142]
总的来说,所述免疫调控性化学治疗剂和所述免疫治疗剂不互相谅解,例如通过共价接头。
[0143]
a.免疫调控性化学治疗剂
[0144]
总的来说,本文提供的组合物包含免疫调控性化学治疗剂。
[0145]
通过本文的“免疫调控性化学治疗剂”表示除了其直接抗肿瘤作用之外能够减少宿主调节性t细胞(treg)和/或mdsc亚群体的治疗剂。
[0146]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含抗肿瘤药剂
[0147]
通过本文的“抗肿瘤药剂”表示通过常规的细胞毒性抗肿瘤活性直接杀死肿瘤细胞的治疗剂。在一些实施方式中,所述抗肿瘤药剂选自由蒽环类药物、硼替佐米、奥沙利铂和环磷酰胺组成的组。
[0148]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含treg抑制剂。
[0149]
通过本文的“treg抑制剂”表示调节cd25
+
/cd45
+
treg细胞的治疗剂。在一些实施方式中,所述treg抑制剂选自由达沙替尼、环磷酰胺、替莫唑胺、多西他赛和5
‑
氟尿嘧啶组成的组。
[0150]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含骨髓来源的抑制细胞(mdsc)抑制剂。
[0151]
通过本文的“骨髓来源的抑制抑制细胞(mdsc)抑制剂”表示能够调节免疫抑制细胞的治疗剂,例如mdsc。在一些实施方式中,所述mdsc抑制剂选自由紫杉醇、吉西他滨、5
‑
氟尿嘧啶、奥沙利铂、顺铂、卡铂、达沙替尼、舒尼替尼和阿霉素组成的组。
[0152]
在一些实施方式中,所述免疫调控性化学治疗剂包含nk细胞激活剂。
[0153]
通过本文的“nk细胞激活剂”表示能够在肿瘤微环境中激活nk细胞的治疗剂。在一些实施方式中,所述nk细胞激活剂选自由达沙替尼和伊马替尼组成的组。
[0154]
b.免疫治疗剂
[0155]
总的来说,本公开所述的组合或组合物包含免疫治疗剂。
[0156]
通过本文的“免疫治疗剂”表示能够刺激或增强身体的免疫系统或肿瘤细胞的化合物、分子或药剂。免疫治疗剂用于通过诱导、增强或抑制免疫应答来治疗疾病。本发明实施方式的免疫治疗剂通常被设计为引发或放大免疫应答,而非抑制免疫应答。
cancer.cancer res 2003;63:6478
‑
6487.zou wp,machelon v,coulomb
‑
l'hermin a,等,stromal
‑
derived factor
‑
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‑
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‑
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‑
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‑
6and macrophage colony
‑
stimulating factor.blood 1998;92:4778
‑
4791)。这些未成熟的dc细胞并未在促进抗肿瘤免疫中起作用。相反,肿瘤微环境内的dc通过抑制抗肿瘤免疫和通过促进血管新生来促进肿瘤生长。有证据显示toll样受体7激动剂咪喹莫特和toll样受体9激动剂cpg药物可以刺激肿瘤微环境内的pdc以抑制肿瘤发展。(dummer r,urosevic m,kempf w等,imiquimod in basal cell carcinoma:how does it work?br j dermatol 2003;149:57
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‑
agonist pf
‑
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‑
527)。
[0164]
自然杀伤(nk)细胞是一种细胞毒性淋巴细胞,其构成免疫系统的主要组分。nk细胞是通过cd56或cd 16的表达和t细胞受体(cd3)的缺失定义的外周血液淋巴细胞的子集。它们识别并杀死转化的细胞系而不以mhc非限制性方式启动。nk细胞在排斥肿瘤和病毒感染的细胞中起到主要作用。nk细胞识别靶细胞并递送足够的信号以触发目标裂解的过程由细胞表面上的一系列抑制和激活受体决定。nk自身与改变的nk自身区分涉及mhc
‑
i分子和非mhc配体(如cd48和clr
‑
1b)的抑制受体识别。感染的或受损的细胞(改变的自身)的nk识别是通过各种激活受体(包括nkg2d、ly49h和nkp46/ncr1)识别的应激诱导的配体(例如mica、micb、rae1、h60、mult1)或病毒编码的配体(例如m157、血球凝集素)来调节的。
[0165]
nk细胞代表在同种异体或自体干细胞移植后数月内外周血液中的主要淋巴样细胞,且其在此期间在对病原体的免疫中发挥主要作用(reittie等,(1989)blood 73:1351
‑
1358;lowdell等,(1998)bone marrow transplant 21:679
‑
686)。在lowdell(2003)transfusion medicine13:399
‑
404中综述了nk细胞在移植、移植物抗宿主病、抗白血病活性和移植后感染中的作用。
[0166]
人nk细胞通过天然细胞毒性和抗体依赖性细胞毒性(adcc)来介导肿瘤细胞和病毒感染的细胞的裂解。
[0167]
人nk细胞是通过阳性和阴性细胞溶解信号控制的。阴性(抑制性)信号是通过包含c
‑
凝集素结构域的受体cd94/nkg2a和通过一些杀伤性免疫球蛋白样受体(kir)转化的。通过抑制性信号进行的nk裂解的调节被称为“自我缺失”假说,其中在靶细胞表面上表达的特定hla
‑
i类等位基因连接nk细胞上的抑制受体。肿瘤细胞和一些病毒感染的细胞(例如cmv)
上的hla分子的下调节将此抑制降低到目标阈值以下,且如果所述靶细胞也携带nk启动和激活分子,所述靶细胞可以变得对nk细胞介导的裂解易感。tlr7、tlr8或tlr9激动剂可以激活mdc和pdc两者以产生i型ifn并表达共刺激分子,例如gitr配体,其随后激活nk细胞以产生ifn
‑
γ并有效地促进nk细胞杀伤功能。
[0168]
抑制性受体归类为两组,称为杀伤性免疫球蛋白样受体(kir)的ig超家族的那些,和凝集素家族nkg2的那些,其与细胞表面处的cd94形成二聚体。kir有2
‑
或3
‑
结构域细胞外结构域且与hla
‑
a、
‑
b或
‑
c结合。所述nkg2/cd94复合物连接hla
‑
e。
[0169]
抑制性kir有至多4个包含itim的细胞内结构域,且表征最好的是kir2dl1、kir2dl2和kir2dl3,其已知与hla
‑
c分子结合。kir2dl2和kir2dl3结合第1组hla
‑
c等位基因,而kir2dl1与第2组等位基因结合。某些白血病/淋巴瘤细胞表达第1组和第2组hla
‑
c等位基因两者,且已知对nk介导的细胞裂解有抵抗力。
[0170]
对于阳性激活信号,认为adcc是通过cd 16介导的,且已鉴定了许多负责天然细胞毒性的触发受体,包括cd2、cd38、cd69、nkrp
‑
i、cd40、b7
‑
2、nk
‑
tr、nkp46、nkp30和nkp44。一些具有短的胞质内尾巴的kir分子也是刺激性的。已知这些kir(kir2ds1、kir2ds2和kir2ds4)与hla
‑
c结合;其细胞外结构域与其相关的抑制性kir相同。激活性kir缺乏itim,且相反地,与dap 12相关联,导致nk细胞激活。抑制性与激活性kir表达的控制机制仍是未知的。
[0171]
若干报告已描述了小鼠或人癌症或癌细胞系中tlr的表达。例如,tlr1至tlr6由结肠、肺、前列腺和黑色素瘤小鼠肿瘤细胞系表达(huang b等,toll
‑
like receptors on tumor cells facilitate evasion of immune surveillance.cancer res.2005;65(12):5009
–
5014),tlr3在人乳腺癌细胞中表达(salaun b,coste i,rissoan mc,lebecque sj,renno t.tlr3 can directly trigger apoptosis in human cancer cells.j immunol.2006;176(8):4894
–
4901),肝癌和胃癌细胞表达tlr2和tlr4(huang b等,listeria monocytogenes promotes tumor growth via tumor cell toll
‑
like receptor 2signaling.cancer res.2007;67(9):4346
–
4352),以及tlr9(droemann d等,human lung cancer cells express functionally active toll
‑
like receptor 9.respir res.2005;6:1)和tlr4(he w,liu q,wang l,chen w,li n,cao x.tlr4 signaling promotes immune escape of human lung cancer cells by inducing immunosuppressive cytokines and apoptosis resistance.mol immunol.2007;44(11):2850
–
2859)由人肺癌细胞表达。tlr7和tlr8发现于人肺癌的肿瘤细胞中(cherfils
‑
vicini j,platonova s,gillard m,laurans l,validire p,caliandro r,magdeleinat p,mami
‑
chouaib f,dieu
‑
nosjean mc,fridman wh,damotte d,saut
è
s
‑
fridman c,cremer i.j.clin invest.2010;120(4):1285
–
1297)。
[0172]
tlr是感知微生物产物和/或启动适应性免疫应答的蛋白家族。tlr激活树突状细胞(dc)。tlr是保守的跨膜分子,其包含富含亮氨酸重复的胞外结构域、跨膜结构域和细胞内tir(toll/白介素受体)结构域。tlr识别微生物中的不同结构,其通常称为“pamp”(病原体相关分子模式)。与tlr结合的配体引发细胞内信号传导通路的级联反应,所述级联反应诱导参与炎症和免疫的因子的产生。
[0173]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是tlr7和/或tlr8激动剂。tlr7和tlr8在系统
发育和结构上是相关的。tlr7由人pdc和b细胞选择性地表达。tlr8主要由mdc、单核细胞、巨噬细胞和骨髓遏制细胞表达。tlr7特异性激动剂激活浆细胞样dc(pdc)以产生大量1型ifn且表达高水平的共刺激分子,其促进t细胞、nk细胞、b细胞和mdc的激活。tlr8特异性激动剂激活髓性dc、单核细胞、巨噬细胞或骨髓来源的抑制细胞以产生大量1型ifn、il
‑
12和il
‑
23,并表达高水平的mhc i类、mhc ii类和共刺激分子,所述mhc i类、mhc ii类和共刺激分子促进抗原特异性cd4和cd8+t细胞的激活。
[0174]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是通过式(i)的结构表示的tlr7和/或tlr8激动剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物:
[0175][0176]
其中虚线表示键或不存在键;
[0177]
x是s或
–
nr1,r
1 is
–
w0—w1—w2—w3—w4,
[0178]
w0是键、烷基烯基、炔基、烷氧基或
–
烷基
‑
s
‑
烷基
–
,
[0179]
w1是键、
–
o
–
或
–
nr2–
,其中r2是氢、烷基或烯基,
[0180]
w2是键、
–
o
–
、
–
c(o)
–
、
–
c(s)
–
或
–
s(o)2—,
[0181]
w3是键、
–
nr3–
,其中r3是氢、烷基或烯基,
[0182]
w4是氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、芳基、芳氧基、杂芳基或杂环基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、
–
nh2、硝基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
芳基、
–
烷基
‑
杂芳基、
–
烷基
‑
杂环基、
–
o
‑
r4、
–
o
‑
烷基
‑
r4、
–
烷基
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
s
‑
r4、
–
s(o)2‑
r4、
–
nh
‑
s(o)2‑
r4、
–
烷基
‑
s
‑
r4、
–
烷基
‑
s(o)2‑
r4、
–
nhr4、
–
nr4r4、
–
nh
‑
烷基
‑
r4、卤素、
–
cn、
–
no2和
–
sh,其中r4独立地是氢、烷基、烯基、
–
烷基
‑
羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基;
[0183]
z是氢、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基,其中的每一个可以被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、杂环基、卤素、氰基、硝基、
–
n(r5)2、
–
烷氧基
‑
烷基、
–
烷氧基
‑
烯基、
–
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
o
‑
烷基、
–
o
‑
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
n(r5)2、芳基、杂芳基、
–
co
‑
芳基和
–
co
‑
杂芳基,其中每个r5独立地是氢、烷基、卤代烷基、
–
烷基
‑
芳基或
–
烷基
‑
杂芳基;
[0184]
r是氢、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤素、芳基、杂芳基、杂环基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、
–
nh2、硝基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
芳基、
–
烷基
‑
杂芳基、
–
烷基
‑
杂环基、
–
o
‑
r4、
–
o
‑
烷基
‑
r4、
–
烷基
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
r4、
–
c(o)
‑
nh
‑
r4、
–
c(o)
‑
nr4r4,
–
烷基
‑
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
o
‑
c(o)
‑
r4、
–
s
‑
r4、
–
c(o)
‑
s
‑
r4、
–
s
‑
c(o)
‑
r4、
–
s(o)2‑
r4、
–
nh
‑
s(o)2‑
r4、
–
烷基
‑
s
‑
r4、
–
烷基
‑
s(o)2‑
r4、
–
nhr4、
–
nr4r4、
–
nh
‑
烷基
‑
r4、卤素、
–
cn和
–
sh,其
中r4独立地是氢、烷基、烯基、烷氧基、
–
烷基
‑
羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基;
[0185]
n是0、1、2、3或4;
[0186]
y是
–
nr6r7、
–
cr6r7r8或
–
烷基
‑
nh2,其中的每一个可以被选自由以下各项组成的组中的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、
–
nh2、卤素、
–
n(r5)2、
–
烷氧基
‑
烷基、
–
烷氧基
‑
烯基、
–
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
o
‑
烷基、
–
c(o)
‑
n(r5)2、芳基、杂芳基、
–
co
‑
芳基和
–
co
‑
杂芳基,
[0187]
其中r6、r7和r8独立地是氢、烷基、烯基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、芳硫基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r9、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r9或
–
烷基
‑
o
‑
c(o)
‑
r9,其中每个r5独立地是氢、烷基、卤代烷基、
–
烷基
‑
芳基或
–
烷基
‑
杂芳基,其中r9是氢、烷基、烯基、卤素或卤代烷基;
[0188]
x和z一起可以任选地形成(5
‑
9)元环。
[0189]
在一些实施方式中,式(i)的x是s。
[0190]
在一些实施方式中,式(i)的x是
–
nr1,r1是烷基、
–
烷基
‑
w4、
–
烷基
‑
o
‑
w4、
–
烷基
‑
nh
‑
c(o)
‑
w4、
–
烷氧基
‑
nh
‑
c(o)
‑
w4、
–
烷基
‑
nh
‑
c(o)
‑
nh
‑
w4、
–
烷氧基
‑
nh
‑
c(o)
‑
nh
‑
w4、
–
烷基
‑
s(o)2‑
w4或
–
烷基
‑
nh
‑
c(s)
‑
w4,其中w4在上文定义。
[0191]
在一些实施方式中,式(i)的z是氢、烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、卤代烷基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一至三个取代基任选地取代:羟基、烷基、芳基、杂芳基、杂环基、氰基、
–
烷氧基
‑
烷基、硝基和
–
n(r5)2,其中每个r5独立地是氢、烷基、卤代烷基、
–
烷基
‑
芳基或
–
烷基
‑
杂芳基。
[0192]
在一些实施方式中,式(i)的y是
–
nh2、
–
烷基
‑
nh2,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一至三个取代基任选地取代:烷基、烷氧基、烯基和炔基。
[0193]
在一些实施方式中,式(i)的n是1或2。
[0194]
在一些实施方式中,式(i)的r是芳基或杂芳基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组中的一至三个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、
–
烷基
‑
羟基、
–
o
‑
r4、
–
o
‑
烷基
‑
r4、
–
烷基
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
r4、
–
c(o)
‑
nh
‑
r4、
–
c(o)
‑
nr4r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r4、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
c(o)
‑
o
‑
r4、
–
o
‑
c(o)
‑
r4、
–
s
‑
r4、
–
c(o)
‑
s
‑
r4、
–
s
‑
c(o)
‑
r4、
–
s(o)2‑
r4、
–
nh
‑
s(o)2‑
r4、
–
烷基
‑
s
‑
r4、
–
烷基
‑
s(o)2‑
r4、
–
nhr4、
–
nr4r4、
–
nh
‑
烷基
‑
r4、卤素、
–
cn和
–
sh,其中r4独立地是氢、烷基、烯基、烷氧基、
–
烷基
‑
羟基、芳基、杂芳基、杂环基或卤代烷基。
[0195]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是选自表2的tlr7和/或tlr8激动剂。表2中的化合物在us4,689,338、us5,389,640、us5,226,575、us6,110,929、us6,194,425、us5,352,784、us6,331,539、us5,482,936、us6,451810、wo2002/46192、wo2002/46193、wo2002/46194、us2004/0014779和us2004/0162309中更详细地描述和表征。
[0196]
表2代表性的tlr7和/或tlr8激动剂
[0197]
[0198]
[0199]
[0200]
[0201]
[0202]
[0203]
[0204][0205]
优选地,在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是瑞喹莫德或咪喹莫特。
[0206]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是由式(ii)的结构表示的tlr调控剂(例如tlr7和/或tlr8激动剂)或其药学上可接受的盐或溶剂化物:
[0207][0208]
其中v是
–
nr6r7,其中r6和r7中的每个独立地是氢、烷基、烯基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、芳硫基、
–
烷基
‑
羟基、
–
烷基
‑
c(o)
‑
o
‑
r9、
–
烷基
‑
c(o)
‑
r9或
–
烷基
‑
o
‑
c(o)
‑
r9,其中r9是氢、烷基、烯基、氢或卤代烷基;
[0209]
r
10
和r
11
独立地是氢、烷基、烯基、芳基、卤代烷基、杂芳基、杂环基或环烷基,其中的每一个被选自由以下各项组成的组的一个或多个取代基任选地取代:羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、卤素、
–
n(r5)2、
–
烷氧基
‑
烷基、
–
烷氧基
‑
烯基、
–
c(o)
‑
烷基、
–
c(o)
‑
o
‑
烷基、
–
c(o)
‑
n(r5)2、芳基、杂芳基、
–
co
‑
芳基和
–
co
‑
杂芳基,其中每个r5独立地是氢、烷基、卤代烷基、
–
烷基
‑
芳基或
–
烷基
‑
杂芳基。
[0210]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是由式(iii)的结构表示的tlr调控剂(例如tlr7和/或tlr8激动剂):
[0211][0212]
其中是双键或单键;r2和r3独立地选自h和低级烷基,或r2和r3连接以形成具有3至7个环成员的饱和碳环;r7和r8中的一个是
[0213][0214]
且另一个是氢;r4是—nr
c
r
d
或—or
10
;r
c
和r
d
是低级烷基,其中所述烷基被一个或多个—oh任选地取代;r
10
是烷基,其中所述烷基被一个或多个—oh任选地取代;z是c且是双键,或z是n且是单键;r
a
和r
b
独立地选自h、烷基、烯基、炔基和r
e
,其中所述烷基被一个或多个—or
10
或r
e
任选地取代,r
e
选自—nh2、—nh(烷基)和—n(烷基)2;当是双键时,r1缺失,或当是单键时,n1—r1和r
a
或r
b
中的一个连接以形成具有5
‑
7个环成员的饱和的、部分不饱和的或不饱和的杂环,且r
a
或r
b
中的另一个可以是氢或在适应环不饱和度的需求时不存在;且以下a
‑
d中至少一个适用:a)r7不是氢;b)r8不是氢且r
a
和r
b
中至少一个不是氢;c)z是n;或d)n1—r1和r
a
或r
b
中的一个连接以形成具有5
‑
7个环成员的饱和的、部分不饱和的或不饱和的杂环。us 20140088085a1,其公开通过引用整体并入。
[0215]
在一些实施方式中,式(iii)的化合物的r7是
[0216][0217]
另外,在式(iii)的化合物中,r
a
和r
b
中至少一个不是氢,或者例如,r
a
和r
b
中的一个是烷基且r
a
和r
b
中的另一个是氢。进一步地,式(iii)的烷基被r
e
取代。在不同的实施方式中,r
a
和r
b
两者是烷基,或者r
a
和r
b
中的一个是r
e
且另一个r
a
和r
b
是氢。例如,式(iii)的r8不是氢。
[0218]
在一些替代的实施方式中,n1和式(iii)的r
a
或r
b
中的一个连接以形成具有5
‑
7个
环成员的饱和的、部分不饱和的或不饱和的杂环,且r
a
或r
b
中的另一个是氢,或在适应环不饱和度的需求时不存在,其中所述环是5元环,或者例如所述环是:
[0219][0220]
在一些实施方式中,式(iii)的化合物中r2和r3中至少一个不是氢,或者例如r2和r3连接以形成饱和的碳环,其中所述饱和的碳环是环丙基。替代地,式(iii)的化合物中的z是n。
[0221]
在一些实施方式中,所述tlr激动剂或调控剂具有式(iv)的结构:
[0222][0223]
其中r4选自—nr
c
r
d
和—or
10
;r
c
和r
d
是低级烷基,其中所述烷基被一个或多个—oh任选地取代;r
10
是烷基,其中所述烷基被一个或多个—oh任选地取代;r
f和
r
g
是低级烷基,或者r
f和
r
g
与其连接的氮原子一起形成具有4
‑
6个环成员的饱和的杂环。例如,式(iv)的化合物中的r
f和
r
g
与其连接的氮原子一起形成饱和的杂环,其中所述杂环是吡咯烷。
[0224]
在一些替代的实施方式中,式(iii)或式(iv)的r4是—or
10
,其中r
10是
烷基或是乙基。在另一实施方式中,式(iii)或式(iv)的r4是—nr
c
r
d
,其中两者均是烷基或两者均是丙基。而且,在某些实施方式中,r
c
或r
d
中的至少一个是被一个—oh取代的烷基,且r
c和
r
d
中的至少一个是
[0225][0226]
且剩余的r
c
或r
d
是丙基。
[0227]
在一些替代的实施方式中,所述tlr是选自以下的化合物:
[0228][0229]
替代地,所述化合物选自
[0230][0231]
在一些替代的实施方式中,所述tlr激动剂化合物是
[0232][0233]
在一些替代的实施方式中,所述tlr激动剂是选自以下的化合物:
[0234][0235]
在一些替代的实施方式中,所述tlr激动剂是
[0236][0237]
在一些替代的实施方式中,所述tlr激动剂是选自以下的化合物:
[0238]
[0239]
[0240]
[0241][0242]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是由式(v)的结构表示的tlr调控剂(例如tlr7和/或tlr8激动剂)及其代谢物、溶剂化物、互变异构体和前药:
[0243][0244]
其中:
[0245]
y是cf2cf3、cf2cf2r6或芳基或杂芳基环,其中所述芳基和杂芳基环被一个或多个独立地选自以下的基团取代:烯基、炔基、br、cn、oh、nr6r7、c(=o)r8、nr6so2r7、(c1‑
c6烷基)氨基、r6oc(=o)ch=ch2‑
、sr6和so2r6,且其中所述芳基和杂芳基环进一步地被一个或多个选自以下的基团任选地取代:f、cl、cf3、cf3o
‑
、hcf2o
‑
、烷基、杂烷基和aro
‑
;
[0246]
r1、r3和r4独立地选自h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(^o)
ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6,
[0247]
或者r3和r4与其连接的原子一起形成饱和的或部分不饱和的碳环,其中所述碳环被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0248]
r2和r8独立地选自h、or6、nr6r7、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br5i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(^o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0249]
r
5a
、r
5b
和r
5c
独立地是h、f、cl、br、i、ome、ch3、ch2f5、chf2或cf3;并且
[0250]
r6和r7独立地选自h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6,
[0251]
或者r6和r7与其连接的原子一起形成饱和的或部分不饱和的杂环,其中所述杂环被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6。在某些实施方式中,r1、r3和r4各自为氢。在某些实施方式中,r
5a
、r
5b
和r
5c
各自为氢。wo 2007024612 a2,其公开通过引用整体并入。
[0252]
在一些实施方式中,式(v)的化合物的r2是or6。在一些实施方式中,r6是烷基,例如(c
l
‑4)烷基。在特定的实施方式中,r6是乙基。
[0253]
在式(v)的化合物的一些实施方式中,r2是nr6r7。在一些实施方式中,r6和r7独立地是h,烷基,例如(c
l
‑6)烷基,或杂烷基,例如(c
l
‑4)烷氧基(c2‑4)烷基。在特定的实施方式中,r6和r7独立地是h、乙基、丙基或ch2ch2och3。在式v的化合物的一些实施方式中,y是芳基,例如苯基。在一些实施方式中,所述芳基被c(=o)r8(例如对r8c(=o)苯基中的)取代。在一些实施方式中,r8是or6、nr6r7或杂环烷基。在一些实施方式中,r6和r7独立地是h或烷基,例如(c
l
‑6)烷基。在一些其他实施方式中,r6和r7与其连接的氮原子一起形成4
‑
6元氮杂环烷基环,例如吡咯烷基。在一些实施方式中,y是
[0254][0255]
在式(v)的化合物的一些实施方式中,y是cf2cf3。
[0256]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是由式(vi)的结构表示的tlr调控剂(例如tlr8激动剂)及其代谢物、溶剂化物、互变异构体、和药学上可接受的前药和盐:
[0257][0258]
其中:
[0259]
z是h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、or6或nr6r7,其中所述烷基、烯基、炔基;杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl
3 br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(ci
‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6occ=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0260]
r1、r2、r3和r4独立地选自h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、cc=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、cc=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6occ=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6,
[0261]
或者r1和r2与其连接的原子一起形成饱和的或部分不饱和的碳环,其中所述碳环被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、cc=o)or6、oc(=o)r6、cc=o)nr6r7、cci
‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6occ=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0262]
或者r3和r4一起是氧基;
[0263]
每一个r5独立地选自h、f、cl、br、i、ome、ch3、ch2f、chf2、cf3和cf2cf3;
[0264]
r6和r7独立地选自h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、cc=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6,cc=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0265]
或者r6和r7与其连接的原子一起形成饱和的或部分不饱和的杂环,其中所述杂环被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、cc=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;且n是0、1、2、3或4。wo2007040840a2,其公开通过引用整体并入。
[0266]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂是由式(vi)的结构表示的tlr调控剂(例如tlr7和/或tlr8激动剂)及其代谢物、溶剂化物、互变异构体、和药学上可接受的盐和前药:
[0267]
[0268]
其中:
[0269]
z是h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、or6或nr6r7,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6occ=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0270]
r1、r2、r3和r4独立地选自h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i
9 cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6occ=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6,
[0271]
或者r1和r2与其连接的原子一起形成饱和的或部分不饱和的碳环,其中所述碳环被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6,
[0272]
或者r3和r4一起是氧基;
[0273]
r5是h、f、cl、br、i、ome、ch3、ch2f、chf2、cf3或cf2cf3;
[0274]
r6和r7独立地选自h、烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基,其中所述烷基、烯基、炔基、杂烷基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基和杂芳基被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基5ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;
[0275]
或者r6和r7与其连接的原子一起形成饱和的或部分不饱和的杂环,其中所述杂环被一个或多个独立地选自以下的基团任选地取代:烷基、烯基、炔基、f、cl、br、i、cn、or6、nr6r7、c(=o)r6、c(=o)or6、oc(=o)r6、c(=o)nr6r7、(c1‑
c6烷基)氨基、ch3och2o
‑
、r6oc(=o)ch=ch2‑
、nr6so2r7、sr6和so2r6;和
[0276]
n是0、1、2、3或4。
[0277]
在一些实施方式中,z是or6。在一些实施方式中,r6是烷基,例如(c1‑6)烷基。在特定的实施方式中,r6是乙基、丙基、异丙基或异丁基。
[0278]
在一些实施方式中,z是nr6r7。在一些实施方式中,r6和r7独立地是h或烷基,例如(c1‑6)烷基。在一些实施方式中,r6和r7是乙基。在一些实施方式中,n是0或1。
[0279]
在一些实施方式中,r5是c f2cf3。在某些实施方式中,r3是h或烷基,例如(c1‑4)烷基,且r4是h。在某些实施方式中,r是烷基,例如(c1‑4)烷基。在一些实施方式中,r是甲基。在其他特定实施方式中,r3是h。在一些实施方式中,r是h或烷基,例如(c1‑4)烷基,且r是h。在一些实施方式中,r1是烷基。在一些实施方式中,r1是甲基。在一些特定实施方式中,r1是h。
[0280]
在一些实施方式中,由式(xv)的结构表示的所述tlr7和/或tlr8激动剂:
[0281][0282]
其中环a表示6
‑
10元芳香碳环或5
‑
10元杂芳环;
[0283]
r表示卤素原子、烷基基团、羟基烷基基团、卤代烷基基团、烷氧基基团、羟基烷氧基基团、卤代烷氧基基团、氨基基团、烷基氨基基团、二烷基氨基基团或在环中含有1至2个环杂原子的4元至7元环,所述1至2个环杂原子选自1
‑
2个氮原子和任选地0
‑
1个氧原子或0
‑
1个硫原子的杂原子;
[0284]
n表示0
‑
2的整数,且当n是2,所述r可以是相同的或不同的;
[0285]
z1表示取代或未取代的亚烷基基团或者取代或未取代的环亚烷基基团;
[0286]
x2表示氧原子、硫原子、so2、nr5、co、conr5、nr5co、so2nr5、nr5so2、nr5conr6或nr5csnr6(其中r5和r6各自独立地是氢原子,取代或未取代的烷基基团或者取代或未取代的环烷基基团);
[0287]
y1、y2和y3各自独立地表示单键或亚烷基基团;
[0288]
x1表示氧原子、硫原子、so2、nr4(其中r4是氢原子或烷基基团)或单键;
[0289]
r2表示氢原子、取代或未取代的烷基基团、取代或未取代的烯基基团、取代或未取代的炔基基团或者取代或未取代的环烷基基团;并且
[0290]
r1表示氢原子、羟基基团、烷氧基基团、烷氧基羰基基团、卤代烷基基团、卤代烷氧基基团、取代或未取代的芳基基团、取代或未取代的杂芳基基团或者取代或未取代的环烷基基团。所述接头与所述激动剂的可能的连接位点之一连接(例如与
–
nh2连接)。
[0291]
在一些实施方式中,r1表示氢、羟基、或c1‑
c6烷氧基、c2‑
c5烷氧基羰基、c1‑
c6卤代烷基、c1‑
c6卤代烷氧基、c6‑
c
10
芳基、c5‑
c
10
杂芳基或c3‑
c8环烷基基团,每个基团被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、c1‑
c6烷氧基、c1‑
c6卤代烷氧基、c2‑
c5烷氧基羰基、氨基(nh2)、(单)
‑
c1‑
c6烷基氨基和(双)
‑
c1‑
c6烷基氨基基团;
[0292]
y1表示单键或c1‑
c6亚烷基;
[0293]
x1表示单键、氧、硫原子、磺酰基(so2)或nr3;
[0294]
z1表示c2‑
c6亚烷基或c3‑
c8环亚烷基基团,每个基团被至少一个羟基任选地取代;
[0295]
x2表示nr4;
[0296]
y2表示单键或c1‑
c6亚烷基;
[0297]
y3表示单键或c1‑
c6亚烷基;
[0298]
n是整数0、1或2;
[0299]
r表示卤素或c1‑
c6烷基、c1‑
c6羟基烷基、c1‑
c6卤代烷基、c1‑
c6烷氧基、c1‑
c6羟基烷氧基、c1‑
c6卤代烷氧基、氨基(nh2)、(单)
‑
c1‑
c6烷基氨基、(双)
‑
c1‑
c6烷基氨基基团或包含环氮原子和任选地一个或多个另外的独立地选自氮、氧和硫的杂原子的c3‑
c8饱和杂环,所
述杂环任选地被一个或多个选自以下的取代基取代:卤素、羟基、氧基、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基、c2‑
c5烷基羰基和c2‑
c5烷氧基羰基;
[0300]
r2表示氢或c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基或c3‑
c8环烷基基团,每个基团被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素,羟基或c1‑
c6烷氧基,c2‑
c
10
酰氧基,选自c2‑5烷基羰基氧基基团、c2‑
c5烯基羰基氧基基团、c2‑
c5炔基羰基氧基基团、c6‑
c9芳基羰基氧基基团和c5‑
c9杂芳基羰基氧基基团的基团,其中的每个酰基氧基基团可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素,羟基,c1‑
c3烷氧基和苯基(前提是所述酰氧基基团中碳原子的总数不超过10个),氨基(nh2),(单)
‑
c1‑
c6烷基氨基,(双)
‑
c1‑
c6烷基氨基基团和包含环氮原子和任选地一个或多个另外的独立地选自氮、氧和硫的杂原子的c3‑
c8饱和杂环,所述杂环转而被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基、氧基、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基、c2‑
c5烷基羰基和c2‑
c5烷氧基羰基基团;
[0301]
r3表示氢或c1‑
c6烷基;
[0302]
r4表示co2r5、so2r5、cor5、so2nr6r7和conr6r7;
[0303]
r5独立地表示
[0304]
(i)包含1或2个选自环基团nr8、s(o)
m
或氧的杂原子的3至8元杂环,所述3至8元杂环被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基或c1‑
c6烷基和c1‑
c6烷氧基基团,或者
[0305]
(ii)c6‑
c
10
芳基或c5‑
c
10
杂芳基基团,其每个可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、氰基、c1‑
c6烷基、c1‑
c3卤代烷基、羧基、s(o)
m
r9、or
10
、co2r
10
、so2nr
10
r
11
、conr
10
r
11
、nr
10
r
11
、nr
10
so2r9、nr
10
co2r9、nr
10
cor9,或者
[0306]
(iii)c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基或c3‑
c8环烷基基团,其中的每一个可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、cn、c3‑
c8环烷基、s(o)
p
r
12
、or
13
、cor
13
、co2r
13
、so2nr
13
r
14
、conr
13
r
14
、nr
13
r
14
、nr
13
so2r
12
、nr
13
co2r
12
、nr
13
cor
12
、nr
13
so2r
12
或c6‑
c
10
芳基或c5‑
c
10
杂芳基基团或杂环,后三个基团可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:c1‑
c6烷基(被羟基、c1‑
c6烷氧基、c1‑
c6烷氧基羰基、氨基、c1‑
c6烷基氨基、双
‑
c1‑
c6烷基氨基、nh2c(o)—、c1‑
c6烷基nhc(o)、双
‑
c1‑
c6烷基nc(o)、—och2ch2oh、吡咯烷基、吡咯烷基羰基、呋喃基、哌啶基、甲基哌啶基或苯基任选地取代),c2‑
c6烯基(被苯基任选地取代),卤素,羟基,氰基,羧基,氨基,c1‑
c6烷基氨基,双
‑
c1‑
c6烷基氨基,nh2c(o)—,c1‑
c6烷基nhc(o)—,双
‑
c1‑
c6烷基nc(o),c1‑
c6烷氧基羰基,c1‑
c6烷基磺酰基、c1‑
c6烷基羰基氨基,c1‑
c6烷基羰基甲基氨基,苯基(被羟基、氟或甲基任选地取代),吡咯烷基,吡啶基,哌啶基,苯并噻唑基或嘧啶基;
[0307]
r6表示氢或c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、c3‑
c8环烷基基团或杂环,其中的每一个可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基、氧基、氰基、c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基、c3‑
c8环烷基、or
15
、s(o)
q
r
15
、co2r
16
、cor
16
、nr
16
r
17
、conr
16
r
17
、nr
16
cor
17
、nr
16
co2r
15
、so2nr
16
r
17
、nr
16
so2r
15
、或c6‑
c
10
芳基或c5‑
c
10
杂芳基基团或杂环,后三个基团可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:c1‑
c6烷基、c3‑
c8环烷基、卤素、s(o)
q
r
15
、co2r
16
、cor
16
、羟基或氰基;和
[0308]
r7表示氢、c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基或c3‑
c8环烷基基团,每个基团可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、c3‑
c8环烷基、c6‑
c
10
芳基或c5‑
c
10
杂芳
基基团、羧基、氰基、or
15
、羟基或nr
18
r
19
,或者
[0309]
r6和r7与其连接的氮原子一起形成3至8元饱和的或部分饱和的杂环,其任选地包含选自氮、s(o)
m
或氧的另外的杂原子或杂基团,所述杂环可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基、羧基、氰基、or
20
、nr
21
r
22
、s(o)
q
r
23
、cor
24
、co2r
24
、nr
24
r
25
、conr
24
r
25
、nr
24
cor
25
、nr
24
co2r
23
、so2nr
24
r
25
、nr
24
so2r
23
、c6‑
c
10
芳基、c5‑
c
10
杂芳基基团、杂环、c1‑
c6烷基、c2‑
c6烯基、c2‑
c6炔基或c3‑
c8环烷基基团,后七个基团被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基、氧基、氰基、or
20
、s(o)
q
r
23
、cor
24
、co2r
24
、nr
24
r
25
、conr
24
r
25
、nr
24
co2r
23
、nr
24
cor
25
、so2nr
24
r
25
、nr
24
so2r
23
、杂环或c6‑
c
10
芳基或c5‑
c
10
杂芳基基团,后三个基团被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:c1‑
c6烷基、卤素、羟基或氰基;
[0310]
r8表示氢、co2r
26
、cor
26
、so2r
26
、c1‑
c6烷基或c3‑
c6环烷基基团,每个基团可以被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基和nr
27
r
28
;
[0311]
r
10
、r
11
、r
16
、r
17
、r
18
、r
19
、r
21
、r
22
、r
26
、r
27
或r
28
各自独立地表示氢、和c1‑
c6烷基或c3‑
c6环烷基基团;
[0312]
r
24
和r
25
各自独立地表示氢、和c1‑
c6烷基或c3‑
c6环烷基基团;或者
[0313]
r
24
和r
25
与其连接的氮原子一起形成3至8元饱和的或部分饱和的杂环,其任选地包含另外的选自氮、s(o)
m
或氧的杂原子或杂基团;
[0314]
r9、r
12
、r
15
和r
23
表示c1‑
c6烷基或c3‑
c6环烷基;
[0315]
r
13
和r
14
分别针对r6和r7定义;
[0316]
r
20
表示c1‑
c6烷基,其被一个或多个独立地选自以下的取代基任选地取代:卤素、羟基或or
23
;
[0317]
m、p、q和r各自独立地表示整数0、1或2;并且
[0318]
a表示c6‑
c
10
芳基或c5‑
c
12
杂芳基基团。参见wo2008004948a1、us 8,138,172和us 8,575,180,其公开通过引用整体并入。
[0319]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8激动剂具有以下结构:
[0320][0321]
其中r是me或h。
[0322]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8具有以下结构:
[0323]
[0324][0325]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8激动剂具有式(xvi)的结构:
[0326][0327]
其中:r1独立地是h,
‑
c(o)r3或外消旋的、l
‑
或d
‑
氨基酸基团
‑
c(o)chnh2r4,其中r3是取代或未取代的烷基,且r4是h或者取代或未取代的烷基;
[0328]
r2是h、o、or5或n(r6)2,其中r5独立地是h或烷基,并且其中r6独立地是h、取代或未取代的烷基、环烷基,或者与氮一起形成取代或未取代的杂环烷基环;并且其中如果r是
‑
oh,所述r基团中的至少一个是外消旋的、l
‑
或d
‑
氨基酸基团
‑
c(o)chnh2r4。参见us 6,924,271,其公开通过引用整体并入。
[0329]
在一些实施方式中,所述r1基团中的至少一个是外消旋的、l
‑
或d
‑
氨基酸基团
‑
c(o)chnh2r4,其中r4是取代或未取代的烷基,并且其中剩余的r1基团是h;r2是or5或n(r6)2,其中r5独立地选自h或烷基,并且其中r独立地是h、取代或未取代的烷基、环烷基,或者与氮一起形成取代或未取代的杂环烷基环。
[0330]
在一些实施方式中,所述r1基团中的至少一个是l
‑
氨基酸基团
‑
c(o)chnh2r4,其中r4是取代或未取代的烷基,并且其中剩余的r1基团是h;r2是or5或n(r6)2,其中r4是取代的烷基,并且其中r6独立地是h或取代或未取代的烷基。
[0331]
在一些实施方式中,所述r1基团中的至少一个是l
‑
氨基酸基团
‑
c(o)chnh2r,其中r4是
‑
ch(ch3)2,并且其中剩余的r1基团是h;且r2是oh。
[0332]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或激动剂选自由一下项目组成的组:
[0333]
[0334][0335]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8具有以下结构:
[0336][0337]
其中:
[0338]
每个r1是h,或者取代或未取代的烷基、烯基或炔基,或者取代或未取代的芳基或杂芳基,所述烷基、烯基、或炔基可以被一个或多个o、s、或n杂原子间断;
[0339]
r2是h,oh,sh,卤代,或者取代或未取代的烷基、烯基或炔基,或者取代或未取代的—o
‑
(烷基)、—o
‑
(芳基)、—o
‑
(杂芳基)、—s
‑
(烷基)、—s
‑
(芳基)、—s
‑
(杂芳基)、芳基、或杂芳基,所述烷基、烯基或炔基可以被一个或多个o、s或n杂原子间断;
[0340]
r3是h,oh,或sh,或者取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、—o
‑
(烷基)、—o
‑
(芳基)、—o
‑
(杂芳基)、—s
‑
(烷基)、—s
‑
(芳基)、—s
‑
(杂芳基)、—nh(烷基)、—nh(芳基)、—nh(杂芳基)、—nh(r4)(烷基)、—nh(r4)(芳基)、或—nh(r4)(杂芳基),其中r4是取代或未取代的烷基;
[0341]
x是o或s;
[0342]
y是h、卤代、oh、or4、sh、sr4、或取代或未取代的烷基或芳基;并且
[0343]
z是h、卤代、oh、or4、sh、sr4。参见us 7,576,068,其公开通过引用整体并入。
[0344]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8激动剂具有式(xviii)的结构:
[0345][0346]
其中:
[0347]
y—z
[0348]
是—cr4r5—、—cr4r5—cr4r5—、—c(o)cr4r5—、—cr4r5c(o)—、—nr8c(o)—、—c(o)nr8—、—cr4r5s(o)2—或—cr5═
cr5—;
[0349]
l1[0350]
是—nr8—、—o—、—s—、—n(r8)c(o)—、—s(o)2—、—s(o)—c(o)n(r8)—、—n(r8)s(o)2—、—s(o)2n(r8)—或共价键;
[0351]
r1是烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基,碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基或取代的杂芳基杂烷基;
[0352]
x1是亚烷基、取代的亚烷基、杂亚烷基、取代的杂亚烷基、亚烯基、取代的亚烯基、亚炔基、取代的亚炔基、亚碳环基、取代的亚碳环基、亚杂环基、取代的亚杂环基、—nr8—、—o—、—c(o)—、—s(o)—、s(o)2—或键;
[0353]
d是碳环基、取代的碳环基、杂环基或取代的杂环基,其中所述碳环基、取代的碳环基、杂环基或取代的杂环基被一个或两个
‑
l2‑
nr6r7取代;或者
[0354]
d是杂环基、取代的杂环基、杂芳基或取代的杂芳基,其中所述杂环基、取代的杂环基、杂芳基或取代的杂芳基包含一至四个氮原子;
[0355]
每个l2独立地是亚烷基、取代的亚烷基、杂亚烷基、取代的杂亚烷基或共价键;
[0356]
每个r3独立的是卤素、氰基、叠氮基、硝基、烷基、取代的烷基、羟基、氨基、杂烷基、取代的杂烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、—cho、—c(o)or8、—s(o)r8、—s(o)2r8;—c(o)nr9r
10
、—n(r9)c(o)r8、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、—s(o)2nr9r
10
、—n(r9)s(o)2r8、—n(r9)s(o)2or
10
、—os(o)2nr9r
10
;
[0357]
n是0、1、2、3、4或5;
[0358]
r4和r
5各
自独立地是h、烷基、取代的烷基、卤代烷基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基、或取代的杂芳基杂烷基、氰基、叠氮基、or8、—c(o)h、—c(o)r8、—s(o)r8、—s(o)2r8、—c(o)or8、或—c(o)nr9r
10
;或者
[0359]
r4和r5与其两者均连接的碳一起形成碳环、取代的碳环、杂环或取代的杂环;或者
[0360]
当在相同碳原子上时,r4和r5与其连接的所述碳一起是—c(o)—或—c(nr8)—;或者
[0361]
相邻碳原子上的两个r4或两个r5在与其连接的所述碳一起时形成3至6元碳环、取代的碳环、杂环或取代的杂环;
[0362]
r6和r7各自独立地是h、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤代烷基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳
基烷基、取代的杂芳基烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基,芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基、或取代的杂芳基杂烷基、—c(o)h、—c(o)r8、—s(o)r8、—s(o)2r8、—c(o)or8、或—c(o)nr9r
10
、s(o)2nr9r
10
;或者
[0363]
r6和r7与其两者均连接的氮一起形成取代或未取代的杂环,所述杂环可以包含一个或多个选自n、o、p或s的另外的杂原子;或者
[0364]
r7与其两者均连接的l2和n形成取代或未取代的3至8元杂环,所述杂环可以包含一个或多个选自n、o、s或p的另外的杂原子;
[0365]
r8是h、烷基、取代的烷基、卤代烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基、或取代的杂芳基杂烷基;并且
[0366]
r9和r
10
各自独立地是h、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、卤代烷基、杂烷基、取代的杂烷基、碳环基、取代的碳环基、碳环基烷基、取代的碳环基烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基、碳环基杂烷基、取代的碳环基杂烷基、杂环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、芳基杂烷基、取代的芳基杂烷基、杂芳基杂烷基、或取代的杂芳基杂烷基;或者
[0367]
r9和r
10
与其两者均键合的氮一起形成取代或未取代的杂环;
[0368]
其中每个取代的烷基、取代的烯基、取代的炔基、取代的杂烷基、取代的碳环基、取代的碳环基烷基、取代的杂环基、取代的杂环基烷基、取代的芳基烷基、取代的杂芳基烷基、取代的碳环基杂烷基、取代的杂环基杂烷基、取代的芳基杂烷基、取代的杂芳基杂烷基、取代的亚烷基、取代的杂亚烷基、取代的亚烯基、取代的亚炔基、取代的亚碳环基、或取代的亚杂环基被一至四个选自以下的取代基独立地取代:
‑
卤素、—r、—o
‑
、
═
o、—or、—sr、—s
‑
、—nr2、—n(+)r3、
═
nr、—c(卤素)3、—cr(卤素)2、—cr2(卤素)、—cn、—ocn、—scn、—n
═
c
═
o、—ncs、—no、—no2、
═
n2、—n3、—nrc(
═
o)r、—nrc(
═
o)or、—nrc(
═
o)nrr、—c(
═
o)nrr、—c(
═
o)or、—oc(
═
o)nrr、—oc(
═
o)or、—c(
═
o)r、—s(
═
o)2or、—s(
═
o)2r、—os(
═
o)2or、—s(
═
o)2nr、—s(
═
o)r、—nrs(
═
o)2r、—nrs(
═
o)2nrr、—nrs(
═
o)2or、—op(
═
o)(or)2、—p(
═
o)(or)2、—p(o)(or)(o)r、—c(
═
o)r、—c(
═
s)r、—c(
═
o)or、—c(
═
s)or、—c(
═
o)sr、—c(
═
s)sr、—c(
═
o)nrr、—c(
═
s)nr r、—c(
═
nr)nrr和—nrc(
═
nr)nrr;其中每个r独立地是h、烷基、环烷基、芳基、芳基烷基或杂环基。参见us 20100143301 a1,其公开通过引用整体并入。
[0369]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8具有以下结构:
[0370][0371]
其中:
[0372]
l1是—nh—或—o—;
[0373]
r1是烷基、取代的烷基、杂烷基、取代的杂烷基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基、碳环基烷基或取代的碳环基烷基;
[0374]
r4和r5中每个独立地是h或c1‑
c6烷基,或者r4和r5与其连接的碳一起是—c(o)—;
[0375]
x1是c1‑
c6亚烷基、c1‑
c6杂亚烷基或c1‑
c6取代的杂亚烷基;
[0376]
d是苯基、联苯基或吡啶基,其中所述苯基、联苯基或吡啶基被
‑
l2‑
nr6r7取代;或者
[0377]
d是吡啶基、哌啶基、哌嗪基或1,2,3,4
‑
四氢异喹啉基;
[0378]
n是0或1;
[0379]
r3是卤素、氰基、烷基、碳环基、碳环基烷基、卤代烷基、—c(o)or6、—c(o)nr9r
10
或—cho;
[0380]
l2是c1‑
c6亚烷基或共价键;
[0381]
r6和r7中每个独立地是h、烷基或杂芳基;或者
[0382]
r6和r7与其连接的氮一起形成取代或未取代的4
‑
6元杂环,所述杂环包含0至2个选自n、o或s的杂原子。
[0383]
在一些实施方式中,所述tlr7和/或tlr8具有以下结构:
[0384][0385]
c.所述治疗组合物中免疫治疗剂的量
[0386]
在另一方面,本公开提供了一种治疗组合,其包含适合用于疾病(例如肿瘤和癌)的联合疗法治疗的量的免疫调控性化学治疗剂和免疫治疗剂。
[0387]
在一些实施方式中,所述免疫治疗剂的量能够:(1)在富集的人血dc中诱导ifn
‑
α;(2)在富集的人血dc中诱导tnf
‑
α;和/或(3)在富集的人血dc中诱导il
‑
12
‑
α。
[0388]
用于测量所述免疫治疗剂的活性的方法是:1)测量免疫疗法刺激的细胞因子从人树突状细胞中的释放的测定;和2)免疫疗法治疗的肿瘤模型中的功效研究。
[0389]
在一些实施方式中,使用口服制剂或静脉制剂以使所述免疫治疗剂的局部浓度(例如在实体瘤的肿瘤位点的附近或在实体瘤的肿瘤位点处)为约0.005μg/ml至约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12μg/ml,或由上述清单中的任何数值对限定的范围(包括所有端点值)的量来口服或静脉施用所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)。
[0390]
可以施用本领域已知的方法(例如测量组织或血药浓度)来测量所述免疫治疗剂的局部浓度(例如在实体瘤的肿瘤位点的附近或在实体瘤的肿瘤位点处)。治疗剂的局部有效浓度依赖于其从各种途径的吸收、组织分布和代谢过程,并且可以使用本领域已知的方法来常规测量药剂的血浆药代动力学和组织浓度。
[0391]
在一些实施方式中,以使所述免疫治疗剂的局部浓度(例如在实体瘤的肿瘤位点的附近或在实体瘤的肿瘤位点处)为约0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml或0.4μg/ml至约0.5μg/ml,或由上述清单中的任何数值对限定的范围(包括所有端点值)
的量来施用所述免疫治疗剂。
[0392]
在一些实施方式中,以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg或0.015mg/kg至约0.02mg/kg,或由上述清单中的任何数值对限定的范围(包括所有端点值)的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的口服制剂。在一些实施方式中,以约0.0005mg/kg至约0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg或0.02mg/kg,或由上述清单中的任何数值对限定的范围(包括所有端点值)的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的口服制剂。
[0393]
在一些实施方式中,以至少0.0001mg/kg但不少于或约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg,0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的口服制剂。
[0394]
在一些实施方式中,以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg或约0.015mg/kg至约0.02mg/kg,或由上述清单中的任何数值对限定的范围(包括所有端点值)的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉制剂。在一些实施方式中,所述受试者以约0.0005mg/kg至约0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg或0.02mg/kg,或由上述清单中的任何数值对限定的范围(包括所有端点值)的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉制剂。
[0395]
在一些实施方式中,所述方法包括以约0.0008mg/kg至约0.0133mg/kg的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉制剂。
[0396]
在一些实施方式中,以至少0.0001mg/kg但不少于或约0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg或约0.01mg/kg的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂(例如瑞喹莫德或其类似物)的静脉制剂。关于免疫治疗及安全剂量的参考,参见jurk等,nature immunology,低4卷,no.6”499(2002),和pockros等,j.hepatology,47:174
‑
182(2007),其公开通过引用整体并入。
[0397]
iii.药物制剂和施用
[0398]
本公开进一步涉及一种药物制剂,其包含本发明实施方式所述的化合物或其药学上可接受的盐,和一个或多个药学上可接受的载体。
[0399]
可以使用各种各样的施用途径或模式向患者递送本文所述的化合物(包括药学上可接受的载体,例如其加成盐或水合物)。合适的施用途径包括吸入、透皮、口服、直肠、经粘膜、肠道和肠胃外施用,包括肌肉内、皮下和静脉注射。优选地,本发明实施方式所述的包含
免疫调控剂的化合物胃肠外施用、更优选地静脉施用。
[0400]
如本文所用,术语“施用(administering/administration)”旨在涵盖所有用于将化合物直接或间接递送至其预期作用位点的手段。
[0401]
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物可以独立施用,与本发明实施方式所述的其他化合物联合施用,和/或以与其他治疗剂组合的混合物施用。当然,可以与本公开所属的化合物共施用的治疗药剂的选择将部分取决于正在治疗的病况。
[0402]
例如,当向患有由依赖自诱导剂的生物体引起的疾病状态的患者施用时,本发明实施方式的化合物可以以含有用于治疗与疾病通常相关的疼痛、感染和其他症状和副作用的药剂的混合物形式施用。此类药剂包括例如镇痛剂、抗生素等。
[0403]
当对接受癌症治疗的患者施用时,所述化合物可以以含有抗癌剂和/或补充增效剂的混合物形式施用。所述化合物也可以以含有治疗放射疗法副作用的药剂(例如止吐药、放射防护剂等)的混合物形式施用。
[0404]
可与本发明实施方式的化合物共施用的补充增效剂包括例如三环抗抑郁药(例如丙咪嗪(imipramine)、地昔帕明、阿米替林、氯米帕明、曲米帕明、多塞平(doxepin)、去甲替林、普罗替林、阿莫沙平和马普替林);非三环类药物和抗抑郁药(例如舍曲林、曲唑酮和西酞普兰);ca+2拮抗剂(例如维拉帕米、硝苯地平、尼群地平和卡罗维林(caroverine));两性霉素;三苯乙醇类似物(例如他莫昔芬);抗心律失常药(例如奎尼丁);抗高血压药物(例如利血平);硫醇消耗剂(例如,丁硫氨酸和亚砜亚胺);和亚叶酸钙。
[0405]
本发明实施方式所述的活性化合物本身或以药物组合物的形式施用,其中活性化合物与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合。根据本发明实施方式使用的药物组合物通常使用一种或多种生理学可接受的载体以常规方式配制,所述载体包括赋形剂和助剂,其促进将活性化合物加工成可药用的制剂。适合的制剂取决于所选择的施用途径。
[0406]
对于透粘膜施用,在制剂中使用适合待渗透屏障的渗透剂。这种渗透剂是本领域公知的。
[0407]
对于口服施用,可通过将活性化合物与本领域公知的药学上可接受的载体组合来容易地配制化合物。此类载体能够将本发明实施方式的化合物配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液和悬浮液,供待治疗患者口服。口服药物制剂可以如下获得:固体赋形剂,任选研磨得到的混合物,并在加入合适的助剂后加工颗粒混合物,如果需要得到片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂特别是诸如糖类的填充剂,包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇;纤维素制剂,例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。如果需要,可以加入崩解剂,如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。
[0408]
糖衣丸芯具有合适的涂层。为此,可使用浓缩糖溶液,其可任选地包含阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中,用于识别或表征活性化合物剂量的不同组合。
[0409]
可口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推合式胶囊,以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制成的软密封胶囊。推合式胶囊可包含与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉
和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中,活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体(例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇)中。此外,可以添加稳定剂。用于口服施用的所有制剂的剂量应适合这种施用。
[0410]
对于口腔施用,所述组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
[0411]
对于通过吸入施用,使用合适的推进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体),将根据本发明实施方式使用的化合物以气雾剂喷雾形式从加压包或喷雾器方便地递送。在加压气雾剂的情况下,剂量单位可以通过提供阀门以递送计量的量来确定。用于吸入器或吹入器的例如明胶的胶囊和药筒可配制成含有化合物和合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0412]
可以将化合物配制为通过注射(例如通过推注或连续输注)来进行肠胃外施用。注射是本发明实施方式所述的组合物的优选施用方法。注射制剂可以以单位剂型(例如安瓿或多剂量容器)存在,并添加防腐剂。组合物可以采用油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液等形式,并且可以包含配制剂,例如可以加入悬浮剂、稳定剂和/或分散剂,例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐,例如海藻酸钠。
[0413]
肠胃外施用的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外,活性化合物的悬浮液可以制备成合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油如芝麻油,或合成脂肪酸酯,如油酸乙酯或甘油三酯,或脂质体。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质,例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地,悬浮液还可包含合适的稳定剂或药剂,其增加化合物的溶解度以允许制备高度浓缩的溶液。对于注射,本发明实施方式所述的药剂可以配制在水溶液中,优选地在生理相容的缓冲液(例如汉克斯溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液)中。
[0414]
替代地,活性成分可以是粉末形式,以便在使用前用合适的媒介物例如无菌无热原水配制。
[0415]
所述化合物也可以配制成直肠组合物,例如栓剂或保留灌肠剂,例如含有常规栓剂基质,例如可可脂或其他甘油酯。
[0416]
除了先前描述的制剂之外,所述化合物还可以配制成贮库制剂。此类长效制剂可通过植入或经皮递送(例如皮下或肌内)、肌内注射或经皮贴剂递送。因此,例如,化合物可以与合适的聚合物或疏水材料(例如,作为可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制,或作为微溶衍生物,例如作为微溶盐。
[0417]
所述药物组合物还可包含合适的固相或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的例子包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。
[0418]
在一些实施方式中,本发明实施方式所述的药物组合物进一步包含除化疗剂和免疫治疗剂之外的另外的治疗剂。
[0419]
在一些实施方式中,所述另外的治疗剂是抗癌剂。
[0420]
在一些实施方式中,所述另外的抗癌剂选自抗代谢物、拓扑异构酶i和ii的抑制剂、烷化剂、微管抑制剂、抗雄激素剂、gnrh调节剂或其混合物。
[0421]
在一些实施方式中,所述另外的治疗剂是化学治疗剂。
[0422]
本文通过“化疗剂”是指可用于治疗癌症的化学化合物。实例为但不限于:吉西他滨、伊立替康、阿霉素、5
‑
氟尿嘧啶、阿糖胞苷("ara
‑
c")、环磷酰胺、噻替哌、白消安、细胞毒
素、taxol、甲氨蝶呤、顺铂、美法仑(melphalan)、长春碱和卡铂。
[0423]
在一些实施方式中,所述第二化疗剂选自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、伊马替尼、紫杉醇、环磷酰胺、洛伐他汀、米诺辛、吉西他滨、阿糖胞苷、5
‑
氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、多西他赛、戈舍瑞林、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他滨、埃坡霉素、长春瑞滨、喜树碱、柔红霉素、肌动蛋白霉素d、米托蒽醌、吖啶、阿霉素、表柔比星或伊达比星。
[0424]
iv.试剂盒
[0425]
在另一方面,本发明实施方式提供了一种试剂盒,其包括本文提供的治疗组合和所述治疗组合物的说明书。所述试剂盒还可包括容器和任选地一个或多个小瓶、试管、烧瓶、瓶子或注射器。试剂盒的其他形式对于本领域技术人员来说是显而易见的并且在本发明的范围内。
[0426]
v.医疗用途
[0427]
在另一方面,本公开提供了一种用于在需要此类治疗的患者中治疗疾病状况的方法,其包括:向所述受试者施用包含治疗有效量的本发明实施方式所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的治疗组合或药物组合物。
[0428]
除了上述组合物和构建体之外,本发明实施方式还提供所公开组合的多种用途。本发明实施方式的组合包含具有肿瘤细胞杀伤剂、treg抑制剂、骨髓源性抑制细胞抑制剂和nk激活剂的一种或多种功能的免疫调节化疗剂。这些用途包括向有此需要的动物(例如哺乳动物或人)施用有效量的本发明实施方式所述的化合物,即施用所公开的组合物。
[0429]
本发明实施方式所述的组合物可用于治疗受试者(例如人)的疾病(例如癌症)。提供了通过以药学上可接受的方式向受试者提供所述组合物与药学上有效的量的本公开的组合物来治疗肿瘤的组合和用途。
[0430]
本文通过“癌症”是指以不受调节的细胞增殖为特征的人类病理状况。实例包括但不限于:癌、淋巴瘤、母细胞瘤和白血病。癌症的更具体实例包括但不限于:急性髓性白血病(aml)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、卵巢癌和视网膜母细胞瘤。
[0431]
本文通过“抑制”或“治疗(treating/treatment)”是指减少、治疗性治疗和预防性或预防性治疗,其中目的是减少或预防目标病理病症或病况。在一个实例中,在施用本发明实施方式的化合物之后,癌症患者可能经历肿瘤大小的减小。“治疗(treating/treatment)”包括(1)抑制正在经历或表现出疾病病理或症状的受试者的疾病,(2)改善正在经历或表现出疾病病理或症状的受试者的疾病,(3)影响正在经历或表现出疾病的病理或症状的受试者或患者的疾病的任何可测量的减少。就本发明实施方式的化合物可以防止癌细胞生长和/或杀死癌细胞而言,它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。
[0432]
本文通过“治疗有效量”是指本文提供的化合物有效“治疗”受试者或哺乳动物的病症的量。在癌症的情况下,治疗有效量的药物可以减少癌细胞的数量,缩小肿瘤大小,抑制癌细胞向周围器官的浸润,抑制肿瘤转移,在一定程度上抑制肿瘤生长,延长无进展期生存,延长总生存期,延长完全缓解后的复发时间和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在一些实施方式中,根据recist标准评估对治疗的应答。
[0433]
与一个或多个其他治疗剂“联合”施用包括同时(同时地)和以任何顺序连续给药。如本文所用,术语“药物组合”是指通过混合或组合活性成分获得的产品,并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分,例如式(1)化合物和共试剂均以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”是指活性成分,例如式(1)的化合物和共试剂均作为独立的实体同时、同时地或顺序给予患者,没有特定的时间限制,其中这样的施用在患者体内提供治疗有效水平的活性成分病人。后者也适用于混合物疗法,例如三种或更多种活性成分的施用。
[0434]
在一些实施方式中,所述疾病状况是肿瘤或癌症。在一些实施方式中,癌症或肿瘤选自胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑/cns、头颈癌、咽喉癌、霍奇金疾病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、尤文氏肉瘤、小细胞肺癌、绒毛膜癌、横纹肌肉瘤、维尔姆斯瘤、神经母细胞瘤、毛细胞白血病、口/咽癌、食道癌、喉癌、肾癌或淋巴瘤。
[0435]
在一些实施方式中,所述疾病状况包括异常细胞增殖,例如癌前病变。
[0436]
本发明实施方式特别适用于治疗癌症和抑制动物体内肿瘤细胞或癌细胞的增殖。癌症或癌前病变,包括肿瘤、转移或任何以不受控制的细胞生长为特征的疾病或病症,可以通过施用本发明实施方式所述的药物
‑
配体复合物来治疗或预防。
[0437]
本发明实施方式所述的化合物可以靶向的癌前病症的代表性实例包括:化生、增生、发育不良、结肠直肠息肉、光化性角化病、光化性唇炎、人乳头瘤病毒、白斑、扁平苔藓和鲍温病。
[0438]
本发明实施方式所述的化合物可以靶向的癌症或肿瘤的代表性实例包括:肺癌、结肠癌、前列腺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌、cns癌、肾癌、肾癌、胰腺癌癌症、胃癌、口腔癌、鼻癌、宫颈癌和白血病。
[0439]
在一些实施方式中,所述异常增殖是癌细胞的。
[0440]
在一些实施方式中,所述癌症选自由如下项目组成的组:乳腺癌、结肠直肠癌、弥漫性大b细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、滤泡性淋巴瘤、胃癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肝细胞癌、肺癌癌症、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和肾细胞癌。
[0441]
在一些实施方式中,所治疗的癌症选自由如下项目组成的组:急性髓性白血病(aml)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、蕈样真菌病、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(nhl)和卵巢癌。
[0442]
在一些实施方式中,本公开提供了用于杀死细胞的化合物。将化合物以足以杀死所述细胞的量给予细胞。在示例性实施方式中,将化合物施用于携带细胞的受试者。在另一个示例性实施方式中,施用用于延缓或停止包括细胞的肿瘤的生长(例如,细胞可以是肿瘤细胞)。对于延缓生长的施用,细胞的生长速度应至少比给药前的生长速度低10%。优选地,生长速率将被延缓至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或完全停止。
[0443]
此外,本公开提供了用作药物的本发明实施方式的化合物或药物组合物。本公开还提供了用于杀死、抑制或延迟肿瘤或癌细胞的增殖,或用于治疗其中涉及tlr7和/或tlr8的疾病的化合物或药物组合物。
[0444]
有效剂量
[0445]
适用于本发明实施方式的药物组合物包括其中活性成分以治疗有效量,即以有效实现其预期目的的量包含的组合物。对特定应用有效的实际量尤其取决于所治疗的病症。有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内,尤其是根据本文的详细公开内容。
[0446]
对于本文所述的任何化合物,治疗有效量可以最初从细胞培养测定法中确定。目标血浆浓度将是能够抑制细胞生长或分裂的活性化合物的浓度。在优选的实施方式中,细胞活性被抑制至少25%。目前优选的是能够诱导至少约30%、50%、75%或甚至90%或更高的细胞活性抑制的活性化合物的目标血浆浓度。可以监测患者细胞活性的抑制百分比以评估所达到的血浆药物浓度的适当性,并且可以向上或向下调整剂量以达到所需的抑制百分比。
[0447]
用于人的治疗有效量也可以从动物模型确定。例如,可以配制用于人的剂量以达到已发现对动物有效的循环浓度。如上所述,可以通过监测细胞抑制和向上或向下调整剂量来调整人体内的剂量。
[0448]
治疗有效剂量也可以从已知表现出相似药理学活性的化合物的人类数据中确定。可以根据所施用化合物与已知化合物相比的相对生物利用度和效力来调整应用的剂量。
[0449]
基于上述方法和本领域公知的其他方法调整剂量以在人类中实现最大功效。
[0450]
在一些实施方式中,将本发明实施方式的组合物局部或区域递送至位于受试者体内的肿瘤、全身递送、或通过瘤内注射或通过直接注射到肿瘤脉管系统中递送。
[0451]
在一些实施方式中,本文提供的组合被配置为用于系统性递送。在一些实施方式中,所述组合被配置为用于口服施用或肠胃外注射。在一些实施方式中,所述组合被配置为用于静脉注射或肿瘤内注射。
[0452]
在另一方面,本公开提供了一种用于在需要这种治疗的受试者中治疗肿瘤或异常细胞增殖的方法,其包括向所述受试者施用本文提供的组合物。
[0453]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg至约0.02mg/kg,或由前述清单中的数值对限定的任何范围(包括所有端点值)的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂。
[0454]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以至少0.0001mg/kg但不少于或约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg或0.01mg/kg的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的口服制剂。
[0455]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约0.0005mg/kg、0.0006mg/kg、0.0007mg/kg、0.0008mg/kg、0.0009mg/kg、0.001mg/kg、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg或0.006mg/kg至约0.015mg/kg,或由前述清单中的数值对限定的任何范围(包括所有端点值)的剂量每周向所述受试者施用包含所述免疫治疗剂的静脉制剂。
[0456]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约40
‑
50mg/kg的剂量在2
‑
5天内以分开剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0457]
在一些实施方式中,以2
‑
4周的间隔反复施用所述组合。
[0458]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约10至15mg/kg的剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂,每7至10天给药所述剂量。
[0459]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约3至5mg/kg的剂量每周两次向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0460]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约60
‑
120mg/m2/天的剂量每天持续向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0461]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约400
‑
1000mg/m2的剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的口服制剂,在4
‑
5天内分次给药所述剂量。
[0462]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以约50
‑
100mg/m2/天或1
‑
5mg/kg/天的剂量向所述受试者施用包含所述免疫调控性化学治疗剂的静脉制剂。
[0463]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以间歇疗法的形式向所述受试者施用静脉制剂,其中40
‑
50mg/kg在2
‑
5天内以分次剂量施用。施用以2
‑
4周的间隔重复。在一些实施方式中,所述剂量是10至15mg/kg,每7至10天给予;或者3至5mg/kg每周两次
[0464]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以持续每日疗法的形式,以1
‑
2.5mg/kg/天的剂量向所述受试者施用静脉制剂。
[0465]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以间歇疗法的形式向所述受试者施用口服制剂,其中以40
‑
50mg/kg的剂量在4
‑
5天内以分次施用。
[0466]
在一些实施方式中,本文提供的方法包括以持续每日疗法的形式用1
‑
5mg/kg/天的剂量向所述受试者施用口服制剂。
[0467]
在局部施用的情况下,施用的化合物的全身循环浓度不是特别重要。在这种情况下,施用所述化合物以在局部区域达到有效达到预期结果的浓度。
[0468]
治疗量的本文公开的特异性抗体也可以作为组合的组分与免疫治疗剂一起以单一混合物形式或分开施用。在一些实施方式中,治疗量是消除或减少患者的肿瘤负荷,或者防止或减少转移性细胞增殖的量。剂量将取决于许多参数,包括肿瘤的性质、患者病史、患者状况、其他溶瘤剂的可能共同使用以及施用方法。施用方法包括注射(例如,肠胃外、皮下、静脉内、腹膜内等),其中在无毒的药学上可接受的载体(例如水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液、5%人血清白蛋白、固定的油、油酸乙酯或脂质体)中提供抗体。典型的剂量范围可为约0.01至约20mg/kg,例如约0.1至约10mg/kg。其他有效的施用方法和剂量可以通过常规实验确定并且在本发明的范围内。
[0469]
对于其他施用方式,剂量的量和间隔可以独立调整,以提供对所治疗的特定临床适应症有效的施用化合物的血浆水平。例如,在一个实施方式中,可以每天多次以相对高的浓度施用根据本发明实施方式的化合物。替代地,可能更希望以最小有效浓度施用本发明实施方式的化合物并使用较低频率的施用方案。这将提供与个体疾病的严重程度相称的治疗方案。
[0470]
利用本文提供的教导,可以计划有效的治疗方案,其不会引起毒性并且完全有效地治疗由特定患者表现出的临床症状。该计划应包括通过考虑化合物效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的存在和严重程度、首选施用方式和所选药物的毒性特征等因素来仔细选择活性化合物。在这些实施方式的各个方面,避免的毒性是可观察到的毒性、显实质性毒性、严重的毒性、或可接受的毒性、或剂量限制性的毒性(例如但不限于mtd)。可观察
到的毒性是指虽然观察到变化,但影响可以忽略不计或轻微。实质性毒性意味着对患者的整体健康或生活质量有负面影响。在某些情况下,可以通过其他正在进行的医疗干预来减轻或解决严重的毒性。严重的毒性是指该效应需要紧急医疗干预和/或剂量减少或治疗暂停。毒性的可接受性将受到正在治疗的特定疾病及其严重程度和减轻正在进行的医疗干预的可用性的影响。毒性和不良事件有时根据5分制进行分级。1级或轻度毒性无症状或仅引起轻度症状;可能仅以临床或诊断观察为特征;并且没有指示干预。2级或中度毒性可能会损害日常生活活动(如准备膳食、购物、理财、使用电话等),但只需要进行微量、局部或非侵入性干预。3级毒性具有医学意义,但不会立即危及生命;需要住院或延长住院时间;与自我照顾相关的日常生活活动(如洗澡、穿衣和脱衣、自己吃饭、如厕、服药和不卧床不起)可能会受到影响。4级毒性危及生命,需要紧急干预。5级毒性产生与不良事件相关的死亡。因此,在各种实施方式中,与针对任一活性成分(免疫治疗剂或免疫调节化学治疗剂)独立使用的类似有效剂量(如果可以达到)相比,所公开的治疗性治疗方案将与治疗相关的毒性的等级降低至少一个等级。替代地,在各种实施方式中,使用所公开组合的方案实现治疗效果,同时产生比与剂量限制性毒性或者方案的一种或另一种所需活性成分相关的毒性更小级别的毒性。在其他实施方式中,使用所公开组合的方案将毒性限制在2级或更低、1级或更低,或产生没有观察到毒性。
[0471]
虽然在此已经示出和描述了本公开的优选实施方式,但是对于本领域技术人员来说显而易见的是,这些实施方式仅作为实例提供。在不脱离本发明的情况下,本领域技术人员现在将想到许多变化、变化和替换。应当理解,在实践本发明时可以采用这里描述的本发明事实方式的各种替代方案。以下权利要求旨在限定本发明事实方案的范围,并且由此涵盖在这些权利要求及其等同物的范围内的方法和结构。
[0472]
实施例
[0473]
本发明通过以下说明本发明实施方式的化合物的制备的实施例进一步举例说明,但不限于此。
[0474]
实施例1
[0475]
使用环磷酰胺与tlrl联合疗法在免疫活性小鼠中体内杀伤肿瘤细胞
[0476]
根据机构动物护理和使用委员会制定的动物实验指南,所有balb/c小鼠都保持在无特定病原体的条件下,并在6
‑
16周龄之间使用。所有实验均已获得机构动物护理和使用委员会的批准,并符合相关监管标准。c26结肠肿瘤细胞系在5%co2中培养,并在补充有10%热灭活胎牛血清(fbs)(sigma)、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的rpmi
‑
1640中体外维持。在6至8周大的麻醉小鼠的背部处s.c.注射c26细胞。沿三个正交轴(x、y和z)测量肿瘤体积并将其计算为肿瘤体积=(xyz)/2。用环磷酰胺的i.p.注射、1.6μg tlrl(瑞喹莫德)的i.v.注射或两种治疗的组合(每周施用一次,施用3次)来治疗小鼠。注射时间点如图1a所示。观察到的肿瘤体积如图1b所示。联合治疗在减少肿瘤体积方面比任何一种独立治疗(这两者是相似的)都有更大的效果。
[0477]
在单独的实验中,用1.6μg tlrl(瑞喹莫德)的i.v.注射或者与1mg、0.5mg、0.25mg或0.1mg环磷酰胺的联合疗法(示于图1c中)来治疗小鼠。
[0478]
在单独的实验中,用3.2ug tlrl(瑞喹莫德)的i.v.注射或者与1mg、0.5mg、0.25mg或0.1mg环磷酰胺的联合疗法(示于图1d中)来治疗小鼠。
[0479]
实施例2
[0480]
肿瘤分离和免疫组织化学
[0481]
向balb/c小鼠(6
‑
8周龄,雌性,购自北京vital river)在麻醉小鼠的背部s.c.注射c26细胞。当肿瘤体积达到100
‑
120mm3时开始治疗,每周进行一次环磷酰胺的i.p.注射或1.6μg tlrl(瑞喹莫德)的i.v.注射或其组合。在第二次治疗的第二天,从经治疗的小鼠手术移除肿瘤的组织标本,在4%缓冲甲醛中固定24小时,加工成石蜡,然后以5μm切片。对于免疫组织化学,将组织切片脱蜡,然后在高温(水浴,在98℃以30分钟)在tris
‑
edta缓冲液(0.01m ph 9.0)中进行抗原修复。在用pbs中的10%山羊血清封闭非特异性结合后,以1μg/ml的浓度应用一抗大鼠抗小鼠cd45(纯化克隆#30
‑
f11,ebiosciencetm,thermofisher,目录#:14
‑
0451
‑
81)并在4度孵育过夜。用pbs洗涤3次后,应用二抗山羊抗体大鼠hpr。使用标准dab(3,3'
‑
二氨基联苯胺)试剂盒进行可视化,并根据制造商推荐的方案使用h&e对切片进行复染。大量cd45
+
细胞浸润在tlrl(瑞喹莫德)或瑞喹莫德/环磷酰胺处理的肿瘤微环境中。
[0482]
实施例3
[0483]
在用环磷酰胺或tlrl或联合疗法治疗的小鼠淋巴结和脾脏中用ifnα诱导基因表达检测全身免疫激活。
[0484]
向balb/c小鼠(6
‑
8周龄,雌性,购自北京vital river)在麻醉小鼠的背部s.c.注射c26细胞。当肿瘤体积达到100
‑
120mm3时开始治疗,每周进行一次环磷酰胺的i.p.注射或1.6μg tlrl(瑞喹莫德)的i.v.注射或其组合。在第二次治疗的第二天(即第8天),从经治疗的小鼠中切下引流液ln和脾脏,并使用trizol试剂提取rna。将cdna逆转录后,进行定量实时pcr,并将ifnα诱导基因表达数据相对于两个看家基因(肌动蛋白)的几何平均值进行归一化:
[0485]
小鼠肌动蛋白:f:cattgctgacaggatgcagaagg(seq id no.:1)
[0486]
小鼠肌动蛋白r:tgctggaaggtggacagtgagg(seq id no.:2)
[0487]
小鼠mx2 f:cctgcctgccatcgctgtc(seq id no.:3)
[0488]
小鼠mx2 r:gcctctccactcctctccctcatt(seq id no.:4)
[0489]
小鼠irf7 f:ttgggcaagacttgtcagca(seq id no.:5)
[0490]
小鼠irf7 r:atacccatggctccagcttc(seq id no.:6)
[0491]
小鼠isg15 f:cagcaatggcctgggacctaa(seq id no.:7)
[0492]
小鼠isg15 r:ggaaagccggcacaccaatc(seq id no.:8).
[0493]
在tlrl(瑞喹莫德)或瑞喹莫德/环磷酰胺治疗的c26小鼠中观察到上调ifna诱导基因簇。