含有羟基化脂肪酸的肠道保护剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及含有羟基化脂肪酸的肠道保护剂。具体地，本发明涉及含有羟基化不 饱和脂肪酸的肠道保护剂。更具体地，其涉及10-羟基-顺-12-十八碳烯酸等对肠道屏障 功能的改善。
【背景技术】
[0002] 肠道上皮细胞与食品、肠细菌、病原体等直接接触。它们不仅作为物理屏障发挥作 用，而且在肠道免疫应答等的诱导和引导等等中发挥重要作用。肠道上皮细胞形成这样的 结构，其中细胞间隙紧密由多个紧密连接相关因子（tight junction-related factors)诸 如ΖΟ-l、闭合蛋白和密蛋白家族紧密粘连。当由于IL-6、TNF_a、胰岛素等导致肠道上皮细 胞中所述相关因子的表达降低等时，肠道屏障功能可能有时受损（非专利文献1)。此外，当 病原体等损伤肠道上皮细胞层时，外周免疫细胞被活化以修复上皮层且去除外来物质。
[0003] 然而，当免疫应答变得过度时，肠道组织中可发生炎症，并且作为抑制此类炎症的 治疗剂，已经报道了炎性肠病的治疗剂，其含有乳杆菌细菌等（专利文献1)。作为通过注意 到经由紧密连接的物质渗透和防止紧密连接的松动而抑制过敏原物质等的渗透的治疗药 物，也已经报道了含有乳清蛋白、酪蛋白、血清白蛋白等作为有效成分等的肠道保护剂（专 利文献2)。
[0004] 尽管已经报道了上述肠道保护剂，但仍期望开发新的肠道保护剂，其可用于预防 或治疗肠道屏障功能的损伤或由此引起的疾病。
[0005] 已经报道通过共轭亚油酸（CLA)代表的共轭脂肪酸具有各种生理活性，诸如脂质 代谢改善效果、抗动脉硬化作用、身体脂肪降低作用等（非专利文献2 -4)，并且是期望可 适于药物、功能性食品等的各种领域的功能性脂质。此外，对肠道保护的作用已经引起关 注，并且已经报道了共轭亚油酸对具有溃疡性结肠炎诸如克罗恩氏病等的患者的症状的改 善，等等（http://www. nimml. org/838/) 〇
[0006] 共轭亚油酸由乳杆菌产生作为不饱和脂肪酸的饱和代谢的中间体。作为代谢的 中间体，例如，存在羟基化脂肪酸，诸如10-羟基-顺-12-十八碳烯酸、10-羟基-十八烷 酸等，氧代脂肪酸（oxofatty acids)诸如10-氧代-12-十八碳稀酸、10-氧代十八烧酸、 10-氧代-11-十八碳烯酸等，等。然而，据申请人所知，没有关于由乳杆菌的不饱和脂肪酸 的饱和代谢的中间体对肠道的作用和效果的报道。
[0007] [文献列表]
[专利文献] 专利文献 I: JP-A-2003-073286 专利文献 2: JP-A-9-241177 [非专利文献] 非专利文献 I: Nusrat A, (2000)，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol·， vol.279, no. 5, p. G851-G857 非专利文献 2: HaYL, (1987)，Carcinogenesis, vol. 8，no. 12 p.1881-1887 非专利文献 3: Clement Ip, (1991)，Cancer Res·，（1991)，vol. 51，p. 6118-6124 非专利文献 4: Kisun NL, (1994)，Atherosclerosis, vol. 108，p.l9_25〇
[0008] 发明概述 本发明待解决的问题 本发明的目的是提供新型肠道保护药，其可用于预防或治疗肠道屏障功能的损伤或由 此引起的疾病。
[0009] 解决问题的方式 本发明人已经鉴于上述问题进行了深入研宄，并且发现，羟基化脂肪酸，特别是具 有18个碳原子且在10位和/或12位具有羟基的羟基化不饱和脂肪酸，诸如10-羟 基-顺-12-十八碳烯酸等，这是乳杆菌代谢不饱和脂肪酸的中间体，具有肠道屏障保护作 用、对炎性细胞因子IL-8的表达的抑制作用和肠炎模型中的病理减少作用。
[0010] 因此，本发明如下。
[0011] [1]肠道保护剂，其包含具有18个碳原子且在10位和/或12位具有羟基的羟基 化脂肪酸。
[0012] [2] [1]的肠道保护剂，其中所述羟基化脂肪酸是羟基化不饱和脂肪酸。
[0013] [3] [2]的肠道保护剂，其中所述羟基化不饱和脂肪酸在12位具有顺式双键。
[0014] [4] [2]的肠道保护剂，其中所述羟基化不饱和脂肪酸是10-羟基-顺-12-十八 碳稀酸。
[0015] [5] [1] - [4]中任一项的肠道保护剂，其用于预防或改善由肠道屏障功能损伤 引起的疾病。
[0016] [6] [5]的肠道保护剂，其中所述由肠道屏障功能损伤引起的疾病是至少一种选 自炎性肠病、溃疡和肠易激综合征的疾病。
[0017] [7] [1]-[6]中任一项的肠道保护剂，其是食品或食品添加剂。
[0018] [8] [1]_[6]中任一项的肠道保护剂，其是药品。
[0019] [9] [1]_[6]中任一项的肠道保护剂，其是饲料或饲料添加剂。
[0020] [10]用于预防或治疗温血动物中的肠道屏障功能损伤或者由所述损伤引起的疾 病的方法，其包括向哺乳动物施用有效量的具有18个碳原子且在10位和/或12位具有羟 基的羟基化脂肪酸。
[0021] [11]具有18个碳原子且在10位和/或12位具有羟基的羟基化脂肪酸，其用作 肠道保护剂。
[0022] [12]具有18个碳原子且在10位和/或12位具有羟基的羟基化脂肪酸用于生产 肠道保护剂的用途。
[0023] 发明效果 在本发明中，已经阐明，羟基化脂肪酸，特别是具有18个碳原子且在10位和/或12位 具有羟基的羟基化不饱和脂肪酸，诸如10-羟基-顺-12-十八碳烯酸（以下也称为HYA)， 具有常规未知的肠道屏障保护作用。基于此类作用，本发明可以提供含有所述脂肪酸的肠 道保护剂。由于所述试剂可用于各个领域诸如药品、食品、饲料等中，本发明在工业上极为 有用。
[0024] 附图简述 图1显示实施例中使用的脂肪酸的结构式。
[0025] 图2显示通过使用人结肠直肠癌来源的细胞系Caco-2的跨上皮电阻（以下称为 TER)作为指标的测试脂肪酸HYA、HYB、Ket〇A、Ket〇B和KetoC的肠道屏障保护作用的结果。 图2A的垂直轴显示TER值（Ω cm2)，且水平轴显示培养时间。不添加测试脂肪酸、IFN-γ 和TNF-α的孔（图中显示为无），和不添加测试脂肪酸且添加 IFN-γ和TNF-α的孔（图 中显示为（-))用作对照（在下文图3 - 8和10中也是如此）。图2Β显示当图2Α中培养 6小时时对照（无）组中的值为1时TER值的相对值。在图中，显示*相对于无、#相对于 (_)、$相对于ΗΥΑ，两个标记显示Ρ〈0. 01，且一个标记显示Ρ〈0. 05 (在图3 - 8和10中 也是如此）。
[0026] 图3显示使用Caco-2细胞中的IL-8产生（测量蛋白和基因水平两者）作为指标 检查的HYA和HYB的肠道屏障保护作用的结果。图3A的垂直轴显示IL-8产生量（pg/mL)。 图3B的垂直轴显示IL-8 mRNA的表达。
[0027] 图4显示HYA和HYB对紧密连接相关因子的基因表达的影响。
[0028] 图5显示HYA或HYB施用对DSS诱导的肠炎模型小鼠的体重的时间-进程变化 (相对于作为100 %的HYA或HYB施用开始时的体重的％变化）的影响。
[0029] 图6显示HYA或HYB施用对DSS诱导的肠炎模型小鼠的体重的降低（从HYA或 HYB施用开始至施用DSS 5天结束时降低的量（g))的影响。
[0030] 图7显示HYA或HYB施用对DSS诱导的肠炎模型小鼠的排泄物评分的时间-进程 变化的影响。
[0031] 图8显示HYA或HYB施用对DSS诱导的肠炎模型小鼠的大肠长度的影响。
[0032] 图9显示HYA或HYB施用对DSS诱导的肠炎模型小鼠的大肠的上皮细胞损伤的影 响。
[0033] 图10显示HYA和HYB对DSS诱导的肠炎模型小鼠的大肠组织中的紧密连接相关 因子的基因表达的影响。
[0034] 实施方案的描述 下面详细解释本发明。本发明提供含有具有18个碳原子和在10位和/或12位具有 羟基的羟基化脂肪酸，诸如10-羟基-顺-12-十八碳烯酸（以下也称为"本发明的羟基化 脂肪酸"）的肠道保护剂。
[0035] 在本发明中，"肠道保护"意指修复受损的肠道屏障功能和/或增强肠道屏障功能。 至于损伤，其程度不显著，且其包括严重水平至轻度水平中任一者。功能的修复意指使异常 状态至初始状态和/或接近初始状态的状态。功能的增强包括执行功能，并且在一些情况 下，同样抑制功能降低。
[0036] 在本发明中，"肠道屏障（功能）"生理上意指通过形成其中肠道上皮细胞之间的 细胞间隙受紧密连接相关因子强烈和紧密粘附的结构防止除了低分子以外的物质的渗透。 在生物学上，它意