治疗肝癌的中药制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗肝癌的中药制剂，该制剂由以下重量份数的原料药制成，瑞香狼毒60?80份，车前子5?10份，白茅根5?10份，冬凌草5?10份，党参3?6份，甘草2?4份。通过对有毒中药与解毒中药合理配伍，以及两次长时间煮沸水提取与乙醇沉淀相结合的制备方法，减轻了药物的毒性，提高了对肿瘤的治疗效果。制剂对肝癌细胞具有杀伤作用，能够抑制肝癌细胞的生长，延长肝癌荷瘤动物的生存时间。
【专利说明】
治疗肝癌的中药制剂及其制备方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及中药制剂，特别是一种治疗肝癌的中药制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 肝癌是诸多肿瘤中恶性程度最高的肿瘤之一，临床上对早期肝癌多采用手术治 疗，但术后复发率较高。对于晚期肝癌则在治疗上采取介入或消融术治疗为多。目前可用于 治疗肝癌的药物很少，而且治疗效果较差，到目前为止还没有一种对肝癌有特效的药物。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种治疗肝癌的中药制剂，该制剂对肝癌细胞具 有杀伤作用，能够抑制肝癌细胞的生长，延长肝癌荷瘤动物的生存时间。
[0004] 为解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是： 一种治疗肝癌的中药制剂，所述制剂由以下重量份数的原料药制成，瑞香狼毒60-80 份，车前子5-10份，白茅根5-10份，冬凌草5-10份，党参3-6份，甘草2-4份。
[0005] 优选地，所述的制剂由以下重量份数的原料药制成，瑞香狼毒70份，车前子8份，白 茅根7份，冬凌草6份，党参5份，甘草3份。
[0006] 本发明依据传统中医以毒攻毒的理念，选用有毒中药瑞香科植物瑞香狼毒 (Stellera chamaejasme L.)的根为主药，配以具有清热解毒，利尿通淋、凉血止血的中药 车前子、白茅根，促进毒性物质通过尿液排出体外，以降低主药瑞香狼毒的毒性作用。同时 在方中加入健脾益肺，养血生津的党参和具有清热解毒、活血止痛作用的冬凌草，以增强机 体的抵抗力，减轻毒性物质对机体的伤害。方中还加入了具有清热解毒、补脾益气、缓解药 物毒性的传统中药甘草，以缓解主药狼毒的毒性和烈性，使药物的作用更平和。
[0007] 此外，本发明还提供以上中药制剂的制备方法。包括步骤，（1)按比例在所有原料 药加原料药总质量6-8倍质量的水加热煮沸提取100-150分钟，收集提取液;（2)残渣中再加 入原料药总质量5-6倍水，继续加热煮沸提取100-150分钟，收集提取液；（3)合并两次提取 液，浓缩至与原料药总质量相同的量；（4)浓缩液中加乙醇形成药液；（5)静置后过滤，滤液 浓缩干燥；（6)研磨干燥物成粉末，然后制成医学上可接受的制剂。
[0008] 优选地，步骤(1)和步骤(2)中水是去离子水。
[0009] 优选地，步骤(1)和步骤(2)中加热煮沸提取时间为120分钟。
[0010]优选地，步骤(1)加热煮沸提取前，先浸泡30分钟。
[0011] 优选地，步骤(3)，在90°C水浴浓缩。
[0012]优选地，步骤(4)中，乙醇的含量达到药液质量的60%。
[0013]优选地，步骤(5)中，滤液在90°C水浴蒸干。
[0014] 优选地，所述的医学上可接收的制剂是片剂、胶囊剂或药粉末加入灭菌注射用水， 60-80 °C水浴溶解后高温灭菌制成的药液。
[0015] 在制备过程中采用两次长时间的煮沸，使药物的毒性得到有效的降解，同时采用 了乙醇沉淀的方法将大部分杂质去掉，进一步降低了药物的毒性，使得其有效成分得以浓 缩保留。经实验证明，经过处理后的药物毒性得到了极大的降低，实验研究过程中没有观察 到因药物毒性导致的动物死亡，用药的安全性得到了保障。
[0016] 服用方法:本药物采用口服给药，对肿瘤细胞有显著的抑制作用。服用剂量按照体 重算，即0.033g/kg-0.067g/kg体重。连续服用1-2周后，停用1-2周，然后再按此方法服用。
[0017] 肝癌被称为癌中之王，恶性程度高，病情进展快，目前尚没有有效的治疗药物，是 肿瘤临床治疗的一个难题。本发明所用的瑞香狼毒为瑞香科植物瑞香狼毒的干燥根，该药 在民间主要作为杀虫剂，用于除四害。虽然有过对其提取物抗肿瘤研究的报导，但因其毒性 较大，均未进入实际临床应用。本发明根据中医以毒攻毒的理论，以瑞香狼毒为主药，加入 清热解毒，利水通淋，补脾益气，养血生津，缓解药物毒性的多味中药，组成复方中药制剂， 在制备工艺方面采用高温长时间提取加乙醇沉淀的方法，去除了其毒性及无用的杂质，只 应用其中最为精华的有效部分，取得了对肝癌动物模型的较好的疗效。低剂量组动物的平 均生存时间较模型组长，生命延长率达到了 34.98%，且统计学表明有显著性差异，表明药物 对肿瘤细胞起到了显著的抑制作用，这在肝癌的治疗上是一个有价值的进步。
【具体实施方式】
[0018] 实施例1 瑞香狼毒60克，车前子5克，白茅根5克，冬凌草5克，党参3克，甘草2克。根茎类药材切成 l-2mm厚的薄片。
[0019] 称取以上原料药置于容器中，加入8倍质量的水，浸泡30分钟后，加热煮沸提取 100分钟，收集提取液;残渣中再加入5倍水，继续加热煮沸提取150分钟，收集提取液;合并 两次收集的提取液于蒸发皿中，搅拌均匀，90°C水浴浓缩至与原料药总质量相同的量;在浓 缩液中加入95%乙醇形成药液，乙醇的含量达到药液质量的60%，置于三角瓶中，搅拌均匀，4 °C静置48小时;过滤药液，将滤液收集于蒸发皿中，90 °C水浴浓缩干燥;收集干燥物，用研钵 充分研磨成粉末，制成片剂。
[0020] 实施例2 瑞香狼毒80克，车前子10克，白茅根10克，冬凌草10克，党参6克，甘草4克。根茎类药材 切成l-2mm厚的薄片。
[0021] 称取以上原料药置于容器中，加入6倍质量的水，浸泡30分钟后，加热煮沸提取 150分钟，收集提取液;残渣中再加入6倍水，继续加热煮沸提取100分钟，收集提取液;合并 两次收集的提取液于蒸发皿中，搅拌均匀，90°C水浴浓缩至与原料药总质量相同的量;在浓 缩液中加入95%乙醇形成药液，乙醇的含量达到药液质量的60%，置于三角瓶中，搅拌均匀，4 °C静置48小时;过滤药液，将滤液收集于蒸发皿中，90 °C水浴浓缩干燥;收集干燥物，用研钵 充分研磨成粉末，制成胶囊剂。
[0022] 实施例3 瑞香狼毒70克，车前子8克，白茅根7克，冬凌草6克，党参5克，甘草3克。根茎类药材切成 l-2mm厚的薄片。称取以上原料药置于容器中，加入7倍质量的水，浸泡30分钟后，加热煮沸 提取120分钟，收集提取液;残渣中再加入6倍水，继续加热煮沸提取120分钟，收集提取液； 合并两次收集的提取液于蒸发皿中，搅拌均匀，90°C水浴浓缩至与原料药总质量相同的量； 在浓缩液中加入95%乙醇形成药液，乙醇的含量达到药液质量的60%，置于三角瓶中，搅拌均 匀，4 °C静置48小时;过滤药液，将滤液收集于蒸发皿中，90 °C水浴浓缩干燥;收集干燥物，用 研钵充分研磨成粉末，制成片剂。
[0023] 实施例4 瑞香狼毒60克，车前子10克，白茅根10克，冬凌草10克，党参6克，甘草4克。根茎类药材 切成l-2mm厚的薄片。
[0024] 称取以上原料药置于容器中，加入6倍质量的水，浸泡30分钟后，加热煮沸提取 120分钟，收集提取液； 残渣中再加入6倍水，继续加热煮沸提取120分钟，收集提取液； 合并两次收集的提取液于蒸发皿中，搅拌均匀，90°C水浴浓缩至与原料药总质量相同 的量； 在浓缩液中加入95%乙醇形成药液，乙醇的含量达到药液质量的60%，置于三角瓶中，搅 拌均匀，4°C静置48小时； 过滤药液，将滤液收集于蒸发皿中，90°C水浴浓缩干燥； 收集干燥物，用研钵充分研磨成粉末，加入灭菌注射用水，配制成与原料药材总质量相 同的药液，60 °C水浴溶解，高压灭菌，备用。
[0025] 实施例5 瑞香狼毒80克，车前子5克，白茅根5克，冬凌草5克，党参3克，甘草2克。根茎类药材切成 l-2mm厚的薄片。
[0026] 称取以上原料药置于容器中，加入8倍质量的水，浸泡30分钟后，加热煮沸提取 120分钟，收集提取液； 残渣中再加入5倍水，继续加热煮沸提取120分钟，收集提取液； 合并两次收集的提取液于蒸发皿中，搅拌均匀，90°C水浴浓缩至与原料药总质量相同 的量； 在浓缩液中加入95%乙醇形成药液，乙醇的含量达到药液质量的60%，置于三角瓶中，搅 拌均匀，4°C静置48小时； 过滤药液，将滤液收集于蒸发皿中，90°C水浴浓缩干燥； 收集干燥物，用研钵充分研磨成粉末，加入灭菌注射用水，配制成与原料药材总质量相 同的药液，60 °C水浴溶解，高压灭菌，备用。
[0027] 以实施例4得到的制剂给药，观察本发明复方中药提取物对小鼠肝癌H22移植肿瘤 的抑瘤作用。
[0028] 实验材料： 动物:清洁级KM小鼠。雌性，30只，体重20 ± 3g;细胞:小鼠肝癌H22细胞株，引自河北医 科大学实验动物中心;康莱特软胶囊:浙江康莱特药业有限公司生产。瑞香狼毒采自山西省 交城县柴录沟村，其余中药购自山西双鹤药业有限公司。
[0029] 实验方法： 复苏H22细胞，接种至昆明小鼠腹腔，7天后取腹水，调整细胞浓度至5 X 10%1，进行右 腋皮下接种，每只接种量为〇. 2ml。接种后将动物随机分组，每组6只。
[0030] 接种后24小时开始给药，连续给药12天。实验期间每隔2天动物称重一次，于末次 给药后24小时颈椎脱白法处死小鼠，剖取肿瘤，称重，比较各组动物肿瘤重量。
[0031]动物分组及给药情况如下： 1模型组:灌胃给予纯净水，0.4ml/只； 2阳性对照组:灌胃给予康莱特软胶囊，配制浓度0.07g/ml，灌胃体积0.2ml/10g; 3复方中药提取物高剂量组（以下简称高剂量组）:浓度lg(生药)/ml，灌胃体积0.2ml/ l〇g； 4复方中药提取物中剂量组（以下简称中剂量组）：浓度0.5g(生药）/ml，灌胃体积 0.2ml/10g； 5复方中药提取物低剂量组（以下简称低剂量组）：浓度0.25g(生药）/ml，灌胃体积 0.2ml/10g； 观察方法： 给药前动物称重，给药期间每隔两天称重并测量瘤体积，观察实验期间动物体重及瘤 体的变化;末次给药后24小时，颈椎脱白法处死小鼠，剖取肿瘤，称重，进行统计分析。
[0032] 瘤体积均数土标准差（cm3):
瘤重均数土标准差
与模型组比较，低剂量组P〈〇. 05，抑瘤率为62.29%。
[0033] 实验结果： 实验中所有接种的小鼠均有肿瘤形成，表明肿瘤模型的建立是成功的。
[0034] 从肿瘤重量来看，各用药组动物的肿瘤重量均小于模型组。各组肿瘤重量大小顺 序为:模型组 >康莱特组>高剂量组> 中剂量组>低剂量组。模型组肿瘤最大，造模成功； 阳性对照药未起到显著的抗瘤作用;低剂量组肿瘤在各组间是最小，抑瘤率达到62.29%，经 统计学处理，结果表明低剂量组与模型组比较，有显著性差异，表明复方中药提取物低剂量 给药可以有效抑制肝癌细胞的生长，起到抑制肿瘤的作用。
[0035] 从小鼠体重看，灌胃一次后，第二天康莱特组、高剂量组、中剂量组均出现体重小 幅度下降，随后体重逐步回升，分析可能与药物毒性有一定的相关性。但因本方中的主要成 分是一种有毒性的植物，所以在用药剂量上必须严格按照规定的剂量使用，不可过量使用 或者延长用药时间。
[0036] 以实施例5得到的制剂给药，观察本发明复方中药提取物对小鼠肝癌原位移植瘤 荷瘤小鼠的生命延长作用。
[0037] 实验材料： 实验动物:清洁级昆明小鼠，雄性，30只，体重20 ± 2g.细胞:小鼠肝癌H22细胞，购自河 北医科大学实验动物中心康莱特软胶囊:浙江康莱特药液有限公司生产。瑞香狼毒于采自 山西省交城县柴录沟村，其余中药购自山西双鹤药业有限公司。
[0038]实验方法： 复苏液氮中冻存的H22细胞，接种至小鼠腹腔内，取接种后7天腹水，PBS洗两次，离心， 调整细胞浓度为2 X107/ml，每只小鼠肝脏原位接种0.05ml(每只小鼠接种细胞量为IX 1〇6)。接种后将动物随机分为以下5组，于接种后24小时开始，分别灌胃给予相应的药液，连 续给药10天。
[0039] 1模型组:给予纯净水，0.4ml/只； 2阳性对照组:给予康莱特软胶囊，配制浓度0.07g/ml，灌胃体积0.2ml/10g; 3复方中药提取物高剂量组（以下简称高剂量组）：浓度lg生药/ml，灌胃体积0.2ml/ l〇g； 4复方中药提取物中剂量组（以下简称中剂量组）:浓度0.5g生药/ml，灌胃体积0.2ml/ l〇g； 5复方中药提取物低剂量组（以下简称低剂量组）:浓度0.25g生药/ml，灌胃体积0.2ml/ l〇g; 观察方法： 给药前动物称重，观察期间每隔两天称重1次，记录动物生存时间。观察期限为60天，生 存时间超过60天按60天计算，比较各组动物平均生存天数。
[0040] 实验结果： 经肝脏原位接种H22细胞后，所有小鼠均存活，在实验第5天，所有小鼠均出现腹水，体 重显著增加。随后精神逐渐萎靡，被毛杂乱，身体发凉，直至死亡。各组小鼠死亡后解剖，所 有小鼠肝脏上均有肿瘤。
[0041 ] 各组小鼠平均生存时间（均数土标准差）
经统计分析，与模型组及对照组比较，给药低剂量组有显著性差异，生命延长率为 34.98%，其余各组间差异无统计学意义。
[0042]从实验结果分析，康莱特作为阳性对照药，对小鼠肝癌没有产生抑制作用。低剂量 组小鼠生存时间最长，高剂量组次之，用药组均表现出一定的抑瘤作用，特别是低剂量组表 现出较好的抗肿瘤活性，显示药物对肿瘤细胞起到了抑制作用。
【主权项】
1. 一种治疗肝癌的中药制剂，其特征在于:所述制剂由以下重量份数的原料药制成，瑞 香狼毒60-80份，车前子5-10份，白茅根5-10份，冬凌草5-10份，党参3-6份，甘草2-4份。2. 根据权利要求1所述的中药制剂，其特征在于:所述的制剂由以下重量份数的原料药 制成，瑞香狼毒70份，车前子8份，白茅根7份，冬凌草6份，党参5份，甘草3份。3. -种制备如权利要求1或2所述的治疗肝癌的中药制剂的方法，其特征在于:包括步 骤，（1)按比例在所有原料药加原料药总质量6-8倍质量的水加热煮沸提取100-150分钟，收 集提取液；（2)残渣中再加入原料药总质量5-6倍水，继续加热煮沸提取100-150分钟，收集 提取液；（3)合并两次提取液，浓缩至与原料药总质量相同的量；（4)浓缩液中加乙醇形成 药液；（5)静置后过滤，滤液浓缩干燥；（6)研磨干燥物成粉末，然后制成医学上可接受的制 剂。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤(1)和步骤(2)中水是去离子水。5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤（1)和步骤(2)中加热煮沸提取时间为 120分钟。6. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤(1)加热煮沸提取前，先浸泡30分钟。7. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤(3 )，在90°C水浴浓缩。8. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，乙醇的含量达到药液质量的 60% 〇9. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(5)中，滤液在90°C水浴蒸干。10. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:所述的医学上可接收的制剂是片剂、胶囊 剂或药粉末加入灭菌注射用水，60-80°C水浴溶解后高温灭菌制成的药液。
【文档编号】A61K36/899GK105902869SQ201610441080
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月20日
【发明人】杨喜花, 任连生, 张蘋
【申请人】山西省肿瘤研究所