一种精准快速无创式大鼠滴注方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及临床医学和动物实验领域，具体地说，涉及一种精准快速无创式大鼠 滴注方法。
【背景技术】
[0002]呼吸道暴露是临床医学、毒理学、环境医学等领域研究中最为重要的暴露途径之 一，随着近年各学科研究的飞速发展，经呼吸道给药、染毒、呼吸监测的动物实验的需求呈 上升趋势，大鼠是国际通用的标准化的实验动物，在多种医学、生物学试验研究中广泛应 用，在大鼠开胸手术需呼吸机辅助呼吸、呼吸功能检测或气管内给药等动物实验中，顺利的 大鼠气管插管是实验成败的前提，目前，常用的插管方法有:颈部切口插管法(邱永明，田 鑫，大鼠简易的气管插管方法[J].上海第二医科大学学报，2001，21(6):567)，颈部切口钢 丝引导插管法(陶运明，莫绪明，戚继荣等，一种新的大鼠气管插管方法[J]，中华实验外科 杂志，2004,21(4)):504;Weksler B，Ng B.Lenert J.A simplified method for endotrocheal intubation in the rat[J].Journal of Applied Physiology.1994.76 (4):1823)，盲插法，内窥镜辅助插管法(ClaryEM·0HalloranEK，delaFuente·SG·et aI.Videonendoscopic endortacheal intubation of the rat[J].Lab Anim,2004.38
[2] :158)，经口明视插管法和经颈部透照气管插管法(王响英，吴淑燕，李苏安，等，大鼠直 视气管插管方法[J].上海实验动物科学，2004,24(2): 107)等。
[0003] 可将气管滴注法分为暴露式和非暴露式两种，暴露式即通过手术将大鼠气管暴露 出来，切口再进行插管;非暴露式主要不需要暴露气管，主要是通过口腔借助透射镜、喉镜 等辅助工具，利用冷光源找到气管，再用导管插入气管进行滴注。以往的暴露式气管滴注需 要切开大鼠颈部的皮肤和肌肉以暴露气管，再把微样进样器插入气管，故实验的精确性得 到了保证，但是尖头的微样进样器容易引起大鼠呼吸道损伤，气管切开后插管虽快速简便， 但对动物机体伤害比较大。组织损伤及术后的感染都会影响术后大鼠机体的恢复，增加了 非实验因素对实验结果的影响。非暴露式气管滴注是采用磨钝的静脉留置针或穿刺针进行 插管，虽然具有无创性的优点，但因为这些插管针往往和普通注射器匹配，而普通注射器的 精确度却不如微样进样器，且非暴露式气管滴注方法难以兼顾无创性和精确性。研究显示， 鼻腔滴注可以达到呼吸道给药或染毒的目的，但尚没有相关的研究对其进行评价。
[0004] 近年来，呼吸机辅助通气技术开始应用于啮齿类动物，为心胸外科、麻醉科、药学 等专业的动物模型研究提供了呼吸支持手段。快速而有效的气管插管是应用辅助通气技术 的前提，以往的暴露式气管滴注需要切开大鼠颈部的皮肤和肌肉以暴露气管，再将微样进 样器插入气管，故实验的精确性得到了保证，但是尖头的微样进样器容易引起大鼠呼吸道 损伤，气管切开后插管虽快速简便，但对动物机体伤害比较大。组织损伤及术后的感染都会 影响术后大鼠机体的恢复，增加了非实验因素对实验结果的影响。非暴露式气管滴注是采 用磨钝的静脉留置针或穿刺针进行插管，虽然具有无创性的优点，但因为这些插管针往往 和普通注射器匹配，而普通注射器的精确度却不如微样进样器。因此，有创的插管方法会对 气管及咽喉部周围组织造成损伤，从而影响插管的重复进行，进而影响整个实验的结果;而 采用直视下导引钢丝引导插管(VLGIT)法，虽然为无创式气管滴注，但是滴注操作，每只动 物所用时间长;滴注量尚不精确，并且插管操作同样会增加小鼠的痛苦与不适。
【发明内容】
[0005] 本发明鉴于现有的气管滴注法中存在的缺陷和不足，为保证大鼠滴注能达到快 速、精准、无创和成活率高等效果，从气管滴注的设备、麻醉、操作步骤等方面入手进行革新 完善，提供一种精准快速无创的大鼠滴注方法。
[0006] 为了实现本发明目的，本发明的一种精准快速无创式大鼠滴注方法，所述方法是 在大鼠用乙醚麻醉后，将其悬挂在铁架台上，用包缠纱布的镊子将大鼠舌头夹住拉出口腔 之外，在喉镜照射下找到声门，然后捏住大鼠鼻子，使大鼠用嘴呼吸，随着声门开合，将已吸 好滴注药物的移液枪快速插入声门，将药物滴注至气管;退出移液枪，继续捏鼻3_8s，使其 通过呼吸自动将滴注药物吸入肺部，待听到湿啰音，表明滴注成功。
[0007] 滴注结束后，将大鼠继续悬挂在铁架台上5-10S，保持身体自然垂落，缓慢转动大 鼠，使药物均匀分布到大鼠肺部。
[0008] 前述的方法，将大鼠置于带盖的麻醉罐(例如玻璃罐或透明塑料罐）中进行麻醉， 麻醉罐中放有蘸满乙醚的棉花或纱布。
[0009] 前述的方法，待大鼠用乙醚麻醉后，用细绳系住大鼠门牙，将其悬挂在铁架台上。
[0010] 优选地，每次滴注剂量控制在300μ1以内，滴注量在300μ1以上，可分为两次缓慢滴 注。
[0011] 本发明的目的还可以采用以下的技术措施来进一步实现。
[0012] 1、滴注前期准备
[0013] 将滴注中所需设备与仪器提前准备好，包括:铁架台、移液枪、枪头、小儿喉镜、细 铁丝或细绳、麻醉罐、无水乙醚、棉花或者纱布、计时器。
[0014] 2、麻醉罐的制作：为能够直观地观察到大鼠麻醉的效果，选用一透明玻璃或者塑 料罐，根据大鼠体型选择麻醉罐大小。将棉花或纱布放入罐中，最少将麻醉罐底部覆盖，然 后，将无水乙醚注入罐中，为避免大鼠身体沾染太多的乙醚，注入量以棉花或纱布不滴出乙 醚为适。一般大鼠在5-10s内能够达到完全麻醉的效果，操作多次后，可视情况添加无水乙 醚，以保证麻醉效率。
[0015] 3、简易手术台的制作：取铁架台一个，将铁夹或铁圈上系一根能够承受大鼠重量 的细绳，升高铁夹或铁圈的高度，至能使上门牙挂在绳上的大鼠能伸展开。
[0016] 4、大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠，快速密封至麻醉罐中，盖紧麻醉罐，大鼠在5-10s 内被麻醉，麻醉标准为倒下不动，呼吸较慢，似熟睡状，快速从罐中取除大鼠，将大鼠上门牙 悬挂在铁架台的细绳上，使其自然垂落。
[0017] 5、定位气管:按照步骤4操作后，一人右手用包一层薄纱布的镊子将大鼠舌头夹住 拉出口腔之外，用左手用拇指、食指轻轻顺向拉出舌头，右手放下镊子，拿小儿喉镜从口腔 顺着舌根照射，能清楚的看到大鼠的声门随着呼吸如鱼嘴般开启与闭合。
[0018] 6、药物滴注:按步骤5操作后，另一人左手捏住大鼠鼻子，大鼠用嘴呼吸，可见声门 一张一闭，右手持已吸好滴注药物的移液枪快速插入声门，将药物滴注至气管。退出移液 枪，左手继续捏鼻3-8s，使其通过呼吸主动将滴注药物吸入肺部，若听到湿啰音，则说明滴 注成功。
[0019] 7、药物均匀分布:大鼠滴注结束后，继续悬挂在细绳上5-10s，缓慢转动大鼠，使药 物均匀分布到大鼠肺部。
[0020] 本发明提供的大鼠滴注方法具有无创、无痛苦、经济、快捷、精准等特点，相比于其 他滴注方式具有良好的效果和优点：
[0021] (一)经过大量实践证明，本方法成功率高，测试中对25只SD大鼠进行了5次造模， 对大鼠滴注累计120次，成功116次，成功率高达96.67%。
[0022] (二)本发明的麻醉方法属于无创式、无后遗症式麻醉，此前麻醉方式基本上是以 戊巴比妥钠或水合氯醛结合阿托品，需要两次注射，增加实验动物的痛苦，同时，也将使注 射误伤大鼠几率提高，并且，该药物的麻醉效果不容易控制，麻醉过浅大鼠容易在手术中清 醒挣扎造成误伤，太深大鼠呼吸速率太低，滴注药物后容易室息或呛死。如果麻醉中没有结 合使用阿托品，大鼠经戊巴比妥钠或水合氯醛后，气管内产生较多的粘液，也会造成室息的 危险。本发明采用乙醚结合自制麻醉罐能够避免上述弊端，达到无创、无后遗症的理想麻醉 效果。
[0023] (三)本发明的滴注属于无创伤安全式滴注，以往的滴注方式，暴露式的气管插管 法和颈部气管切开插管法(TTIT)直接切开皮肤、暴露气管，手术中给大鼠造成一定的机械 创伤，术后也存在感染风险，而非暴露式的直视下导引钢丝引导插管法(VLGIT)，同样需要 硬质钢丝导入插管，存在戳伤大鼠气管的可能。
[0024] (四）本发明的滴注方法属于快速、精准式滴注，以往的暴露式和非暴露式，因气管 暴露、气管缝合，导管的插入等繁琐的步骤，消耗大量的时间，一般每只大鼠滴注时间需要 40s-300s，本发明滴注时间只需15s-30s，以往方法大部分采用注射器或进样器，外加导管 的辅助，增加了药物量的消耗，本发明直接采用移液枪一步到位、操作快捷方便。
[0025] (五)本发明还具有所需器材简易，容易获取、制作简单、经济合理;滴注过程中不 需要