药物组合的制作方法
【专利说明】药物组合 夺叉引用
[0001] 本申请要求2013年10月4日提交的美国临时专利申请N0. 61/887, 165和2013 年3月1日提交的美国临时专利申请N0.61/771，525的权益，其中每一个均通过引用将其 全部内容并入本文。
【背景技术】
[0002] 基因组的外遗传修饰，特别是DNA甲基化，通过影响癌症起始和进展中的关键细 胞途径（包括细胞周期控制、细胞凋亡、侵袭和转移的潜力和血管发生）而在人类恶性肿瘤 中发挥重要作用。DNA甲基化由酶DNA甲基转移酶介导，并导致当胞嘧啶出现在CpG二核苷 酸的环境中时向胞嘧啶添加甲基。
[0003] 启动子相关的CpG岛的DNA甲基化导致相应基因的沉默一一一般而言，启动子相 关的CpG岛在非恶性细胞中未被甲基化。因此，在肿瘤细胞中异常的DNA超甲基化在功能 上等同于通过突变使肿瘤抑制基因经失活，并因此通过下调赘生性细胞中的肿瘤识别复合 体的各种组分（包括HLAI类抗原、CTA抗原和辅助/共刺激分子）来促进肿瘤逃避宿主 免疫识别。这导致针对癌症治疗的免疫治疗方法的临床疗效降低。
[0004]DNA低甲基化剂（DHA)诱发全局的和基因特异性的DNA低甲基化。这促进了肿瘤 相关抗原的再表达，从而增强免疫识别。实例包括5-氮杂胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷（地 西他滨）和Zebularine:5_氮杂胞苷和5-氮杂-2'-脱氧胞苷目前被美国食品与药品管理 局（USFoodandDrugAdministration)批准用于骨髓增生异常综合征患者的治疗，而地 西他滨目前正在被开发为用于治疗慢性髓性白血病（CML)、骨髓增生异常综合征（MDS)、非 小细胞肺癌（NSCLC)、镰状细胞贫血和急性髓性白血病（AML)的药物。 援引并入
[0005] 在本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其引用 程度如同明确并单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。
【发明内容】
[0006] 在一些实施方案中，本发明提供了一种组合，其包含式I的化合物或其药学上可 接受的盐： (5-氮杂胞嘧啶基团）-L-(鸟嘌呤基团）（I) 其中L是含磷连接基，其中L中的磷原子数是1 ; 和一种或多种辅助治疗组分，其选自： (a) T细胞活化剂； (b) 癌症疫苗；和 (c) 佐剂。
[0007] 可替代地，本发明提供了一种组合，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐： (5-氮杂胞嘧啶基团）-L-(鸟嘌呤基团）（I) 其中L是含磷连接基，其中L中的磷原子数是1 ; 和一种或多种辅助治疗组分，其选自： (a) T细胞活化剂； (b) 癌症疫苗； (c) IDO抑制剂；和 (d) 佐剂。
[0008] 在一些实施方案中，在式I的化合物中，L是式（II):
其中，R1和R2独立地是H、0H、烷氧基、烷氧基烷氧基、酰氧基、碳酸酯基团、氨基甲酸酯 基团或卤素；R3是H，或者R3连同与R3结合的氧原子一起形成醚、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯； R4是H，或者R4连同与R4结合的氧原子一起形成醚、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯；并且，X连 同与X结合的氧原子一起形成磷酸二酯、硫代磷酸二酯、硼烧磷酸二酯（boranophosphate diester)或甲基膦酸二酯。在一些实施方案中，R1和R2独立地是H、0H、Me、OEt、OCH2CH20Me、 〇Bn或F，且X连同与X结合的氧原子一起形成磷酸二酯。在一些实施方案中，R1和R2是H。
[0009] 在一些实施方案中，式I的化合物是1-(1-44)中的任一个。在一些实施方案中， 式I的化合物是： ]
[0010] 在一些实施方案中，I的化合物是下式的化合物：
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，该盐是钠盐。
[0011] 该化合物或其盐可以是例如溶解在基本无水的溶剂中的制剂的形式，该溶剂包含 约45 %至约85 %的丙二醇；约5 %至约45 %的甘油；和0 %至约30 %的乙醇。在这样的 实施方案中，该溶剂可包含约65%至约70%的丙二醇；约25%至约30%的甘油；和0%至 约10%的乙醇，例如：（a)65%至70%的丙二醇和25%至30%的甘油，余量为乙醇；(b)约 65%的丙二醇；约25%的甘油；和约10%的乙醇；（c)65%的丙二醇；25%的甘油；和10% 的乙醇；（d)约70%的丙二醇和约30%的甘油，不存在乙醇；（e) 45%至85%的丙二醇；5% 至45 %的甘油；和0 %至30 %的乙醇；（f) 65 %至70 %的丙二醇；25 %至30 %的甘油；和 0%至10%的乙醇。该制剂可进一步包含DMS0,任选地DMS0 :化合物比例为2 :1、1 :1、0. 5 : 1、0. 3 :1或0. 2-0. 3 :1。该组合可适合于通过皮下注射施用。
[0012] 当作为制剂的一部分存在时，该化合物可以以约80mg/mL至约110mg/mL，任选地 约100mg/mL的浓度存在。
[0013] 在一些实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含： (a) 含有如本文所述的化合物或其盐的第一容器； (b) 含有如本文所述的基本无水的溶剂的第二容器；和 (c) 如本文所述的一种或多种辅助治疗组分。
[0014] 该化合物可以以基本无水的粉末的形式存在于药盒中，例如被冻干。在一些实施 方案中，第一容器可以含有约80mg至约llOmg所述化合物，例如约100mg所述化合物，并且 可进一步包含关于通过皮下注射施用的说明书。
[0015] 在一些实施方案中，本发明提供了一种用于制备药物组合物的过程，该过程包括 在如上定义的基本无水的溶剂中溶解如上定义的化合物或其盐，然后将溶解的化合物与如 上定义的一种或多种辅助治疗组分相组合。在一些实施方案中，该过程进一步包括以下预 备步骤： (a) 将所述化合物溶解在DMS0中以产生所述化合物在DMS0中 的溶液；和 (b) 冻干步骤（a)的所述溶液，以提供作为基本无水的粉末的所 述化合物。
[0016] 在一些实施方案中，本发明提供了一种用于生产药物组合物的过程，该药物组合 物包含基本无水的粉末形式的如上定义的化合物或其盐，该过程包括在DMS0中溶解所述 化合物以产生在DMS0中的溶液，冻干所述溶液以提供作为基本无水的粉末的所述化合物， 然后将所述粉末与一种或多种辅助治疗组分相组合。在一些实施方案中，所述基本无水的 粉末包含残余的DMS0,例如：（a)以彡2000或约0. 1至约2000mg/g所述化合物的量存在； 或（b)以彡1000或约0? 1至约1000mg/g、彡600或约0? 1至约600mg/g、彡500或约0? 1 至约500mg/g、< 400或约0. 1至约400mg/g、< 300或约0. 1至约300mg/g、或约200至约 300mg/g所述化合物的量存在；或（c)以200-300mg/g所述化合物的量存在。
[0017] 在一些实施方案中，本发明提供了一种基本无水的粉末，其基本由与如上定义的 一种或多种辅助治疗组分相组合的如上定义的化合物或其盐和DMS0组成，所述DMS0以 彡200或约0. 1 %至约200%w/w的量存在。在这样的实施方案中，DMS0以如下量存在： < 100 %，或约 0. 1 %至约 100 %，< 60 %，或约 0. 1 %至约 60 %，< 50 %，或约 0. 1 %至约 50 %，彡40 %，或约0? 1 %至约40 %，或彡30 %，或约0? 1 %至约30 %w/wDMS0/化合物，例 如约20%至约30%￥/^01^0/化合物的量。
[0018] 还提供了一种通过本发明的过程可获得的或已获得的药物组合物。
[0019] 在一些实施方案中，所述辅助治疗组分包含T细胞活化剂。
[0020] 在一些实施方案中，所述辅助治疗性组分包含癌症疫苗。
[0021 ] 在一些实施方案中，所述辅助治疗性组分包含佐剂。
[0022] 在一些实施方案中，所述辅助治疗组分包含T细胞活化剂和癌症疫苗。
[0023] 在一些实施方案中，所述辅助治疗组分包含T细胞活化剂，例如选自针对IC0S、 GITR、MHC、⑶80、⑶86、半乳凝素9和LAG-3的激动剂或抗体。
[0024] 在其他实施方案中，所述T细胞活化剂是抗体，例如选自：(a)CD137激动剂；(b) CD40激动剂；（c) 0X40激动剂；（d)H)-l单克隆抗体（mAb);(e)PD-L1单克隆抗体；（f)H)-L2 单克隆抗体；（g)CTLA-4单克隆抗体；以及（h) (a)-(g)的组合。
[0025] 在一些实施方案中，所述辅助治疗组分是曲美木单抗（Tremelimumab)或伊匹木 单抗（Ipilimumab) 〇
[0026] 在一些实施方案中，所述辅助治疗组分包含CTA癌症疫苗，例如该CTA癌症疫苗 基于选自以下的CTA抗原：NY-ES0-1、LAGE-1、MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10、-A12、 CT7、CT10、GAGE1-6、GAGE1-2、BAGE、SSX1-5、SSX2、HAGE、PRAME、RAGE-1、XAGE-1、MUC2、 MUC5B、B7. 1/2、CD28、B7-H1、HLA、CD40L和HMW-MAA，例如基于MAGE-A3 (例如recMAGE-A3)、 NY-ES0-1和PRAME。
[0027] 在一些实施方案中，所述辅助治疗组分包含ID0抑制剂，例如选自INCB24360、1甲 基色氨酸和NLG919。
[0028] 在一些实施方案中，本发明提供了免疫疗法或用于治疗疾病的方法，该疾病选 自： (a) 骨髓增生异常综合征（MDS); (b) 癌症； (c) 血液系统病症；或 (d) 与异常血红蛋白合成相关的疾病， 该方法包括向有需要或愿望的受试者施用本发明的组合、药盒、过程、粉末或组合物。 在一些实施方案中，如上定义的化合物或其盐可在一种或多种辅助治疗组分施用之前、同 时或之后施用。在一些实施方案中，首先施用式I的化合物或其盐（作为引导疗法），随后 施用辅助治疗组分。
[0029]所述MDS可选自低危、中危和高危MDS和骨髓增生性肿瘤。
[0030]所述血液系统病症可以是白血病，例如选自：急性髓样白血病（AML)、急性早幼粒 细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病和慢性髓性白血病。在一些实施方案中，所述AML可选 自老年AML、首次复发AML和第二次复发AML。
[0031]所述癌症可以选自乳腺癌、皮肤癌、骨癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、 鳞状非小细胞肺腺癌、脑癌、喉癌、胆囊癌、胰腺癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、肾上 腺癌、神经组织癌、头颈癌、结肠癌、胃癌、支气管癌和肾癌、基底细胞癌、溃疡型和乳头 型鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤因肉瘤、网状组织细胞肉瘤（veticulumcell sarcoma)、骨髓瘤、巨细胞肿瘤、小细胞肺癌、胆结石、胰岛细胞肿瘤、原发性脑瘤、急性和 慢性淋巴细胞和粒细胞肿瘤、毛细胞肿瘤、腺瘤、增生、髓样癌、嗜铬细胞瘤、粘膜神经瘤 (mucosalneuronms)、肠神经节瘤、增生性角膜神经肿瘤、马方综合征样习性瘤（marfanoid habitustumour)、肾母细胞瘤、精原细胞瘤、卵巢肿瘤、铂类耐药性卵巢癌、平滑肌肿瘤 (leiomyomatertumour)、宫颈发育不良和原位癌、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、软组织 肉瘤、恶性类癌、局部皮肤病变、蕈样真菌病、横纹肌肉瘤、卡波西肉瘤、成骨性肉瘤、恶性高 钙血症、肾细胞肿瘤、真性红细胞增多、腺癌、多形性胶质母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、黑色素 瘤、表皮样癌、肝细胞癌和实体瘤。
[0032]在一些实施方案中，所述癌症选自胰腺癌、卵巢癌、黑色素瘤和肺癌。
[0033]在一些实施方案中，与异常血红蛋白合成相关的疾病选自镰状细胞贫血和地 中海贫血。
[0034]在一些实施方案中，本发明提供了如本文所附权利要求书中定义的或如本文所述 的组合、药盒、过程、粉末或组合物，其用于在治疗或预防中使用，例如用于在免疫疗法中使 用或用于治疗如本文所附权利要求书中定义的和以上或本文所述的疾病。
[0035]在一些实施方案中，本发明提供了如本文所附权利要求书中定义的或如本文所述 的组合、药盒、过程、粉末或组合物在制备药物中的用途，该药物用于在免疫疗法中或在治 疗本文所附权利要求书中和以上或本文所述的疾病的方法中使用。
[0036]本发明的组合、药盒、过程、粉末或组合物可以按照以下给药方案向受试者施用： (a)每周一次、两次、三次、四次、五次、六次或七次；或（b)在5、6、7、8、9或10天中每天施 用；或（c)在多达10天中每天施用；或（d)在5至10天中每天施用；或（e)在5天中每天 施用，随即两天不给药并且随后在接下来的5天中每天施用。施用可以是皮下施用。
【附图说明】
[0037]图1显示在药代动力学研究中，在每周给予化合物1-1皮下剂量的雄性和雌性食 蟹猴中，化合物1-1的平均血浆浓度。
[0038] 图2显示在药代动力学研究中，在每周给予地西他滨皮下剂量的雄性和雌性食蟹 猴中，地西他滨的平均血浆浓度。
[0039] 图3显示在预试（pretest)之后的不同天数（D)从食蟹猴抽取的血液样品中观察 到的LINE1甲基化水平的下降。
[0040] 图4显示在各种DMS0和DMS0/水组合物中，式1-1化合物的钠盐的总相关物质的 变化。
[0041] 图5显示SGI-110联合抗小鼠CTLA-4的抗肿瘤效果。
[0042] 图6显示两个周期的先SGI-110后抗小鼠CTLA-4单克隆抗体9H10的顺序施用的 抗肿瘤效果。 发明详沭
[0043] 本发明的组合激活不同组织型的赘生性细胞中肿瘤识别复合体的组分的表达，或 强烈上调其表达水平。因此，它们可以用作免疫调节剂，以增加赘生性细胞的免疫原性和免 疫识别。这又允许在肿瘤控制和消退、延长无疾病进展和提高总存活期方面具有更好的治 疗结果。
[0044] 从地西他滨衍生的第二代DHA，包括化合物1-1 (5-氮杂-2' -脱氧胞苷和脱氧鸟苷 的二核苷酸）的DNA低甲基化剂，描述在W02007/041071(在此通过引用而整体并入）中。 用于在本发明的组合中伸用的式I化合物
[0045] 在一些实施方案中，本发明提供了包含式I的化合物或其药学上可接受的盐的组 合： (5-氮杂胞嘧啶基团）-L-(鸟嘌呤基团）（I)， 其中L是含磷连接基，其中L中的磷原子数是1。
[0046]L是适合于将5-氮杂胞嘧啶基团与鸟嘌呤基团相连接的基团。在一些实施方案 中，L包含碳水化合物。在一些实施方案中，L包含超过一种碳水化合物。在一些实施方案 中，L包含两种碳水化合物。当L包含超过一种碳水化合物时，该碳水化合物可以相同或不 同。碳水化合物可以为闭环形式的单糖，例如吡喃糖或呋喃糖型。碳水化合物可以在任意位 置被取代或者在任意位置（该位置在该碳水化合物的天然存在形式中将会被氧化）脱氧。 在一些实施方案中，该碳水化合物是核糖。在一些实施方案中，该碳水化合物是2-脱氧核 糖。该核糖或2-脱氧核糖可以在任意位置被取代。
[0047]L的磷原子可以存在于任何含有磷原子的天然存在的或合成的官能团中。此类官 能团的非限制性实例包括磷酸二酯、硫代磷酸二酯、硼烷磷酸二酯和甲基膦酸二酯。
[0048] 在一些实施方案中，L包含式II。在一些实施方案中，L是式II。
其中，R1和R2独立地是H、0H、烷氧基、烷氧基烷氧基、酰氧基、碳酸酯基团、氨基甲酸酯 基团或卤素；R3是H，或者R3连同与R3结合的氧原子一起形成醚、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯；R4是H，或者R4连同与R4结合的氧原子一起形成醚、酯、碳酸酯或氨基甲酸酯；并且，X连同 与X结合的氧原子一起形成磷酸二酯、硫代磷酸二酯、硼烷磷酸二酯或甲基膦酸二酯。
[0049] 5-氮杂胞嘧啶基团可以连接到L的任一端，且鸟嘌呤基团可以连接到L的另一端， 只要该化合物含有一个5-氮杂胞嘧啶基团和一个鸟嘌呤基团即可。因此，可以通过交换 5_氮杂胞嘧啶基团和鸟嘌呤基团的连接性，来制备结构异构体。
[0050] R1和R2可以相同或不同。在一些实施方案中，R1和R2独立地是H、0H、OMe、OEt、 OPh、0CH2CH20Me、0CH2CH20Et、0CH2CH20Bn、OBn、OAc、OBz、OCOOMe、OCOOEt、OCOOBn、0C0NH2、 0C0NMe2、0C0NEt2、0C0NBn2、0C0NHMe、0C0NHEt、0C0NHBn、F、Cl、Br或I。在一些实施方案中， 尺1和1?2独立地是11、011、(116、(^丨、001 2012(116、(》11或？。在一些实施方案中，1?1和1?2独立地 是H或0H。在一些实施方案中，R1和R2是H。在一些实施方案中，R1和R2是0H。
[0051] R3和R4可以相同或不同。
[0052] 在一些实施方案中，R3是H，或者R3连同与R3结合的氧原子一起形成0H、OMe、OEt、 OPh、0CH2CH20Me、0CH2CH20Et、0CH2CH20Bn、OBn、OAc、OBz、OCOOMe、OCOOEt、OCOOBn、0C0NH2、 0C0NMe2、0C0NEt2、0C0NBn2、0C0NHMe、0C0NHEt或OCONHBn。在一些实施方案中，R3是H，或者 R3连同与R3结合的氧原子一起形成〇H、OMe、OEt、0CH2CH20Me或OBn。在一些实施方案中， R3是H。
[0053] 在一些实施方案中，R4是H，或者R4连同与R4结合的氧原子一起形成0H、OMe、OEt、 OPh、0CH2CH20Me、0CH2CH20Et、0CH2CH20Bn、OBn、OAc、OBz、OCOOMe、OCOOEt、OCOOBn、0C0NH2、 0C0NMe2、0C0NEt2、0C0NBn2、0C0NHMe、0C0NHEt或OCONHBn。在一些实施方案中，R4是H，或者 R4连同与R4结合的氧原子一起形成〇H、OMe、OEt、0CH2CH20Me或OBn。在一些实施方案中， R4是H。
[0054] 在一些实施方案中，X是P(0) 0H、P(0)SH、P( - 0)BH3或P(0)Me。在一些实施方 案中，X是P(0)0H。在一些实施方案中，X连同与X结合的氧原子一起形成磷酸二酯。
[0055] 烷基的非限制性实例包括直链、支链和环状烷基。直链烷基的非限制实例包括甲 基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。
[0056] 支链烷基包括被任意数目的烷基取代的任何直链烷基。支链烷基的非限制性实例 包括异丙基、异丁基、仲丁基和叔丁基。
[0057] 环状烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。 环状烷基也包括稠合的、桥连的和螺环-双环，以及更高级的稠合的、桥连的和螺环体系。 环状烷基可以被任意数目的直链或支链烷基取代。
[0058] 卤代烷基可以是被任意数目的卤素原子（例如，氟、氯、溴和碘原子）取代的任何 烷基。
[0059] 烷氧基例如可以是被任何烷基取代的氧原子。醚或醚基团包含烷氧基。烷氧基的 非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和异丁氧基。
[0060] 烷氧基烷氧基例如可以是在任意位置被任意烷氧基所取代的烷氧基。烷氧基烧氧 基的非限制性实例包括甲氧乙氧基、乙氧乙氧基、乙氧乙氧乙氧基、由任何顺序的甘醇二甲 醚衍生的基团和由聚乙二醇衍生的基团。
[0061] 芳基基团可以是杂环或非杂环的。芳基可以是单环或多