稳定的阿达木单抗水性制剂的制作方法
【专利说明】稳定的阿达木单抗水性制剂 发明领域
[0001] 本发明涉及适合于阿达木单抗（包括考虑或打算作为市售阿达木单抗的"生物仿 制"或"生物改良"变体的抗体蛋白质）的长期储存的水性药物组合物，制造这些组合物的 方法，它们的施用方法，以及含有这些组合物的试剂盒。
[0002] 发明背景
[0003] 肿瘤坏死因子a (TNF α )是由多种细胞类型（包括单核细胞和巨噬细胞）响应于 内毒素或其他刺激产生的天然存在的哺乳动物的细胞因子。TNF α是炎性反应、免疫反应和 病理生理反应的主要介体（Grell, M，et ah (1995) Cell, 83:793-802)。
[0004] 可溶性TNF α通过前体跨膜蛋白的裂解形成（Kriegler, et al. (1988) Cell 53:45-53)，并且分泌的17kDa多肽组装成可溶性三同聚体复合物（Smith, et al. (1987)，J. Biol. Chem. 262:6951-6954 ;对于 TNF 的综述，参见 Butler, et al. (1986)， Nature320:584 ;01d (1986)，Science 230:630)。然后这些复合物结合存在于多种细胞上的 受体。结合产生一些促炎作用，包括：（i)释放其他促炎细胞因子，如白介素（IL)_6、IL-8 和IL-1，（ii)释放基质金属蛋白酶和（iii)上调内皮粘附分子的表达，通过吸引白细胞到 血管外组织中进一步放大炎性和免疫级联。
[0005] 存在许多与升高的TNFa水平相关的病症。例如，在许多人类疾病中已经显示 TNFa被上调，这些人类疾病包括慢性疾病，例如类风湿关节炎（RA)，炎性肠道疾病，包括 克罗恩氏病和溃疡性结肠炎，败血症，充血性心脏衰竭，支气管哮喘和多发性硬化症。TNF a 也被称为促炎细胞因子。
[0006] 生理学上，TNF α还与特定感染的保护相关联（Cerami. et al. (1988)，Immunol. Today 9:28)。TNFa由已经被革兰氏阴性菌的脂多糖活化的巨噬细胞释放。照此，TNFa 似乎是涉及与细菌性败血症有关的内毒素性休克的发展和发病机制的至关重要的内源性 介体。
[0007] 阿达木单抗（Humira?，AbbVie公司）是对人TNF特异的重组人IgGl单克隆抗 体。该抗体也被称为D2E7。阿达木单抗由1330个氨基酸组成并且具有大约148千道尔顿 的分子量。美国专利第6090382号已经描述并且要求保护阿达木单抗，其全部公开内容在 此通过引用并入本文中。阿达木单抗通常是通过重组DNA技术在哺乳动物细胞表达系统中 产生，所述哺乳动物细胞表达系统诸如，例如，中国仓鼠卵巢细胞。阿达木单抗特异性地结 合TNF α并通过阻断TNF与p55和p75细胞表面TNF受体的相互作用来中和TNF的生物学 功能。
[0008] 各种阿达木单抗制剂是本领域已知的。参见，例如，美国专利8216583和8420081。 仍然需要能够实现长期储存而无功效显著损失的稳定的阿达木单抗液体制剂。
【发明内容】
[0009] 本发明提供包括能够实现长期储存的包含阿达木单抗的稳定的水性制剂。
[0010] 在第一个实施方案中，本发明提供一种稳定的水性药物组合物，其包括阿达木单 抗；包括选自多元醇和表面活性剂中的至少一种的稳定剂；和选自柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀 酸盐、组氨酸盐、酒石酸盐和马来酸盐的缓冲剂，其中所述组合物具有约4至约8并且优选 约5至约6的pH，并且其中，所述缓冲剂不包括柠檬酸盐和磷酸盐的组合，以及优选不包括 任何柠檬酸盐缓冲剂。在本实施方案中，稳定剂优选包括多元醇和表面活性剂。
[0011] 在第二个实施方案中，利用单缓冲系统，本发明提供了一种稳定的水性药物组合 物，其包括阿达木单抗、多元醇、表面活性剂和包括单缓冲剂的缓冲系统，所述单缓冲剂选 自柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、组氨酸盐、酒石酸盐或马来酸盐，但不包括上述的组合；其 中，所述制剂具有约4至8并且优选约5至约6的pH。组氨酸盐和琥珀酸盐特别优选地用 作单缓冲剂。如本文所用的术语缓冲剂、缓冲系统、或缓冲剂和类似的术语意在表示在制 剂中引入除了由蛋白质本身提供的缓冲容量之外的缓冲容量的缓冲组分，因此，术语"缓冲 剂"等并非意在包括作为自缓冲实体的该蛋白质自身。
[0012] 在第三个实施方案中，本发明提供一种稳定的水性药物组合物，其包括阿达木单 抗，包括选自多元醇与表面活性剂中的至少一种的稳定剂，其中，所述组合物具有约4至约 8并且优选约5至约6的pH，并且其中，所述组合物基本上不含缓冲剂。
[0013] 在第四个实施方案中，本发明提供了一种稳定的水性药物组合物，其包括阿达木 单抗，多元醇，和选自柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、组氨酸盐、酒石酸盐和马来酸盐的缓冲 剂，其中，所述组合物具有约4至约8并且优选约5至约6的pH，并且其中，所述组合物不含 或基本上不含表面活性剂。优选地，该组合物（i)不包含柠檬酸盐和磷酸盐的缓冲组合；以 及（ii)所述缓冲剂为选自组氨酸盐和琥珀酸盐中的至少一种；以及（iii)多元醇选自甘露 醇、山梨醇和海藻糖。
[0014] 在第五个实施方案中，本发明提供了一种稳定的水性药物组合物，其包括阿达木 单抗，表面活性剂，以及选自柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、组氨酸盐、酒石酸盐和马来酸盐 的缓冲剂，其中，所述组合物具有约4至8并且优选约5至约6的pH，并且其中，所述组合物 基本上不含多元醇。优选地，该组合物（i)不包含柠檬酸盐和磷酸盐的缓冲组合；以及（ii) 所述缓冲剂为选自组氨酸盐和琥珀酸盐中的至少一种，包括它们的组合。
[0015] 在上述讨论的五个实施方案中的每一个中，所述组合物可以任选地进一步包括选 自氨基酸、盐、乙二胺四乙酸（EDTA)和金属离子的稳定剂。氨基酸稳定剂可以选自甘氨酸、 丙氨酸、谷氨酸、精氨酸和蛋氨酸。盐稳定剂可以选自氯化钠和硫酸钠。金属离子稳定剂可 以选自锌、镁和钙。优选地，包含上述稳定剂的阿达木单抗制剂也不包含其中磷酸盐缓冲剂 和柠檬酸盐缓冲剂组合存在的缓冲系统，并且，最优选包含不含或基本上不含柠檬酸盐缓 冲剂的缓冲系统。在特别优选的实施方案中，（i)存在于本实施方案的任选附加的稳定剂 不是氯化钠，或者包括存在量不超过约IOOmM的氯化钠，并且包括精氨酸和甘氨酸中的至 少一种，包括这两种氨基酸的组合；（ii)所述缓冲剂，当存在时，不含有柠檬酸盐，或者至 少没有柠檬酸盐和磷酸盐组合，而是含有组氨酸盐和琥珀酸盐中的至少一种，包括它们的 组合；以及（iii)当稳定剂包括多元醇时，稳定剂优选是量超过约150mM的甘露醇。
[0016] 在进一步的实施方案中，本发明涉及一种水性的、缓冲的药物组合物，其包括阿达 木单抗和缓冲剂，其中（i)该组合物不含或基本上不含包括柠檬酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲 剂的缓冲组合；以及（ii)该组合物显示出长期的稳定性。
[0017] 本发明的另一个实施方案涉及表现出长期稳定性的水性、缓冲药物组合物，所述 组合物包括：（i)阿达木单抗；（ii)选自组氨酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂以及它们的组合 的缓冲剂；（iii)聚山梨醇酯或泊洛沙姆表面活性剂，或它们的组合；以及（iv)以下的一种 或者两种：(a)选自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、蛋氨酸、EDTA、氯化钠、硫酸钠、金属离 子以及它们的组合的稳定剂；和（b)选自山梨醇、甘露醇和海藻糖或它们的组合的多元醇。 任选地，该制剂还可以包括糖，如蔗糖。
[0018] 在进一步的实施方案中，本发明是一种包括阿达木单抗和缓冲剂的水性的、缓冲 的药物组合物，其中（i)该组合物不含或基本不含多元醇；和（ii)该组合物显示出长期的 稳定性。
[0019] 在又一个进一步的实施方案中，本发明涉及一种包括阿达木单抗和缓冲剂的水性 的、缓冲的药物组合物，其中（i)该组合物不含或基本上不含表面活性剂；和（ii)该组合物 显示出长期的稳定性。
[0020] 发明的另一个实施方案涉及包括阿达木单抗的水性药物组合物，其中：（i)该组 合物不含或基本上不含缓冲剂；和（ii)该组合物显示出长期的稳定性。
[0021] 在另一个实施方案中，本发明的阿达木单抗制剂包括，由或基本上由阿达木单抗、 作为制剂中的唯一的缓冲剂的组氨酸缓冲剂、较早引用的非表面活性剂稳定剂中的作为唯 一的稳定剂的甘氨酸（或精氨酸，或它们的组合）和聚山梨醇酯80组成。在该制剂中，阿达 木单抗的量为20至150mg/ml ;组氨酸缓冲剂的量多达约50mM ;甘氨酸的量多达约300mM ; 以及聚山梨醇醋80的量在约0. 01至约0. 2wt %的范围内。任选地，该制剂可包括多达约 IOOmM的NaCl。本发明还考虑对该制剂修饰以使组氨酸缓冲剂与柠檬酸盐、乙酸盐、磷酸 盐、马来酸盐、酒石酸盐缓冲剂中的一种或者多种组合。
[0022] 在另一个实施方案中，本发明的阿达木单抗制剂包括，由或基本上由阿达木单抗、 作为唯一的缓冲剂的组氨酸缓冲剂、甘露醇（或山梨醇或海藻糖）和聚山梨醇酯80组成， 并且进一步不含或者基本上不含以上引用的非表面活性剂稳定剂（例如甘氨酸，精氨酸 等）。在此制剂中，阿达木单抗的量为20至150mg/ml ;组氨酸缓冲剂的量多达约50mM ;多 元醇的量多达约300mM ;并且聚山梨醇酯80的量在约0. 01至约0. 2wt %的范围内。任选 地，该制剂可以包括多达约IOOmM的NaCl。本发明还考虑对该制剂修饰以使组氨酸缓冲剂 与柠檬酸盐、乙酸盐、磷酸盐、马来酸盐、酒石酸盐缓冲剂中的一种或者多种组合。
[0023] 在方法方面，本发明涉及一种用于提高水性、缓冲的阿达木单抗制剂的长期稳定 性的方法，其包括以下的一个或者多个步骤：(a)基于表明这些缓冲剂相比于其他缓冲剂 或者缓冲剂组合在更大程度上有助于所述制剂的稳定性的经验数据，将组氨酸缓冲剂、琥 珀酸盐缓冲剂或它们的组合加入所述制剂中；或者（b)基于表明这种稳定剂相比于其他 稳定剂在更大程度上有助于所述制剂的稳定性的经验数据，将甘氨酸、精氨酸或它们的组 合作为稳定剂加入所述制剂中；或者；（c)基于表明这种缓冲剂或者缓冲剂组合相比于其 他缓冲剂在稳定所述制剂方面表现不佳的经验数据，基本上排除包括柠檬酸盐缓冲剂的缓 冲剂或者缓冲剂组合（特别是包括柠檬酸盐和磷酸盐的缓冲剂组合）的存在。该方法可 以进一步包括基于表明PS80相比于其他表面活性剂（包括PS20)赋予阿达木单抗制剂更 好的热稳定性的经验数据选