一种长效促排卵注射液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及动物生殖领域，尤其涉及一种长效促排卵注射液。
【背景技术】
[0002] 目前，畜牧业已逐步成为我国相对独立的产业和农村经济的支柱产业。在畜牧业 发展中乳业和肉业发展较为迅速，肉和奶也正在成为我国城市居民每天消费的生活必需 品。但是，目前乳业和肉业的发展规模和水平远不能满足人民生活水平以及现代农业发展 的需要。借助胚胎生物技术能充分挖掘优良母畜的繁殖潜力，快速实现短期快速扩繁良种 群。其中，超数排卵是发挥这种扩繁作用的重要技术环节。
[0003] 超排激素是影响超排效果的主要因素之一。通常使用的超数排卵药物有促卵泡素 (FSH)、孕马血清促性腺激素（PMSG)。应用FSH多次超排（FSH作用效果稳定）处理后卵巢 机能恢复较快，排卵数较高。但FSH半衰期短，需分四天注射8次，比较麻烦而且费用高，在 注射剂量和时间上易引起误差。用PMSG进行超数排卵，只需肌肉注射一次，对供体刺激小， 费用低廉，使用方便。在发情期第13d注射PMSG，能得到一定数量的卵母细胞，但PMSG半衰 期较长，常使未排卵的大卵泡残留于卵巢而分泌雌激素，从而影响回收胚胎的质量，延长卵 巢恢复和重复超排间隔。用FSH在供体获得可用卵数和超排效果稳定性上，显著高于PMSG 超排药品。并且FSH超排供体不会有卵巢囊肿和持续发情，所以使用FSH优于PMSG，但由 于FSH的半衰期短，所以要多次注射，处理程序繁琐。同时激素质量与可用胚胎数有密切关 系，不同来源的FSH制剂超数排卵的效果也大不相同。
[0004]FSH制剂也被广泛用于母畜繁殖障碍的治疗，是治疗卵巢静止、卵巢囊肿的繁殖疾 病首选的药品，对提高养殖企业母畜的繁殖力有重要作用。
[0005] 但是国内兽用的FSH制剂存在纯度不高，生物活性低，半衰期较短的问题。由于在 体内代谢和消除迅速，在实际中需要多次连续注射，才能维持FSH血药浓度在卵巢刺激的 阈值水平以上。在生产实践中大大增加了工作时间和成本，反复连续注射也会使动物产生 应激反应。国际上也有人尝试使用重组FSH制剂，实验结果表明使用重组FSH制剂并没有 解决天然FSH制剂在动物体内半衰期短和不稳定性的问题。继重组FSH制剂后，2010年美 国推出的第一个长效FSH(即FSH-CTP)，该产品在保持天然FSH制剂活性的情况下，半衰期 得到一定程度的延长，并且更加稳定。对于长效FSH，国内外也做了大量的实验研究，均证明 长效FSH半衰期和生物活性明显增强，在实际生产实践中有良好的应用效果，但由于其成 本较高未能在动物的超数排卵上得到应用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种长效促排卵注射液，该长效促排卵注射液包含卵泡刺 激素融合蛋白及医学上可接受的载体；其中卵泡刺激素融合蛋白的含量为10-600Ug/mL。
[0007] 该长效促排卵注射液的主要活性成分为卵泡刺激素融合蛋白，其含量为 10-600iig/mL，优选为 50-400iig/mL，更优选为 200iig/mL。
[0008] 卵泡刺激素融合蛋白（FSH融合蛋白）应用的是专利申请（CN103509121A)中公 开的FSH融合蛋白，包括同二聚体融合蛋白和异二聚体融合蛋白。
[0009] 本发明的一种长效促排卵注射液，其包含卵泡刺激素融合蛋白、甘露醇、L-甲硫氨 酸、吐温80和L-组氨酸；
[0010] 其中甘露醇含量为10-70mg/mL，优选为25-60mg/mL;L-甲硫氨酸含量为 0? 02-2mg/mL，优选为 0? 1-lmg/mL;吐温 80 含量为 0? 01-lmg/mL，优选为 0? 05-0. 5mg/mL; L_组氨酸含量为2-4mg/mL，优选为2. 5-3. 5mg/mL;
[0011] 所述的长效促排卵注射液，其中卵泡刺激素融合蛋白的含量为200iig/mL，甘露醇 含量为10-70mg/mL;L-甲硫氨酸含量为0? 02-2mg/mL;吐温80含量为0? 01-lmg/mL;L-组 氨酸含量为2-4mg/mL;余量为水。
[0012] 本发明所述的长效促排卵注射液，其PH值为5. 5-8. 0,优选为6. 5-7. 0。
[0013] 本发明的长效促排卵注射液的制备方法为：将卵泡刺激素融合蛋白从-80°C冰箱 取出，在2?8°C冷房水浴化冻24小时，加入甘露醇、L-甲硫氨酸、吐温80、L-组氨酸，然 后用注射用水稀释，再用柠檬酸调节溶液的PH值为5. 5-8. 0 (优选为6. 5-7. 0)，磁力搅拌 10-15分钟，充分混匀，用PES材质0. 22ym过滤器过滤，得到长效促排卵注射液。
[0014] 本发明的长效促排卵注射液可以用于动物的生殖领域，包括促排卵，卵巢静止、持 久黄体、卵泡发育停滞等的预防和治疗。
[0015] 本发明所述的长效促排卵注射液进行5次反复冻融的稳定性研究，经SE-HPLC(分 子排阻色谱法）纯度和生物活性的检测，表明SE-HPLC纯度和生物活性均符合标准。本发明 所述的长效促排卵注射液对奶牛有明显的超排作用，获得的可用胚胎数均超过了 6. 5枚。 [0016] 本发明所述的长效促排卵注射液是通过FSH融合蛋白特殊的分子设计，在基本保 留FSH的生物学活性的基础上，显著延长其在动物体内的半衰期，避免了由于药物反复注 射引起的副作用，实现真正的"长效"，能减少畜牧业生产中的工作量，降低生产成本，同时 也能减轻动物的应激反应，为日后在动物繁殖领域的发展奠定良好的基础。
[0017] 本发明研发的长效促排卵注射液不仅可以填补国内外兽用长效FSH市场的空白， 对我国动物繁殖技术的发展，尤其是对推动家畜胚胎移植技术的发展及产业化进程有重要 意义。
【具体实施方式】
[0018] 通过如下实施例来对本发明做进一步说明，其中实施例1-5为长效促排卵注射液 的实施方案。
[0019] 实施例1-9
[0020] 具体制备方法为：将卵泡刺激素融合蛋白异二聚体从_80°C冰箱取出，在2?8°C 冷房水浴化冻24小时，加入甘露醇、L-甲硫氨酸、吐温80、L_组氨酸，然后用注射用水稀释 至1L，再用柠檬酸调节溶液的PH值为5. 5-8. 0,磁力搅拌10-15分钟，充分混匀，用PES材 质0. 22ym过滤器过滤，最后分装成2000瓶。
[0021] 具体的各组分的含量见表1。
[0022] 表1实施例1-5的注射液组分及含量
[0023]
【主权项】
1. 一种长效促排卵注射液，其特征在于该长效促排卵注射液包含卵泡刺激素融合蛋白 及医学上可接受的载体组成；其中卵泡刺激素融合蛋白的含量为10-600 y g/mL。
2. 根据权利要求1所述的长效促排卵注射液，其特征在于其中卵泡刺激素融合蛋白的 含量为 50-400 ii g/mL。
3. 根据权利要求1所述的长效促排卵注射液，其特征在于其中卵泡刺激素融合蛋白的 含量为 200ii g/mL。
4. 根据权利要求1-3任一项所述的长效促排卵注射液，其特征在于该长效促排卵注射 液包含卵泡刺激素融合蛋白、甘露醇、L-甲硫氨酸、吐温80和L-组氨酸。
5. 根据权利要求4所述的长效促排卵注射液，其特征在于其中甘露醇含量为10-70mg/ mL;L-甲硫氨酸含量为0.02-2mg/mL;吐温80含量为0.01-lmg/mL;L-组氨酸含量为 2_4mg/mL〇
6. 根据权利要求5所述的长效促排卵注射液，其特征在于其中甘露醇含量为25-60mg/ mL;L-甲硫氨酸含量为0. 1-lmg/mL;吐温80含量为0.05-0. 5mg/mL;L-组氨酸含量为 2. 5-3. 5mg/mL〇
7. 根据权利要求4所述的长效促排卵注射液，其特征在于其中卵泡刺激素融合蛋白的 含量为200 ii g/mL，甘露醇含量为10-70mg/mL ;L-甲硫氨酸含量为0. 02-2mg/mL ;吐温80含 量为0. 01-lmg/mL ;L-组氨酸含量为2-4mg/mL ;余量为水。
8. 根据权利要求7所述的长效促排卵注射液，其特征在于其PH值为5. 5-8. 0。
9. 根据权利要求8所述的长效促排卵注射液，其特征在于其PH值为6. 5-7. 0。
10. 权利要求1-9任一项所述长效促排卵注射液在动物生殖领域的应用。
11. 根据权利要求10所述的应用，其特征在于该长效促排卵注射液用于促排卵，卵巢 静止、持久黄体、卵泡发育停滞的预防和治疗。
【专利摘要】本发明公开了一种长效促排卵注射液，该长效促排卵注射液包含卵泡刺激素融合蛋白及医学上可接受的载体；其中卵泡刺激素融合蛋白的含量为10-600μg/mL。本发明的长效促排卵注射液具有明显的超排作用。
【IPC分类】A61K9-08, A61P15-08, A61K38-24
【公开号】CN104524553
【申请号】CN201410768635
【发明人】薛传校, 杨彦玲, 薛峰, 曹羽然, 李蔚
【申请人】薛传校, 杨彦玲, 薛峰
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月12日
【公告号】CN104524553B