荆三棱有效部位在制备治疗脑出血药物中的应用

荆三棱有效部位在制备治疗脑出血药物中的应用
【专利摘要】本发明属于生物医药领域，涉及荆三棱有效部位在制备治疗脑出血药物中的应用。本发明得到的荆三棱有效部位能明显改善脑出血小鼠的神经功能缺损，降低脑水肿含量，下调脑组织中炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达。
【专利说明】
荆三棱有效部位在制备治疗脑出血药物中的应用
技术领域
[0001]本发明涉医药技术领域，具体而言，涉及荆三棱块茎有效部位治疗脑出血的医药用途。
【背景技术】
[0002]脑出血(ICH)占中风的10%?15%，具有高死亡率和高发病率，病人在ICH发生后的一个月内的死亡率接近40%。随着对ICH发病机制研究的深入开展，ICH的研究取得了明显进展，已经证实ICH后进入脑组织的血液及其代谢产物导致的炎症损伤是ICH后神经功能缺损的最主要原因，炎症在ICH的病理进程中起着关键作用。在ICH诱导的炎症损伤中，小胶质细胞的激活起着非常重要的作用。当病人发生ICH时，血液中的成分包括红细胞、凝血酶、纤维蛋白原等和红细胞溶解产生的血红蛋白、亚铁血红素等迅速进入脑组织。其中红细胞作用于CD36，凝血酶与蛋白酶活化受体(PAR)结合而激活小胶质细胞，使小胶质细胞释放各种细胞因子、趋化因子、自由基等以引起炎症反应；纤维蛋白原、血红蛋白和亚铁血红素则通过与TLRgg合激活小胶质细胞，引起炎症信号级联反应，产生大量炎性因子；同时，血红蛋白还可通过激活炎症细胞TLR2/TLR4形成新型二聚体，进一步加重ICH后的炎症损伤。随着ICH的持续发展，Fas信号通路和HtrA2信号通路被激活，最终导致细胞凋亡蛋白酶(caspases)活化，使DNA破碎和细胞凋亡。死亡的细胞释放许多危险相关分子模式(DAMPs)信号分子，被Toll样受体(TLRs)识别，进一步激活炎症信号级联反应，产生炎症细胞因子，加重脑损伤。因此，抗炎治疗可能成为防治脑出血后脑损伤的有效措施。
[0003]荆三棱(Scirpus yagara Ohwi)为莎草科薦草属植物，其干燥块莖在唐代就作为中药三棱使用，是三棱最早使用的品种。其在我国的东北、浙江、江苏、安徽等地区均有分布。荆三棱，性平、味苦，入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛功能，多用于月经不调，积聚结块等病症，是临床常用的活血化瘀中药。目前已从荆三棱块茎中分离得到有黄酮类、苯丙素类、二苯乙稀类、4'-苯基异香豆素类、酸酸类等化合物(Kang kun，et al.Nat Prod ResDev, 2008, 20:639_640，649 ;张铁军，等.现代药物与临床，2009，24 (I):36-38 ;崔晓东，等.中国药学学报，2012，47 (24):1987-1989 ;Qiaoli Liang, et al.Fitoterapia，2013，84(1):170-173)。近些年国内外学者发现部分二苯乙烯类、4'-苯基异香豆素类和酚酸类化合物具有抗炎、抗HIV等方面的药理作用(Li 0u, et al.B1l.Pharm.Bull, 2003, 26 (11):1511-1516 ；Gu-xunYang, et al.Planta Med，2005，71:569-571)。荆三棱有效部位(PingLi, et al.Journal of Ethnopharmacology，2014，158:331-337)可提高胺毒性休克小鼠的生存率，抑制体内炎性因子的释放，降低肺组织损伤；其主要成分类型为异香豆素类、酚酸类、二苯乙炔类，并且含量在50%以上。迄今，尚未见到有关荆三棱有效部位具有治疗脑出血的报道。

【发明内容】

[0004]本发明的目的是提供荆三棱有效部位在制备治疗脑出血药物中的应用。
[0005]本发明的目的在于提供了一种用于治疗脑出血的药物或药物组合物。
[0006]本发明中荆三棱有效部位能明显减少ICH小鼠的神经功能缺损评分，降低脑水肿含量，下调脑组织中炎性因子IL-6、IL-1 β和TNF- α的表达。
[0007]本发明中的荆三棱有效部位的药品含有药剂学可接受的载体，包括赋形剂和辅料，剂型可以是任何一种药剂学上的剂型。
【附图说明】
[0008]图1.各组不同时间脑出血小鼠神经功能缺损评分(结果以mean土SEM表示，“**ρ
<0.01”是与ICH组比较)。
[0009]图2.脑出血小鼠脑水肿含量(结果以mean土SEM表示，“*ρ < 0.05，**ρ < 0.01”是与ICH组比较)。
[0010]图3.荆三棱有效部位对血肿周围组织中炎性细胞因子的影响(Α图是对IL-6的影响，B图是对IL-Ιβ的影响，C图是对TNF-α的影响。结果以mean土SEM表示，“*p
<0.05，*p < 0.01” 是与 ICH 组比较)。
【具体实施方式】
[0011]以下通过具体实施例对本发明的内容作进一步详细的说明，但这些实施例绝不应该被理解为对本发明的限制。本领域的技术人员在不脱离本发明上述思想情况下，对本发明实施所做的任何变动，均包含在本发明之内。
[0012]实施例1荆三棱有效部位的制备
[0013]取荆三棱干燥块茎20kg，粉碎，用3倍量85 %的乙醇水溶液浸泡I天后，在90 °C加热回流提取，每次提取时间为2h，总共提取2次，合并2次提取液。将得到的提取液减压浓缩至无醇味，浓缩液加1.5倍水稀释成悬浮液，再分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯部位萃取液合并浓缩得浸膏90.5g。将乙酸乙酯部位浸膏进行正相硅胶(100-200目)柱层析，然后分别使用不同比例的石油醚与乙酸乙酯(石油醚和乙酸乙酯的体积比分别为100: 0,100: 1,100: 2，100: 4，100: 6，100: 8，100: 10，100: 12)按极性从小到大依次进行梯度洗脱。合并石油醚和乙酸乙酯体积比为100: UlOO: 10和100: 12的洗脱溶剂的洗脱液，用旋转蒸发仪在60°c减压浓缩，即得荆三棱有效部位14.0g。
[0014]实施实例2荆三棱有效部位(AF)对脑出血(ICH)小鼠脑损伤的保护作用
[0015]I实验材料:荆三棱块茎，购自浙江磐安，经南京中医药大学药学院吴启南教授鉴定为莎草科薦草属植物荆三棱；DW-2000脑立体定位仪，购自成都泰盟软件有限公司；C57BL/6J小鼠，SPF级，6?8周龄，体重18?22g，购自上海杰思捷实验动物有限公司；IL-6、IL-1 β、TNF-α试剂盒，美国eB1science公司生产；25 μ L微量注射器，上海光正医疗仪器有限公司生产。
[0016]2实验方法
[0017]2.1小鼠脑出血模型造模方法[6]
[0018]小鼠用4%水合氯醛麻醉(0.1mL.1g ')后固定在脑立体定位仪上，取尾动脉血25 μ L，用注射栗(2yL*min ')注射至左脑纹状体(小鼠前囟向前0.2_、旁开2.3_、深
3.5mm)。sham组小鼠注射25 μ L无菌生理盐水。
[0019]2.2分组与给药
[0020]实验分为sham 组、ICH 组、300mg.kg 1 组和 600mg.kg 1 组(AF 用 0.5 % CMC-Na 溶液配制)，编号。各组做脑出血手术，术后2小时，灌胃相应药物，Stime.d1，每次相隔12h。[0021 ] 2.3脑出血小鼠神经功能缺损评分(NDS)
[0022]将24只小鼠随机分为4组。各组术后连续给药4d，并在术后的第ld、第3d、第5d参照文献[7]对各组进行神经功能缺损评分(总分28分)。
[0023]2.4脑水肿含量测定
[0024]将24只小鼠随机分为4组。各组术后连续给药2d，并在术后第3d，将小鼠麻醉后取出脑组织，分离小脑，然后将大脑组织冠状位切成3_厚的组织片，分别取血肿同侧大脑皮层、基底节区脑组织及血肿对侧大脑皮层、基底节区脑组织，称取各部分组织的湿重，然后置于100°C烤箱24小时后分别秤取干重。脑水肿含量计算方法:(湿重-干重)/湿重 X100%o
[0025]2.5ELISA法测定脑组织中炎性因子的含量
[0026]将63只小鼠随机分为4组，其中sham组9只、ICH组18只、300mg.kg 1组18只、600mg.kg 1组18只。各组术后连续给药4d，并在术后第ld、第3d、第5d取血肿同侧脑组织，剃除血肿，剩余组织称重，加入组织重量九倍体积的PBS匀浆，取上清液，参照ELISA试剂盒说明书检测上清液中IL-6、IL-1 β和TNF-α的含量。
[0027]2.6统计分析
[0028]采用GraphPad Prism 5软件进行统计分析，数据以mean土SEM表示，两两均数比较使用学生t检验，P < 0.05认为具有显著性差异。
[0029]3 结果
[0030]3.1AF对脑出血小鼠神经功能缺损的影响
[0031]神经功能缺损评分是用来评价脑出血严重性的非常重要的指标。从图1可以看出，ICH组的NDS显著高于sham组(P < 0.01)，说明造模是成功的；第ld、第3d和第5d，300mg.kg 1组和600mg.kg 1组均能显著降低NDS(p < 0.01)，表明脑出血小鼠灌胃AF后能明显改善神经功能缺损。
[0032]3.2AF对脑出血小鼠脑水肿含量的影响
[0033]图2反映了脑出血小鼠在灌胃AF后脑水肿含量的变化情况。从图中可知，300mg.kg 1组和600mg.kg 1组与ICH组相比，其血肿对侧大脑皮层和基底节区脑组织以及小脑水肿含量均没有显著变化；而血肿同侧大脑皮层和基底节区脑组织水肿含量显著下降，其中300mg.kg 1AF使水肿含量分别下降了 2.74%和3.32%,600mg.kg 1AF分别下降了 2.79%和3.84%，两剂量组之间无显著差异。
[0034]3.3AF对脑出血小鼠脑组织中炎性细胞因子表达的影响
[0035]采用ELISA法检测了炎症因子IL_6、IL-1 β和TNF- α在脑出血小鼠脑组织中的含量变化。由图3中sham组和ICH组可以看出，IL_6、IL-1 β和TNF-α在脑出血小鼠中的表达水平显著增高(P < 0.01)，并且在第3d达到最大值。与ICH组比较，第Id和第3d，300mg.kg 1 和 600mg.kg 1AF 均能显著抑制 IL-6、IL-1 β 和 TNF- α 的表达水平(ρ < 0.05或P < 0.01);第Id,与ICH组相比，300mg.kg 1组和600mg.kg 1组小鼠脑组织IL-6含量降低了 12.06%和21.64%，IL-1 β含量降低了 12.10%和35.02%，TNF-α含量降低了22.04%和26.03% ;第3d，与ICH组相比，300mg *kg 1组和600mg.kg 1组小鼠脑组织IL-6含量降低了 16.26%和30.35%，IL-1 β含量降低了 26.33%和35.99%，TNF-α含量降低了 21.07%和31.02%。而第5d，300mg.kg 1组和600mg.kg 1组小鼠脑组织只有IL-6表达明显降低(P < 0.05或P < 0.01)。
【主权项】
1.一种中药提取物的新用途，其特征在于:荆三棱有效部位治疗脑出血的新用途。2.根据权利要求1所述的一种中药提取物的新用途，其特征在于:用于治疗脑出血的荆三棱有效部位的药物组合物。3.根据权利要求1-2所述的荆三棱有效部位，其特征是:选用荆三棱的块茎。
【文档编号】A61P9/10GK105878872SQ201510016293
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年1月8日
【发明人】梁侨丽, 刘杰, 张建芳, 东水华, 向燕茹
【申请人】南京中医药大学