一种具有协同增效效应的药物组合物及其其抗病毒用途的制作方法

1.本发明属于药物制剂领域，具体涉及由新型氘代氰基类化合物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐、以及氘代胞苷衍生物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐组成的药物组合物及其抗病毒用途。


背景技术：

[0002][0003]
sars病毒属于套式病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属，为β属b亚群冠状病毒。病毒粒子多呈圆形，有囊膜，外周有冠状排列的纤突,分布于细胞浆中，呈圆形，病毒直径在80～120nm之间。sars是一种起病急、传播快、病死率高的传染病，被传染的病人多数都与患者直接或间接接触，或生活在流行区内。
[0004]
mers病毒是一种β属c亚群冠状病毒，全名为中东呼吸综合征冠状病毒 (middle east respiratory syndrome coronavirus，简称mers-cov)，感染后引发中东呼吸综合征(middle east respiratory syndrome，简称mers)。mers-cov 最早于2012年9月在沙特被发现，早期因与sars临床症状相似得名“类sars 病毒”，也成为第6种已知的人类冠状病毒，也是过去10年内被分离出来的第 3种。
[0005]
新型冠状病毒sars-cov-2是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株， 2019年首次被发现并报道，至今仍然在全球多个国家流行肆虐，并在很多国家区域并未得到很好的控制。
[0006]
人感染冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡，而且目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。
[0007]
新型氘代氰基类化合物是由上海谷森医药有限公司独自研发的一种小分子 3cl蛋白酶抑制剂，其结构为：体外实验证实其具有优良的抗sars-cov-2活性，能有效抑制病毒的复制，该化合物在病毒抑菌活性相当的基础上，实现了比其他口服抗新冠药更优的药动学性质，上海谷森医药有限公司针对上述新型氘代氰基类化合物是申请了发明专利(申请号 cn202111234708x)。
[0008]
氘代胞苷衍生物也是由上海谷森医药有限公司独自研发的一种小分子新胞苷类抗病毒口服药物。该药物是一种sars-cov-2聚合酶抑制剂，体外实验证实，其具有很强的抗sars-cov-2活性，能有效抑制病毒的复制，化合物氘代胞苷衍生物的化学名为：((2r,3s,4r,5r)-3,4-二羟基-5-(4-(羟胺基)-2-氧代嘧啶-1(2h)-基)四氢呋喃-2-基)氘甲基异丁酯，其
化学式为：并已申请了发明专利(申请号cn2021110245289)。
[0009]
尽管新型氘代氰基类化合物和氘代胞苷衍生物在体外具有较好的抗病毒活性，但其安全性和耐药性有待提升。基于此，迫切需要开发切实有效的药物组合物，以改善药物的抗病毒活性、耐药性和安全性。而本发明公开的药物组合物恰好解决了上述问题。


技术实现要素：

[0010]
本发明的目的是提供一种包含新型氘代氰基类化合物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐、以及氘代胞苷衍生物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐组成的药物组合物及其抗病毒用途。
[0011]
一方面，本发明提供了一种药物组合物，其特征在于：由新型氘代氰基类化合物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐、以及氘代胞苷衍生物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐组成。
[0012]
本发明涉及的新型氘代氰基类化合物结构如下：
[0013][0014]
氘代胞苷衍生物的结构如下：
[0015][0016]
本发明药学上可接受的盐包括相应化合物的有机盐和无机盐，可以是本领域技术人员所熟知的所有盐，优选但非限制性实例是盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐等。
[0017]
进一步地，化合物可以以前药的形式施用。前药可包含共价键合的载体，其施用于哺乳动物对象时释放活性母体药物。前药可以通过以这种方式修饰化合物中存在的功能基团使得修饰在例行操作中或在体内裂解为母体化合物。
[0018]
本发明的溶剂化物是指一个或多个溶剂分子与本发明形成的缔合物，形成溶剂化物的溶剂包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲亚砜等。
[0019]
本发明的异构体包括立体异构、互变异构体。
[0020]
此外，本发明的化合物包括其晶体和非晶体形式，其中晶体包括单晶、多晶和共晶。
[0021]
优选地，新型氘代氰基类化合物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐、与氘代胞苷衍生物或其异构体或其前药或其溶剂化物或其药学上可接受的盐的重量比为(100-300):(200-400)，优选地，它们的质量比为100：200、100：300、100：400、200：300、200：400、300：400。优选地，它们的质量比为200：300。
[0022]
优选地，本文公开的药物组合物包含约100mg至约300mg新型氘代氰基类化合物和200mg-400mg氘代胞苷衍生物。优选地，药物组合物包含约200mg 新型氘代氰基类化合物和200mg-300mg氘代胞苷衍生物，优选地，药物组合物包含约200mg新型氘代氰基类化合物和300mg氘代胞苷衍生物。
[0023]
应当理解，本发明药物组合物可以在相同或不同药物组合物中同时给药，或者可按顺序给药，也即新型氘代氰基类化合物与氘代胞苷衍生物可以混合在一起形成单一的给药单元，也可以分别独立形成给药单元。如果是独立给药，给第二种活性组分的间隔时间不应当使活性组分联合所能产生的协同疗效的益处失去。优选新型氘代氰基类化合物与氘代胞苷衍生物分别独立形成给药单元。
[0024]
所述组合物还包括药学上可接受的载体，所述载体由被认为是安全且有效的材料组成，并且可以对个体施用而不会引起不良的生物学副作用或不期望的相互作用。载体是药物制剂中存在的除活性成分以外的所有成分。如本文通常所使用的，“载体”包括但不限于调节剂、黏合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、着色剂、增塑剂、膜衣材料、有机溶剂、增溶剂、调味剂、表面活性剂等。
[0025]
稀释剂，也被称为“填充剂”，其通常是增加固体剂型的体积从而提供用于压制片剂或形成珠子和颗粒的实用大小所必需的。合适的稀释剂包括但不限于磷酸二钙二水合物、硫酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素、微晶纤维素、高岭土、氯化钠、干淀粉、水解淀粉、预胶化淀粉、二氧化硅、氧化钛、硅酸铝镁和糖粉。
[0026]
黏合剂被用于赋予固体剂型黏结性，从而确保剂型形成后片剂或珠子或颗粒保持完整。合适的黏合剂材料包括但不限于淀粉、预胶化淀粉、明胶、糖类(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖和山梨糖醇)、聚乙二醇、蜡、天然树胶和合成树胶。
[0027]
润滑剂用于促进片剂的制造。合适的润滑剂的实例包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉和矿物油。
[0028]
崩解剂用于在施用后促进剂型崩解或“分解”，并且通常包括但不限于淀粉、淀粉乙醇酸钠、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、预胶化淀粉、黏土、纤维素、海藻酸盐、胶或交联的聚合物。
[0029]
稳定剂用于抑制或延缓药物分解反应，例如包括氧化反应。
[0030]
表面活性剂可以是阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。合适的阴离子表面活性剂包括但不限于含有羧酸根、磺酸根和硫酸根离子的那些。阴离子表面活性剂的实例包括长链烷基磺酸和烷基芳基磺酸的钠盐、钾盐、铵盐，例如十二烷基苯磺酸钠；二烷基磺基琥珀酸钠。
[0031]
典型的增塑剂的实例包括聚乙二醇、丙二醇、三醋精、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸
三乙酯、蓖麻油和乙酰化的单甘油酯。
[0032]
有机溶剂可以为醇类，如异丙醇，丙二醇，聚乙二醇，聚丙烯乙二醇，甘油和聚氧乙烯醇等。
[0033]
可以配制本文所述的组合物以用于调节释放或控制释放。控释剂型的实例包括延长释放剂型、延迟释放剂型、脉冲释放剂型及其组合。
[0034]
优选地，化合物或药物组合物通过口服施用、静脉内施用，口服包括片剂或者口服液。
[0035]
另一方面，本发明提供一种药物组合物在制备用于治疗或预防病毒感染的药物中的用途，所述病毒可以为新冠病毒sars-cov-2、sars冠状病毒、mers 冠状病毒、东部马脑炎病毒、西部马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、奇昆古尼亚热病毒、正黏病毒科病毒或副黏病毒科病毒、rsv病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒、埃博拉病毒。优选地，所述病毒为新冠病毒sars-cov-2、sars 冠状病毒和mers冠状病毒。优选地，所述病毒为新冠病毒sars-cov-2。
[0036]
本发明的药物组合物具有以下优点和有益效果：
[0037]
(1)本发明所述药物组合物中的活性成分新型氘代氰基类化合物和氘代胞苷衍生物分别是由上海谷森医药有限公司独自研发的一种小分子3cl蛋白酶抑制剂和新胞苷类抗病毒口服药物，它们均展现出优异的抗病毒活性。
[0038]
(2)本发明所述组合物的抗病毒效果明显优于单独给药，具有显著的协同增效效应，并降低了细胞毒性。
[0039]
(3)新型氘代氰基类化合物针对的是病毒的蛋白酶，而氘代胞苷衍生物针对的是病毒的rna聚合酶，将针对不同靶点的药物组合在一起可以解决耐药性问题，从而提高药物的安全性。
[0040]
说明书附图
[0041]
图1为药物组合物对细胞毒性的影响
[0042]
图2为药物组合物的抗病毒活性
[0043]
图3为药物组合物对比单独用药的细胞抗病毒活性
具体实施方式：
[0044]
以下结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明。
[0045]
以下详细的说明都仅是示例性和解释性的，而非限制性的。
[0046]
以下实施例，除非另外指出，否则使用的所有溶剂和试剂都是商购得到并且以原样使用。
[0047]
实施例1：新型氘代氰基类化合物(以下简称化合物1)的合成路线
[0048][0049]
1)中间体h、k、m的制备方法可参见发明人在先申请cn202111234708.x。
[0050]
2)新型氘代氰基类化合物(以下简称化合物1)的合成
[0051]
在室温下，将m(8g，21.1mmol)溶于thf(80ml)和meoh(80ml)中。加入氢氧化锂(1.5g，62.8mmol)的水溶液(15ml)，室温搅拌2小时。调温至0-10℃，加入乙酸乙酯后使用1n hcl调反应液至酸性，分层，水相使用ea 萃取两次，合并有机相后无水硫酸镁干燥，浓缩至干得到粗品，柱层析纯化得到m水解化合物。
[0052]
将上一步所得的水解化合物和dmf(100ml)投入反应瓶中，调温至0-10℃。在此温度下，依次加入edci(4.9g，25.6mmol)，hobt(3.4g，25.2mmol)， nmm(4.3g，42.5mmol)，并在此温度下搅拌30分钟。在此温度下，分批加入h(4.0g，21mmol)，加完后在室温下搅拌过夜。tlc检测反应转化基本完全，加入水(80ml)后用ea萃取三次，合并有机相，依次使用0.5mol/l hcl， 5％nahco3，水洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩至干得到粗品1，柱层析得到类白色固体产物8.4g，即新型氘代氰基类化合物(以下简称化合物1)。
[0053]
实施例2：氘代胞苷衍生物(以下简称化合物2)的合成路线
[0054][0055]
具体操作步骤可参见发明人在先申请cn202111479537.7。
[0056]
实施例3：细胞毒性试验
[0057]
试验方法：
[0058]
1)将vero-e6细胞进行消化传代，用含10％fbs的dmem调整细胞密度为 1
×
105个细胞/ml接种96孔板，100μl/孔，放置于温度为35℃、6％co2培养箱培养20h；
[0059]
2)将孔中的培养基去除，1
×
pbs洗涤2次，甩干后加入含1％fbs的dmem，同时加入实施例1-2所述新型氘代氰基类化合物(以下简称化合物1)和氘代胞苷衍生物(以下简称化合物2)(摩尔比为1：1)，使孔内组合物的终浓度为1000 μm、300μm、100μm、30μm，设置细胞对照组，放置于35℃、6％co2培养箱培养；
[0060]
3)48h后，用cck8试剂盒进行细胞活力检测。
[0061]
试验结果：
[0062]
结果见图1。由图可知，该组合物对vero-e6细胞的毒性作用小，其cc50 大于100μm。
[0063]
实施例4：体外抗病毒活性ec
50
试验
[0064]
试验方法：
[0065]
1)将vero-e6细胞进行消化传代，用含10％fbs的dmem调整细胞密度为1
×
105个细胞/ml接种于96孔板，100μl/孔，放置于35℃、6％co2培养箱培养20h；
[0066]
2)用含1％fbs的dmem按照1:1的摩尔比稀释包含化合物1和化合物2 的组合物，使组合物浓度为200μm、60μm、20μm、6μm、2μm、0.6μm、 0.2μm、0.06μm、0.02μm；
[0067]
3)弃去孔中培养基，并在96孔板盖子上做好标记，1
×
pbs洗三次，按序每孔加入100μl稀释好的组合物，接着每孔加入100μl 0.01moi病毒液，使组合物的终浓度为100μm、30μm、10μm、3μm、1μm、0.3μm、0.1μm、0.03 μm、0.01μm，设置细胞对照组和病毒对照组，放置于35℃、6％co2培养箱培养；
[0068]
4)48h后，用cck8试剂盒进行细胞活力检测。
[0069]
试验结果：
[0070]
结果见表1。本发明的组合物半数最大效应浓度(ec50)为：0.241μm，显著低于单独使用化合物1(1.716μm)与化合物2(1.563μm)。
[0071]
表1药物组合物体外抗病5毒活性(ec50)对比
[0072]
组别ec50(μm)化合物21.716
±
0.585μm化合物11.563
±
0.576μm化合物1+化合物20.241
±
0.084μm
[0073] 实施例5：抗病毒活性(tcid
50
)的测定
[0074]
试验方法：
[0075]
1)将vero-e6细胞进行消化传代，用细胞培养液调整细胞密度为1
×
105/ml 接种96孔板，100μl/孔，放置于35℃、6％co2培养箱培养20h；
[0076]
2)用含1％fbs的dmem按照按照1:1的摩尔比稀释包含化合物1和化合物2的组合物，使组合物浓度分别为200μm、60μm、20μm、6μm、2μm、 0.6μm、0.2μm、0.06μm、0.02μm；
[0077]
3)弃去96孔板孔中培养基，用1
×
pbs洗三次，每孔对应加入100μl已经稀释好的组合物，每孔接种100μl 0.01moi的病毒，使组合物的终浓度为100 μm、30μm、10μm、3μm、1μm、0.3μm、0.1μm、0.03μm、0.01μm，于 35℃、6％co2培养箱培养；
[0078]
4)约80h后，收集每孔上清测毒价。
[0079]
试验结果：
[0080]
由图2可知，病毒毒价随着组合物浓度增加而降低。组合物浓度大于0.3μm 时抑制效果最明显。组合物浓度为100μm、30μm、10μm、3μm、1μm、0.3 μm、0.1μm、0μm时的tcid50分别为0、0、0、0、0、10-2.58/ml、10-3.87/ml、 10-6.8/ml，在100μm、30μm、10μm、3μm、1μm时，没有检测到病毒，能完全抑制病毒的增殖，0.3μm时可以降低约4.22个滴度，0.1μm时可以降低约2.93个滴度。
[0081]
组合物与单独用药的比较结果见图3。单独用药0.3μm化合物2或化合物1的tcid50分别为10-5.07/ml、10-3.84/ml，而本发明组合物0.3μm的 tcid50为10-2.58/ml，组合物较化合物1单独用药降低2.49个滴度，较化合物2单独用药降低1.26个滴度。单独用药0.1μm化合物2和化合物1的tcid50分别为10-5.596/ml、10-4.67/ml，组合物0.1μm的tcid50为 10-3.87/ml，组合物相较于化合物1单独用药降低3.016个滴度，较化合物2 单独用药降低2.09个滴度。
[0082]
综上，本发明所述组合物的抗病毒效果明显优于单独给药，具有显著的协同增效效应。此外，新型氘代氰基类化合物针对的是病毒的蛋白酶，而氘代胞苷衍生物针对的是病毒的rna聚合酶，将针对不同靶点的药物组合在一起可以解决耐药性问题，从而提高药物的安全性。
[0083]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。