肺水肿兔动物模型的建立方法与流程

文档序号:25991421发布日期:2021-07-23 21:03阅读:来源:国知局

技术特征:

1.肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:将待实验动物外接间断注入改变肺水含量增多的药剂,以增加肺间质、肺泡和细胞内的液体含量从而诱导模型产生肺水肿病变。

2.根据权利要求1所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:所述实验动物的间断注入包括以下步骤:1)将待试验动物分为若干实验组;

2)实验组中的变量包括动物的体位以及药剂注入方式;

3)在注入过程中利用定量复苏,每次复苏囊通气后进行肺部超声检查。

3.根据权利要求2所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:所述步骤3)中,超声检测的方法如下:

i)将每侧肺依次分为第一区域、第二区域和第三区域;

ii)每个区域分为上下两个部分,随后通过标记区分左侧、右侧、上侧和下侧;

iii)超声扫描过程中超声探头与肋骨垂直,扫描第一区域时采用仰卧位,扫描第二区域时采用侧卧位,扫描第三区域时采用俯卧位。

4.根据权利要求3所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:所述步骤i)中区域划分方法为胸骨旁线至腋前线之间的区域为第一区域,腋前线至腋后线之间的区域为第二区域,腋后线至椎骨旁线的区域为第三区域。

5.根据权利要求1所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:所述诱导病变后还包括肺组织取材,肺组织取材包括以下步骤:

s1,对每组待试验动物,在注入药剂量累计达60ml~80ml后,采用空气栓塞法处死;

s2,剖胸取出双肺,在双侧肺门根部进行结扎,在结扎线上离断气管;

s3,将肉眼可见病变部位的肺组织楔形取材后立即置于3%~4%含量的多聚甲醛溶液中;

s4,将取材组织放置于冰箱2~4摄氏度保存24小时固定后取出;

s5,将组织石蜡包埋后连续切片,切片厚度为3~5um。

6.根据权利要求5所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:将石蜡切片进行苏木精-伊红染色法染色。

7.根据权利要求6所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:将染色后的切片进行病理分析,分析过程如下:

a)烤片:将切片置于60℃恒温干燥箱内2h;

b)常规脱蜡水化:将切片置于二甲苯5min*2次脱蜡后,分别置于100%、100%、95%、95%、90%乙醇中各5min,除去二甲苯;

c)蒸馏水冲洗5min*3次,洗去乙醇;

d)苏木精染色15min,流动水冲洗15s;

e)1%盐酸酒精脱色3s,流动水冲洗15min;

f)伊红染色2min,流动水冲洗15s去除浮色;

g)脱水:将切片分别置于90%、95%、95%、100%、100%乙醇中各5min,二甲苯5min*2,使标本透明;

h)从二甲苯中取出已透明的载玻片,滴加适量中性树胶,盖上盖玻片封固标本,在光学显微镜下观察肺组织病理变化。

8.根据权利要求5所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:所述步骤s2中,对肺部进行肺干重称量,所述肺干重称量方法如下用吸水纸吸净肺表面水分后进行称重,即为肺湿重,然后将肺组织放入干燥箱72小时后称重。

9.根据权利要求8所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:对照正常肺组织湿干比,确定发生肺水肿病变的实验动物。

10.根据权利要求1、2或5任一项所述的肺水肿兔动物模型的建立方法,其特征在于:所述药剂为生理盐水。


技术总结
本发明公开了生物模型构建领域的肺水肿兔动物模型的建立方法,以克服现有技术中通过降低心率或其他外部循环影响产生并发呼吸系统症状的缺陷,为了克服上述缺陷本技术方案包括将待实验动物外接间断注入改变肺水含量增多的药剂,以增加肺间质、肺泡和细胞内的液体含量从而诱导模型产生肺水肿病变。相对于油酸注射法、肾上腺素滴注法和氯仿注入法的现有技术,本技术方案中利用药剂直接灌注肺内以改变肺水浓度,从而实现诱变,此处规避了心率或其他外部循环影响,以克服并发呼吸系统症状的诱变模型,同时也最大程度保留了肺部表面的活性物质(直接内部灌入),减小了并发症对实验数据的影响。

技术研发人员:郭果;宗海峰;刘敬
受保护的技术使用者:刘敬
技术研发日:2021.02.03
技术公布日:2021.07.23
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