一种控油多肽柔性脂质体水凝胶及制备方法与应用

1.本发明涉及一种水凝胶及制备方法与应用，特别涉及一种控油多肽柔性脂质体水凝胶及制备方法与应用。


背景技术：

2.目前，对于皮脂分泌旺盛，可采用收敛剂使毛孔收缩，关闭皮脂腺的开口，从而暂时性地减少皮脂分泌。但皮肤内合成的皮脂并没有减少，而是聚集在毛孔内，轻者导致过后皮脂分泌量更大，重者则引发细菌感染，发生炎症。还可采用碱性洗涤剂来去除皮脂，然而使用后皮肤极度干燥反而刺激皮脂的分泌，油性更严重。除此以外，化学合成或天然矿物成分可以靠吸附的方式清除皮脂，采用此种方式控制油脂分泌，待皮肤表面的油脂被吸附后，反而会加速皮脂的分泌，造成适得其反的效果。
3.现阶段大多数控油产品及主要的制备方法是将具有控油效果的活性成分及其他组分进行混合，制备成为组合物，例如：一种含多糖保湿控油组合物，一种纯植物精华的控油防痤疮类化妆品，一种含有抗炎控油功能组合物的化妆品等。其中活性成分主要包括植物提取物、发酵产物、多糖、化学合成或天然矿物成分等。产品的剂型多为化妆水、乳液、润肤膏霜等形式。一般从抗菌和消炎、收敛毛孔、吸收皮脂等角度发挥作用。
4.据前期文献以及专利检索，没有产品针对细胞水平皮脂产生的分子机制进行研究，并选用具有针对性的活性成分进行产品的制备。除此之外，不同活性成分的理化性质不同，众所周知，一些水溶性的成分难以透过角质层，因此要达到将活性成分递送至深层皮肤的目的，制备出一种合适的载体是至关重要的。


技术实现要素：

5.本发明的主要目的是将针对细胞水平皮脂产生的控油多肽制备成新型制剂，从而达到促进透皮吸收、增强控油效果和提高控油多肽稳定性的目的；
6.本发明的另一个目的是使控油多肽类脂膜具有高度变形能力，提高其透皮渗透能力，并且经过处方优化，将控油多肽的包封率提高到90％以上；
7.本发明的再一个目的是通过水凝胶基质改善脂质体溶液在储存过程中容易出现聚集、沉降等稳定性问题；延长药物在皮肤表面的滞留时间达到缓释效果，提高药物在皮肤中的渗透量。
8.本发明是为了解决上述问题并达到上述目的而提供的一种控油多肽柔性脂质体水凝胶及制备方法与应用。
9.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶包括有控油多肽、卵磷脂、胆固醇、表面活性剂、凝胶基质和辅料，其中卵磷脂与胆固醇摩尔比为1-12：1；卵磷脂与表面活性剂摩尔比为1-12：1；卵磷脂与控油多肽摩尔比为100-400：1；控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的3-6％，凝胶基质占总质量的0.6-20％，辅料占总质量的4.1％-8.3％，其余为超纯水。
10.卵磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化大豆卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为脱氧胆酸钠、吐温-80和吐温-20中的一种或几种。
11.控油多肽为吉林省蓝浦浩业科技有限公司生产的活性成分，控油多肽为专利产品。
12.凝胶基质为卡波姆、海藻酸钠和泊洛沙姆中的任意一种，辅料中包括有保湿剂和防腐剂，保湿剂和防腐剂占前述水凝胶总质量数分别为4％-7％和0.1％-1％，保湿剂为透明质酸、甘油和神经酰胺中的一种或几种组合；防腐剂为羟苯甲酯、羟苯乙酯和尼泊金甲酯中的一种或几种组合,当凝胶基质选用卡波姆和海藻酸钠时,辅料中还需要加入中和剂，中和剂占前述水凝胶总质量数为0-0.3％，中和剂为三乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺和氯化钙中的一种或几种组合。
13.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶的制备方法，其方法包括如下步骤：
14.步骤一、将卵磷脂、表面活性剂和胆固醇溶于甲醇中置于旋转蒸发仪上30-50℃旋转蒸发1-3小时制成透明膜状的脂膜，其中卵磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为阴离子表面活性剂脱氧胆酸钠、非离子表面活性剂吐温-80和非离子表面活性剂吐温-20中的一种或几种，卵磷脂与胆固醇摩尔比为1-12：1，卵磷脂与表面活性剂摩尔比为1-12：1；
15.步骤二、加入控油多肽水溶液，卵磷脂与控油多肽水溶液剂摩尔比为100-400：1，置于摇床上30-50℃水化1-4小时，然后在100w下超声处理10-20分钟，处理后的柔性脂质体通过450nm孔径的膜挤压数次，通过220nm孔径的膜挤压数次；
16.步骤三、将占总质量数0.6-20％的凝胶基质在超纯水中搅拌分散，凝胶基质为卡波姆、海藻酸钠和泊洛沙姆中的任意一种，然后依次加入占总质量数4％-7％的保湿剂、占总质量数0.1％-1％的防腐剂和步骤二制得的占总质量数30-60％的脂质体溶液,其中脂质体溶液中控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的3-6％，其余为超纯水，搅拌20-30分钟，当凝胶基质选用卡波姆和海藻酸钠时,最后辅料中还需要加入中和剂，中和剂占前述水凝胶总质量数为0-0.3％，搅拌至均一。
17.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶在制备具有增强水溶性多肽控油功效的护肤品中的应用。
18.本发明的有益效果：
19.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶及制备方法与应用将普通脂质体进行优化，引入表面活性剂增加了脂质体膜的柔性，脂质体组分与人体皮肤具有较好的生物相容性，提高了药物的经皮透过率。对比阴离子表面活性剂脱氧胆酸钠、非离子表面活性剂吐温-80的包封率，结果显示：得到的柔性脂质体的zeta电位为-18.52
±
0.53mv，粒径为80-120nm，控油肽的包封率为92.46
±
1.21％。带有正单荷的控油肽和带有负电荷的脱氧胆酸钠通过静电吸引的作用，包封率达到90％以上。表面活性剂增加了脂质体膜的流动性，减小脂质体的粒径，增加透皮吸收效果；胆固醇能够提高脂质体膜的刚性，从而提高脂质体的稳定性。
20.本发明提供的水凝胶对组分的比例进行优化，使其质地均一，且脂质体在凝胶中均匀分散。水凝胶能够防止脂质体从皮肤部位快速清除，并且能够保持脂质体膜的完整性。此外，在水凝胶中掺入脂质体将赋予要局部使用的脂质体足够的粘度，改善脂质体溶液在
储存过程中容易出现聚集、沉降等稳定性问题，延长药物在皮肤表面的滞留时间从而提高药物在皮肤中的渗透量，在皮肤渗透与滞留实验中与控油肽水溶液相比显示出良好的渗透与滞留的能力。在金黄地鼠高皮脂模型以及人体试验中都验证了柔性脂质体水凝胶制剂的控油效果。人体皮肤斑贴实验显示了控油肽柔性脂质体水凝胶制剂的安全性。本发明提供的制剂具有重要的理论价值和良好的应用前景。
附图说明
21.图1为本发明所述的对比例srei-cl、对比例srei-ndl和实施例srei-adl的外观示意图。
22.图2为本发明所述的实施例srei-adl的粒径分布示意图。
23.图3为本发明所述的实施例srei-adl的透射电镜形态示意图。
24.图4为本发明所述的实施例srei-adl、srei-adl-car和对比例free srei、srei-adl-sa、srei-adl-plu的皮肤累计渗透曲线示意图。
25.图5为本发明所述的实施例srei-adl-car的扫描电镜形态示意图。
26.图6为本发明所述的实施例srei-adl,srei-adl-car的外观示意图。
27.图7为本发明所述的实施例srei-adl、srei-adl-car对比例free srei的体外释放曲线示意图。
28.图8为本发明所述的实施例srei-adl、srei-adl-car和对比例free srei、在4℃和室温条件下12个月的药物含量变化曲线示意图。
29.图9为本发明所述的空白组、实施例srei-adl、srei-adl-car和对比例free srei、adl-car的金黄地鼠背部皮脂腺生长曲线示意图。
30.图10为本发明所述的a为空白组、b为对比例adl-car、c为对比例free srei、d为实施例srei-adl、e为实施例srei-adl-car的金黄地鼠背部皮脂腺石蜡切片he染色示意图。
具体实施方式
31.请参阅图1至图10所示：
32.实施例一：
33.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶包括有控油多肽、卵磷脂、胆固醇、表面活性剂、凝胶基质和辅料，其中卵磷脂与胆固醇摩尔比为1：1；卵磷脂与表面活性剂摩尔比为6：1；卵磷脂与控油多肽摩尔比为100：1；控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的3％，凝胶基质占总质量的20％，辅料占总质量的8％，其余为超纯水。
34.卵磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化大豆卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为脱氧胆酸钠、吐温-80和吐温-20中的一种或几种。
35.控油多肽为吉林省蓝浦浩业科技有限公司生产的活性成分，控油多肽为专利产品。
36.凝胶基质为泊洛沙姆，辅料包括保湿剂和防腐剂，保湿剂和防腐剂占前述水凝胶总质量数分别为7％和1％，保湿剂为透明质酸、甘油、神经酰胺中的一种或几种；防腐剂为羟苯甲酯、羟苯乙酯、尼泊金甲酯中的一种或几种。
37.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶的制备方法，其方法包括如下步骤：
38.步骤一、将卵磷脂、表面活性剂和胆固醇溶于甲醇中置于旋转蒸发仪上30-50℃旋转蒸发1-3小时制成透明膜状的脂膜，其中卵磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为阴离子表面活性剂脱氧胆酸钠、非离子表面活性剂吐温-80和非离子表面活性剂吐温-20中的一种或几种，卵磷脂与胆固醇摩尔比为1：1，卵磷脂与表面活性剂摩尔比为6：1；
39.步骤二、加入控油多肽水溶液，卵磷脂与控油多肽水溶液剂摩尔比为100：1，置于摇床上30-50℃水化1-4小时，然后在100w下超声处理10-20分钟，处理后的柔性脂质体通过450nm孔径的膜挤压数次，通过220nm孔径的膜挤压数次；
40.步骤三、将占总质量数20％的凝胶基质在超纯水中搅拌分散，凝胶基质为泊洛沙姆，然后依次加入占总质量数7％的保湿剂、占总质量数1％的防腐剂和步骤二制得的占总质量数30％的脂质体溶液,其中脂质体溶液中控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的3％，其余为超纯水，搅拌20-30分钟至均一。
41.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶在制备具有增强水溶性多肽控油功效的护肤品中的应用。
42.实施例二：
43.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶包括有控油多肽、卵磷脂、胆固醇、表面活性剂、凝胶基质和辅料，其中卵磷脂与胆固醇摩尔比为6：1；卵磷脂与表面活性剂摩尔比为12：1；卵磷脂与控油多肽摩尔比为300：1；控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的6％，凝胶基质占总质量的0.6％，辅料占总质量的5.1％，其余为超纯水。
44.卵磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化大豆卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为脱氧胆酸钠、吐温-80和吐温-20中的一种或几种。
45.控油多肽为吉林省蓝浦浩业科技有限公司生产的活性成分，控油多肽为专利产品。
46.凝胶基质为卡波姆、海藻酸钠中的任意一种，辅料包括保湿剂、中和剂和防腐剂，保湿剂、中和剂和防腐剂占前述水凝胶总质量数分别为4％、0.1％和1％，保湿剂为透明质酸、甘油、神经酰胺中的一种或几种；中和剂为三乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺和氯化钙中的一种或几种；防腐剂为羟苯甲酯、羟苯乙酯、尼泊金甲酯中的一种或几种。
47.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶的制备方法，其方法包括如下步骤：
48.步骤一、将卵磷脂、表面活性剂和胆固醇溶于甲醇中置于旋转蒸发仪上30-50℃旋转蒸发1-3小时制成透明膜状的脂膜，其中卵磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为阴离子表面活性剂脱氧胆酸钠、非离子表面活性剂吐温-80和非离子表面活性剂吐温-20中的一种或几种，卵磷脂与胆固醇摩尔比为6：1，卵磷脂与表面活性剂摩尔比为12：1；
49.步骤二、加入控油多肽水溶液，卵磷脂与控油多肽水溶液剂摩尔比为300：1，置于摇床上30-50℃水化1-4小时，然后在100w下超声处理10-20分钟，处理后的柔性脂质体通过450nm孔径的膜挤压数次，通过220nm孔径的膜挤压数次；
50.步骤三、将占总质量数0.6％的凝胶基质在超纯水中搅拌分散，凝胶基质为卡波姆和海藻酸钠中的任意一种，然后依次加入占总质量数4％的保湿剂、占总质量数1％的防腐剂和步骤二制得的占总质量数60％的脂质体溶液，其中脂质体溶液中控油多肽、卵磷脂、胆
固醇和表面活性剂之和占总质量的6％，其余为水溶液，搅拌20-30分钟，最后加入占总质量数的中和剂0.1％，搅拌至均一。
51.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶在制备具有增强水溶性多肽控油功效的护肤品中的应用。
52.实施例三：
53.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶包括有控油多肽、卵磷脂、胆固醇、表面活性剂、凝胶基质和辅料，其中卵磷脂与胆固醇摩尔比为12：1；卵磷脂与表面活性剂摩尔比为1：1；卵磷脂与控油多肽摩尔比为400：1；控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的4.5％，凝胶基质占总质量的11％，辅料占总质量的6.0％％，其余为超纯水。
54.卵磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和氢化大豆卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为脱氧胆酸钠、吐温-80和吐温-20中的一种或几种。
55.控油多肽为吉林省蓝浦浩业科技有限公司生产的活性成分，控油多肽为专利产品。
56.凝胶基质为泊洛沙姆，辅料中包括有保湿剂和防腐剂，保湿剂和防腐剂占前述水凝胶总质量数分别为5.5％和0.5％，保湿剂为透明质酸、甘油、神经酰胺中的一种或几种组合；防腐剂为羟苯甲酯、羟苯乙酯、尼泊金甲酯中的一种或几种组合。
57.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶的制备方法，其方法包括如下步骤：
58.步骤一、将卵磷脂、表面活性剂和胆固醇溶于甲醇中置于旋转蒸发仪上30-50℃旋转蒸发1-3小时制成透明膜状的脂膜，其中卵磷脂为大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的一种或几种，表面活性剂为阴离子表面活性剂脱氧胆酸钠、非离子表面活性剂吐温-80和非离子表面活性剂吐温-20中的一种或几种，卵磷脂与胆固醇摩尔比为12：1，卵磷脂与表面活性剂摩尔比为1：1；
59.步骤二、加入控油多肽水溶液，卵磷脂与控油多肽水溶液剂摩尔比为400：1，置于摇床上30-50℃水化1-4小时，然后在100w下超声处理10-20分钟，处理后的柔性脂质体通过450nm孔径的膜挤压数次，通过220nm孔径的膜挤压数次；
60.步骤三、将占总质量数的11％凝胶基质在超纯水中搅拌分散，凝胶基质为泊洛沙姆，然后依次加入占总质量数5.5％的保湿剂、占总质量数0.5％的防腐剂和步骤二制得的占总质量数45％的脂质体溶液，其中脂质体中控油多肽、卵磷脂、胆固醇和表面活性剂之和占总质量的4.5％，其余为超纯水，搅拌20-30分钟至均一。
61.本发明提供的控油多肽柔性脂质体水凝胶在制备具有增强水溶性多肽控油功效的护肤品中的应用。
62.本发明具体验证的实施例和对比例如下所述：
63.1、实施例和对比例的设定，具体如下：
64.表1本发明实施例和对比例的缩写
[0065][0066]
2、脂质体包封率的测定以及外观观察
[0067]
对脂质体进行破乳，采用hplc法测定包封率(ee％)和载药量(dl％)，结果如表2所示，各脂质体外观如图1所示。
[0068]
表2本发明对比例1-2和实施例1的脂质体的包封率(n＝3)
[0069][0070]
3、柔性脂质体粒径、pdi和zeta电位的测定
[0071]
取稀释后的脂质体溶液，在25℃下使用马尔文粒径分析仪测粒径、电位及pdi值(polydispersity index，多分散系数)，结果如表3所示，最优柔性脂质体处方srei-adl的粒径分布如图2所示。
[0072]
表3本发明对比例1-2和实施例1的脂质体的粒径和电位(n＝3)
[0073][0074]
4、柔性脂质体外观以及电镜形态观察
[0075]
根据上述结果选出最优柔性脂质体处方为srei-adl，采用jem-2100f型透射电子显微观察柔性脂质体样品，结果如图3所示。
[0076]
5、皮肤渗透性研究
[0077]
取健康的sd大鼠，取大鼠腹部皮肤用于体外透皮渗透试验。先用剪刀机械除去腹部皮肤毛发，再用适量的脱毛膏将剩余毛发脱去，除毛过程需要仔细，保持皮肤的完整性不受破坏。然后将大鼠处死后，用手术剪分离腹部皮肤，小心地除去皮下脂肪和粘连组织，用生理盐水洗净。制备各制剂，按透皮试验扩散仪的使用说明进行待试样品的透皮实验，分别于试验的0h、1h、2h、4h、8h、12h收获接收池里的样品。进行hplc检测：紫外检测波长：220nm；流动相：50％a液：99.9％h2o+0.1％tfa；50％b液：60％acn+40％h20。结果如表4以及图4所示。
[0078]
表4各控油肽制剂累计透过量
[0079][0080]
6、柔性脂质体水凝胶形态观察
[0081]
根据上述结果选取最优的柔性脂质体水凝胶制剂为srei-adl-car，柔性脂质体srei-adl和制备成的凝胶剂srei-adl-car的照片如图5所示，将srei-adl-car冷冻干燥48h。在使用直流溅射技术观察之前，用双面胶带将样品安装在金属短截线上，并在氩气气氛下用金溅射涂覆。用钨丝扫描电子显微镜(*jsm-it500a*)拍摄其形态。结果如图6所示。
[0082]
7、稳定性考察
[0083]
取实施例srei-adl、srei-adl-car以及对比例free srei，分别放置于4℃和室温，在不同时间点(0个月、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月)各取出3份，测定制剂内部srei的浓度，记为cn(n＝0、1、2、3、6、9、12)，绘制时间药物含量百分率曲线如图7所示。
[0084]
8、体外释放率考察
[0085]
取实施例srei-adl、srei-adl-car以及对比例free srei，置于透析袋内中透析，透析温度为36℃，分别于0、1、2、4、8、12、24、48h取出适量，测定控油肽浓度，记为cn(n为不同时间点)，以时间为横坐标，释放率为纵坐标，绘制释放率曲线。释放率的计算方法为：释放率＝(1-cn/c0)
×
100％，结果如表5和图8所示。
[0086]
表5各制剂中控油肽的体外释放百分率
[0087][0088]
9、动物控油实验
[0089]
制备实施例srei-adl和srei-adl-car，以及对比例free srei和adl-car，空白组给予生理盐水。50只金黄地鼠随机分成5组，每组10只。分别在皮脂腺斑涂抹上述溶液，连续涂抹21天。用游标卡尺每日测量背部皮脂腺斑的最大横径(dt)和最大纵径(dl)，计算金黄地鼠皮脂腺大小的增长率如图9所示，实验结束后取皮脂腺组织制备石蜡切片，he染色观察背部皮脂腺的显微结构，如图10所示。
[0090]
10、斑贴试验
[0091]
制备实施例srei-adl和srei-adl-car的控油肽制剂。选取符合受试者志愿入选标准24人(各试验样品使用同一批受试者)。采用封闭式试验，取0.02g受试物置于斑贴器内，用低致敏胶带贴敷于受试对象的手臂曲侧，试验区域至少为5
×
5cm，贴敷时让受试者上伸直手臂，从下方往上贴，用手掌轻轻按压胶带排出空气，使之贴紧皮肤，持续24小时，空白对照组为不使用试验样品。观察结果：分别在去除斑贴器后48小时后根据下述判读标准进行判读，统计试验结果，试验结果如表6所示。
[0092]
表6斑贴试验结果
[0093][0094]
判读标准：(一)阴性反应；(+﹣)可疑反应：仅有轻度红斑；(+)弱阳性：红斑、浸润、可有少量丘疹；(++)强阳性：红斑、浸润、丘疹、水疱；(+++)极强阳性：红斑、浸润、丘疹，出现水疱、大疱。
[0095]
11、皮肤油脂清除实验
[0096]
制备实施例srei-adl和srei-adl-car，以及对比例free srei和对比例adl-car的各制剂。将48名油性皮肤志愿者，特点为毛孔明显，皮脂分泌多，在面部和t区可见油光。随机分为4组，每组12人。实验中将面部左右侧作为试验区域。规范受试者或护理者每天早晚坚持使用，半张脸用测试样品，半张脸只使用清水擦拭，连续使用14天。在实验开始的不同时间段进行随访，分别测试使用产品及使用清水的皮肤控油变化，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。结果如表7所示：
[0097]
表7油脂清除率测试结果
[0098][0099]
测试标准：1)皮肤油脂含量的测定：以受试者的面颊、额头的固定部位作为测试区域，在25℃的环境中采用cbs皮肤分析系统测定各受试者使用前的皮肤油脂含量及使用样品后第14天皮肤的油脂含量，按下述公式计算油脂清除率，作其算术平均值。
[0100]
皮肤油脂清除率＝(使用前皮肤油脂含量-使用后皮肤油脂含量)/使用前皮肤油脂含量
×
100％。