一种寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种动物模型的造模方法，具体涉及一种寒凝血瘀型原发性痛经动物 模型的造模方法及其该模型在筛选抗寒凝血瘀型原发性痛经药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 痛经发病有情志所伤，起居不慎或六淫为害等不同病因，并与素体及经期、经期前 后特殊的生理环境有关。其发病机理主要是在这个期间受到致病因素的影响，导致冲任瘀 阻或寒凝经脉，使气血运行不畅，胞宫经血流通受碍，以致"不通则痛";或冲任、胞宫失于濡 养，不荣而痛。其病位在冲任、胞宫，变化在气血，表现为痛证。其所以随月经周期发作，是 与经期冲任气血变化有关。非行经期间，冲任气血平和，致病因素尚未能引起冲任、胞宫气 血瘀滞或不足，故不发生疼痛；而在经期或经期前后，由于血海由满盈而泻溢，气血变化急 骤，致病因素乘时而作，便可发生痛经。现代医学将痛经分为两大类：原发性痛经和继发性 痛经，原发性痛经是指无生殖系统明显病变的一般初潮开始就会发生。
[0003] 原发性痛经临床床上常见证候实证多于虚证，而实证中以寒凝血瘀证最为常见。
[0004] 近年有研究表明，痛经患者的免疫细胞和免疫反应发生改变，血中单核细胞， 内啡肽含量明显高于对照组。其他肽类及自主神经系统、内皮素、去甲肾上腺素增高也 可造成子宫肌肉及子宫血管收缩而导致痛经。
[0005] 近年来，代谢组学在中医药现代研究中应用越来越广泛。其核心思想在于运用现 代分析技术定量地测定生物体在不同状态下（生理病理状态、药物干预前后等）参与物质 传递、能量代谢和信息传导等代谢调控的小分子代谢物质即代谢物组的变化，并利用模式 识别将这种应答与体内生物学事件相关联，定位事件发生的靶器官，从而确定生物标记物， 表征或揭示生物体在特定时间、环境下整体的功能状态。生物体受刺激后而发生的病理变 化过程中，必然影响其生物代谢网络而产生相应的变化，生物功能状态的最终改变是通过 代谢表现出来的，代谢组学对证候模型的评价起到客观化作用，罗和古等以慢性束缚法建 立肝郁脾虚大鼠模型，采用NMR技术分析表明，正常组、模型组代谢产物具有明显差异，涉 及能量、脂肪及蛋白质代谢异常。
[0006] 目前，尚未有寒凝血瘀型原发性痛经的病证结合的动物模型的报道。临床上评价、 筛选抗寒凝血瘀型原发性痛经的药物受到一定的限制。
【发明内容】
[0007] 发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，从病证结合的角 度，采用冰浴和注射肾上腺素制造大鼠寒凝血瘀，以雌激素和缩宫素联合制备大鼠原发性 痛经。最后，通过测定内啡肽、内皮素、孕酮等相关生化指标，并联合代谢组学方法观察 造模前后大鼠血浆、尿液中内源性小分子代谢产物的变化来优选得到寒凝血瘀型原发性痛 经动物模型。
[0008] 技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
[0009] -种寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，它包括以下步骤：
[0010] (1)选择雌性大鼠连续放在冰水中冰浴5?7天，然后取出注射盐酸肾上腺素，间 隔3?4小时后，再注射一次盐酸肾上腺素，以制得寒凝血瘀型大鼠；
[0011] (2)然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，给以上步骤（1)的大 鼠连续5?7天皮下注射苯甲酸雌二醇，以同步化子宫，并使子宫对缩宫素的敏感性提高， 最后给大鼠腹腔注射缩宫素，得到寒凝血瘀型原发性痛经大鼠动物模型。
[0012] 0? 16ml/只/次，间隔四小时
[0013] 作为优选方案，以上所述的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，它包括 以下步骤：
[0014] (1)选择雌性大鼠连续放在冰水中冰浴7天，然后取出注射盐酸肾上腺素， 0. 16ml/只/次，间隔4小时后，再注射一次盐酸肾上腺素，0. 16ml/只/次，以制得寒凝血 瘀型大鼠；
[0015] (2)然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，给以上步骤（1)的大 鼠连续7天皮下注射苯甲酸雌二醇，lmL/kg/天，以同步化子宫，并使子宫对缩宫素的敏感 性提高，第8天给大鼠腹腔注射缩宫素，lmL/kg，得到寒凝血瘀型原发性痛经大鼠动物模 型。
[0016] 作为优选方案，以上所述的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，所述的 雌性大鼠为SD雌性大鼠。
[0017] 本发明制备得到的的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型在筛选抗痛经药物中的应 用。
[0018] 本发明制备得到的的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型在筛选抗寒凝血瘀型原发 性痛经药物中的应用。
[0019] 有益效果：本发明提供的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法和现有技术 相比具有以下优点：
[0020] 本发明根据中医药理论和妇科疾病的发病机制，通过大量实验筛选，以冰浴联合 注射肾上腺素制造大鼠寒凝血瘀；以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型。实验 结果显示，模型组大鼠血浆生化指标检测与对照组有显著性差异，且代谢组学分析结果表 明，模型大鼠尿液与血浆代谢轮廓在PLS-DA图上完全分开，偏离正常状态，故寒凝血瘀型 原发性痛经动物模型造模成功，该模型可以很好的用于筛选抗寒凝血瘀型原发性痛经的药 物，具有重要的用于价值。
【具体实施方式】
[0021] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限 制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0022] 实施例1
[0023] 1、寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，其它包括以下步骤：
[0024] (1)选择SD雌性大鼠连续放在冰水中冰浴5天，然后取出注射盐酸肾上腺素， 0. 16ml/只/次，间隔3小时后，再注射一次盐酸肾上腺素，0. 16ml/只/次，以制得寒凝血 瘀型大鼠；
[0025] (2)然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，给以上步骤（1)的大 鼠连续5天皮下注射苯甲酸雌二醇，lmL/kg/天，以同步化子宫，并使子宫对缩宫素的敏感 性提高，第6天给大鼠腹腔注射缩宫素，lmL/kg，得到寒凝血瘀型原发性痛经大鼠动物模 型。
[0026] 实施例2
[0027] 1、寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，其它包括以下步骤：
[0028] (1)选择SD雌性大鼠连续放在冰水中冰浴7天，然后取出注射盐酸肾上腺素， 0. 16ml/只/次，间隔4小时后，再注射一次盐酸肾上腺素，0. 16ml/只/次，以制得寒凝血 瘀型大鼠；
[0029] (2)然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，给以上步骤（1)的大 鼠连续7天皮下注射苯甲酸雌二醇，lmL/kg/天，以同步化子宫，并使子宫对缩宫素的敏感 性提高，第8天给大鼠腹腔注射缩宫素，lmL/kg，得到寒凝血瘀型原发性痛经大鼠动物模 型。
[0030] 实施例3
[0031] 1、实验分组：选择按以上实施例2方法造模得到的寒凝血瘀型原发性痛经大鼠16 只，体重220g左右，分为模型组8只和给药组（少腹逐瘀汤）8只，同时选择8只未造模的 大鼠作为正常对照组，体重220g左右。
[0032] 2、生化指标的测定
[0033] 前列腺素（prostaglandins,PGs)与原发性痛经密切相关，PGF2a可刺激子宫收缩， 使子宫张力升高，有研究表明，痛经越严重着，血液中PGF2a含量越高；催产素（oxytocin) 催产素可作用于子宫肌细胞引起子宫收缩，同时刺激内膜细胞释放前列腺素；神经内分泌 激素0 -endorphin是一种与疼痛有关的神经内分泌激素；孕酮（progesterone)、雌二醇 (estradiol)和内皮素（endothelin)也均是与痛经相关。
[0034] 分别对本发明上述实施例2造模得到的模型大鼠，给药组（少腹逐瘀汤）和正常 对照组进行生化指标检测，具体检测实验结果如下表1所示：
[0035] 表1寒凝血瘀原发性痛经模型大鼠体内的相关生化因子及少腹逐瘀汤的干预效 应（n= 8)
[0036]
【主权项】
1. 一种寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，其特征在于，它包括以下步骤： (1) 选择雌性大鼠连续放在冰水中冰浴5~7天，然后取出注射盐酸肾上腺素，间隔3~4 小时后，再注射一次盐酸肾上腺素，以制得寒凝血瘀型大鼠； (2) 然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，给以上步骤（1)的大鼠连续 5~7天皮下注射苯甲酸雌二醇，以同步化子宫，并使子宫对缩宫素的敏感性提高，最后给大 鼠腹腔注射缩宫素，得到寒凝血瘀型原发性痛经大鼠动物模型。
2. 根据权利要求1所述的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，其特征在于， 它包括以下步骤： (1) 选择雌性大鼠连续放在冰水中冰浴7天，然后取出注射盐酸肾上腺素，0. 16ml/只 /次，间隔4小时后，再注射一次盐酸肾上腺素，0. 16ml/只/次，以制得寒凝血瘀型大鼠； (2) 然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，给以上步骤（1)的大鼠连续 7天皮下注射苯甲酸雌二醇，lmL/kg/天，以同步化子宫，并使子宫对缩宫素的敏感性提高， 第8天给大鼠腹腔注射缩宫素，lmL/kg，得到寒凝血瘀型原发性痛经大鼠动物模型。
3. 根据权利要求1或2所述的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，其特征在 于，所述的雌性大鼠为SD雌性大鼠。
4. 权利要求1或2制备得到的的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型在筛选抗痛经药物中 的应用。
5. 权利要求1或2制备得到的的寒凝血瘀型原发性痛经动物模型在筛选抗寒凝血瘀型 原发性痛经药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的造模方法，本发明以冰浴联合注射肾上腺素制造大鼠寒凝血瘀，然后以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，得到寒凝血瘀型原发性痛经动物模型。本发明根据中医药理论和痛经疾病的发病机制，通过大量实验筛选，以冰浴联合注射肾上腺素制造大鼠寒凝血瘀；以雌激素和缩宫素联合制备原发性痛经大鼠模型，整个方法操作简单，造模成功率高，易于推广应用，可解决目前没有寒凝血瘀型原发性痛经动物模型的不足，为规范、标准、科学的评价中医药提供一种新方法，具有重要的应用价值。
【IPC分类】A61K38-12, A61K49-00, A61K31-137
【公开号】CN104524545
【申请号】CN201410763865
【发明人】宿树兰, 段金廒, 黄晓晨, 郭建明, 刘培, 钱大玮
【申请人】南京中医药大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月11日