使用来源于神经丝蛋白的肽治疗需要破坏或移除细胞的病症的方法1.本技术是申请日为2016年1月27日、发明名称为“使用来源于神经丝蛋白的肽治疗需要破坏或移除细胞的病症的方法”的中国专利申请no.201680017811.x的分案申请。2.相关申请的交叉引用3.本技术要求2015年1月27日提交的美国非临时专利申请号14/606,683的优先权，其通过引用整体结合于此。4.背景5.1.实施方案的领域6.实施方案包括使用基于小肽的化合物治疗哺乳动物中的需要移除或破坏细胞元件的病况如良性或恶性肿瘤的方法。所述方法包括，但不限于，将化合物通过肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、病灶内、眼内、动脉内、鞘内、肿瘤内、鼻内、局部、经皮、皮下、或皮内单独或与载体缀合施用至之前尚未针对该病况进行治疗的需要其的初始哺乳动物。7.2.相关领域描述8.许多医学治疗和手术的本质涉及有害或不需要的组织的移除或破坏。这样的治疗的实例包括癌或癌前生长的移除、转移肿瘤经由化学疗法的破坏、和腺(例如，前列腺)增生的减少。其他实例包括不需要的面部毛发的移除、疣的移除、和不需要的脂肪组织的移除。9.对于将会破坏有害或不需要的细胞和组织并且因此促进其移除或抑制其进一步生长但是将会主要具有局部作用和最小或不存在全身毒性的有效试剂存在需求。10.在美国专利申请公布号2007/0237780(现在放弃)；2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)中公开了这样的试剂的类型，其每一个的公开内容通过引用整体结合在本文中。11.癌症是引起细胞的不受控制的生长和繁殖的细胞内部调控机制的异常。正常的细胞构成组织，并且当这些细胞丧失作为专门化、受控制和协同单元的能力(去分化(dedifferentiation))时，缺陷导致细胞群体中的混乱。当它发生时，形成肿瘤。12.组织的良性过度生长是其中需要从生物体中移除细胞的异常。良性肿瘤是不会在整个身体中转移但是导致疾病症状的细胞增殖。如果这样的肿瘤位于器官如脑中难以到达的区域中，它们可能是致命的。存在多种器官的良性肿瘤，包括肺、脑、皮肤、垂体、甲状腺、肾上腺皮质和髓质、卵巢、子宫、睾丸、结缔组织、肌肉、肠、耳、鼻、喉、扁桃腺、嘴、肝、胆囊、胰腺、前列腺、心脏、和其他器官。13.在癌症的治疗中手术通常是第一步。手术的目的不同。有时用手术尽可能多地移除明显的肿瘤，或至少使它“除块(debulk)”(移除一个或多个主要的肿瘤块从而使得对其它方法治疗的需求较少)。取决于癌种类和位置，手术也可以为患者提供一些症状缓解。例如，如果外科医生可以移除大部分扩增的脑肿瘤，颅内压将降低，使患者的症状改善。14.不是所有的肿瘤都适于手术。一些肿瘤可能位于使得它们不能被完全移除的身体部位中。这些的实例是在脑干(脑中控制呼吸的部分)中的肿瘤或生长在主要血管中和周围的肿瘤。在这些情况中，由于与肿瘤移除相关的高风险，手术的作用有限。15.在一些情况中，不使用手术对肿瘤进行除块，因为根本不需要。实例是霍奇金淋巴瘤，这是对化学疗法和放射疗法的组合有非常良好的反应的淋巴结的癌症。在霍奇金淋巴瘤中，很少需要手术来实现治愈，而手术几乎都是用于确定诊断。16.化学疗法是癌症治疗的另一种常见形式。基本上，其包括使用特异性攻击整个身体中快速分裂细胞(如在肿瘤中发现的那些)的药物(通常通过口服或注射提供)。这使化学疗法可用于治疗已经转移的癌症以及通过血液和淋巴系统扩散的可能性高但尚未明显超过原发性肿瘤的肿瘤。化学疗法也可以使用增强局部肿瘤对手术和放射疗法的反应。例如，对于一些头颈癌来说，是这样的情况。17.不幸的是，人体中通常同样快速分裂的其他细胞(如胃的内膜和毛发)也会受化学疗法影响。由于这种原因，许多化疗剂引起不希望的副作用如恶心、呕吐、贫血、脱发或其它症状。这些副作用是暂时性的，存在可以帮助缓解许多这些副作用的药物。随着我们的知识持续增长，研究人员已经设计了较新的化疗剂，它们不仅更好地杀伤癌细胞，而且对患者的副作用更小。18.化学疗法以多种方式向患者施用。一些包括丸剂，并且其他通过静脉内或其他注射来施用。对于可注射的化学疗法来说，患者前往医生的诊所或医院进行治疗。其他化疗剂需要一天24小时连续输注至血流中。对于这些类型的化学疗法来说，进行小外科手术以植入由患者穿戴的小泵。之后泵缓慢施用药物。在许多情况中，在患者的静脉中放置永久性端口以免除反复针刺的需要。19.放射疗法是在与癌症的斗争中另一种常用的武器。放射线通过破坏肿瘤细胞内的dna来对癌进行杀伤。放射线以不同的方式递送。最常用的方式包括以高精确方式使放射线束指向患者，聚焦在肿瘤上。为此，患者躺在台上并且光束在他/她周围移动。该过程持续数分钟，但是可以在数周内每天进行(取决于肿瘤的类型)以达到特定的总处方剂量。20.有时采用被称为短程疗法(brachytherapy)的另一种放射方法，包括采用放射性球粒(种子(seed))或线并且将其植入体内的肿瘤区域中。植入物可以是暂时性的或永久性的。对于永久性植入物来说，在种子中的放射在数天或数周的时间段内衰减，从而患者不是放射性的。对于临时植入物来说，全部剂量的放射通常在数天内递送，并且在这段时间期间患者必须留在医院。对于这两种短程疗法来说，通常将放射线递送至准确的靶向区域以获得对癌症的局部控制(与全身治疗如化学疗法相反)。21.一些高度选择的患者可以求助于骨髓移植。通常进行该过程是因为患者患有特别侵袭性的癌症或者是因为他们患有用常规疗法治疗之后复发的癌症。骨髓移植是复杂的过程。存在许多类型，并且其在其引起副作用和治愈的可能性方面不同。大多数移植在专科中心进行，并且在许多情况中，它们的使用被认为是研究性的。22.存在许多其他疗法，尽管它们中的大多数仍然在临床试验中探究并且尚未成为标准疗法。实例包括使用免疫疗法、单克隆抗体、抗血管生成因子和基因疗法。23.良性肿瘤和畸形也可以通过多种方法治疗，包括手术、放射疗法、药物疗法、热或电烧灼、冷冻疗法等。尽管良性肿瘤不转移，它们可能会长大并且它们可能会复发。手术根除良性肿瘤通常具有手术的所有困难和副作用，并且一些良性肿瘤如垂体腺瘤、脑膜瘤、前列腺增生等常常必须反复进行手术。24.存在其他涉及不需要的细胞元件的病况，其中选择性的细胞移除是理想的。例如，心脏病和中风通常由动脉粥样硬化(atherosclerosis)导致，其为纤维脂肪和改性平滑肌元件的增殖性病变，其使血管壁扭曲、血管腔狭窄、血流收缩、易发病灶性血栓并最终导致阻塞和梗塞。存在多种针对动脉粥样硬化的治疗，如旁路移植；人工移植；采用再通、刮除、放射、激光或其他移除的血管成形术；通过脂质降低来抑制动脉粥样硬化的药物疗法；抗凝血疗法；和饮食、锻炼及生活方式的常规手段。需要用于移除动脉粥样硬化病变而没有外科手术的风险和副作用的方法。25.其中需要选择性细胞移除的不需要的细胞元件的其他实例包括病毒诱导的生长，如疣。另一个实例是发现于炎性病况中的肥厚性炎性块，以及肥厚性瘢痕或瘢痕瘤。其他实例发现于美容环境中，如移除不需要的毛发，例如面部毛发，或者出于美容目的使面部真皮和结缔组织中或四肢皮肤和结缔组织中的不需要的组织区域收缩。26.其中需要选择性细胞移除或细胞增殖抑制的不需要的细胞元件的其他实例包括在循环系统中的包括但不限于瓣膜(例如，包括主动脉瓣膜口变窄的主动脉狭窄)、冠状动脉(例如，包括冠状动脉口变窄的冠状口硬化)、颈动脉、和肾动脉的任何动脉、瓣膜或管的狭窄和再狭窄。其他实例包括抑制或移除不需要的细胞生长或累积，该生长或累积导致在血管内用于治疗其中的狭窄、缩窄或动脉瘤或在尿道内和胆管中放置或植入的医疗装置如支架(stent)的部分或完全阻塞。27.其他实例对本领域普通技术人员来说将会是显而易见的。在这些实例的全部或大多数中，对于能够移除或破坏不需要的细胞元件而没有常规疗法的风险和副作用或以更高精确度移除不需要的细胞元件的治疗存在需求。28.在包括前述相关领域描述在内的整个说明书中，包括任何和全部美国专利在内的在本文中所述的任何和全部公开获得的文献通过引用具体地整体结合在本文中。前述相关领域描述并非意在以任何方式承认包括待审美国专利申请在内的在其中描述的任何文献是本公开的现有技术。此外，在本文中与所描述的产品、方法、和/或装置有关的任何缺点的描述并非意在限制实施方案。实际上，实施方案的方面可以包括所描述的产品、方法、和/或装置的某些特征，而不受其所描述的缺点影响。29.实施方案概述30.在本领域中对于用于治疗不需要的细胞元件的新型、较低毒性的治疗仍然存在需求。实施方案满足了这些需求。31.本公开部分基于这样的发现：某些ntp肽，包括由氨基酸序列ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu(seqidno:66)描述的特定肽，能够治疗和/或杀伤在尚未接受先前治疗的哺乳动物中的不需要的细胞增殖。这些不需要的细胞增殖尤其包括良性和恶性肿瘤、腺(例如，前列腺)增生、不需要的面部毛发、疣、和不需要的脂肪组织。本公开还部分基于这样的发现：当与具有症状多于10年的哺乳动物相比时，在已经具有症状少于10年的哺乳动物中，某些ntp肽，包括由氨基酸序列ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu(seqidno:66)描述的特定肽，能够以出乎意料更高的量治疗和/或杀伤不需要的细胞增殖。本公开还部分基于这样的发现：当与对照相比时，当与治疗无效的哺乳动物相比时，并且当与具有症状多于10年的哺乳动物相比时，某些ntp肽，包括由氨基酸序列ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu(seqidno:66)描述的特定肽，能够在治疗之后提供病况随时间恶化的减轻。32.在本文中所述的实施方案部分基于令人惊讶和出乎意料的发现：当与之前已经接受治疗的患者相比时，某些ntp肽，包括由氨基酸序列ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu(seqidno:66)描述的特定肽，具有在从初始哺乳动物中移除不需要的细胞增殖方面增加的功效。在本文中所述的实施方案还部分基于令人惊讶和出乎意料的发现：当与具有症状多于10年的哺乳动物相比时，某些ntp肽，包括由氨基酸序列ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu(seqidno:66)描述的特定肽，具有在从已经具有症状少于10年的哺乳动物中移除不需要的细胞增殖方面增加的功效。33.一些实施方案涉及治疗不需要的细胞增殖(良性和恶性肿瘤、腺(例如，前列腺)增生、不需要的面部毛发、疣、和不需要的脂肪组织)的方法，所述方法包括向需要其的初始哺乳动物施用治疗有效量的ntp肽。34.这样的ntp肽可以单独或与载体或抗体缀合施用。可以通过肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、肿瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、经皮，通过气雾剂、输注、推注注射、植入装置、持续释放系统等单独或与载体缀合施用ntp肽。备选地，由于遗传修饰或其他方式，可以通过施用表达ntp肽的基因、通过施用诱导这样的生成的疫苗或者通过引入在体内表达该肽的细胞、细菌或病毒来表达ntp肽。35.此外，ntp肽可以与用于治疗良性和恶性肿瘤和其他不需要的或有害的细胞生长的其他疗法结合使用，只要被治疗的哺乳动物之前未针对良性和恶性肿瘤或其他不需要的或有害的细胞生长进行治疗即可。36.前述的概括描述和之后的详细描述二者均是示例性和解释性的，并且意在提供所要求保护的实施方案的进一步解释。对本领域技术人员来说，根据之后的实施方案的详细描述，其他目的、优点、和特征将会是显而易见的。37.优选实施方案详述38.在描述本发明的蛋白质、核苷酸序列、肽等以及方法之前，应理解的是，本发明不限于所描述的具体方法、方案、细胞系、载体和试剂，因为这些可以变化。还应该理解的是，在本文中使用的术语仅用于描述具体的实施方案，并非意在限制本发明的实施方案的范围，该范围将仅由所附权利要求限制。39.除非另外指定，在本文中使用的术语和短语根据以下给出的定义。40.除非上下文明确地另外指出，在整个说明书中，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代物。因此，例如，提及“宿主细胞”包括多个这样的宿主细胞，并且提及“抗体”是提及一个或多个抗体和其本领域技术人员已知的等价物，等等。41.可以根据以下表中提供的一字母或三字母代码提及在本文中所述的氨基酸和氨基酸残基。42.表143.三字母氨基酸单字母氨基酸符号丙氨酸aala精氨酸rarg天冬酰胺nasn天冬氨酸dasp半胱氨酸ccys谷氨酰胺qgln谷氨酸eglu甘氨酸ggly组氨酸hhis异亮氨酸iile亮氨酸lleu赖氨酸klys甲硫氨酸mmet苯丙氨酸fphe脯氨酸ppro丝氨酸sser苏氨酸tthr色氨酸wtrp酪氨酸ytyr缬氨酸vval44.除非上下文另外指出，表达方式“ntp肽”是指包含对应于神经丝蛋白(neuralthreadprotein)的氨基酸序列的至少一部分的氨基酸序列的肽或者是指神经丝蛋白的片段，并且包括这样的肽的同源物、衍生物、变体、融合蛋白、和肽模拟物。表达方式“ntp肽”还指在一个或多个以下美国专利申请公布号中要求保护的肽或其他物质组合物：2007/0237780(现在放弃)；2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)。这些申请中的每一个的公开内容通过引用整体结合在本文中。以下列出特定肽。45.1)seqidno.1:mefslllprlecnga或met-glu-phe-ser-leu-leu-leu-pro-arg-leu-glu-cys-asn-gly-ala46.2)seqidno.2:gaisahrnlrlpgss或gly-ala-ile-ser-ala-his-arg-asn-leu-arg-leu-pro-gly-ser-ser47.3)seqidno.3:dspasaspvagitgmct或asp-ser-pro-ala-ser-ala-ser-pro-val-ala-gly-ile-thr-gly-met-cys-thr48.4)seqidno.4:mctharlilyfflvem或met-cys-thr-his-ala-arg-leu-ile-leu-tyr-phe-phe-leu-val-glu-met49.5)seqidno.5:yfflvemeflh或tyr-phe-phe-leu-val-glu-met-glu-phe-leu-his50.6)seqidno.6:vgqaglelpts或val-gly-gln-ala-gly-leu-glu-leu-pro-thr-ser51.7)seqidno.7:ddpsvsasqsaryrtgh或asp-asp-pro-ser-val-ser-ala-ser-gln-ser-ala-arg-tyr-arg-thr-gly-his52.8)seqidno.8:tghharlclanfcg或thr-gly-his-his-ala-arg-leu-cys-leu-ala-asn-phe-cys-gly53.9)seqidno.9:anfcgrnrvslmcpsws或ala-asn-phe-cys-gly-arg-asn-arg-val-ser-leu-met-cys-pro-ser-trp-ser54.10)seqidno.10:pelkqstclslpkcwdyrr或pro-glu-leu-lys-gln-ser-thr-cys-leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg55.11)seqidno.11:lkqstclslpkcwdyrr或leu-lys-gln-ser-thr-cys-leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg56.12)seqidno.12:stclslpkcwdyrr或ser-thr-cys-leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg57.13)seqidno.13:lslpkcwdyrr或leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg58.14)seqidno.14:kcwdyrraavpgl或lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg-ala-ala-val-pro-gly-leu59.15)seqidno.15:kcwdyrraavpglfilffl或lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg-ala-ala-val-pro-gly-leu-phe-ile-leu-phe-phe-leu60.16)seqidno.16:kcwdyrraavpglfilfflrhrcp或lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg-ala-ala-val-pro-gly-leu-phe-ile-leu-phe-phe-leu-arg-his-arg-cys-pro61.17)seqidno.17:kcwdyrraavpglfilfflrhrcptltqdevqwcdhss或lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg-ala-ala-val-pro-gly-leu-phe-ile-leu-phe-phe-leu-arg-his-arg-cys-pro-thr-leu-thr-gln-asp-glu-val-gln-trp-cys-asp-his-ser-ser62.18)seqidno.18:wdyrr或trp-asp-tyr-arg-arg63.19)seqidno.19:filfflrhrcptl或phe-ile-leu-phe-phe-leu-arg-his-arg-cys-pro-thr-leu64.20)seqidno.20:filfflrhrcptltqdevqwcdhss或phe-ile-leu-phe-phe-leu-arg-his-arg-cys-pro-thr-leu-thr-gln-asp-glu-val-gln-trp-cys-asp-his-ser-ser65.21)seqidno.21:hrcptltqdevqwcdhsslqpstpeikhp或his-arg-cys-pro-thr-leu-thr-gln-asp-glu-val-gln-trp-cys-asp-his-ser-ser-leu-gln-pro-ser-thr-pro-glu-ile-lys-his-pro66.22)seqidno.22:pasasqvagtkdmh或pro-ala-ser-ala-ser-gln-val-ala-gly-thr-lys-asp-met-his67.23)seqidno.23:dmhhytwlifififnflr或asp-met-his-his-tyr-thr-trp-leu-ile-phe-ile-phe-ile-phe-asn-phe-leu-arg68.24)seqidno.24:hytwlifififnflrqsln或his-tyr-thr-trp-leu-ile-phe-ile-phe-ile-phe-asn-phe-leu-arg-gln-ser-leu-asn69.25)seqidno.25:svtqagvqwrnlgslqplppgfklfscpsllsswdyrrpprlanf或ser-val-thr-gln-ala-gly-val-gln-trp-arg-asn-leu-gly-ser-leu-gln-pro-leu-pro-pro-gly-phe-lys-leu-phe-ser-cys-pro-ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg-pro-pro-arg-leu-ala-asn-phe70.26)seqidno.26:pgfklfscpsllsswdyrr或pro-gly-phe-lys-leu-phe-ser-cys-pro-ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg71.27)seqidno.27:fklfscpsllsswdyrrpprlanf或phe-lys-leu-phe-ser-cys-pro-ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg-pro-pro-arg-leu-ala-asn-phe72.28)seqidno.28:fscpsllsswdyrr或phe-ser-cys-pro-ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg73.29)seqidno.29:sllsswdyrr或ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg74.30)seqidno.30:sswdy或ser-ser-trp-asp-tyr75.31)seqidno.31:sswdyrr或ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg76.32)seqidno.32:sswdyrrpprlanffvflvemgftm或ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg-pro-pro-arg-leu-ala-asn-phe-phe-vat-phe-leu-val-glu-met-gly-phe-thr-met77.33)seqidno.33:fvflvemgftm或phe-val-phe-leu-val-glu-met-gly-phe-thr-met78.34)seqidno.34:mgftmfarlilisgpcdlpasas或met-gly-phe-thr-met-phe-ala-arg-leu-ile-leu-ile-ser-gly-pro-cys-asp-leu-pro-ala-ser-ala-ser79.35)seqidno.35:isgpc或ile-ser-gly-pro-cys80.36)seqidno.36:dlpasasqsagitgvsh或asp-leu-pro-ala-ser-ala-ser-gln-ser-ala-gly-ile-thr-gly-val-ser-his81.37)seqidno.37:gvshharlifnfclfem或gly-val-ser-his-his-ala-arg-leu-ile-phe-asn-phe-cys-leu-phe-glu-met82.38)seqidno.38:nfclfemesh或asn-phe-cys-leu-phe-glu-met-glu-ser-his83.39)seqidno.39:svtqagvqwpnlgslqplppglkrfsclslpsswdyghlpphpanf或ser-val-thr-gln-ala-gly-val-gln-trp-pro-asn-leu-gly-ser-leu-gln-pro-leu-pro-pro-gly-leu-lys-arg-phe-ser-cys-leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr-gly-his-leu-pro-pro-his-pro-ala-asn-phe84.40)seqidno.40:ppglkrfsclslpsswdyg或pro-pro-gly-leu-lys-arg-phe-ser-cys-leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr-gly85.41)seqidno.41:fsclslpsswdygh或phe-ser-cys-leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr-gly-his86.42)seqidno.42:lslpsswdy或leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr87.43)seqidno.43:sswdyghlpphpanfcifirggvspylsgwsqtpdlr或ser-ser-trp-asp-tyr-gly-his-leu-pro-pro-his-pro-ala-asn-phe-cys-ile-phe-ile-arg-gly-gly-val-ser-pro-tyr-leu-ser-gly-trp-ser-gln-thr-pro-asp-leu-arg88.44)seqidno.44:pgffklfscpsllsswdyrr或pro-gly-phe-phe-lys-leu-phe-ser-cys-pro-ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg89.45)seqidno.45:pelkqstclslpkcwdyrr或pro-glu-leu-lys-gln-ser-thr-cys-leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg90.46)seqidno.46:ppglkrfsclslpsswdyg或pro-pro-gly-leu-lys-arg-phe-ser-cys-leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr-gly91.47)seqidno.47:fsclslpsswdygh或phe-ser-cys-leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr-gly-his92.48)seqidno.48:stclslpkcwdyrr或ser-thr-cys-leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg93.49)seqidno.49:fscpsllsswdyrr或phe-ser-cys-pro-ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg94.50)seqidno.50:lslpsswdy或leu-ser-leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr95.51)seqidno.51:lslpkcwdyrr或leu-ser-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-arg96.52)seqidno.52:sllsswdyrr或ser-leu-leu-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg97.53)seqidno.53:lpsswdyrr或leu-pro-ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg98.54)seqidno.54:sswdyrr或ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg99.55)seqidno.55:sswdy或ser-ser-trp-asp-tyr100.56)seqidno.56:sswdyrrfilffl或ser-ser-trp-asp-tyr-arg-arg-phe-ile-leu-phe-phe-leu101.57)seqidno.57:wdyrrfifnfl或trp-asp-tyr-arg-arg-phe-ile-phe-asn-phe-leu102.58)seqidno.58:fnfclf或phe-asn-phe-cys-leu-phe103.59)seqidno.59:fifnfl或phe-ile-phe-asn-phe-leu104.60)seqidno.60:pasaspvagitgm或pro-ala-ser-ala-ser-pro-val-ala-gly-ile-thr-gly-met105.61)seqidno.61:pasasqvagtkdm或pro-ala-ser-ala-ser-gln-val-ala-gly-thr-lys-asp-met106.62)seqidno.62:pasasqsagitgv或pro-ala-ser-ala-ser-gln-ser-ala-gly-ile-thr-gly-val107.63)seqidno.63:pasaspvag或pro-ala-ser-ala-ser-pro-val-ala-gly108.64)seqidno.64:fflvem或phe-phe-leu-val-glu-met109.65)seqidno.65:svtqagvqw或ser-val-thr-gln-ala-gly-val-gln-trp110.66)seqidno.66:idqqvlsrikleikrcl或ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu111.67)seqidno.67:lsrikleik或leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys112.68)seqidno.68:gdhgrpnlsrlklaikyevkkm或gly-asp-his-gly-arg-pro-asn-leu-ser-arg-leu-lys-leu-ala-ile-lys-tyr-glu-val-lys-lys-met113.69)seqidno.69:qqsiavkflavfgvsi或gln-gln-ser-ile-ala-val-lys-phe-leu-ala-val-phe-gly-val-ser-ilephe-val-ile-leu-lys-cys134.90)seqidno.90:qrdseknkvrmapff或gln-arg-asp-ser-glu-lys-asn-lys-val-arg-met-ala-pro-phe-phe135.91)seqidno.91:lhhidsisgvsgkrmf或leu-his-his-ile-asp-ser-ile-ser-gly-val-ser-gly-lys-arg-met-phe136.92)seqidno.92:eayytmlhlpttnrp或glu-ala-tyr-tyr-thr-met-leu-his-leu-pro-thr-thr-asn-arg-pro137.93)seqidno.93:kiahcilfnqphspr或lys-ile-ala-his-cys-ile-leu-phe-asn-gln-pro-his-ser-pro-arg138.94)seqidno.94:snshshpnplklhrr或ser-asn-ser-his-ser-his-pro-asn-pro-leu-lys-leu-his-arg-arg139.95)seqidno.95:shshnrprayiliti或ser-his-ser-his-asn-arg-pro-arg-ala-tyr-ile-leu-ile-thr-ile140.96)seqidno.96:lpsklklrthsqshh或leu-pro-ser-lys-leu-lys-leu-arg-thr-his-ser-gln-ser-his-his141.97)seqidno.97:nplsrtsnstptnsflmtsskpr或asn-pro-leu-ser-arg-thr-ser-asn-ser-thr-pro-thr-asn-ser-phe-leu-met-thr-ser-ser-lys-pro-arg142.98)seqidno.98:ssslglpkcwdyrhe或ser-ser-ser-leu-gly-leu-pro-lys-cys-trp-asp-tyr-arg-his-glu143.99)seqidno.99:llslalminfrvmac或leu-leu-ser-leu-ala-leu-met-ile-asn-phe-arg-val-met-ala-cys144.100)seqidno.100:tfkqhielrqkisiv或thr-phe-lys-gln-his-ile-glu-leu-arg-gln-lys-ile-ser-ile-val145.101)seqidno.101:prklccmgpvcpvki或pro-arg-lys-leu-cys-cys-met-gly-pro-val-cys-pro-val-lys-ile146.102)seqidno.102:alltinghctwlpas或ala-leu-leu-thr-ile-asn-gly-his-cys-thr-trp-leu-pro-ala-ser147.103)seqidno.103:mfvfclilnrekikg或met-phe-val-phe-cys-leu-ile-leu-asn-arg-glu-lys-ile-lys-gly148.104)seqidno.104:gnssffllsfffsfq或gly-asn-ser-ser-phe-phe-leu-leu-ser-phe-phe-phe-ser-phe-gln149.105)seqidno.105:nccqcfqcrttegya或asn-cys-cys-gln-cys-phe-gln-cys-arg-thr-thr-glu-gly-tyr-ala150.106)seqidno.106:vecfyclvdkaafecwwfysfdt或val-glu-cys-phe-tyr-cys-leu-val-asp-lys-ala-ala-phe-glu-cys-trp-trp-phe-tyr-ser-phe-asp-thr151.107)seqidno.107:mephtvaqagvpqhd或met-glu-pro-his-thr-val-ala-gln-ala-gly-val-pro-gln-his-asp152.108)seqidno.108:lgslqsllprfkrfs或leu-gly-ser-leu-gln-ser-leu-leu-pro-arg-phe-lys-arg-phe-ser153.109)seqidno.109:clilpkiwdyrnmnt或cys-leu-ile-leu-pro-lys-ile-trp-asp-tyr-arg-asn-met-asn-thr154.110)seqidno.110:alikrnrytpetgrks或ala-leu-ile-lys-arg-asn-arg-tyr-thr-pro-glu-thr-gly-arg-lys-ser155.111)seqidno.111:idqqvlsri或ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile156.112)seqidno.112:kleikrcl或lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu157.113)seqidno.113:vlsrik或val-leu-ser-arg-ile-lys158.114)seqidno.114:rikleik或arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys159.115)seqidno.115:vlsrikleikrcl或val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu；和160.116)seqidno.116:idqqvlsriklei或ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile。161.表达方式“ntp肽”还优选包括(但不限于)seqidno:1至116的氨基酸序列。162.术语“片段”是指由蛋白质或肽的氨基酸序列的连续亚序列组成的蛋白质或多肽并且包括自然存在的片段如剪接变体和由体内自然存在的蛋白酶活性产生的片段。这样的片段可以在氨基末端、羧基末端、和/或内部(如通过天然剪接)截短。这样的片段可以在具有或不具有氨基末端甲硫氨酸的情况下制备。术语“片段”包括来自相同蛋白质或肽的相同或不同的片段，具有共有或非共有的、直接或通过接头连接在一起的连续氨基酸序列。本领域普通技术人员将能够利用在本文中概述的指导和操作选择在实施方案中使用的适合的片段而无需进行过度的实验。163.术语“变体”指一种蛋白质或多肽，其中与该蛋白质或肽的氨基酸序列相比存在一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入，并包括天然产生的蛋白质或肽的等位基因变体或者旁路剪接变体。术语“变体”包括用一个或多个相似或同源的氨基酸或一个或多个不相似的氨基酸替换肽序列中的一个或多个氨基酸。存在许多可以将氨基酸分为相似或同源的标准。(gunnarvonheijne，分子生物学中的序列分析(sequenceanalysisinmolecularbiology)p.123-39(学术出版社(academicpress),纽约,n.y.1987)。优选的变体包括在一个或多个氨基酸位置的丙氨酸置换。其他优选的置换包括对蛋白质的总体净电荷、极性、或疏水性几乎没有或没有影响保守性置换。保守性置换在以下表2中给出。164.表2165.保守性氨基酸置换[0166][0167]表3给出了氨基酸置换的另一个方案：[0168]表3[0169]原始残基置换alagly；serarglysasngln；hisaspglucysserglnasngluaspglyala；prohisasn；glnileeu；valleuile；vallysarg；gln；glumetleu；tyr；ilephemet；leu；tyrserthrthrsertrptyrtyrtrp；phevalile；leu[0170]其他变体可以由较低保守性的氨基酸置换组成，如选择在它们对维持下列各项的影响方面差异更明显的残基：(a)置换区域中多肽主链的结构，例如作为片层或螺旋构象、(b)分子在靶位点的电荷或疏水性、或(c)侧链的主体。通常预期对功能具有更明显影响的置换是：(a)甘氨酸和/或脯氨酸被另一种氨基酸置换或被缺失或插入；(b)亲水残基，例如丝氨酰或苏氨酰置换疏水残基(或被疏水残基置换)，例如亮氨酰、异亮氨酰、苯丙氨酰、缬氨酰或丙氨酰；(c)半胱氨酸残基置换任何其他残基(或被任何其他残基置换)；(d)具有正电性侧链的残基，例如赖氨酰、精氨酰、或组氨酰置换具有负电荷的残基(或被具有负电荷的残基置换)，例如谷氨酰或天冬氨酰；或(e)具有大体积侧链的残基，例如苯丙氨酸置换不具有这样的侧链的残基(或被不具有这样的侧链的残基置换)，例如甘氨酸。其他变体包括设计为产生一个或多个新的糖基化和/或磷酸化位点的那些，或设计为使一个或多个现有糖基化和/或磷酸化位点缺失的那些。变体包括在糖基化位点、蛋白水解切割位点和/或半胱氨酸残基处的至少一个氨基酸置换。变体还包括在接头肽上的蛋白质或肽氨基酸序列之前或之后的具有另外的氨基酸残基的蛋白质和肽。例如，可以在ntp肽的氨基末端和羧基末端二者均添加半胱氨酸残基以允许通过形成二硫键来进行肽的环化。术语“变体”还包括具有ntp肽的氨基酸序列的多肽，其在肽的3’或5’末端侧接至少一个并且至多25个以上的额外氨基酸。[0171]术语“衍生物”是指化学修饰的蛋白质或多肽，其通过天然过程如加工和其他翻译后修饰而被化学修饰，而且还通过化学修饰技术而被化学修饰，例如通过加入一个或多个聚乙二醇分子、糖类、磷酸盐、和/或其他这样的分子，其中该一个或多个分子不与野生型蛋白质或ntp肽自然连接。衍生物包括盐。这样的化学修饰在基础教科书和在更详细的专著中充分描述，并且也在大量的研究文献中描述，并且它们对本领域技术人员来说是众所周知的。应该理解的是，可以在给定的蛋白质或多肽中的若干位点存在相同或不同程度的相同类型的修饰。此外，给定的蛋白质或多肽可以含有许多类型的修饰。修饰可以在蛋白质或多肽中的任何地方进行，包括肽主链、氨基酸侧链、和氨基或羧基末端。修饰包括例如乙酰化、酰基化、adp-核糖基化、酰胺化、黄素的共价结合、血红素部分的共价结合、核苷酸或核苷酸衍生物的共价结合、脂质或脂质衍生物的共价结合、磷脂酰肌醇的共价结合、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸盐的形成、甲酰化、γ-羧基化、糖基化、gpi锚(anchor)形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、糖基化、脂质结合、硫酸化、谷氨酸残基的γ-羧基化、羟基化和adp-核糖基化、硒基化(selenoylation)、转运rna介导的氨基酸向蛋白质中的添加，如精氨酰化和泛素化。参见，例如，蛋白质‑‑结构和分子性质(proteins‑‑structureandmolecularproperties)，第二版，t.e.creighton,w.h.freemanandcompany，纽约(1993)和wold,f.,“翻译后蛋白质修饰：观点和前景(posttranslationalproteinmodifications:perspectivesandprospects)”，蛋白质的翻译后共价修饰(posttranslationalcovalentmodificationofproteins)中第1-12页，b.c.johnson编，学术出版社，纽约(1983)；seifter等，meth.enzymol.182:626-646(1990)和rattan等，“蛋白质合成：翻译后修饰和衰老(posttranslationalmodificationsandaging)”，ann.n.y.acad.sci.663:48-62(1992)。术语“衍生物”包括导致蛋白质或多肽成为分支或者具有或不具有分支的环状的化学修饰。环状、分支和分支环状环状蛋白质或多肽可以由翻译后的天然过程产生并且也可以完全通过合成方法制备。[0172]术语“同源物”是指如通过通常用于比较两种多肽的氨基酸的位置的相似性的标准方法测定的其与ntp肽的氨基酸序列至少60％相同的蛋白质。两种蛋白质之间的相似性或同一性程度可以通过已知方法容易地计算，所述方法包括但不限于在下列各项中描述的那些：计算分子生物学(computationalmolecularbiology)，lesk,a.m.编，牛津大学出版社(oxforduniversitypress)，纽约，1988；生物计算：信息学和基因组计划(informaticsandgenomeprojects)，smith,d.w.编，学术出版社，纽约，1993；序列数据的计算机分析(computeranalysisofsequencedata)，第i部分，griffin,a.m.和griffin,h.g.编，humana出版社，新泽西，1994；分子生物学中的序列分析(sequenceanalysisinmolecularbiology)，vonheinje,g.，学术出版社，1987；序列分析引物(sequenceanalysisprimer)，gribskov,m.和devereux,j.编，mstockton出版社，纽约，1991；和carilloh.和lipman,d.,siam,j.appliedmath.,48:1073(1988)。设计确定同一性的优选的方法以给出所测试的序列之间的最大匹配。在可公开获得的计算机程序中编入了确定同一性和相似性的方法。[0173]可用于确定两种序列之间的同一性和相似性的优选的计算机程序方法包括但不限于gcg程序包(devereux,j.等，核酸研究(nucleicacidsresearch)，12(1):387(1984))，blastp，blastn，和fasta，atschul,s.f.等，j.molec.biol.,215:403-410(1990)。blastx程序可从ncbi和其他来源公开获得(blast手册，altschul,s.等，ncbinlmnihbethesda,md.20894；altschul,s.等，j.mol.biol.,215:403-410(1990)。例如，采用计算机算法如gap(遗传学计算机组，威斯康星大学，madison,wis.)，对待确定百分比序列同一性的两种蛋白质或多肽进行比对，以进行它们的相应氨基酸的最佳匹配(如通过算法确定的“匹配范围(matchedspan)”)。[0174]空位开放罚分(gapopeningpenalty)(计算为平均对角线的3倍；其中“平均对角线”是使用的比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是通过具体比较矩阵为每个完美氨基酸匹配指定的得分或数字)和空位延伸罚分(gapextensionpenalty)(通常为开放空位罚分的{分数(1/10)}倍)，以及比较矩阵，如pam250或blosum62，与该算法一起使用。算法也可以使用标准的比较矩阵(对于pam250比较矩阵，参见dayhoff等，蛋白质序列和结构的图谱集(atlasofproteinsequenceandstructure)，第5卷，增补本3；对于blosum62比较矩阵，参见henikoff等，proc.natl.acad.sciusa,89:10915-10919)。之后通过算法计算百分比同一性。根据情况，与比较蛋白质或肽相比，同源物通常将会具有一个或多个氨基酸置换、缺失、和/或插入。[0175]术语“融合蛋白”是指其中一个或多个肽与蛋白质如(但不限于)抗体或抗体片段如f.sub.ab片段或短链fv重组融合或化学缀合(包括共价和非共价)的蛋白质。术语“融合蛋白”还指肽的多聚体(即二聚体、三聚体、四聚物和更高的多聚体)。这样的多聚体包括含有一种肽的同聚多聚体、含有多于一种肽的异聚多聚体、以及含有至少一种肽和至少一种其他蛋白质的异聚多聚体。这样的多聚体可以是疏水、亲水、离子和/或共价结合、键或连接的结果，可以通过使用接头分子交联而形成，或者可以通过例如脂质体形成而间接连接。[0176]术语“肽模拟物”或“模拟物”是指模拟肽或蛋白质的生物活性但是化学性质上不再是肽的生物活性化合物，即它们不再含有任何肽键(即氨基酸之间的酰胺键)。在这里，以更广泛的含义使用术语肽模拟物以包括性质上不再完全是肽的分子，如假肽、半肽和拟肽(peptoid)。下面描述这种更广泛含义的肽模拟物的实例(其中肽的一部分被缺少肽键的结构替换)。无论完全是或部分是非肽，根据实施方案的肽模拟物提供了反应性化学部分的空间排列，所述反应性化学部分与肽模拟物所基于的肽中的活性基团的三维排列非常相似。作为这种相似的活性位点的几何形状的结果，肽模拟物对生物系统的作用与肽的生物活性相似。[0177]实施方案的肽模拟物优选在三维形状和生物活性方面与在本文中所述的肽基本上相似。结构修饰本领域中已知的肽以形成肽模拟物的方法的实例包括主链手性中心的倒置，产生d-氨基酸残基结构，其可以具体在n末端，产生了针对蛋白水解降解的提高的稳定性而不负面影响活性。实例在文章“含氚d-ala.sup.1-肽t结合(tritriatedd-ala.sup.1-peptidetbinding)”，smithc.s.等，drugdevelopmentres.,15,371-379页(1988)中给出。第二种方法是为了稳定性而改变环状结构，如n到c链间的酰亚胺和内酰胺(ede等，smith和rivier(编)“肽：化学和生物学(peptides:chemistryandbiology)”，escom,leiden(1991),268-270页)。这个的实例以构型限制的胸腺五肽样化合物给出，如在美国专利号4,457,489(1985)，goldstein,g等中公开的那些，其公开内容通过引用整体结合在本文中。第三种方法是假肽赋予对蛋白水解的抗性的假肽键替换肽中的肽键。[0178]已经描述了通常不影响肽结构和生物活性的许多假肽键。这种方法的一个实例是替换逆反假肽(retro-inversopseudopeptide)键(“胸腺五肽的生物活性逆反类似物(biologicallyactiveretroinversoanaloguesofthymopentin”，sistoa.等，rivier,j.e.和marshall,g.r.(编)“肽、化学、结构和生物学(peptides,chemistry,structureandbiology)”，escom,leiden(1990),722-773页，和dalpozzo等(1993),int.j.peptideproteinres.,41:561-566，其通过引用结合在本文中)。根据这种修饰，除了肽键中的一个或多个被逆反假肽键替换之外，肽的氨基酸序列可以与上述肽的序列相同。优选地，大多数n端肽键被替换，因为这样的替换将会通过对n末端的外肽酶作用而赋予对蛋白水解的抗性。还可以通过用其他相似结构的化学基团替换氨基酸的化学基团来进行进一步修饰。另一种已知提高对酶切割的稳定性而没有或几乎没有生物活性损失的适合的假肽键是还原等排物(reducedisostere)假肽键(couder等(1993),int.j.peptideproteinres.,41:181-184，其通过引用整体结合在本文中)。[0179]因此，除了一个或多个肽键被等排物假肽键替换之外，这些肽的氨基酸序列可以与一种肽的序列相同。优选地，大多数n端肽键被替换，因为这样的替换将会通过对n末端的外肽酶作用而赋予对蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原等排物假肽键的肽的合成是在本领域中已知的(以上引用的couder等(1993))。其他实例包括引入酮亚甲基或甲基硫化物键以代替肽键。[0180]肽的拟肽衍生物代表了另一类肽模拟物，其保留了对于生物活性来说重要的结构决定簇，但是去除了肽键，从而赋予对蛋白水解的抗性(simon等，1992,proc.natl.acad.sci.usa,89:9367-9371，其通过引用整体结合在本文中)。拟肽是n取代的甘氨酸的低聚物。已经描述了许多n-烷基，其各自对应于天然氨基酸的侧链(以上引用的simon等(1992))。肽的一些或全部氨基酸可以用对应于替代的氨基酸的n-取代的甘氨酸来lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu[0191]seqidno.111idqqvlsriꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile[0192]seqidno.115vlsrikleikrclꢀꢀꢀval-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu[0193]seqidno.116idqqvlsrikleiꢀꢀile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile[0194]实施方案还包括治疗患有需要移除或破坏不需要的细胞增殖的病况的哺乳动物的方法，其中哺乳动物患有该病况少于10年，所述方法包括向哺乳动物施用ntp肽。实施方案还包括治疗患有需要移除或破坏不需要的细胞增殖的病况的哺乳动物的方法，所述方法包括向哺乳动物施用ntp肽，其中所述方法移除或破坏不需要的细胞增殖，并且降低这样的不需要的细胞增殖随时间的复发。[0195]在本文中所述的实施方案部分基于令人惊讶和出乎意料的发现：当与之前已经接受治疗的患者相比时，某些ntp肽在从初始哺乳动物中移除不需要的细胞增殖方面具有增加的功效。根据一个实施方案，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供了在约15％至约95％、或约20％至约80％、或约25％至约70％的范围内、或约26.5％、或在其之间的任何范围内的量的平均ipss提高(“ipss”表示“国际前列腺症状评分(internationalprostatesymptomscore)”)。当与对照相比时，在对治疗无效的患者(即，之前接受了针对bph的治疗但是未完全成功治疗的患者)中的bph进行治疗中使用ntp肽仅提供在约0％至约3％、或约0.5％至约2.5％、或约0.8％至约2.0％的范围内、或约1.5％、或在其之间的任何范围内的量的平均ipss提高。当与通过对治疗无效的患者进行治疗而发现的提高相比时，施用ntp肽以治疗初治(treatment)患者中的bph的方法能够提供在100％至百分之数百万、或约500％至约10,000％、或约1,000％至约5,000％、或约1,500％至约2,500％的范围内、或约1,700％、或在其之间的任何范围内的量的提高。[0196]根据其他实施方案，当与对照相比时，在治疗具有症状少于10年的初始患者中的bph中使用ntp肽提供了在约15％至约95％、或约20％至约80％、或约25％至约70％的范围内、或约27.5％、或在其之间的任何范围内的量的平均ipss提高。当与接受相同药物但是之前已经进行治疗并且具有症状少于或多于10年的患者相比时，对于具有症状少于10年的患者来说，本发明的方法提供在约20％至约95％、或约25％至约80％、或约30％至约70％的范围内、或约35.4％、或在其之间的任何范围内的量的提高，并且对于具有症状多于10年的患者来说，提供约39.7％的提高。[0197]根据其他实施方案，当与对照相比时，在约10至约40个月、或约15至约30个月、或20至25个月、或约22个月的时间段内，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供了在约25％至约99％、或约30％至约90％、或约50％至约70％的范围内、或约52.9％、或在其之间的任何范围内的量的平均ipss提高。根据另一个实施方案，当与对治疗无效的患者进行治疗相比时，在治疗初治患者中使用ntp肽提供了在约20％至约95％、或约30％至约80％、或约35％至约60％的范围内、或约40.5％、或在其之间的任何范围内的量的提高。在优选的实施方案中，与在治疗无效的患者中相比，在初治患者中ntp肽更有效超过40％。[0198]根据其他实施方案，当与对照相比时，在约10至约40个月、或约15至约30个月、或20至25个月、或约22个月的时间段内，在治疗具有症状少于10年的初始患者中的bph中使用ntp肽提供了在约25％至约99％、或约30％至约90％、或约50％至约70％的范围内、或约61.7％、或在其之间的任何范围内的量的平均ipss提高。当与对照相比时，在从初治哺乳动物中移除不需要的细胞元件中使用ntp肽展现出随时间增加的出乎意料的提高。在3个月至22个月，在用ntp治疗的初治患者和用对照治疗的初治患者之间的提高大于两倍。当与接受相同药物但是之前已经进行治疗并且具有症状少于或多于10年的患者相比时，对于具有症状少于10年的患者来说，本发明的方法提供在约15％至约90％、或约20％至约80％、或约30％至约60％的范围内、或约48.6％、或在其之间的任何范围内的量的提高，并且对于具有症状多于10年的患者来说，提供在约25％至约99％、或约30％至约90％、或约50％至约70％的范围内、或约61.7％、或在其之间的任何范围内的量的提高。与在具有症状较长时间段的治疗无效的患者中相比，在具有症状较短时间段的初始患者中，在移除或破坏不需要的细胞增殖中使用ntp肽因此出乎意料地更有效。[0199]根据其他实施方案，无论其是初治的还是治疗无效的，具有症状较短时间段的患者还展现出出乎意料地优秀的提高。当与具有症状多于10年的患者相比时，在治疗具有症状少于10年的患者中使用ntp肽展现出约15％至约90％、或约20％至约80％、或约30％至约60％、或约40.9％、或在其之间的任何范围的提高。[0200]在额外的实施方案中，当与治疗无效的患者相比时，并且当与用对照治疗的初治患者相比时，用ntp肽治疗的初始患者随时间以低得多的程度恶化。根据这个实施方案，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供在约25％至约99％、或约30％至约90％、或约50％至约70％的范围内、或约51.5％、或在其之间的任何范围内的量的随时间恶化的患者的比例的降低。本发明的发明人发现，对于治疗无效的患者来说，在药物和对照之间的随时间恶化的患者的比例的这种差异较不明显。当与对照相比时，在对治疗无效的患者中的bph进行治疗中使用ntp肽提供在约0％至约30％、或约1％至约25％、或约5％至约15％的范围内、或约10％、或在其之间的任何范围内的量的随时间恶化的患者的比例的降低。当与治疗无效的患者相比时，施用ntp肽以治疗初治患者中的bph的方法因此将恶化的患者的比例降低了在约100％至5,000％、或约200％至约1,000％、或约300％至约500％的范围内、或约420％、或在其之间的任何范围内的量，代表大于约4.15倍的提高。[0201]在又一个实施方案中，当与治疗无效的患者相比时，并且当与用对照治疗的初治患者相比时，根据实施方案的方法用ntp肽治疗的初始患者随时间以低得多的程度恶化。根据实施方案，对于以下实施例7的表10中所示的不同测量方法来说，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供在约25％至约99％、或约30％至约90％、或约50％至约70％的范围内、或约61.9％、62.5％、和66.7％的量的随时间恶化的患者的比例的降低。本发明的发明人发现，对于治疗无效的患者来说，在针对初治患者的对照和向治疗无效的患者或具有bph历史多于10年的患者施用药物之间的随时间恶化的患者的比例的差异较不明显。当与对照相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，在对治疗无效的患者中的bph进行治疗中使用ntp肽提供在约1％至约50％、或约5％至约45％、或约10％至约40％的范围内、或约14.3％、25％、和33.3％的量的随时间恶化的患者的比例的降低。当与对照相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，在治疗具有bph历史多于10年的患者(初治的和治疗无效的)中的bph中使用ntp肽提供在约1％至约40％、或约2.5％至约25％、或约3％至约20％的范围内、或约4.7％、18.8％、和16.7％的量的随时间恶化的患者的比例的降低。最后，当与在治疗无效的患者中的bph的治疗相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，施用ntp肽以治疗初治患者中的bph的方法提供在约25％至约99％、或约30％至约90％、或约45％至约70％的范围内、或约55.6％、50％、和50％的量的随时间恶化的患者的比例的降低。[0202]在本文中所述的实施方案还部分基于令人惊讶和出乎意料的发现：当与具有症状多于10年的哺乳动物相比时，某些ntp肽，包括由氨基酸序列ile-asp-gln-gln-val-leu-ser-arg-ile-lys-leu-glu-ile-lys-arg-cys-leu(seqidno:66)描述的特定肽，具有在从已经具有症状少于10年的哺乳动物中移除不需要的细胞增殖方面增加的功效。[0203]任何哺乳动物均可以受益于本发明的用途，人、小鼠、兔、狗、绵羊和其他家畜，通过或可通过兽医、动物园饲养员、或野生动物保护区员工治疗任何哺乳动物。优选的哺乳动物是人、绵羊、和狗。[0204]对本领域技术人员来说将会显而易见的是，可以选择以上ntp肽的其他较小片段以使得这些肽将会拥有相同或相似的生物活性。可以由本领域技术人员选择其他片段，以使得这些肽将会拥有相同或相似的生物活性。实施方案的肽包括这些其他片段。通常，实施方案的肽具有至少4个氨基酸，优选至少5个氨基酸，并且更优选至少6个氨基酸。[0205]实施方案还包括治疗需要移除或破坏不需要的细胞增殖的哺乳动物(或患者)的方法，所述方法包括施用包含含有连接在一起的两个以上ntp肽的ntp肽的组合物。只要ntp肽具有所需生物活性，则推断两个这样的肽也将会拥有所需生物活性。[0206]可以使用对本领域技术人员来说已知的方法制备这个实施方案包括的ntp肽及其片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物，如重组dna技术、蛋白质合成和自然存在的肽、蛋白质、ad7c-蛋白及其片段、变体、衍生物和同源物的分离。[0207]可以使用对本领域技术人员来说已知的方法由其他肽、蛋白质及其片段、变体、衍生物和同源物制备ntp肽及其片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物。这样的方法包括(但不限于)使用蛋白酶将肽或蛋白质切割为所需ntp肽。[0208]使用公知的重组dna技术方法，如在sambrook等，分子克隆：实验室手册(molecularcloning:alaboratorymanual)，冷泉港实验室出版社(coldspringharborlaboratorypress)，冷泉港(coldspringharbor),n.y.和/或ausubel等编的分子生物学中的当前方案(currentprotocolsinmolecularbiology),greenpublishersinc.和wileyandsons,n.y.中给出的那些，可以制备ntp肽。[0209]例如，可以通过筛选基因组或cdna文库，或通过pcr扩增获得编码ntp肽的基因或cdna。可以基于来自相同或相关家族基因的其他已知基因或基因片段的序列信息，如，例如发现于其他肽或蛋白质中的保守基序，产生可用于筛选文库的探针或引物。此外，在已经鉴别编码ntp肽的基因的情况下，可以使用全部或一部分基因作为探针以鉴别同源基因。探针或引物可以用于从据信表达ntp肽基因的多种组织来源中筛选cdna文库。通常，将会使用高严格性条件来进行筛选以使由筛选获得的假阳性的数量最小化。[0210]另一种制备编码ntp肽的基因的方式是采用化学合成，其使用对技术人员来说公知的方法，如由engels等，angew.chem.intl.ed.,28:716-734描述的那些。这些方法尤其包括用于核酸合成的磷酸三酯、亚磷酰胺、和h-膦酸酯方法。用于这样的化学合成的优选的方法是使用标准亚磷酰胺化学的聚合物支持的合成。通常，编码肽或蛋白质的dna长度将会为数百个核苷酸。可以使用这些方法将大于约100个核苷酸的核酸合成为若干个片段。之后可以将片段连接在一起以形成全长肽或蛋白质。通常，编码蛋白质的氨基末端的dna片段将会具有编码甲硫氨酸残基的atg。这种甲硫氨酸可以或可以不存在于蛋白质或肽的成熟形式上，这取决于在宿主细胞中产生的蛋白质是否被设计为从细胞中分泌。[0211]可以使用标准连接技术将编码ntp肽的基因、cdna、或其片段插入至适当的表达或扩增载体中。通常选择在所采用的特定宿主细胞中起作用的载体(即，载体与宿主细胞机制(hostcellmachinery)相容性以使得可以进行基因的扩增和/或基因的表达)。编码ntp肽的基因、cdna或其片段可以在原核、酵母、昆虫(杆状病毒系统)和/或真核宿主细胞中扩增/表达。宿主细胞的选择将会部分取决于ntp肽是否被糖基化和/或磷酸化。如果是这样的话，酵母、昆虫、或哺乳动物宿主细胞是优选的。[0212]通常，在任何宿主细胞中使用的载体将会含有至少一个5’侧翼序列(也被称为启动子)以及调节元件，如一个或多个增强子、复制起点元件、转录终止元件、含有供体和受体剪接位点的完整内含子序列、信号肽序列、核糖体结合位点元件、多聚腺苷化序列、用于插入编码待表达的多肽的核酸的多聚连接子区域、和可选择标记元件。以下讨论了这些元件中的每一个。任选地，载体可以含有标签序列，即位于蛋白质或肽编码序列的5’或3’末端的寡核苷酸分子；寡核苷酸分子编码多聚组氨酸(polyhis)(如六组氨酸(hexahis)(seqidno:118))或其他标签如flag、ha(流感病毒血凝素)或存在可商购的抗体的myc。这种标签通常在多肽表达时与多肽融合，并且可以充当用于从宿主细胞中亲和纯化蛋白质或肽的方式。例如，使用针对该标签的抗体作为亲和基质，通过柱层析，可以实现亲和纯化。任选地，随后可以通过多种方式如使用某些肽酶将标签从纯化的蛋白质或肽中移除。[0213]可以由本领域技术人员将人免疫球蛋白铰链和fc区在ntp肽的n末端或c末端融合。可以通过使用蛋白a亲和柱将随后的fc-融合蛋白纯化。已知fc在体内展现出长的药代动力学半衰期并且已经发现与fc融合的蛋白质在体内展现出大幅高于未熔合的对应物的半衰期。此外，与fc区的融合允许可能对一些分子的生物活性有用的分子的二聚化/多聚化。[0214]5’侧翼序列可以是同源的(即，来自与宿主细胞相同的物种和/或菌株)、异源的(即，来自除宿主细胞物种或菌株外的物种)、混合物(即，来自多于一种来源的5’侧翼序列的组合)、合成的，或者其可以是天然的蛋白质或肽基因5’侧翼序列。因此，5’侧翼序列的来源可以是任何单细胞原核或真核生物，任何脊椎或无脊椎生物,或任何植物，条件是5’侧翼序列在宿主细胞机械中起作用并且可以被宿主细胞机械活化。[0215]可用于这个实施方案的载体的5’侧翼序列可以通过在本领域内公知的若干方法中的任一种获得。通常，除蛋白质或肽基因侧翼序列外的在本文中可用的5’侧翼序列之前已经通过作图和/或通过限制性核酸内切酶消化鉴别并且因此可以使用适当的限制性核酸内切酶从适当的组织来源中分离。在一些情况中，5’侧翼序列的全核苷酸序列可以是已知的。在这里，可以使用以上对于核酸合成或克隆所描述的方法合成5’侧翼序列。[0216]在5’侧翼序列的全部或仅一部分已知的情况下，其可以使用pcr和/或通过筛选基因组文库利用来自相同或另一种物种的适合的寡核苷酸和/或5’侧翼序列片段获得。[0217]在5’侧翼序列未知的情况下，可以从可以含有例如编码序列或甚至另外一种基因或多种基因的较大块dna中分离含有5’侧翼序列的dna的片段。可以使用一种或多种仔细选择的酶通过限制性核酸内切酶消化来完成分离以分离适当的dna片段。在消化之后，可以通过琼脂糖凝胶纯化qiagen.rtm.柱或对技术人员来说已知的其他方法将所需片段分离。实现这种目的的适合的酶的选择对本领域普通技术人员来说将会是显而易见的。[0218]复制起点元件通常是商购的原核表达载体的一部分，并且辅助载体在宿主细胞中的扩增。在一些情况中，载体扩增到一定的拷贝数对于蛋白质或肽的最佳表达来说可能是重要的。如果所选择的载体不含复制起点位点，则可以基于已知序列化学合成复制起点位点并且连接到载体中。转录终止元件通常位于蛋白质或肽编码序列的3’末端并且用于终止蛋白质或肽的转录。通常，在原核细胞中的转录终止元件是后面有聚t序列的富含g-c的片段。尽管元件可以从文库克隆或者作为载体的一部分商购，其也可以使用用于核酸合成的方法(如以上描述的那些)容易地合成。[0219]可选择标记基因元件编码在选择性培养基中生长的宿主细胞的存活和生长所需的蛋白质。典型的选择标志基因编码这样的蛋白质：其(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其他毒素例如氨苄青霉素、四环素、或卡那霉素(kanamycin)的抗性，(b)补充细胞的营养缺陷型缺陷；或(c)提供不能从复合培养基获得的关键营养物质。优选的可选择标记是卡那霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、和四环素抗性基因。[0220]核糖体结合元件，通常被称为shine-dalgarno序列(原核生物)或kozak序列(真核生物)，通常是mrna的翻译起始所需的。该元件通常位于启动子的3’端和待合成的蛋白质或肽的编码序列的5’端。shine-dalgarno序列是不同的但是通常是多聚嘌呤(即，具有高a-g含量)。已经鉴别了许多shine-dalgarno序列，其每一种可以使用以上给出的方法容易地合成并且在原核载体中使用。[0221]在需要将ntp肽从宿主细胞中分泌的那些情况中，可以使用信号序列将肽从合成其的宿主细胞中引导出来，并且可以使蛋白质的羧基末端部分缺失从而防止膜锚定。通常，信号序列位于ntp肽基因或cdna的编码区，或直接在肽基因编码区的5’末端。已经鉴别了许多信号序列，并且在所选择的宿主细胞中起作用的任何信号序列均可以与肽基因或cdna结合使用。因此，信号序列可以是与肽基因或cdna同源的或异源的，并且可以是与肽基因或cdna同源的或异源的。此外，可以使用以上给出的方法化学合成信号序列。在大多数情况中，借助信号肽的存在从宿主细胞中分泌多肽将会导致多肽的氨基末端甲硫氨酸的移除。[0222]在许多情况中，借助载体中一个或多个内含子的存在增加了ntp肽基因或cdna的转录；在肽在真核宿主细胞、尤其是哺乳动物宿主细胞中产生情况下尤其如此。所使用的内含子可以是在肽基因内自然存在的，尤其是在所使用的基因是全长基因组序列或其片段的情况下。在内含子不是自然存在于基因内的情况下(如对于大多数cdna)，内含子可以获得自另一个来源。由于内含子必须转录有效，内含子相对侧翼序列和肽基因的位置一般是重要的。同样，当插入表达载体中的肽基因是cdna分子时，内含子的优选位置是转录起始位点3’端和多a转录终止序列5’端。优选地，对于肽cdna来说，一个或多个内含子将会位于cdna的一侧或另一侧(即，5’或3’)以使得其不中断该编码序列。可以使用来自包括任何病毒、原核和真核(植物或动物)生物在内的任何来源的任何内含子实施这个实施方案，条件是其与其插入的一个或多个宿主细胞相容。在本文中还包括合成的内含子。任选地，可以在载体中使用多于一个内含子。[0223]在以上给出的一种或多种元件不存在于将要使用的载体中的情况下，它们可以单独获得并且连接到载体中。用于获得每种元件的方法对技术人员来说是公知的并且可与以上给出的方法(即，dna的合成、文库筛选等)相当。[0224]可以从起始载体如可商购的载体构建用于实施这个实施方案的最终载体。这样的载体可以含有或可以不含有在完整载体中包括的一些元件。如果在起始载体中不存在所需元件，通过用一种或多种适当的限制性核酸内切酶切割载体以使得待连接的元件的末端和载体的末端对于连接是相容的，可以将每种元件独连接到载体中。在一些情况中，可能需要使要连接在一起的末端平端化(blunt)从而得到令人满意的连接。通过首先使用klenowdna聚合酶或t4dna聚合酶在全部四种核苷酸的存在下填充“粘性末端”来实现平端化。该过程是在本领域内公知的，并且例如在sambrook等(见上文)中描述。备选地，可以首先将待插入至载体中的两个以上元件连接在一起(如果它们位置彼此相邻)并且之后连接到载体中。[0225]用于构建载体的另外的方法是在一种反应混合物中同时进行多种元件的连接。在这里，归因于元件的不适当的连接或插入，将会产生许多无义或无功能载体，然而可以通过限制性核酸内切酶消化来鉴别和选择功能性载体。[0226]用于实施这个实施方案的优选的载体是与细菌、昆虫、和哺乳动物宿主细胞相容的那些。这样的载体尤其包括pcrii、pcr3、和pcdna3.1(invitrogen公司,sandiego,calif.)、pbsii(stratagene公司,lajolla,calif.)、pet15b(novagen,madison,wis.)、pgex(pharmaciabiotech,piscataway,n.j.)、pegfp-n2(clontech,paloalto,calif.)、petl(bluebachl；invitrogen)、和pfastbacdual(gibco/brl,grandisland,n.y.)。[0227]在已经构建载体并且已经将编码全长或截短的蛋白质或肽的核酸分子插入至载体的适当位点中之后，可以将完整载体插入至用于扩增和/或多肽表达的适合的宿主细胞中。宿主细胞可以原核宿主细胞(如大肠杆菌)或真核宿主细胞(如酵母细胞、昆虫细胞、或脊椎动物细胞)。当在适当条件下培养时，宿主细胞可以合成蛋白质或肽，其随后可以从培养基中(如果宿主细胞将其分泌至培养基中)或直接从产生其的宿主细胞中(如果其未被分泌)收集。[0228]在收集之后，可以使用如分子筛层析、亲和层析等方法将ntp肽纯化。用于蛋白质或肽产生的宿主细胞的选择将会部分取决于是否将肽糖基化或磷酸化(在这种情况中，真核宿主细胞是优选的)，以及宿主细胞能够将肽折叠为其天然三级结构(例如，二硫桥的适当取向等)的方式，从而通过具有生物活性的肽制备生物活性蛋白质，肽可以在合成之后使用如以下讨论的适当化学条件折叠。适合的细胞或细胞系可以哺乳动物细胞，如中国仓鼠卵巢细胞(cho)、人胚胎肾(hek)293、293t细胞、或3t3细胞。用于转化、培养、扩增、筛选和产物制备和纯化的适合的哺乳动物宿主细胞和方法的选择是在本领域中已知的。其他适合的哺乳动物细胞系是猴cos-1和cos-7细胞系，和cv-1细胞系。另外的示例性哺乳动物宿主细胞包括灵长类动物细胞系和啮齿类动物细胞系，包括转化的细胞系。正常二倍体细胞、来源于初生组织的体外培养物的细胞菌株、以及原代外植体也是适合的。候选细胞可以是选择基因中的遗传型缺陷，或者可以含有显性作用选择基因。其他适合的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠成神经细胞瘤n2a细胞、hela、小鼠l-929细胞、来源于swiss、balb-c或nih小鼠的3t3系、bhk或hak仓鼠细胞系。[0229]与适用于本发明的实施方案的宿主细胞类似可用的是细菌细胞。例如，在生物
技术领域：
：中多种大肠杆菌菌株(例如，hb101、dh5α、dh10、和mc1061)公知作为宿主细胞。还可以在该方法中采用枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、假单胞菌属(pseudomonasspp.)、其它芽孢杆菌属(bacillusspp.)、链霉菌属(streptomycesspp.)等的多种菌株。本领域技术人员已知的许多酵母细胞的菌株也可作为用于表达本发明的实施方案的多肽的宿主细胞获得。[0230]另外，在需要的情况下，可以在本发明的实施方案的方法中使用昆虫细胞系统。例如在kitts等(biotechniques,14:810-817)、lucklow(curr.opin.biotechnol.,4:564-572)和lucklow等(j.virol.,67:4566-4579)中描述了这样的系统。优选的昆虫细胞是sf-9和hi5(invitrogen,carlsbad,calif.)。[0231]载体向所选择的宿主细胞中的插入(也被称为转化或转染)可以使用如氯化钙、电穿孔、显微注射、脂质转染、或deae-葡聚糖法的方法实现。所选择的方法将会部分为将要使用的宿主细胞的类型的功能。这些方法和其他适合的方法是技术人员公知的，并且例如在sambrook等(见上文)中给出。[0232]可以使用技术人员公知的标准培养基来培养含有载体(即，转化的或转染的)的宿主细胞。培养基通常将会含有细胞生长和存活所需的全部营养物质。用于培养大肠杆菌细胞的适合的培养基是例如luria培养基(lb)和/或terrific培养基(tb)。用于培养真核细胞的适合的培养基是rpmi1640、mem、dmem，他们都可以根据所培养的特定细胞系的需要而补充有血清和/或生长因子。用于昆虫培养的适合的培养基是根据需要补充有酵母提取物(yeastolate)、乳白蛋白水解产物、和/或胎牛血清的grace培养基。通常，将抗生素或仅可用于转化细胞的选择性生长的其他化合物作为补充品加入至培养基中。将要使用的化合物将会取决于在转化宿主细胞的质粒上存在的可选择标记元件。例如，在可选择标记元件是卡那霉素抗性的情况下，加入至培养基中的化合物将会是卡那霉素。[0233]可以使用本领域中已知的标准方法评价在宿主细胞中产生的ntp肽的量。这样的方法包括，但不限于，蛋白印迹分析、sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳、非变性凝胶电泳、hplc分离、质谱法、免疫沉淀、和/或活性测定如dna结合凝胶移位测定。[0234]如果将蛋白质或肽设计为从宿主细胞中分泌，可以在细胞培养基中发现大多数蛋白质或肽。以这种方式制备的蛋白质通常不会拥有氨基末端甲硫氨酸，因为其在从细胞中分泌期间被移除。然而，如果不从宿主细胞中分泌蛋白质或肽，其将会存在于细胞质和/或细胞核中(对于真核宿主细胞来说)或存在于细胞溶质中(对于革兰氏阴性菌宿主细胞来说)并且可以具有氨基末端甲硫氨酸。[0235]对于位于宿主细胞细胞质和/或细胞核中的ntp肽来说，通常首先机械地或用洗涤剂破坏宿主细胞以将细胞内的内含物释放至缓冲溶液中。之后可以从该溶液中分离肽。[0236]可以使用多种技术实现从溶液中纯化ntp肽。如果已经合成ntp肽以使得在其羧基或氨基末端其含有标签如六组氨酸(seqidno:118)(例如，肽/六组氨酸(seqidno:118))或其他小肽如flag(sigma-aldritch,st.louis,mo.)或钙调蛋白结合肽(stratagene,lajolla,calif.)，其基本上可以借助经由亲和柱通过溶液而在一步过程中纯化，其中柱基质对标签或直接对蛋白质具有高亲和力(即，特异性识别肽的单克隆抗体)。例如，多聚组氨酸以高亲和力和特异性与镍、锌和钴结合；因此采用镍系亲和树脂(如在qiagen的qlaexpress系统或invitrogen的xpress系统中使用的)或钴系亲和树脂(如在bdbiosciences-clontech的talon系统中使用的)的固定金属离子亲和层析可以用于肽/多聚组氨酸的纯化。(参见，例如，ausubel等编，分子生物学中的当前方案(currentprotocolsinmolecularbiology)，第10.11.8章,johnwiley&sons,纽约)。[0237]在制备ntp肽而没有标签连接并且无抗体可用的情况下，可以使用用于纯化的其他公知的操作。这样的操作包括，但不限于，离子交换层析、羟磷灰石层析、疏水相互作用层析、分子筛层析、hplc、与凝胶洗脱结合的天然凝胶电泳、和制备型等电点聚焦(isoprime机器/技术，hoeferscientific)。在一些情况中，可以将这些技术中的两种以上组合以得到增加的纯度。[0238]如果预期将会主要在细胞内发现ntp肽，可以使用技术人员已知的任何标准技术从宿主细胞中提取细胞内物质(包括革兰氏阴性菌的包含体(inclusionbody))。例如，可以通过弗氏压碎器(frenchpress)、均质化、和/或超声波处理、随后离心将宿主细胞裂解以释放周质/细胞质的内含物。如果肽在细胞溶质中形成包含体，则包含体通常可以与内部和/或外部细胞膜结合并且因此在离心之后主要在沉淀物质中发现。之后可以在ph极端值下或在还原剂如在碱性ph下的二硫苏糖醇或在酸性ph下的三羧乙基膦的存在下用离液剂如洗涤剂、胍、胍衍生物、脲、或脲衍生物处理沉淀物质，以将包含体释放、分解、和溶解。之后可以使用凝胶电泳、免疫沉淀等分析目前处于其可溶性形式的肽。如果需要将肽分离，可以使用标准方法如以下和在marston等，meth.enz.,182:264-275中给出的那些实现分离。[0239]在一些情况中，ntp肽在分离时可以不具有生物活性。用于将多肽再折叠或转化为其三级结构并且产生二硫键的多种方法可以用于恢复生物活性。这样的方法包括使溶解的多肽暴露于通常高于7的ph并且存在特定浓度的离液剂。离液剂的选择与用于包含体溶解的选择非常相似，但是通常在较低浓度下，并且并非必须是与用于溶解相同的离液剂。在大多数情况中，再折叠/氧化溶液也将会含有还原剂或特定比例的还原剂加其氧化形式，以产生特定氧化还原电位，以允许在蛋白质的一个或多个半胱氨酸桥的形成中发生二硫化物改组(disulfideshuffling)。一些常用的氧化还原对包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(gsh)/二硫双gsh、氯化铜、二硫苏糖醇(dtt)/二噻烷dtt、2-巯基乙醇(bme)/二硫-b(me)。在许多情况中，需要助溶剂以增加再折叠的效率，并且用于此目的的较常见的试剂包括甘油、不同分子量的聚乙二醇、和精氨酸。[0240]如果在宿主细胞中不形成显著程度的ntp肽包含体，则在细胞匀浆离心之后将会主要在上清液中发现ntp肽，并且可以使用如以下给出的那些方法从上清液中分离ntp肽。[0241]在优选部分或完全分离ntp肽的那些情况中，可以使用技术人员公知的标准方法实现纯化。这样的方法包括，但不限于，通过电泳和随后的电洗脱进行分离、各种类型的层析(免疫亲和、分子筛、和/或离子交换)、和/或高压液相层析。在一些情况中，可以优选使用这些方法中的多于一种以完全纯化。[0242]除了使用重组dna技术制备和纯化ntp肽之外，可以通过化学合成方法(如固相肽合成)使用本领域中已知的技术(如由merrifield等，j.am.chem.soc.,85:2149，houghten等，procnatlacad.sci.usa,82:5132，和stewart和young，固相肽合成(solidphasepeptidesynthesis)，piercechemicalco.,rockford,ill.给出的那些)来制备ntp肽及其片段、变体、同源物、融合蛋白、肽模拟物、和衍生物。这样的肽可以在具有或不具有在氨基末端上的甲硫氨酸的情况下合成。可以使用在这些参考文献中给出的方法将化学合成的ntp肽氧化以形成二硫桥。ntp肽预期具有可与重组制备的或从自然来源中纯化的肽相比的生物活性，因此可以与重组的或天然的肽可互换地使用。[0243]在本发明的实施方案的范围内包括其中肽与聚合物连接的化学修饰的ntp肽组合物。所选择的聚合物通常是水溶性的，从而与其连接的蛋白质在水性环境如生理环境中不沉淀。所选择的聚合物通常被修饰以具有单一反应性基团，如用于酰基化的活性酯或用于烷基化的醛，从而可以根据在本发明的方法中所提供的控制聚合度。聚合物可以是任何分子量的，并且可以是分支的或无分支的。在肽聚合物的范围内包括的是聚合物的混合物。[0244]在一些情况中，可能需要制备自然存在的ntp肽的核酸和/或氨基酸变体。可以使用定点诱变、pcr扩增、或其他适当方法制备核酸，其中一个或多个引物具有所需的点突变(对于诱变技术的描述参见sambrook等，见上文，和ausubel等，见上文)。使用engels等(见上文)描述的方法的化学合成也可以用于制备这样的变体。也可以使用技术人员已知的其他方法。[0245]优选的核酸变体是含有在用于产生ntp肽的宿主细胞中引起密码子偏好的核苷酸置换的那些。这样的密码子优化可以通过计算机算法确定，所述算法结合密码子频率表如ecohigh.cod作为高度表达细菌基因的密码子偏好，如由威斯康星州麦迪逊市威斯康星大学遗传学计算机组提供，软件包版本9.0。其他可用的密码子频率表包括celegans_high.cod、celegans_low.cod、drosophila_high.cod、human_high.cod、maize_high.cod、和yeast_high.cod。其他优选的变体是编码与野生型相比如上所述的保守性氨基酸变化(例如，其中自然存在的氨基酸侧链的电荷或极性不因用不同氨基酸置换而大幅改变)的那些，和/或设计为产生一个或多个新的糖基化和/或磷酸化位点的那些，或设计为使一个或多个现有糖基化和/或磷酸化位点缺失的那些。[0246]还可以技术人员已知的使用常规肽合成技术制备ntp肽及其片段、同源物、变体、融合蛋白、肽模拟物、衍生物和盐。这些技术包括化学偶联方法(参考wunsch,e:“methodenderorganischenchemie”,第15卷,1+2区,synthesevonpeptiden,thimeverlag,stuttgart(1974),和barrany,g.；marrifield,r.b.：“肽(thepeptides)”，e.gross,j.meienhofer编，第2卷，第1章，1-284页，学术出版社(1980))，酶偶联方法(参考widmer,f.johansen,j.t.,carlsbergres.commun.,第44卷,37-46页(1979)；kullmann,w.：“酶肽合成(enzymaticpeptidesynthesis)”,crcpressinc.bocaraton,fla.(1987)；和widmer,f.,johansen,j.t.“生物和医学中的合成肽(syntheticpeptidesinbiologyandmedicines)”，alitalo,k.,partanen,p.,vatieri,a.编，79-86页，elsevier,amsterdam(1985))，或者化学和酶方法的组合，如果这对过程设计和经济效益有利。使用在本文中提供的指导，本领域技术人员能够改变ntp肽的肽序列以制备具有与原始或天然ntp肽相同或相似的生物活性(生物学活性)的同源物。[0247]对于使用给定的ntp肽的模拟物而不是肽本身来说，存在优势。通常，与天然蛋白质和肽相比，肽模拟物生物可利用度更高，具有更长的作用持续时间，并且可以更廉价地制备。[0248]可以使用组合的化学技术和本领域中已知的其他技术开发ntp肽的肽模拟物(参见例如，第20次欧洲肽研讨会的会议录(proceedingsofthe20theuropeanpeptidesymposium)，g.jung,e.bayer编，289-336页，以及在其中的参考文献)。本领域中已知的用于对肽进行结构修饰以形成肽模拟物的方法的实例包括主链手性中心的倒置，产生d-氨基酸残基结构，其可以具体在n末端，产生了针对蛋白水解降解的提高的稳定性而不负面影响活性。实例在文章“含氚d-ala.sup.1-肽t结合(tritriatedd-ala.sup.1-peptidetbinding)”，smithc.s.等，drugdevelopmentres.,15,371-379页(1988)中给出。[0249]第二种方法是为了稳定性而改变环状结构，如n到c链间的酰亚胺和内酰胺(ede等，smith和rivier(编)“肽：化学和生物学(peptides:chemistryandbiology)”，escom,leiden(1991),268-270页)。这个的实例以构型限制的胸腺五肽样化合物给出，如在美国专利号4,457,489(1985)，goldstein,g.等中公开的那些，其公开内容通过引用整体结合在本文中。[0250]第三种方法是假肽赋予对蛋白水解的抗性的假肽键替换ntp肽中的肽键。已经描述了通常不影响肽结构和生物活性的许多假肽键。这种方法的一个实例是替换逆反假肽(retro-inversopseudopeptide)键(“胸腺五肽的生物活性逆反类似物(biologicallyactiveretroinversoanaloguesofthymopentin)”，sistoa.等，rivier,j.e.和marshall,g.r.(编)“肽、化学、结构和生物学(peptides,chemistry,structureandbiology)”，escom,leiden(1990),722-773页，和dalpozzo等(1993),int.j.peptideproteinres.,41:561-566，其通过引用结合在本文中)。根据这种修饰，除了肽键中的一个或多个被逆反假肽键替换之外，肽的氨基酸序列可以与上述肽的序列相同。优选地，大多数n端肽键被替换，因为这样的替换将会通过对n末端的外肽酶作用而赋予对蛋白水解的抗性。[0251]具有一个或多个还原逆反假肽键的肽的合成是在本领域中已知的(以上引用的sisto(1990)和dalpozzo等(1993))。因此，肽键可以被非肽键替换，这允许肽模拟物获得与原始肽相似的结构，以及因此相似的生物活性。还可以通过用其他相似结构的化学基团替换氨基酸的化学基团来进行进一步修饰。另一种已知提高对酶切割的稳定性而没有或几乎没有生物活性损失的适合的假肽键是还原等排物(reducedisostere)假肽键(couder等(1993),int.j.peptideproteinres.,41:181-184，其通过引用整体结合在本文中)。因此，除了一个或多个肽键被等排物假肽键替换之外，这些肽的氨基酸序列可以与一种肽的序列相同。优选地，大多数n端肽键被替换，因为这样的替换将会通过对n末端的外肽酶作用而赋予对蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原等排物假肽键的肽的合成是在本领域中已知的(以上引用的couder等(1993))。其他实例包括引入酮亚甲基或甲基硫化物键以代替肽键。[0252]ntp肽的拟肽衍生物代表了另一类肽模拟物，其保留了对于生物活性来说重要的结构决定簇，但是去除了肽键，从而赋予对蛋白水解的抗性(simon等，1992,proc.natl.acad.sci.usa,89:9367-9371，其通过引用整体结合在本文中)。拟肽是n取代的甘氨酸的低聚物。已经描述了许多n-烷基，其各自对应于天然氨基酸的侧链(以上引用并且通过引用整体结合在本文中的simon等(1992))。肽的一些或全部氨基酸用对应于替代的氨基酸的n-取代的甘氨酸来替代。[0253]可以通过借助nmr光谱法、结晶学和/或计算机辅助的分子建模确定原始肽的三级结构来辅助肽模拟物的开发。这些技术辅助开发具有与原始肽相比更高的效力和/或更高的生物利用度和/或更高的稳定性的新型组合物(dean(1994),bioessays,16:683-687；cohen和shatzmiller(1993),j.mol.graph.,11:166-173；wiley和rich(1993),med.res.rev.,13:327-384；moore(1994),trendspharmacol.sci.,15:124-129；hruby(1993),生物聚合物(biopolymers),33:1073-1082；bugg等，(1993),sci.am.,269:92-98，其全部通过引用整体结合在本文中)。[0254]一旦鉴别潜在的肽模拟物化合物，其可以使用在以下实例中概述的方法合成并且测定以评估其活性。这个实施方案包括通过以上方法获得的肽模拟物化合物，其具有肽的生物活性和相似的三维结构。对本领域技术人员来说将会显而易见的是，可以由携带上述修饰中的一种或多种的任何肽产生肽模拟物。将会更显而易见的是，除了它们作为治疗化合物的应用以外，这个实施方案的肽模拟物可以进一步用于开发甚至更加强效的非肽化合物。[0255]目前存在许多能够合成在本文中所述的肽的机构。例如，根据ntp肽的序列，机构可以合成肽并且提供合成肽以及肽身份的随附文件和证明。[0256]本发明的实施方案涉及治疗患有需要移除细胞的病况如良性和恶性肿瘤、腺(例如，前列腺)增生、不需要的面部毛发、疣、和不需要的脂肪组织的初始哺乳动物的方法，或抑制或预防不需要的细胞增殖如支架的狭窄。这样的方法包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的ntp肽，或用治疗有效量的ntp肽涂布装置如支架。[0257]病况可以是，例如肺、乳房、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨骼、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃体、嘴、淋巴结和淋巴系统、和其他器官的肿瘤。[0258]如在本文中所使用的，术语“恶性肿瘤”意在包括人类癌、肉瘤和黑色素瘤的所有形式低度分化、适度分化、高度分化的形式出现。[0259]这个实施方案满足在本领域中对能够以较低风险和较少的不希望的手术副作用移除良性肿瘤的治疗的需求。用于在手术危险区中如体内深部位置(例如，脑、心脏、肺等)中移除良性肿瘤的方法是特别需要的。[0260]治疗其中必须移除细胞的病况的方法可以与治疗这样的病况的常规方法如手术切除、化学疗法、和放射结合使用。肽可以在这样的常规治疗之前、期间或之后施用。[0261]待治疗的病况还可以是选自由下列各项组成的组中的组织的增生、肥大、或过度生长：肺、乳房、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨骼、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃体、嘴、以及淋巴结和淋巴系统。[0262]可以使用实施方案的方法治疗的其他病况是选自由下列各项组成的组中的病毒、细菌、或寄生虫改变的组织：肺、乳房、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨骼、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃体、嘴、以及淋巴结和淋巴系统。[0263]待治疗的病况还可以是选自由下列各项组成的组中的组织的畸形或病症：肺、乳房、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨骼、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃体、嘴、以及淋巴结和淋巴系统。[0264]尤其是，待治疗的病况可以是扁桃体肥大、前列腺增生、银屑病、湿疹、皮肤病或痔疮。待治疗的病况可以是血管疾病，如动脉粥样硬化或动脉硬化，或血管病症如静脉曲张、动脉或支架的狭窄或再狭窄。待治疗的病况还可以是组织的美容修饰，如皮肤、眼、耳、鼻、喉、嘴、肌肉、结缔组织、毛发、或乳房组织。[0265]ntp肽的治疗组合物可以包含与药用载体混合的治疗有效量的ntp肽。载体物质可以是注射用水，优选补充有在溶液中常见的其他物质以向哺乳动物施用。通常，用于治疗用途的ntp肽将会以组合物的形式施用，所述组合物包含与一种或多种生理学上可接受的载体、赋形剂、或稀释剂结合的纯化肽。与血清白蛋白混合的中性缓冲盐水或盐水是示例性的适当载体。优选地，使用适当赋形剂(例如，蔗糖)将产物配制为冻干物。可以根据需要包括其他标准载体、稀释剂、和赋形剂。实施方案的组合物还可以以适当的ph值范围包含本领域普通技术人员已知的缓冲液，包括约ph7.0-8.5的tris缓冲液，或约ph4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可以包括山梨糖醇或其适合的替代物。[0266]实施方案的范围还包括使用与抗体、抗体片段、抗体状分子、或对特异性肿瘤标记物如细胞受体、信号肽或过度表达的酶具有亲和力的分子缀合或连接或结合的ntp肽以靶向初始哺乳动物中不需要的细胞元件。抗体、抗体片段、抗体状分子、或对特异性肿瘤标记物具有高亲和力的分子用于将肽缀合物靶向特异性细胞或组织靶标。例如，具有特殊表面抗原或表达抗原的肿瘤可以被抗体、抗体片段、或抗体状结合分子靶向并且肿瘤细胞可以被肽杀伤。这样的使用抗体靶向的方法具有以下预期优点：降低剂量，增加与靶细胞结合和被靶细胞吸收的可能性，增加靶向和治疗转移肿瘤和微观尺寸肿瘤的有效性。[0267]这个实施方案还包括使用与蛋白质或其他分子缀合或连接或结合以形成组合物的ntp肽，在通过肿瘤或位点特异性酶或蛋白酶或通过靶向肿瘤或其他不需要的细胞的抗体缀合物在肿瘤或其他不需要的细胞处或附近切割时，所述组合物在肿瘤或其他不需要的细胞处或附近将肽释放。[0268]这个实施方案还包括使用与蛋白质或其他分子缀合或连接或结合以形成组合物的ntp肽，在待治疗的组织暴露于光(如在激光疗法或其他光动力学或光活化疗法中)、其他形式的电磁辐射如红外辐射、紫外辐射、x射线或γ射线辐射、局部加热、α或β辐射、超声波发射、或其他局部能量来源时，所述组合物释放肽或肽的一些生物活性片段。[0269]ntp肽可以单独、一起、或与其他药物组合物组合使用，如适用于所治疗的适应症的细胞因子、生长因子、抗生素、细胞凋亡诱导剂、抗炎药、和/或化疗剂。[0270]这个实施方案还包括采用树枝状分子、富勒烯、和其他合成分子、聚合物和大分子的ntp肽的治疗组合物，其中肽和/或其相应dna分子通过其本身或与其他分子物种如肿瘤特异性标记物结合而与分子、聚合物或大分子缀合、与它们连接、或包含在它们中。例如，美国专利号5,714,166，生物活性和/或靶向的dendimer缀合物(bioactiveand/ortargeteddendimerconjugates)，提供了制备和使用尤其是由至少一个具有一个或多个靶导向物(targetdirector)的树枝状分子和至少一个与其缀合的生物活性剂组成的树枝状聚合物缀合物的方法。美国专利号5,714,166的公开内容通过引用整体结合在本文中。[0271]这个实施方案还包括用ntp肽和/或基因和药物递送载体如脂质乳液、胶束聚合物、聚合物微球、电活性聚合物、水凝胶和脂质体的治疗组合物治疗初始哺乳动物的方法。[0272]在实施方案中还包括使用转移至初治哺乳动物中不需要的细胞的ntp肽或相关基因或基因等同物。在肿瘤内的ntp肽的过度表达可以用于诱导肿瘤中的细胞死亡并且因此降低肿瘤细胞群。用于治疗不需要的细胞元件的ntp肽的基因或基因等同物转移预期具有以下优点：需要较低的剂量，并且被传递至靶标细胞元件的细胞后代因此使得治疗频率更低，以及更少的总体治疗。这个实施方案还包括将编码含有ntp肽的融合蛋白的基因转移至不需要的细胞或相邻细胞，其中表达基因并且产生和/或分泌融合蛋白之后，融合蛋白被天然酶或蛋白酶或被前药裂解以在不需要的细胞中、在不需要的细胞处、在不需要的细胞附近释放ntp肽。[0273]实施方案的范围还包括使用克隆的重组肽肽-抗体缀合物；克隆的重组肽-抗体片段缀合物；和克隆的重组肽-抗体状蛋白质缀合物以施用至初治哺乳动物。除了克隆的缀合分子的制造和标准化制备的优点以外，与靶向缀合物(如抗体、抗体片段、抗体状分子、或对癌症特异性受体或其他肿瘤标记物具有高亲和力的分子)组合的克隆ntp肽的优点是这样的分子还结合了上述的靶向优点。[0274]这个实施方案还包括使用ntp肽或基因或基因等同物的治疗组合物作为医疗装置如支架的涂层的组分从而移除、抑制或预防不需要的细胞增殖或累积。[0275]用于口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂、和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与下列各项中的至少一种混合：(a)一种或多种惰性赋形剂(或载体)，如柠檬酸钠或磷酸二钙；(b)填充剂或膨胀剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(c)粘合剂，如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；(d)保湿剂，如甘油；(e)崩解剂，如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶液缓聚剂(solutionretarder)，如石蜡；(g)吸收加速剂，如季铵化合物；(h)润湿剂，如乙酰醇和甘油单硬脂酸酯；(i)吸收剂，如高岭土和膨润土；(j)滑润剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，或它们的混合物。对于胶囊、片剂、和丸剂来说，剂型也可以包含缓冲剂。[0276]用于口服施用的液体剂型包括药用乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂、和酏剂。除了活性化合物以外，液体剂型还可以包含在本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其他溶剂、增溶剂、和乳化剂。示例性的乳化剂是乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油，甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物等。[0277]除了这样的惰性稀释剂以外，组合物还可以包含剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、增甜剂、调味剂和香味剂。[0278]对于具体的组合物和施用方法来说，可以改变实施方案的组合物中的活性成分的实际剂量水平以得到有效获得所需治疗响应的量的ntp肽。因此所选择的剂量水平取决于所需的治疗效果、给药途径、所需的治疗持续时间、和其他因素。[0279]对于包括人在内的哺乳动物来说，可以基于体表面积施用有效量。e.j.freireich等，cancerchemother.rep.,50(4):219(1966)描述了针对各种大小、物种和人的剂量的相互关系(基于mg/体表的m.sup.2)。体表面积可以根据个体的身高和体重近似确定(参见例如，scientifictables,geigypharmaceuticals,ardsley,n.y.537-538页(1970))。[0280]向宿主施用的ntp肽的每日总剂量可以是单一剂量或分开的剂量。剂量单位组合物可以含有可以用于构成每日剂量的几分之一的量。然而，应理解的是，任何特定患者的特定剂量水平将会取决于多种因素，包括体重、整体健康、性别、饮食、施用时间和途径、施用药物的效力、吸收和排泄的速率、与其他药物的组合以及所治疗的具体疾病的严重程度。[0281]施用根据实施方案的ntp肽组合物的方法包括但不限于肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、肿瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、经皮，通过气雾剂、输注、推注注射、植入装置、持续释放系统等。[0282]另一种施用实施方案的ntp肽的方法是通过经皮或透皮途径。这样的实施方案的一个实例是使用贴剂。尤其是，贴剂可以用肽在例如二甲亚砜(dmso)或dmso与棉籽油的混合物中的精细悬浮液制备并且与携带肿瘤的哺乳动物的远离皮肤囊(skinpouch)内的肿瘤部位的皮肤接触。其他介质或其与其他溶剂和固体支持物的混合物也可以起同样作用。贴剂可以含有溶液或悬浮液形式的肽化合物。之后可以将贴剂施加至患者的皮肤，例如通过将其插入至通过借助针、夹子或其他夹持装置将皮肤折叠并且夹持在一起形成的患者的皮肤囊中的方式。该囊应当以使得确保与皮肤的连续接触而不受哺乳动物干扰的方式使用。除了使用皮肤囊以外，还可以使用确保与皮肤接触的贴剂牢固放置的任何装置。例如，可以使用创可贴将贴剂保持在皮肤上的适当位置。[0283]ntp肽可以在持续释放的配制物或制剂中施用。缓释制剂的适合的实例包括成形制品的形式的半可透过性聚合物基质，例如膜或微胶囊。持续释放基质包括聚酯、水凝胶、聚交酯(美国专利号3,773,919、ep58,481)、l-谷氨酸和γl-谷氨酸乙酯的共聚物(sidman等，生物聚合物(biopolymers),22:547-556)、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(langer等，j.biomed.mater.res.,15:167-277和langer,chem.tech.,12:98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(langer等，见上文)或聚-d(-)-3-羟基丁酸(ep133,988)。缓释组合物还可以包括脂质体，其可以通过本领域中已知的若干方法中的任一种制备(例如，eppstein等，proc.natl.acad.sci.usa,82:3688-3692；ep36,676；ep88,046；和ep143,949)。[0284]施用实施方案的ntp肽的另一种方法是通过肽向待治疗的肿瘤或其他组织中的直接或间接输注。这样的实施方案的一个实例是肽向待治疗的肿瘤或其他组织中的直接注射。治疗可以由单次注射、在一个场合中的多次注射或在数小时、数天或数月的时间段内的一系列注射组成，并且借助活组织检查、成像或其他监测组织生长的方法来监测待治疗的肿瘤或其他组织的消退或破坏。向待治疗的肿瘤或其他组织中的注射可以借助插入至孔如鼻、嘴、耳、阴道、直肠或尿道中的装置或经由切口，从而到达体内的肿瘤或组织，并且可以与成像或光学系统如超声或光纤观察镜(scope)结合进行，从而确定用于一次或多次注射的适当位点。这样的实施方案的另一个实例是使用可以随时间向组织提供恒定的ntp肽的输注的装置。[0285]施用实施方案的ntp肽的另一种方法是与用于物理切除、烧灼或杀伤或破坏需要或希望被移除或破坏的肿瘤或其他组织或细胞元件的手术或类似操作结合，其中将实施方案的ntp肽施用至包围一个或多个移除了肿瘤或其他组织的区域的一个或多个紧邻区域，从而破坏或阻止未被该操作移除或破坏的任何肿瘤细胞或其他细胞元件的生长。[0286]施用实施方案的ntp肽的另一种方法是通过在待治疗的肿瘤或其他组织内植入装置。这样的实施方案的一个实例是在待治疗的肿瘤或其他组织中植入含有肽的薄片。薄片随时间将治疗剂量的肽释放至组织中。备选地或另外地，可以通过向吸收了ntp肽的膜、海绵、或其他适当物质的受影响区域中植入来局部施用组合物。在使用植入装置的情况下，可以将装置植入至任何适合的组织或器官中，并且肽的递送可以使用连续输注通过推注、或通过连续施用、或通过导管直接经过该装置。[0287]备选的施用方法是将一个或多个拷贝的编码ntp肽的基因引入至靶向的细胞中，并且如果需要，诱导一个或多个拷贝的基因开始在细胞内产生肽。一种可以应用基因疗法的方式是使用编码ntp肽的基因(编码肽(或片段、变体、同源物或其衍生物)的基因组dna、cdna、和/或合成dna)，其可以可操作地连接至组成型或可诱导启动子以形成基因疗法dna构建体。启动子可以是与内源性编码肽的基因同源的或异源的，条件是其在将会插入构建体的细胞或组织类型中具有活性。根据需要，基因疗法dna构建体的其他组分可以任选包括针对位点特异性整合设计的dna分子(例如，可用于同源重组的内源性侧翼序列)、组织特异性启动子、一个或多个增强子或一个或多个沉默子、能够提供超过亲本细胞的选择性优势的dna分子、可以用作标记物以鉴别转化细胞的dna分子、阴性选择系统、细胞特异性结合剂(例如，用于细胞靶向)、细胞特异性内在化因子、和增强借助载体的表达的转录因子以及实现载体产生的因子。[0288]体内或离体的向细胞或组织的基因递送的方式包括(但不限于)裸露dna的直接注射、弹道法(ballisticmethod)、脂质体介导的转移、受体介导的转移(配体-dna配合物)、电穿孔、和磷酸钙沉淀。参见美国专利号4,970,154、wo96/40958、美国专利号5,679,559、美国专利号5,676,954、和美国专利号5,593,875，其每一个的公开内容通过引用整体结合在本文中。它们还包括使用病毒载体如逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、痘病毒、慢病毒、乳头瘤病毒或单纯疱疹病毒，使用dna-蛋白质缀合物，以及使用脂质体。例如，在美国专利号5,672,344、美国专利号5,399,346、美国专利号5,631,236、和美国专利号5,635,399中描述了基因疗法载体的使用，其每一个的公开内容通过引用整体结合在本文中。[0289]可以使用如在本文中所述的那些方法通过植入至已经离体遗传改造的患者的某些细胞中来递送编码ntp肽的基因，以表达和分泌ntp肽或其片段、变体、同源物、或衍生物。这样的细胞可以是动物或人细胞，并且可以来源于患者自身的组织或来源于人或非人的另外来源。任选地，细胞可以是永生化(immortalized)细胞或干细胞。然而，为了降低免疫响应的可能性，优选将细胞包封以避免周围组织的浸润。包封物质通常是生物相容性、半可透过性聚合物封闭物或膜，其允许释放一种或多种蛋白质产物但是防止细胞被患者的免疫系统或被来自周围组织的其他有害因素破坏。用于细胞的膜包封的方法是技术人员熟悉的，并且可以在无需过度实验的情况下实现包封的细胞的制备和其在患者中的植入。参见，例如，美国专利号4,892,538；5,011,472；和5,106,627，其每一个的公开内容通过引用整体结合在本文中。在pctwo91/10425中描述了包封活细胞的系统。用于配制多种其他持续或受控递送方式如脂质体载体、生物可侵蚀粒子或珠的技术也是本领域人员已知的，并且例如在美国专利号5,653,975中描述，其公开内容通过引用整体结合在本文中。在包封或未包封的情况下，都可以将细胞植入至患者的适合的身体组织或器官中。[0290]治疗需要移除或破坏细胞的病症的方法的特别优选的实施方案是通过施用一种或多种实施方案的ntp肽，并且待移除或破坏的细胞是淋巴组织。其他优选的实施方案包括治疗需要移除或破坏细胞的病况，如单独或组合选自下列各项中的任一个：扁桃体肥大、前列腺增生、血管疾病(动脉粥样硬化或动脉硬化)、痔疮、静脉曲张、银屑病、湿疹、皮肤病、以及组织的美容修饰。其他可治疗的病况包括动脉或放置或植入在动脉中的支架的狭窄、再狭窄、阻塞或堵塞。在优选的实施方案中可以治疗的适合的组织包括皮肤、眼、耳、鼻、喉、嘴、肌肉、结缔组织、毛发、和乳房。[0291]根据实施方案治疗的其他优选的病况包括选自下列各项的那些：炎性疾病、自身免疫疾病、代谢疾病、遗传性/遗传学疾病、创伤性疾病或物理损伤、营养缺乏性疾病(nutritionaldeficiencydisease)、传染病、淀粉样疾病(amyloiddisease)、纤维变性病(fibrosisdisease)、贮积病(storagedisease)、先天性畸形(congenitalmalformation)、酶缺乏性疾病(enzymedeficiencydisease)、中毒(poisoning)、醉酒(intoxication)、环境病、辐射病、内分泌疾病、退行性疾病(degenerativedisease)和机能性疾病(mechanicaldisease)。在另一个优选的实施方案中，肽与选自下列各项的分子缀合、连接、或结合：抗体、抗体片段、和抗体状结合分子，其中相比于与其他细胞结合，所述分子对具有更高的与肿瘤或其他靶标结合的亲和力。在另一个实施方案中，肽是由该肽和选自由下列各项组成的组中的分子组成的单一新克隆的重组分子的一部分：抗体、抗体片段、和抗体状结合分子，其中相比于与其他细胞结合，所述分子对具有更高的与肿瘤或其他靶标结合的亲和力。[0292]提供以下实施例以说明本发明的实施方案。然而，应当理解的是，实施方案限于在这些实施例中描述的具体情况或细节。在整个说明书中，包括美国专利在内的对可公开获得的文献的任何和全部参考通过引用具体结合。[0293]尤其是，实施方案通过引用明确地结合在下列各项中含有的实例：待审美国专利申请公布号2003/0054990(现在放弃)；2007/0237780(现在放弃)；2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)，它们各自揭示在其中指定的某些肽是在普通啮齿类动物肌肉组织、皮下结缔组织、真皮和其他组织中导致体内细胞死亡的有效试剂。[0294]实施例一[0295]在978名男性的研究中，在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年以上。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症(nocturia))。相对于接受单独pbs的患者，在给予药物的患者中，比较与基线ipss的差异。将没有先前常规药物治疗历史的患者(“初治”)与先前其他常规批准的药物如α阻断剂或5-α还原酶抑制剂无效的患者进行比较。出人意料地发现，在症状的改善方面，与先前治疗无效的患者相比，初治患者具有好得多的平均结果。结果总结在表4中。[0296]表4[0297][0298]*双侧t检验与pbs组相比p＝.02；与先前治疗无效的药物组相比p《.001[0299]根据本实施例，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供约26.5％的平均ipss提高。当与对照相比时，在对治疗无效患者中的bph进行治疗中使用ntp肽仅提供约1.5％的平均ipss提高。当与通过对治疗无效的患者进行治疗而发现的提高相比时，施用ntp肽以治疗初治患者中的bph的本发明的方法提供几乎1,700％的提高，或16.7倍的增加。[0300]在以下专利和专利申请中已知并且描述的是，可以使用某些ntp肽移除不需要的细胞元件：美国专利申请公布号2007/0237780(现在放弃)；2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)。本领域普通技术人员将会预期在治疗初治哺乳动物中使用在其中描述的肽与它们有效用于治疗已经接受先前治疗但是不成功的哺乳动物一样有效。基于已知的文献，初始患者的治疗提供显著提高的事实是出乎意料的。[0301]实施例二[0302]在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年以上。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症)。相对于接受单独pbs的患者，在给予药物的患者中，比较与基线ipss的差异。将a)没有先前常规药物治疗历史(“初治”)并且b)其bph症状《10年的患者与a)先前其他常规批准的药物如α阻断剂或5-α还原酶抑制剂无效或b)其bph症状》＝10年的患者进行比较。出人意料地发现，在症状的改善方面，与先前治疗无效的患者或具有bph症状》＝10年的患者相比，具有bph症状《10年的初治患者具有好得多的结果。结果总结在表5中。[0303]表5[0304][0305]*双侧t检验与pbs组相比p＝.02；与先前治疗无效的药物组相比p《.001；与症状持续时间》＝10年的组相比p《.01[0306]根据本实施例，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供约27.5％的平均ipss提高。当与接受相同药物但是之前已经进行治疗并且具有症状少于或多于10年的患者相比时，对于具有症状少于10年的患者来说，本发明的方法提供35.4％的提高，并且对于具有症状多于10年的患者来说，提供约39.7％提高。基于已知文献，这些提高是出乎意料的并且显著的。[0307]实施例三[0308]在978名男性的研究中，在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年以上。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症)。相对于接受单独pbs的患者，在给予药物的患者中，在治疗之后平均22个月时比较与基线ipss的差异。随访仅12个月的患者从12个月以后被赋予等于其所在组的平均值的变化。将没有先前常规药物治疗历史的患者(“初治”)与先前其他常规批准的药物如α阻断剂或5-α还原酶抑制剂无效的患者进行比较。出人意料地发现，在症状的改善方面，与先前治疗无效的患者相比，初治患者具有好得多的平均结果。结果总结在表6中。[0309]表6[0310][0311]*双侧t检验与pbs组相比p《.01；与先前治疗无效的药物组相比p《.01。[0312]表3显示，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供约52.9％的平均ipss提高。结果还显示，当与对治疗无效的患者进行治疗相比时，治疗初治患者提供约40.5％的提高。换句话说，与在治疗无效的患者中相比，在初治患者中ntp肽更有效超过40％。[0313]实施例四[0314]在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年以上。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症)。相对于接受单独pbs的患者，在给予药物的患者中，在平均22个月时比较与基线ipss的差异。随访仅12个月的患者从12个月以后被赋予等于其所在组的平均值的变化。出人意料地发现，在症状的改善方面，与先前治疗无效的患者或具有症状持续时间》＝10年的患者相比，具有bph历史《10年的初治患者具有好得多的平均结果。结果总结在表7中。[0315]表7[0316][0317]*双侧t检验与pbs组相比p＝.01；与先前治疗无效的药物组相比p《.01；与bph症状》＝10年的药物组相比p《.01[0318]根据本实施例，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽在22个月之后提供约61.7％的平均ipss提高。当与对照相比时，在90天之后，提供相同比较的实施例2显示出27.5％的平均ipss提高。在从初治哺乳动物中移除不需要的细胞元件中使用ntp肽因此显示出随时间增加的出乎意料的提高。事实上，从3个月至22个月，提高大于两倍。当与接受相同药物但是之前已经进行治疗并且具有症状少于或多于10年的患者相比时，对于具有症状少于10年的患者来说，本发明的方法提供48.6％的提高，并且对于具有症状多于10年的患者来说，提供约61.7％提高。基于已知文献，这些提高是出乎意料的并且显著的。[0319]实施例五[0320]在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症)。在给予药物的具有不同bph历史的患者中，在12个月时比较与基线ipss的差异。出人意料地发现，在症状的改善方面，与具有症状持续时间》＝10年的患者相比，具有bph历史《10年的患者具有好得多的平均结果。结果总结在表8中。[0321]表8[0322][0323]*双侧t检验与bph历史》＝10年的药物组相比p《.01。[0324]本实施例显示，无论其是初治的还是治疗无效的，具有症状较短时间段的患者同样展现出出乎意料地优秀的提高。如在以上表5中所示，当与具有症状多于10年的患者相比时，具有症状少于10年的患者展现出约40.9％的提高。[0325]实施例六[0326]在978名男性的研究中，在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年以上。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症)。相对于接受单独pbs的患者，在给予药物的患者中，比较与基线ipss的差异。将没有先前常规药物治疗历史的患者(“初治”)与先前其他常规批准的药物如α阻断剂或5-α还原酶抑制剂无效的患者进行比较。出人意料地发现，在症状的更低频率的恶化方面，与先前治疗无效的患者相比，初治患者具有好得多的平均结果。结果总结在表9中。[0327]表9[0328][0329](1)在12个月ipss》0[0330]*费舍尔精确检验(fisherexact)与pbs相比p《.01；与先前治疗无效的药物组相比p《.01[0331]来自实施例6的结果显示，当与治疗无效的患者相比时，并且当与用对照治疗的初治患者相比时，根据本发明的方法用ntp肽治疗的初始患者随时间恶化的程度低得多。根据本实施例，当与对照相比时，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供约51.5％的随时间恶化的患者的比例的降低。对于治疗无效的患者来说，在药物和对照之间的随时间恶化的患者的比例的这种差异较不明显。当与对照相比时，在对治疗无效的患者中的bph进行治疗中使用ntp肽提供约10％的随时间恶化的患者的比例的降低。当与治疗无效的患者相比时，施用ntp肽以治疗初治患者中的bph的本发明的方法因此将恶化的患者的比例降低了几乎420％，或4.15倍的提高。[0332]实施例七[0333]在双盲条件下由泌尿科医师在办公室环境中在超声引导下为患有bph的患者前列腺内注射a)在ph7.2的磷酸盐缓冲盐水(“pbs”)中的药物或b)单独pbs。利用常规身体检查、实验室试验、和症状的评价，对每位患者随访一年。通过作为用于评估前列腺症状改善或恶化的量化尺度的国际前列腺症状评分(ipss)测量症状评价。ipss对以下进行量化：1)排尿之后不完全膀胱排空；2)频繁排尿；3)排尿期间停止和开始；4)迫切需要排尿；5)尿流虚弱；6)排尿期间需要用力或紧张；7)在晚上睡觉之后需要排尿(夜尿症)。相对于接受单独pbs的患者，在给予药物的患者中，比较与基线ipss的差异。将具有bph历史《10年的先前初治患者与先前治疗无效的患者并且与具有bph历史》＝10年的患者进行相比。出人意料地发现，在症状的更低频率的恶化方面，与先前治疗无效的患者相比并且与具有bph历史》＝10年的患者相比，具有历史《10年的初治患者具有好得多的平均结果。结果总结在表10中。[0334]表10[0335][0336](1)在一年时具有ipss》0或》1或》2的患者的比例(》0/》1/》2)。[0337]*具有ipss》0的比例的费舍尔精确检验：与pbs相比p《.001；与bph历史》＝10年相比p《.01；与先前治疗无效的药物组相比p《.01。[0338]**具有ipss》1的比例的费舍尔精确检验：与pbs相比p《.01；与bph历史》＝10年相比p＝.032；与先前治疗无效的药物组相比p＝.023。[0339]***具有ipss》2的比例的费舍尔精确检验：与pbs相比p《.01；与bph历史》＝10年相比p＝.038。[0340]来自实施例7的结果显示，当与治疗无效的患者相比时，并且当与用对照治疗的初治患者相比时，根据实施方案的方法用ntp肽治疗的初始患者随时间以低得多的程度恶化。根据本实施例，当与对照相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，在治疗初始患者中的bph中使用ntp肽提供约61.9％、62.5％、和66.7％的随时间恶化的患者的比例的降低。在针对初治患者的对照和向治疗无效的患者或具有bph历史多于10年的患者施用药物之间的随时间恶化的患者的比例的差异较不明显。当与对照相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，在对治疗无效的患者中的bph进行治疗中使用ntp肽提供约14.3％、25％、和33.3％的随时间恶化的患者的比例的降低。当与对照相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，在对具有bph历史多于10年的患者(初治和治疗无效的)中的bph进行治疗中使用ntp肽提供约4.7％、18.8％、和16.7％的随时间恶化的患者的比例的降低。最后，当与在治疗无效的患者中的bph的治疗相比时，基于在表10中列出的三种不同方案，施用ntp肽以治疗初治患者中的bph的方法提供约55.6％、50％、和50％的随时间恶化的患者的比例的降低。[0341]来自前述实施例的结果说明了在初治患者中和在具有少于10年的病况历史的患者中ntp肽的出乎意料地优秀的效果。当与对照相比时，当与治疗无效的患者相比时，并且当与具有症状多于10年的患者相比时，使用根据实施方案的ntp肽还提供随时间的病况恶化的显著降低。[0342]对本领域技术人员来说将会显而易见的是，可以在本发明的实施方案的方法和组合物中做出多种改进和改变而不背离实施方案的精神或范围。当前第1页12当前第1页12