专利名称：八宝素在制备抗病毒新药中的应用的制作方法
本申请是《一种抗病毒化合物八宝素的制法》发明专利申请的分案申请，原发明名称为《一种新的抗病毒化合物八宝素的制法及其制剂》，原申请日为960726，申请号96115901.4。本发明涉及医药领域，是关于一种具有抗病毒性活性的化合物，更具体地说是一种用于抗乙型肝炎病毒和双向免疫调节的活性化合物。
乙型肝炎是危害人类健康的主要传染病之一，国内约有10％的人口携带乙肝表面抗原。目前治疗乙肝的药物及其乙肝疫苗的研究虽有进展，但至今仍无良好的特效药。景天科植物在民间曾作为清热解毒、散瘀消肿及跌打损伤中草药使用，但对其内在的药物活性均未深入研究。
本发明的目的在于提供一种新的具有抗乙肝病毒活性的化合物，以及从景天科植物提取物合成这种化合物的方法。
本发明研制的抗乙肝病毒活性化合物是长药八宝(H.spectabile)或景天科植物八宝(Hylotelephium erythrosticlum)或瓦松(Orostachys fimbriatus)等植物的全草中提取、分离纯化而得到景酮糖酐，再以该景酮糖酐化合物与丙酮一步缩合获得具有活性的化合物，这里命名为八宝素(Hylotelephin)。合成这种活性化合物主要包括以下操作步骤1、粉碎干燥景天科植物全草，先用沸水浸取，一般浸取两次，合并浸取液；2、浸取液先经薄膜浓缩，尔后再以减压浓缩至浓缩后体积为原浸取液体积的五分之一左右。加等量的乙醇定容，使醇度约为50％左右，放置；3、取上清液，先通过强酸型阳离子交换脂柱，再通过强碱型阴离子交换树脂柱处理；4、流出液蒸除乙醇，并回收乙醇，得到浸膏；5、浸膏以硅藻土和酸性氧化铝拌料后，上氧化铝柱，以乙醇洗脱，得到景酮糖酐；6、取景酮糖酐，在适量硫酸存在下，加丙酮一步缩合得到八宝素；按上述方法得到的这种抗病毒活性化合物八宝素。用化学、红外、核磁共振和质谱等现代波谱方法，对该化合物的结构进行了鉴定，鉴定结果如下八宝素为白色针状结晶，m.p224-225℃，熔融时升华，αD28＝-125.2°(水溶液)，分子式C10H16O6，M+232。元素分析计算值，C51.72％，H6.94％；实测值C51.32％，H6.74％，Molish反应强阳性，苔黑酚反应阳性，Liebermann-Burchard反应阳性，茴香醛-硫酸反应阳性。
IR(Vcm)3410 3280(宽)1380 1365 982 955 932 850 820 810785 740 720H-NMRL(CD3)2SO，加三氟醋酸δ1.31(S，3H，-CH3)，1.43(S，3H，-CH3)，3.43(d，1H，J＝12，C1-H)，3.65(d，1H，C1-H1)，3.61(d，1H，J3，4＝5，C3-H)，3.73(d，1H，J6.7＝5.4，C7-H6x)，3.85(d，1H，J6，76a＝1.5，C7-H6a)，4.01(q，1H，J4，6＝6，C4-H)，4.21(q，1H，J5，6＝1.2，C6-H)4.78(m，1H，C6-H)MS m/e(％)电子轰击232(M+0.17)，217(100)，156(11.2)，101(27.0)，85(6.99)，70(46.3)，59(48.6)，43(35.6)；场解吸217(100，m-CH3)，232(10.7，M+)，233(16，M+1)，234(29，M+2)13C-NMRδ(OFR)61.4(t，c-1)，110.9(s，c-2)，73.30(d，c-3)，76.79(d，c-4)，74.85(d，c-5)，79.47(d，c-6)，67.78(t，c-7)，108.05(s，c-8)，26.55)q，c-9)，28.17(q，c-10)。
经化学反应和波谱数据的归属，并与已知有关化合物比较，该活性化合物的结构式定为
化学名为异丙叉景酮糖酐(Isopropylidene Sedoheptulosan)，该化合物可作为制备抗鸭乙型肝炎病毒及双向免疫新药的制剂。
为证明本发明对鸭乙型肝炎病毒的治疗效果，以目前国内外共认的动物实验模型在鸭乙型肝炎病毒感染鸭体内进行治疗效果试验。实验采用一日龄北京鸭静脉注射鸭乙型肝炎病毒，七日后开始给鸭腹腔注射本发明注射液，一天两次，给药10天(Bidx10)或14天(Bidx14)，观察药物对鸭的毒性和鸭血清鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影响。实验结果表明，200，100和50mg/kg剂量组，一天二次，10天或14天，均无毒性，200mg/kg和100mg/kg两个剂量组均能降低DHBA感染鸭血清DHBR-DNA水平，与病毒对照组作成组统计分析比较，给药第七天(T7)或第14天(T14)DHBV-DNA有显著性降低，50mg/kg剂量组，实验中未出现显著性差异，表明本发明注射液对鸭血清DHBV-DNA有抑制作用，同时，实验结果还表明，本发明注射液，在本实验条件下，其200mg/kg和100mg/kg组为治疗鸭乙型肝炎病毒的有效剂量。
进一步以昆明小鼠观察了本发明针剂对机体的免疫调节活性。本发明的体内试验，对小鼠腹腔巨噬细胞溶酶体酶-酸性磷酸酶(ACP)活性有明显的增强作用(P＜0.01)。对细胞膜酶-碱性磷酸酶(AKP)的活性，有明显的免疫调节作用。对肿瘤环死因子(TNF)活性，亦有明显的增强作用(P＜0.01)，体外实验表明，本发明与CONA及LPS合用，可加强二者的丝、裂原作用，促进淋巴细胞转化，两者合用有协同作用(P值分别为＜0.01及＜0.05)，因此，本发明注射液是生物反应调节剂(Biological Response Modifer，BRM)中的免疫调节剂和/或免疫增强剂，具有双向免疫功能。
下面再用一个实际例子对本发明自景天科植物中提取景酮糖酐，进一步合成八宝素的方法作进一步描述。
取八宝(或瓦松、长药八宝)(50kg，粉碎成粗粉，加水煮沸1小时，放出浸取液后，再加水煮沸1小时，合并两次浸取液，先经薄膜浓缩，再经减压浓缩至液体体积为原浸取液体积的五分之一左右，加入等量的95％乙醇定容，使醇浓度约为50％左右，放置，取上清液先通过强酸性H+型阳离子交换树脂柱交换，流出液再通过强碱性OH-型阴离子交换树脂柱交换。流出液蒸出乙醇，并回收乙醇再用，制得浸膏。所得浸膏以硅藻土和酸性氧化铝拌料后，上氧化铝柱，以乙醇洗脱，可得最酮糖酐约50克。
取以上景酮糖酐4克，加丙酮80毫升，加适量硫酸，电磁搅拌24小时后，放置，即有八宝素针状结晶析出，回收丙酮，得产品4.1克，收率大于85％。
经质量检验合格后，在无菌条件下，分装于10ml容量的青霉素安瓶内，每支100mg，在105℃加热消毒20分钟，即得八宝素针剂。
使用时，在临用前加灭菌注射用水5毫升左右，使溶解后，静脉滴注，一日200-300mg。
本发明从景天科植物八宝或长药八宝，瓦松等植物的全草中提取景酮糖酐，再合成八宝素，经实验证实这种 化合物对乙型肝炎病毒有显著的抗病毒活性及双向免疫功能。可作为治疗乙型肝炎等疾病的双向免疫调节剂。
权利要求
1.八宝素在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
2.八宝素作为制备生物反应调节剂药物中的应用。
全文摘要
一种从景天科植物八宝或瓦松或长药八宝的全草中提取、分离得到景酮糖酐,再与丙酮一步缩合得到一种具有抗病毒活性的化合物。经结构鉴定该化合物为异丙叉景酮糖酐,即八宝素,结构式为:该化合物可作为制备抗乙型肝炎病毒及双向免疫等抗病毒新药中应用。
文档编号A61K31/357GK1277020SQ99112550
公开日2000年12月20日 申请日期1999年11月17日 优先权日1999年11月17日
发明者左春旭, 仲英, 李风琴, 丁杏苞 申请人:山东省医学科学院药物研究所