一种具有高效抗蓝光功效的SOD组合物及其制备方法与流程

一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物及其制备方法
技术领域
1.本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物及其制备方法。


背景技术：

2.经研究表明，阳光全波段光均会对人体皮肤造成损伤，包括红外线、可见光以及紫外线。蓝光是可见光的重要组成部分，在日常生活中的led灯以及电子屏幕也十分常见。蓝光是可见光中能量最高的波段，其穿透力也最强，甚至强于紫外光，因而蓝光会对皮肤会造成类似于紫外线引起的皮肤损伤。
3.蓝光照射角质形成细胞会使细胞产生氧化应激，细胞接受蓝光照射主要产生超氧阴离子，而接受uva紫外线波长为320～420nm照射主要产生单线态氧，两者都是通过活性氧(ros)途径介导皮肤损伤，诱导细胞产生自由基，降低成纤维细胞的抗氧化能力，抑制成纤维细胞增生，使皮肤真皮层的纤维细胞外基质大量减少，进而加速皮肤的衰老速度。
4.目前，市面上的抗蓝光化妆品一般是添加植物提取物或植物精油等成分阻挡蓝光对皮肤的伤害。例如：专利文献cn 106727027a公开了一种抗蓝光、抗氧化、清除自由基组合物。该抗蓝光、抗氧化、清除自由基组合物主要由万寿菊花提取物和红花籽油的复合物、茶提取物和高山火绒草提取物组成，其中万寿菊花提取物和红花籽油的复合物可以增强人体皮肤过滤蓝光的能力，阻挡蓝光对皮肤的伤害，还能捕获人体皮肤组织中的自由基，延缓由于皮肤氧化而导致的衰老。
5.专利文献cn 109464308a公开了一种具有抗蓝光护肤功效的精油组合物，该精油组合物主要由橙花精油、石榴精油、姜精油、薰衣草精油组成，制得的精油组合物可以吸收蓝光从而避免蓝光对皮肤的伤害，同时该精油组合物还具有活血、美白祛斑功、促进细胞生长、活血化瘀、抗自由基的作用，可以消除蓝光引起的皮肤损伤和皮肤衰老，从而达到抗蓝光的目的。
6.然而，添加植物提取物或植物精油等成分抗蓝光的化妆品，其在使用过程中存在抗蓝光效果较差，修复时间较短，植物精油容易挥发，抗蓝光效果下降快的缺陷。超氧化物歧化酶(sod)是一种含有铜、锌、铁和锰的金属蛋白酶，具有催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，平衡机体内氧自由基的功能，有望成为抵御因蓝光辐射造成的皮肤老化问题的重要成分。


技术实现要素：

7.为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物及其制备方法。本发明提供的具有高效抗蓝光功效的sod组合物是以sod为核心原料，搭配其他优选多肽、稳定剂以及协同增效剂，通过特定比例配伍，解决了sod在应用时的稳定性差和利用率低等问题，同时也可以大幅度地提升sod的抗蓝光、修复损伤的作用。
8.本发明提供了一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物，包括以下成分及其质量百
分比：
9.超氧化物歧化酶0.01～2％、多肽0.01～2％、稳定剂5～10％、增效剂2～5％、增溶剂10～30％，纯化水加至100％。
10.进一步地，所述的具有高效抗蓝光功效的sod组合物，包括以下成分及其质量百分比：
11.超氧化物歧化酶0.1～2％、多肽0.1～2％、稳定剂5～8％、增效剂2～5％、增溶剂10～28％，纯化水加至100％。
12.进一步地，所述多肽为肌肽、谷胱甘肽、乙酰基四肽-2和棕榈酰四肽-10中的一种或两种以上的组合。
13.进一步地，所述稳定剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸与海藻糖和透明质酸钠中的一种或两种组合。
14.进一步地，所述增效剂为对羟基苯乙酮。
15.进一步地，所述增溶剂为丁二醇和戊二醇中的一种或两种组合。
16.进一步地，所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物还包括质量百分比5～10％的环糊精。
17.此外，本发明还提供了所述的具有高效抗蓝光功效的sod组合物的制备方法，包括以下步骤：
18.s1将增效剂加入纯化水中，加热至80～100℃，在250～350rpm的条件下搅拌至澄清透明，得混合液；
19.s2待步骤s1制得的混合液冷却至常温，接着加入超氧化物歧化酶、多肽、稳定剂和增溶剂，在450～550rpm的条件下搅拌至澄清透明，即得。
20.进一步地，所述的具有高效抗蓝光功效的sod组合物的制备方法，还包括步骤s3，具体为：将环糊精加入纯化水中配制成环糊精饱和溶液，接着将步骤s2制得的混合液加入到上述环糊精饱和溶液中，加热至60～80℃搅拌2～3h，冷却至室温，在室温下搅拌6～8h后，放置温度为2～8℃的条件下存放12h，取出，过滤，取晶体，加入纯化水搅拌至澄清透明状态，所述晶体与纯化水的料液比为1g:6ml，即得。
21.目前，虽然sod已被广泛应用到护肤品中，但sod在化妆品工业中依然存在着许多未能解决的难题，例如：sod稳定性较差，在水基体系中易受溶解氧、光照、电解质、温度等因素影响活性降解；而且天然sod的分子量为32000da左右，属于大分子蛋白，在细胞膜上没有专一受体，难以迅速进入细胞内发挥作用，大大限制了sod的功效发挥。
22.为了解决上述问题，本发明人创造性地提出了一种稳定性高且抗蓝光效果和修复皮肤损伤效果显著的sod组合物。该sod组合物是以sod为核心原料，搭配多肽、稳定剂以及协同增效剂，通过特定比例配伍，解决了sod稳定性差和利用率低的问题，同时也可以大幅度地提升sod的抗蓝光的作用。
23.在研究过程，发明人意外发现：以由羟乙基哌嗪乙烷磺酸与海藻糖和透明质酸钠中的一种或两种混合组成稳定剂，以对羟基苯乙酮作为增效剂，以丁二醇和戊二醇作为增溶剂，可以提高sod的稳定性，进一步添加多肽与sod进行协同搭配，可以极大的提高sod的抗蓝光，修复皮肤损伤的作用。
24.发明人在研究过程发现，虽然海藻糖和透明质酸钠在化妆品中一般是作为保湿剂
使用，且海藻糖和透明质酸钠在人体功效而言确实更多作为保湿成分，但是发明人发现原料于配方结构作用和人体功效作用上是两个不同层面的理解概念。本发明提供的由羟乙基哌嗪乙烷磺酸与海藻糖和透明质酸钠中的一种或两种混合组成稳定剂在发明配方体系中主要起维持体系酸碱度稳定和减弱牛顿流体分子和布朗运动的效率，解决了sod的酶活性在溶液中出现自消化反应导致酶活性损失的问题，从而保持sod在体系中的酶活性，同时还可以提高sod的吸收率问题。而以对羟基苯乙酮作为增效剂在防蓝光抗氧化方面有协同增效作用，进一步提高体系的防蓝光抗氧化作用；以丁二醇和戊二醇作为增溶剂，可以提高体系中的溶解度，使体系处于稳定、澄清透明的状态，更有利于产品的稳定性。
25.另外，发明人还提出添加一定比例的环糊精对sod进行封闭包裹，其可以更好地解决sod在水基体系中受溶解氧、光照、电解质、温度和微生物等因素影响酶活性降解的问题，进一步提高sod的稳定性，更有利于sod的抗蓝光、修复损伤作用的发挥。
26.本发明制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物为外观性状为无色至淡绿色的透明粘稠状液体。经试验发现，该制得的sod组合物具备长期的较高的活性稳定性，在90天40℃高温加速测试超氧化物歧化酶活性损伤较低，且该制得的sod组合物在波长为400～500nm范围拥有更高效的蓝光损伤防护效果。
27.与现有技术相比，本发明提供的具有高效抗蓝光功效的sod组合物具有稳定性高、皮肤吸收率好，抗蓝光、修复损伤作用显著，且可以长时间维持抗蓝光、修复皮肤损伤的作用的作用，而且制备工艺简单，合适大规模生产和使用，是一种较为理想的抗蓝光、修复皮肤损伤的化妆品组合物。
具体实施方式
28.以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。本发明中所涉及的材料和试剂，均可通过市售或本领域常规技术手段获得。其中：sod和多肽购自于南京斯拜科生物科技股份有限公司，环糊精购自大昌洋行(上海)有限公司。
29.实施例1、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
30.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
31.超氧化物歧化酶0.2％、多肽0.2％、稳定剂6％、对羟基苯乙酮5％、增溶剂10％，纯化水加至100％；
32.所述多肽由质量百分比为0.1％的肌肽和质量百分比为0.1％的谷胱甘肽混合组成。
33.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成。
34.所述增溶剂由质量百分比为5％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组成。
35.制备工艺：
36.s1将对羟基苯乙酮加入纯化水中，加热至80℃，在350rpm的条件下搅拌至澄清透明，得混合液；
37.s2待步骤s1制得的混合液冷却至常温，接着加入超氧化物歧化酶、多肽、稳定剂和
增溶剂，在550rpm的条件下搅拌至澄清透明，即得。
38.实施例2、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
39.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
40.超氧化物歧化酶0.5％、多肽0.5％、稳定剂7％、对羟基苯乙酮2％、增溶剂15％，纯化水加至100％；
41.所述多肽由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.25％的乙酰基四肽-2混合组合；
42.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸、质量百分比为1％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成；
43.所述增溶剂由质量百分比为10％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组合。
44.制备工艺：
45.s1将对羟基苯乙酮加入纯化水中，加热至90℃，在300rpm的条件下搅拌至澄清透明，得混合液；
46.s2待步骤s1制得的混合液冷却至常温，接着加入超氧化物歧化酶、多肽、稳定剂和增溶剂，在400rpm的条件下搅拌至澄清透明，即得。
47.实施例3、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
48.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
49.超氧化物歧化酶1％、多肽1％、稳定剂10％、对羟基苯乙酮5％、增溶剂25％，纯化水加至100％；
50.所述多肽由质量百分比为0.25％的肌肽、由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.5％的棕榈酰四肽-10混合组成。
51.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸、质量百分比为4％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成。
52.所述增溶剂由质量百分比为5％的丁二醇和质量百分比为20％的戊二醇混合组合。
53.制备工艺：
54.s1将对羟基苯乙酮加入纯化水中，加热至100℃，在250rpm的条件下搅拌至澄清透明，得混合液；
55.s2待步骤s1制得的混合液冷却至常温，接着加入超氧化物歧化酶、多肽、稳定剂和增溶剂，在450rpm的条件下搅拌至澄清透明，即得。
56.对比例1、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
57.超氧化物歧化酶0.5％，纯化水加至100％。
58.制备工艺：
59.取超氧化物歧化酶和纯化水，于300rpm的条件下，搅拌至体系澄清透明，即得。
60.对比例2、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
61.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
62.超氧化物歧化酶1％、稳定剂7％、对羟基苯乙酮2％、增溶剂15％，纯化水加至100％；
63.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸、质量百分比为1％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成；
64.所述增溶剂由质量百分比为10％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组合。
65.与实施例2的区别在于：缺少多肽。
66.制备工艺如实施例2类似。
67.对比例3、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
68.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
69.超氧化物歧化酶0.5％、多肽0.5％、稳定剂7％、增溶剂15％，纯化水加至100％；
70.所述多肽由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.25％的乙酰基四肽-2混合组合；
71.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸、质量百分比为1％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成；
72.所述增溶剂由质量百分比为10％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组合。
73.与实施例2的区别在于：缺少对羟基苯乙酮。
74.制备工艺如实施例2类似。
75.对比例4、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
76.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
77.超氧化物歧化酶0.5％、多肽0.5％、羟乙基哌嗪乙烷磺酸7％、对羟基苯乙酮2％、增溶剂15％，纯化水加至100％；
78.所述多肽由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.25％的乙酰基四肽-2混合组合；
79.所述增溶剂由质量百分比为10％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组合。
80.与实施例2的区别在于：所述稳定剂为羟乙基哌嗪乙烷磺酸。
81.制备工艺如实施例2类似。
82.对比例5、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
83.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
84.超氧化物歧化酶0.5％、多肽0.5％、稳定剂7％、对羟基苯乙酮2％、增溶剂15％，纯化水加至100％；
85.所述多肽由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.25％的乙酰基四肽-2混合组合；
86.所述稳定剂由质量百分比为6％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成；
87.所述增溶剂由质量百分比为10％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组合。
88.与实施例2的区别在于：所述稳定剂由质量百分比为3.5％的海藻糖和质量百分比为3.5％的透明质酸钠混合组成。
89.制备工艺如实施例2类似。
90.实施例4、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
91.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
92.超氧化物歧化酶0.5％、多肽0.5％、稳定剂7％、对羟基苯乙酮2％、增溶剂15％、5％环糊精，纯化水加至100％；
93.所述多肽由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.25％的乙酰基四肽-2混合组合；
94.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸、质量百分比为1％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成；
95.所述增溶剂由质量百分比为10％的丁二醇和质量百分比为5％的戊二醇混合组合。
96.制备工艺：
97.s1将对羟基苯乙酮加入纯化水中，加热至90℃，在300rpm的条件下搅拌至澄清透明，得混合液；
98.s2待步骤s1制得的混合液冷却至常温，接着加入超氧化物歧化酶、多肽、稳定剂和增溶剂，在400rpm的条件下搅拌至澄清透明；
99.s3将环糊精加入纯化水中配制成环糊精饱和溶液，接着将步骤s2制得的混合液加入到上述环糊精饱和溶液中，加热至70℃搅拌2h，冷却至室温，在室温下搅拌7h后，放置温度为4℃的条件下存放12h，取出，过滤，取晶体，加入纯化水搅拌至澄清透明状态，所述晶体与纯化水的料液比为1g:6ml，即得。
100.实施例5、一种具有高效抗蓝光功效的sod组合物
101.所述具有高效抗蓝光功效的sod组合物按照质量百分比由如下组分组成：
102.超氧化物歧化酶1％、多肽1％、稳定剂10％、对羟基苯乙酮8％、增溶剂25％、8％环糊精，纯化水加至100％；
103.所述多肽由质量百分比为0.25％的肌肽、由质量百分比为0.25％的谷胱甘肽和质量百分比为0.5％的棕榈酰四肽-10混合组成。
104.所述稳定剂由质量百分比为5％的羟乙基哌嗪乙烷磺酸、质量百分比为4％的海藻糖和质量百分比为1％的透明质酸钠混合组成。
105.所述增溶剂由质量百分比为5％的丁二醇和质量百分比为20％的戊二醇混合组合。
106.制备工艺：
107.s1将对羟基苯乙酮加入纯化水中，加热至90℃，在300rpm的条件下搅拌至澄清透明，得混合液；
108.s2待步骤s1制得的混合液冷却至常温，接着加入超氧化物歧化酶、多肽、稳定剂和增溶剂，在400rpm的条件下搅拌至澄清透明；
109.s3将环糊精加入纯化水中配制成环糊精饱和溶液，接着将步骤s2制得的混合液加入到上述环糊精饱和溶液中，加热至60℃搅拌2h，冷却至室温，在室温下搅拌8h后，放置温度为4℃的条件下存放12h，取出，过滤，取晶体，加入纯化水搅拌至澄清透明状态，所述晶体与纯化水的料液比为1g:6ml，即得。试验例一、具有高效抗蓝光功效的sod组合物的稳定性
试验
110.1、试验对象：
111.实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4和对比例5制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物。
112.2、试验方法：
113.取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、对比例1、对比例2、对比例3、对比例4和对比例5制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物样品各10ml，于密封西林瓶中置于40℃恒温加热箱内，定期取样(5天、10天、30天、60天、90天)进行自氧化速率测定，从而测得试验样品中超氧化物歧化酶存余活性及活性损伤比例。
114.试验样品中超氧化物歧化酶存余活性测定：借助邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出o
2-，生成带色的中间产物，反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。当有超氧化物歧化酶(sod)存在时，由于它能催化o
2-与h
+
结合生成o2和h2o2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过计算即可求出供试品中sod的酶活性。
115.借助仪器多功能微孔检测仪测定在325nm波长处测定光吸收值，每隔30s读数一次，测定4min内每分钟光吸收值的变化。
116.以吸光值为纵坐标，时间为横坐标，作图；在上述吸光度对时间的关系图中，按下式计算：
[0117][0118]
式中：
△
a325为自氧化管的反应速率；
[0119]
△a′
325为样品管的反应速率；
[0120]
d为供试品的稀释倍数。
[0121]
vt为反应液的总体积，单位为ml；
[0122]
v为加入的待测供试品的体积，单位为ml；
[0123]
3、试验结果：
[0124]
试验结果如表1所示。
[0125]
表1具有高效抗蓝光功效的sod组合物的稳定性试验数据
[0126]
[0127][0128]
由表1可知，本发明实施例1～3制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物在40℃的高温条件下具有较高的稳定性，尤其是添加环糊精作为包裹剂的实施例4～5制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物，其稳定性更佳。而对比例2～5制得的的具有高效抗蓝光功效的sod组合物稳定性较差，说明本发明提供的具有高效抗蓝光功效的sod组合物配方中的各成分相互协同作用起提高的sod组合物的稳定性作用。
[0129]
试验例二、成纤维细胞蓝光损伤保护试验
[0130]
1、试验对象：
[0131]
实施例2、实施例4和对比例1制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物。
[0132]
2、试验方法：
[0133]
2.1、基于小鼠胚胎成纤维细胞的蓝光损伤模型建立
[0134]
将细胞以1.5
×
103个/孔的密度接种在96孔板上，培养24h后，用波长λ＝450nm的led-bl(蓝光)，以5、15、25、45、85j/cm2的辐照量照射，空白对照组用锡箔纸包住以避光。在用led-bl照射前，将96孔板中的培养基弃掉，加入pbs。照射后立即将重新加入完全培养基，置于培养箱中培养。24小时后，使用mtt进行细胞活力测定。
[0135]
2.2、sod组合物对蓝光损伤的预保护作用测试
[0136]
本次检测设置5个测试样，每个测试样下设置4个重复孔，同时，试验设置调零孔、模型孔、对照孔(含10％胎牛血清的dmem培养基)。本试验采用mtt法检测细胞活力，具体操作如下：
[0137]
2.2.1、种板：
[0138]
取对数生长期细胞用含有edta胰酶消化后，离心去上清液，调整细胞密度为1.5*104/ml后，以每孔100ul接种于96孔板。
[0139]
2.2.2设计配置不同浓度的受试物：分别将实施例2、实施例4和对比例1制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物样品配制成不同浓度梯度的试验样，具体浓度为：100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml和6.2ug/ml。
[0140]
2.2.3给药：
[0141]
待细胞完全贴壁(接种后24h)进行给药，每孔给药100ul。给药完成后放置在37℃，5％co2的培养箱中。
[0142]
2.2.4造模：
[0143]
细胞孵育24h，用波长λ＝450nm的led-bl(蓝光)以45j/cm2的辐照量照射给药组与模型组，空白对照组用锡箔纸包住以避光。在用led-bl照射前，将96孔板中的培养基弃掉，加入pbs。照射后立即将重新加入完全培养基，置于培养箱中培养。
[0144]
2.2.5细胞活性测试：
[0145]
细胞培养24h后，用pbs清洗两次96孔板，每孔加入100ul的0.5mg/ml的mtt-dmem基础培养基溶液，于37℃避光孵育3小时。然后每孔加入100ul的dmso，于摇床下摇晃15min，在酶标仪570nm处读取od值。
[0146]
2.2.6计算公式：
[0147]
细胞活力＝(给药孔od-调零od)/(对照孔od-调零od)
×
100％
[0148]
3、试验结果：
[0149]
3.1、基于小鼠胚胎成纤维细胞的蓝光损伤结果：细胞由低到高设定5、15、25、45、85j/cm2共5个蓝光辐照量，其蓝光损伤结果在45j/cm2出现损伤峰值。
[0150]
3.2、sod组合物对蓝光损伤的预保护作用试验数据如表2所示。
[0151]
表2sod组合物对蓝光损伤的预保护作用试验数据
[0152][0153][0154]
由表2可知，本发明制得的具有高效抗蓝光功效的sod组合物具有较好的抗蓝光和修复皮肤损伤的作用。
[0155]
上述实施例仅示例性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。