用于刺激骨生长的组合物的制作方法
【专利说明】
[0001]本发明的
技术领域
[0002]本发明涉及组合物在维持骨和/或软骨健康或者预防、缓解和/或治疗骨和/或软骨病症中的应用。
[0003]发明背景
[0004]骨量在整个生命期间都在发展，并且受到遗传、机械和激素机制的调节。骨矿物质获取发生在儿童期间且在20岁左右达到骨量峰值。在此期间，骨形成超过骨吸收。在生命后期且特别是在绝经前后或在老年人群中，骨量和骨质量由于具有过度骨吸收的较高的骨转换而受损，导致骨量、微结构、结构和强度逐步损失。
[0005]为了维持骨，重要的是恢复骨形成与骨吸收之间的平衡。这种骨重建过程在牵涉骨形成细胞(成骨细胞)与骨吸收细胞(破骨细胞)之间的紧密相互作用的骨细胞水平上进行调节。
[0006]在健康成年人男性或动物中，成骨细胞和破骨细胞的联合作用使得能够随时间推移维持骨量，同时确保通过骨的吸收和从头合成来重建骨组织。
[0007]在健康成年人中，破骨细胞和成骨细胞的形成速率使得在骨形成与骨吸收之间取得平衡。然而，在骨质疏松个体中，产生了骨重建过程的失衡，这在骨丢失以比骨形成速率更快的速率进行时达到高峰。尽管大多数个体在他们变老时存在一定程度的这种失衡，但是这种失衡在骨质疏松个体中严重得多并且在较年轻时发生。
[0008]因此，在男性和其它哺乳动物中，很多种病症涉及骨吸收和骨形成的异常代谢，导致代谢或骨重建失衡。
[0009]此外，在男性和动物中，存在很多种以需要增加骨形成为特征的病症。例如，在骨折情况中，必须刺激骨生长以加速骨的完全修复。这种需求也存在于牙周疾病、骨的转移性疾病、溶骨性疾病和需要结缔组织修复的病症，例如用于愈合或再生软骨缺损或创伤。在原发性和继发性甲状旁腺功能亢进中以及在糖尿病相关性骨质疏松症和糖皮质激素相关性骨质疏松症的情况中也需要刺激骨生长。
[0010]尽管当今存在大量用于刺激骨形成和/或抑制骨吸收的活性化合物，但是仍然持续地需要新的活性化合物，特别是因为现有治疗的成功有限。
[0011]另一种关节病症是骨关节炎(osteoarthrtis)，它是老年群体的首要致残原因。目前，不存在用于骨关节炎的治愈手段，并且疗法仅仅是旨在改善症状的缓解疗法。
[0012]发曰月概沐
[0013]申请人已经令人惊奇地证明:维生素D与羟基酪醇和/或齐墩果苷(为来源于橄榄树的多酚)的组合能够协同发挥作用以刺激骨形成和/或软骨合成代谢。通过刺激成骨细胞分化和活动和胶原蛋白合成，该组合能够刺激骨形成和软骨合成代谢。维生素D与齐墩果苷或羟基酪醇中一者或两者的组合的添加导致刺激成骨细胞，使得其在强度上增强和在时间上向前(即，引起刺激比各组分自身引起的刺激早)。在本申请的上下文中，添加维生素D的作用被称为“增强”多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的作用。
[0014]因此，在第一方面，本发明涉及用于增强一种或多种多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的作用的包含维生素D的组合物。
[0015]在另一方面，本发明涉及包含维生素D和一种或多种多酚的组合物，其用于增强所述多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的刺激。
[0016]在另一方面，本发明涉及本发明的用于应用的组合物，其包含维生素D和一种或多种多酚，每日施用至少I次，持续至少2个月、优选至少3个月的时间期。
[0017]在另一方面，本发明涉及包含维生素D和一种或多种多酚的药物组合物。
[0018]在另一方面，本发明涉及治疗、缓解和/或预防骨和/或软骨病症的方法，该方法包括给需要其的个体施用有效量的维生素D与一种或多种多酚的组合。
[0019]附图简沐
[0020]在所有附图中，1，25 (OH) 2D3 = 10 9M I, 25 二羟基维生素D3 ；0LP = I μΜ齐墩果苷；HTy = I μΜ羟基酪醇；C+ =优化培养基用作阳性对照；C-=最小培养基用作阴性对照。
[0021]数据表示为平均值土SEM(重复3次)。统计学:克-瓦二氏(Kruskal Wallis)检验，然后是曼-怀二氏(Mann Whitney) U 检验(双尾)，*ρ〈0.05 ;**ρ〈0.01 ;***ρ〈0.001，对比于阴性对照(C-)。
[0022]图1显示了响应于1，25 (OH) 2D30LP和HTy组合的刺激的培养9天后的成骨细胞的胶原蛋白合成，通过相对于每毫克总蛋白质而言的所产生的胶原蛋白的微克数测定。
[0023]图2显示了响应于I，25 (OH) 2D3、OLP和HTy组合的培养9天后的碱性磷酸酶(ALP)活性，由微摩尔ALP/毫克蛋白质/小时表示。
[0024]图3显示了在5、9、12或15天处理后在1，25 (OH) 2D3的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0025]图4Α显示了在5、9、12或15天处理后在齐墩果苷的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0026]图4Β显示了在5、9、12或15天处理后在1，25 (OH) 2D3和齐墩果苷的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0027]图5Α显示了在5、9、12或15天处理后在羟基酪醇的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0028]图5Β显示了在5、9、12或15天处理后在1，25 (OH) 2D3和羟基酪醇的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0029]图6Α显示了在5、9、12或15天处理后在齐墩果苷和羟基酪醇的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0030]图6Β显示了在5、9、12或15天处理后在1，25 (OH) 2D3、齐墩果苷和羟基酪醇的存在下培养的成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。
[0031]发明详述
[0032]定义
[0033]在更详细地讨论本发明之前，首先定义如下术语和规定:
[0034]在本发明的上下文中，提及的百分比是重量/重量百分比，另有指示除外。
[0035]“X和/或Y”中所用的术语“和/或”应解释为“X”或“Y”或“X和Y”。
[0036]本文所用的数值范围意欲包括该范围内的每一个数值和数值子集，无论是否特别公开。而且，这些数值范围应当被视为给涉及该范围中的任意数值或数值子集的权利要求提供了支持。例如，公开1-10应被视为支持1-8、3-7、4-9、3.6-4.6、3.5-9.9的范围，以此类推。
[0037]本发明对单数特征或限定的称谓应当包括相应的复数特征或限定，反之亦然，除非所述称谓的上下文有相反的具体说明或清楚暗指。
[0038]除非另有定义，否则本文所用的全部技术和科学术语具有与本领域技术人员通常理解相同的含义。
[0039]用于应用的包含维生素D的组合物
[0040]之前已经证明多酸对炎症和骨代谢具有有益作用。
[0041]发明人已经出人意料地证明:维生素D与一种或多种多酚如HT和OLP中的一种或多种的组合增强这些多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的刺激作用(参见实施例2及其讨论和图2) ο
[0042]〃刺激骨形成和/或软骨合成代谢〃指维生素D、齐墩果苷和羟基酪醇的组合刺激成骨细胞活性且由此促进骨和/或软骨的蛋白质网络合成的能力。这导致矿物质、特别是钙沉积在这些蛋白质网络中，即刺激骨矿化(也称作骨形成)和刺激软骨合成代谢。
[0043]“增强多酚的刺激作用”指一种或多种多酚的刺激作用在强度上增强和在时间上向前(即，引起刺激比没有维生素D存在的情况早)。
[0044]因此，在第一方面，本发明涉及用于增强一种或多种多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的作用的包含维生素D的组合物。多酚可以例如是齐墩果苷和羟基酪醇中的一种或多种。
[0045]维生素D可以以任意适宜的形式存在。维生素D的各种有用形式是可获得的，包括例如胆钙化醇(D3)、麦角骨化醇(D2)及它们的生物活性代谢物和前体如l-α -羟基维生素D、25-羟基维生素D、I, 25- 二羟基维生素D等。
[0046]在本发明的该方面的一个实施方案中，维生素D可以与一种或多种多酚的提供同时提供或依次提供。维生素D可以与一种或多种多酚在同一组合物中提供，或者可以在单独组合物中提供，例如在套件药盒或一系列相互作用产品中提供。如果所述维生素D和所述一种或多种多酚存在于一种或多种单独组合物中，则它们可以在施用前进行混合或者可以同时或依次施用。
[0047]维生素D的增强作用在与单一多酚的组合中、例如在与齐墩果苷或羟基酪醇的组合中已经是清楚的。
[0048]当指定将维生素D与齐墩果苷和羟基酪醇二者组合时，这种增强作用甚至进一步增加。
[0049]在另一方面，本发明涉及维生素D在制备用于增强一种或多种多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的作用的组合物或药剂中的应用。
[0050]用于应用的组合物
[0051]在另一方面，本发明涉及包含维生素D和一种或多种多酚的组合物，其用于增强所述多酚对骨形成和/或软骨合成代谢的刺激。
[0052]多酚可以例如是橄榄多酚，例如选自齐墩果苷、女贞甙(Iigstroside)、羟基酪醇和或酪醇的多酚。在优选的实施方案中，橄榄多酚包含齐墩果苷和羟基酪醇中的一种或多种，甚至更优选多酚包含齐墩果苷和羟基酪醇。
[0053]本发明的组合物可以例如包含800-1200IU/单份量的量的维生素D。所述一种或多种多酸可以各自以0.0lmg至约lg、优选0.1mg至lg、甚至更优选Img至约Ig/单份量的量存在。
[0054]当然，实现治疗作用所需的本发明的组合物的有效量将随特定的组合物、施用途经、接受者的年龄和状况以及待治疗的具体病症或疾病而不同。
[0055]作为示例，补充有维生素D、羟基酪醇和齐墩果苷的组合的RTD (即饮产品)将含有0.0lmg至500mg的各活性成分/单份量。
[0056]在一个实施方案中，本发明的组合物包含例如800-1200IU维生素D，例如800-1100、800-1000、850-1000、850-950、900-950，例如约 900 或约 950IU。在另外的实施方案中，本发明的组合物除维生素D外还包含0.0lmg-1g的量