一种知母降血糖提取物的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药制备方法，特别是涉及一种知母降血糖提取物的制备方法。
【背景技术】
[0002] 知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖，始载于 《神农本草经》，具有清热泻火、滋阴润燥的功效。用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸 潮热，内热消渴，肠燥便秘等症。知母历代的主流炮制品种为盐知母，即将知母饮片加盐水 用文火共同炒制至干，盐知母最早见于宋代，记有"盐水炒研末"。历版《中国药典》收载的知 母的炮制品种均为盐知母，传统理论认为"入盐走肾脏仍仗软坚"，知母经盐炙后能够"引药 入肾经，增强滋阴降火的作用"。早在《神农本草经》中就有记载：知母"主消渴，热中…"，表 明知母具有降血糖作用。现代研宄亦有报道知母中芒果苷、皂苷、多糖等有降血糖的作用。
[0003] 我们课题组在进行知母盐制前后药效学对比研宄时，首次发现了知母盐炙后降血 糖作用显著增强，特别是盐知母高剂量组，降血糖作用高效且持久，明显优于知母组，且优 于格列本脲阳性对照组。于是，在前期研宄基础上，我们对盐知母的降血糖作用进行了深入 研宄，对盐知母不同极性部位进行降血糖作用比较研宄。本技术的发明，可以使提高知母的 降血糖作用，寻找到了盐知母降血糖的有效部位，可进一步开发为降血糖药物。
【发明内容】
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[0004] 本发明的目的，是提供一种知母降血糖提取物的制备方法，本制备方法明确了盐 知母降血糖作用的最佳部位，为研发新药提供基础。本方法获得的盐知母提取物，对II型糖 尿病，具有良好的降糖作用。
[0005] 采用的技术方案是：
[0006] 一种知母降血糖提取物的制备方法，包括下述步骤：
[0007] 1.盐知母的制备
[0008] 知母饮片加盐水拌匀，闷润至盐水被吸尽，在140°C?170°C下炒制7-9分钟。每 IOOg知母饮片加入2_4g的盐。
[0009] 2.取步骤1制备的盐知母粉碎成粗粉，加60-80%乙醇回流提取2-3次，每次 I. 5-2. 5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏。浸膏以适量水分散，依次 用的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂得到石油醚萃取物（I )，氯仿萃取物 (II )，乙酸乙酯萃取物（III)，正丁醇萃取物（IV )以及剩余部分（V )。
[0010] 3脂肪乳的制备
[0011] 每IOOmL脂肪乳含15-25g猪油，3-8g胆固醇，8-12g果糖，8-12g蔗糖，8-12mL吐 温 80,8-12mL 甘油。
[0012] 4.造模与给药
[0013] SD大鼠适应性喂养一周左右后，随机取8只作空白对照组，正常饮食，余下组大鼠 除正常饮食外每天ig脂肪乳，4周后，禁食12h，腹腔注射STZ (35mg/kg)。72h后测定空腹血 糖值，选择空腹血糖大于等于12. lmmol/L的大鼠作为II型糖尿病模型。将造模成功的糖尿 病大鼠，随机分为模型对照组、阿卡波糖组（0. 2g/kg)、及I?V提取物组（折合生药I. 4g/ kg)。给药组每天ig相应药液10mL/kg，对照组和模型组ig等体积蒸馏水，连续14d。
[0014] 5检测指标
[0015] 5.1-般生理指标观察
[0016] 观察大鼠一般生理状况，包括摄食量，饮水量及活动状态等。
[0017] 5. 2空腹血糖值（FBG)及葡萄糖耐量（OGTT)的测定
[0018] 于给药7d、14d后，采用剪尾取血法，检测各组大鼠空腹血糖水平。末次给药后，禁 食4h，灌胃给予20 %葡萄糖溶液（2g/kg)，分别测定0、0. 5h、lh、2h血糖水平，梯形法计算 曲线下面积。
[0019] 5. 3糖化血红蛋白（HbAlc)和血清胰岛素（FINS)测定
[0020] 末次给药后，禁食12h，眼眶取血，取EDTA抗凝全血按试剂盒操作说明，测定糖化 血红蛋白（HbAlc);放射免疫法测定血清胰岛素（FINS)，按公式计算胰岛敏感指数ISI及 Homa胰岛素抵抗指数（Homa-IR) 〇
[0021] 6实验结果
[0022] 6. 1 -般生理指标观察
[0023] 造模后大鼠摄食量、饮水量和尿量明显增加，体重明显下降，出现"三多一少"的症 状。对照组摄食量和饮水量均衡，体重增长，反应灵敏，皮毛有光泽；模型组大鼠反应迟钝、 皮毛枯萎，体重增长缓慢；给药组大鼠的状态有不同程度的好转，活动量增加。
[0024] 6. 2对糖尿病大鼠 FBG的影响
[0025] 与模型组相比，给药7d后，各给药组大鼠的FBG均显著降低（p〈0. 01或p〈0. 05)， 14d后，阿卡波糖、II及V提取物组大鼠的FBG显著降低（p〈0. 01)。表明盐知母II及V提取 物具有明显降低糖尿病大鼠空腹血糖的作用，且较其它提取物作用持久。结果见表1。
[0026]
【主权项】
1. 一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：将知母饮片加盐水拌均匀，每 IOOg知母饮片加入2-4g的盐，闷润至盐水被吸尽，在140°C?170°C下炒制7-9分钟，取盐 知母粉碎成粗粉，加60-80 %乙醇回流提取2-3次，每次I. 5-2. 5h，滤过，合并滤液，减压回 收乙醇至无醇味，得醇浸膏；醇浸膏以适量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取 物，蒸干，即得。
2. 根据权利要求1所述的一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：制得的知 母降血糖提取物，能够明显降低II型糖尿病的空腹血糖值、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰 岛素抵抗指数，升高胰岛敏感指数，改善糖耐量。
【专利摘要】一种知母降血糖提取物的制备方法，其特征在于：将知母饮片加盐水拌均匀，每100g知母饮片加入2-4g的盐，闷润至盐水被吸尽，在140℃～170℃下炒制7-9分钟，取盐知母粉碎成粗粉，加60-80％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇浸膏；醇浸膏以适量水分散，用石油醚萃取后，再用氯仿萃取，得萃取物，蒸干，即得。本发明能够明显降低Ⅱ型糖尿病的空腹血糖值、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数，升高胰岛敏感指数，改善糖耐量。
【IPC分类】A61K36-8964, A61P3-10, A61K125-00
【公开号】CN104606459
【申请号】CN201410842076
【发明人】高慧, 吴莹, 宋泽璧, 张爽, 贾天柱, 史辑, 鞠成国, 林桂梅, 张凡, 黄金宇
【申请人】辽宁中医药大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2014年12月29日