技术特征：
1.一种工程化的t细胞，所述工程化的t细胞表达：嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，所述细胞内结构域包含共刺激结构域和/或信号传导结构域；以及异源嵌合蛋白，所述异源嵌合蛋白包含通用结构：n末端-(a)-(b)-(c)-c末端，其中：(a)是包含第一跨膜蛋白的细胞外结构域的第一结构域，(b)是连接所述第一结构域和第二结构域的接头结构域，并且(c)是包含第二跨膜蛋白的细胞外结构域的第二结构域。2.如权利要求1所述的工程化的t细胞，其中所述第一结构域基本上包含所述第一跨膜蛋白的整个细胞外结构域，和/或所述第二结构域基本上包含所述第二跨膜蛋白的整个细胞外结构域。3.如权利要求1或权利要求2所述的工程化的t细胞，其中所述第一结构域能够结合所述第一跨膜蛋白的配体/受体，并且所述第二结构域能够结合所述第二跨膜蛋白的配体/受体。4.如权利要求1至3中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述第一结构域在与其配体/受体结合时能够抑制免疫抑制信号，和/或所述第二结构域在与其配体/受体结合时能够激活免疫刺激信号。5.如权利要求1至4中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述第一跨膜蛋白的所述配体/受体由癌细胞表达，和/或所述第二跨膜蛋白的所述配体/受体由所述工程化的t细胞和/或天然t细胞表达。6.如权利要求1至4中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述抗原结合结构域能够结合由癌细胞表达的抗原。7.如权利要求1至4中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述异源嵌合蛋白响应于由所述工程化的t细胞表达的所述嵌合抗原受体的激活而分泌，例如，其中所述嵌合抗原受体的激活刺激激活的t细胞核因子(nfat)启动子。8.如权利要求1至4中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞表达α/βt细胞受体。9.如权利要求1至4中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞表达γ/δt细胞受体。10.如权利要求5至9中任一项所述的工程化的t细胞，其中：当所述异源嵌合蛋白的第一结构域与由所述癌细胞表达的所述第一跨膜蛋白的所述配体/受体结合并且所述第二结构域与由所述工程化的t细胞表达的所述第二跨膜蛋白的所述配体/受体结合时，所述异源嵌合蛋白能够在所述癌细胞与所述工程化的t细胞之间形成稳定的突触；和/或当与由所述癌细胞表达的抗原结合时，所述嵌合抗原受体能够在所述癌细胞与所述工程化的t细胞之间形成稳定的突触。11.如权利要求10所述的工程化的t细胞，其中所述稳定的突触提供有利于所述工程化的t细胞的抗癌作用/肿瘤减少的空间取向。
12.如权利要求11所述的工程化的t细胞，其中所述空间取向定位所述工程化的t细胞以攻击所述癌细胞。13.如权利要求10至12中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述稳定的突触允许所述工程化的t细胞在所述癌细胞附近的增殖。14.如权利要求10至13中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述稳定的突触允许非工程化的天然t细胞在所述癌细胞/肿瘤部位附近的募集和增殖。15.如权利要求10至14中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述稳定的突触允许足够的信号传递以提供刺激信号的表达和/或释放。16.如权利要求15所述的工程化的t细胞，其中所述刺激信号是细胞因子。17.如权利要求1至16中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述异源嵌合蛋白和/或嵌合抗原受体能够增加cd4+和/或cd8+t细胞亚群或防止cd4+和/或cd8+t细胞亚群的减少。18.如权利要求1至17中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述异源嵌合蛋白增加所述癌细胞/所述肿瘤部位附近存在的非工程化的t细胞克隆的数量。19.如权利要求1至18中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述异源嵌合蛋白由所述工程化的t细胞分泌。20.如权利要求1至19中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述接头结构域包含至少一个能够形成二硫键的半胱氨酸残基和/或包含铰链-ch2-ch3 fc结构域。21.如权利要求20所述的工程化的t细胞，其中所述铰链-ch2-ch3 fc结构域源自igg4，例如人igg4。22.如权利要求20或权利要求21所述的工程化的t细胞，其中所述接头结构域包含与seq id no:1、seq id no:2或seq id no:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。23.如权利要求1至22中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述第一跨膜蛋白选自由以下组成的组：pd-1、csf1r、tim-3、btla、ctla-4、lag-3、b7-h3、tmigd2、tigit、cd172a/sirpα、btnl3、btnl8、btnl3a1、btnl3a2和vsig8。24.如权利要求1至23中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述第二跨膜蛋白选自由以下组成的组：ox40配体(ox40l)、cd40配体(cd40l)、4-1bb配体(4-1bbl)、gitr配体(gitrl)、light(cd258)、cd70、cd30配体、trail和tl1a。25.如权利要求24所述的工程化的t细胞，其中所述第一跨膜蛋白是pd-1。26.如权利要求25所述的工程化的t细胞，其中所述第二跨膜蛋白是ox40l。27.如权利要求25所述的工程化的t细胞，其中所述第二跨膜蛋白是4-1bbl。28.如权利要求24所述的工程化的t细胞，其中所述第一跨膜蛋白是csf1r。29.如权利要求28所述的工程化的t细胞，其中所述第二跨膜蛋白是cd40l。30.如权利要求1至29中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述嵌合抗原受体由引入所述工程化的t细胞基因组中的基因组安全港(gsr)中的核酸编码。31.如权利要求30所述的工程化的t细胞，其中所述gsr是腺相关病毒位点1(aavs1)；趋化因子(c-c基序)受体5(ccr5)基因；或rosa26基因座/rosa26基因座的人直向同源物。32.如权利要求1至29中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述嵌合抗原受体由引入所述t细胞基因组中的内源性t细胞受体基因座中的核酸编码。33.如权利要求1至32中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述抗原结合结构域包含
抗体、抗体片段、scfv、fv、fab、(fab')2、单结构域抗体(sdab)、vh或vl结构域或骆驼科动物vhh结构域。34.如权利要求6至33中任一项所述的工程化的t细胞，其中由所述癌细胞表达的所述抗原选自由以下组成的组：b细胞成熟抗原(bcma)、cd10、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd34、cd38、cd56、cd80/86、cd117、cd123、cd123、cd133、cd138、癌胚抗原(cea)、cs1/cd319/slamf7、双唾液酸神经节苷脂(gd2)、epha2、表皮生长因子受体(egfr)、上皮细胞粘附分子(epcam)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、her2、整联蛋白β7、lewis-y、间皮素、muc1、pd-l1和前列腺干细胞抗原(psca)。35.如权利要求1至34中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述跨膜结构域包含选自由以下组成的组的蛋白的跨膜结构域：t细胞受体的α链、t细胞受体的β链或t细胞受体的ζ链、cd28、cd3ε、cd45、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、kirds2、ox40、cd2、cd27、lfa-1(cdl la、cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd40、baffr、hvem(lightr)、slamf7、nkp80(klrf1)、cd160、cd19、il-2rβ、il-2rγ、il-7ra、itga1、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cdlld、itgae、cd103、itgal、cdlla、lfa-1、itgam、cdl lb、itgax、cdllc、itgbl、cd29、itgb2、cd18、lfa-1、itgb7、tnfr2、dnaml(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(触觉)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、slamf6(ntb-a、ly108)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、pag/cbp、nkp44、nkp30、nkp46、nkg2d和nkg2c或它们的组合。36.如权利要求1至35中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述细胞内结构域包含共刺激结构域，所述共刺激结构域包含cd27、cd28、4-1bb、ox40、cd30、cd40、pd-1、icos、淋巴细胞功能相关抗原-1(lfa-1)、cd2、cd7、light、nkg2c、b7-h3或特异性地结合cd83的配体或它们的组合的细胞内结构域的一部分。37.如权利要求36所述的工程化的t细胞，其中所述细胞内结构域的所述部分来自cd28和/或4-1bb。38.如权利要求1至37中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述细胞内结构域包含来自cd3-ζ的信号传导结构域。39.如权利要求1至38中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞源自同种异体t细胞、自体t细胞或肿瘤浸润淋巴细胞(til)。40.如权利要求39所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞是cd4+t细胞。41.如权利要求39所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞是cd8+t细胞。42.如权利要求1至41中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞是体外细胞。43.如权利要求1至42中任一项所述的工程化的t细胞，其中所述工程化的t细胞是人细胞。44.如权利要求1至43中任一项所述的工程化的t细胞，用作癌症治疗中的药物。45.如权利要求1至44中任一项所述的工程化的t细胞在制造药物中的用途。46.一种组合物，所述组合物包含权利要求1至44中任一项所述的工程化的t细胞。47.如权利要求46所述的组合物，所述组合物还包含表达嵌合抗原受体且不表达异源
嵌合蛋白的工程化的t细胞。48.如权利要求47所述的组合物，所述组合物还包含表达异源嵌合蛋白且不表达嵌合抗原受体的工程化的t细胞。49.如权利要求46所述的组合物，所述组合物还包含表达异源嵌合蛋白且不表达嵌合抗原受体的工程化的t细胞。50.如权利要求46至49中任一项所述的组合物，所述组合物还包含不表达异源嵌合蛋白也不表达嵌合抗原受体的t细胞。51.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求46至50中任一项所述的组合物和药学上可接受的赋形剂。52.一种用于制造工程化的t细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(i)从受试者获得t细胞或t细胞祖细胞；(ii)用编码嵌合抗原受体并被设计为整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中的第一dna分子转染所述t细胞或t细胞祖细胞；以及(iii)用编码异源嵌合蛋白并被设计为整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中的第二dna分子转染所述t细胞或t细胞祖细胞，其中所述异源嵌合蛋白包含通用结构：n末端-(a)-(b)-(c)-c末端，其中：(a)是包含第一跨膜蛋白的细胞外结构域的第一结构域，(b)是连接所述第一结构域和第二结构域的接头结构域，并且(c)是包含第二跨膜蛋白的细胞外结构域的第二结构域。53.如权利要求52所述的方法，其中步骤(ii)在步骤(iii)之前。54.如权利要求52所述的方法，其中步骤(iii)在步骤(ii)之前。55.如权利要求52所述的方法，其中步骤(ii)和步骤(iii)是同时的。56.一种用于制造工程化的t细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(i)获得t细胞或t细胞祖细胞，所述t细胞或t细胞祖细胞已用编码嵌合抗原受体并被设计为整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中的第一dna分子转染；以及(ii)用编码异源嵌合蛋白并设计为整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中的第二dna分子转染步骤(i)的所述t细胞或t细胞祖细胞，其中所述异源嵌合蛋白包含通用结构：n末端-(a)-(b)-(c)-c末端，其中：(a)是包含第一跨膜蛋白的细胞外结构域的第一结构域，(b)是连接所述第一结构域和第二结构域的接头结构域，并且(c)是包含第二跨膜蛋白的细胞外结构域的第二结构域。57.一种用于制造工程化的t细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(i)获得t细胞或t细胞祖细胞，所述t细胞或t细胞祖细胞已用编码异源嵌合蛋白并被设计为整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中的第一dna分子转染，其中所述异源嵌合蛋白包含通用结构：n末端-(a)-(b)-(c)-c末端，
其中：(a)是包含第一跨膜蛋白的细胞外结构域的第一结构域，(b)是连接所述第一结构域和第二结构域的接头结构域，并且(c)是包含第二跨膜蛋白的细胞外结构域的第二结构域；以及(ii)用编码嵌合抗原受体并被设计为整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中的第二dna分子转染步骤(i)的所述t细胞或t细胞祖细胞。58.如权利要求52至57中任一项所述的方法，其中所述接头结构域包含至少一个能够形成二硫键的半胱氨酸残基和/或包含铰链-ch2-ch3 fc结构域。59.如权利要求52至58中任一项所述的方法，其中所述第一跨膜蛋白选自由以下组成的组：pd-1、csf1r、tim-3、btla、ctla-4、lag-3、b7-h3、tmigd2、tigit、cd172a/sirpα、btnl3、btnl8、btnl3a1、btnl3a2和vsig8。60.如权利要求52至59中任一项所述的方法，其中所述第二跨膜蛋白选自由以下组成的组：ox40配体(ox40l)、cd40配体(cd40l)、4-1bb配体(4-1bbl)、gitr配体(gitrl)、light(cd258)、cd70、cd30配体、trail和tl1a。61.如权利要求52至60中任一项所述的方法，其中编码所述嵌合抗原受体的所述dna分子被设计为在基因组安全港(gsr)处整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中。62.如权利要求61所述的方法，其中所述gsr是腺相关病毒位点1(aavs1)；趋化因子(c-c基序)受体5(ccr5)基因；或rosa26基因座/rosa26基因座的人直向同源物。63.如权利要求52至60中任一项所述的方法，其中编码所述嵌合抗原受体的所述dna分子被设计为在内源性t细胞受体基因座处整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中。64.如权利要求52至63中任一项所述的方法，其中所述转染包括添加锌指核酸酶、大范围核酸酶、转录激活因子样效应物(tale)核酸酶或crispr-cas9系统的组分以将所述第一dna分子和/或所述第二dna分子整合至所述t细胞或t细胞祖细胞的基因组中。65.如权利要求52至64中任一项所述的方法，所述方法还包括在选择性地增强表达嵌合抗原受体的细胞和/或表达异源嵌合蛋白的细胞的增殖的培养基中培养所述转染的t细胞或t细胞祖细胞的步骤。66.如权利要求65所述的方法，所述方法还包括分离表达所述嵌合抗原受体和/或所述异源嵌合蛋白的工程化的t细胞的步骤。67.一种工程化的t细胞，所述工程化的t细胞通过权利要求66所述的方法分离。68.一种用于获得工程化的t细胞群体的方法，所述方法包括：获得权利要求67所述的工程化的t细胞；以及在增强所述工程化的t细胞的增殖的培养基中培养所述工程化的t细胞，从而获得工程化的t细胞群体。69.一种工程化的t细胞群体，所述工程化的t细胞群体通过权利要求68所述的方法获得。70.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求69所述的工程化的t细胞群体和药学上可接受的赋形剂。71.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求70所述的药物组合物。
72.如权利要求71所述的方法，其中所述t细胞或t细胞祖细胞从所述受试者获得。73.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求51所述的药物组合物。74.如权利要求73所述的方法，其中所述药物组合物中的至少一种工程化的t细胞是同种异体的。75.如权利要求74所述的方法，其中所述药物组合物中的至少一种工程化的t细胞是自体的。76.如权利要求73所述的方法，其中所述药物组合物中的至少一种工程化的t细胞是自体的。77.如权利要求71至76中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食道癌、黑素瘤、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(cns)、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波济氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症、所述癌症的组合以及所述癌症的转移性病灶或它们的组合。78.如权利要求71至76中任一项所述的方法，其中所述癌症是选自由以下组成的组的血液癌症：慢性淋巴细胞性白血病(cll)、急性白血病、急性淋巴细胞白血病(all)、b细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)、t细胞急性淋巴细胞白血病(t-all)、慢性髓细胞性白血病(cml)、b细胞幼淋巴细胞性白血病、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤、伯基特氏淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、恶性淋巴组织增生疾患、malt淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突细胞肿瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和白血病前期或它们的组合。79.如权利要求71至78中任一项所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白的所述第一跨膜蛋白包含pd-1，并且所述异源嵌合蛋白的所述第二跨膜蛋白包含ox40l。80.如权利要求71至78中任一项所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白的所述第一跨膜蛋白包含pd-1，并且所述异源嵌合蛋白的所述第二跨膜蛋白包含4-1bbl。81.如权利要求71至78中任一项所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白的所述第一跨膜蛋白包含csf1r，并且所述异源嵌合蛋白的所述第二跨膜蛋白包含cd40l。82.如权利要求71至81中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述有需要的受试者施用包含所述异源嵌合蛋白的药物组合物。83.如权利要求82所述的方法，其中在向所述受试者施用包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物之前，向所述受试者施用包含所述异源嵌合蛋白的所述药物组合物。84.如权利要求82所述的方法，其中在向所述受试者施用包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物之后，向所述受试者施用包含所述异源嵌合蛋白的所述药物组合物。85.如权利要求82所述的方法，其中在施用包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物的同时，向所述受试者施用包含所述异源嵌合蛋白的所述药物组合物。
86.如权利要求82至85中任一项所述的方法，其中包含所述异源嵌合蛋白的所述药物组合物的剂量小于施用至尚未或将不会施用包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物的受试者的剂量。87.如权利要求71至86中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用治疗有效量的免疫抑制药物。88.如权利要求87所述的方法，其中所述免疫抑制药物减轻或预防细胞因子释放综合征。89.如权利要求88所述的方法，其中所述免疫抑制药物是针对白细胞介素6受体(il-6r)的抗体。90.如权利要求89所述的方法，其中所述抗体是托珠单抗。91.如权利要求87至90中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制药物在包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物之前施用。92.如权利要求87至90中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制药物在包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物之后施用。93.如权利要求87至90中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制药物与包含所述工程化的t细胞群体的所述药物组合物同时施用。
技术总结
本发明尤其涉及适用于治疗癌症的组合物和方法，包括表达嵌合抗原受体和异源嵌合蛋白的工程化的T细胞。的工程化的T细胞。的工程化的T细胞。
技术研发人员：T
受保护的技术使用者：沙塔克实验室有限公司
技术研发日：2020.06.22
技术公布日：2022/6/4