一种化橘红有效部位及其在制备治疗糖尿病心肌病的药物中的应用
【专利摘要】本发明涉及天然药物技术领域，具体公开了一种化橘红有效部位及其在制备治疗糖尿病心肌病的药物中的应用。所述的化橘红有效部位通过包含如下步骤的方法制备得到：S1.首先将化橘红用有机溶剂提取，得有机溶剂提取物；S2.将有机溶剂提取物上大孔吸附树脂柱，先用体积分数为10%~30%的乙醇洗脱除杂，再用体积分数为50%~70%的乙醇洗脱，收集体积分数为50%~70%的乙醇洗脱部位；S3.将步骤S2得到的50%~70%的乙醇洗脱部位经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红有效部位。该有效部位能显著降低大鼠心肌NF?κB蛋白的含量，可以用于治疗糖尿病心肌病。
【专利说明】-种化橘红有效部位及其在制备治疗糖尿病心肌病的药物中 的应用
[0001]
技术领域
[0002] 本发明设及天然药物技术领域，具体设及一种化橘红有效部位及其在制备治疗糖 尿病屯、肌病的药物中的应用。
【背景技术】
[0003] 糖尿病是一种常见的代谢障碍疾病，严重地威胁着人类的生命。最新的研究显示， 中国糖尿病患者已高达9240万，糖尿病前期的患者则高达1.48亿，而屯、血管疾病是糖尿病 患者的主要死因，流行病学研究证实，糖尿病患者70%W上死于屯、血管疾病，是非糖尿病人 群屯、血管系统疾病病死率的2-3倍。其中糖尿病性屯、肌病（diabetic cardiomyopathy, DCM)是糖尿病独立的并发症之一，其发病率高、危险性大，与糖尿病患者屯、血管疾病的高发 生率和高死亡率密切相关。目前 临床上尚无有效的治疗药物。
[0004] 近年来大量研究发现屯、肌组织炎症是糖尿病屯、肌病的重要机制，屯、肌组织中伴有 炎性细胞的大量浸润，局部组织炎症因子的异常表达;NF-kB是免疫和炎症反应的中屯、调节 转录因子，它的激活与糖尿病屯、肌病的发生及发展密切相关，对高血糖状态下的屯、肌结构、 功能的改变起重要作用，NF-kB激活后可调控多种炎性因子、细胞因子(如TNF-a、比-6、IL-1 0等)的表达，从而参与屯、肌的炎性损伤。
[0005] 我国具有丰富的天然药物和中草药，从天然药物和中草药开发一种能够治疗糖尿 病屯、肌病的药物具有中药的意义。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术的上述不足，提供一种化橘红 有效部位。
[0007] 本发明所要解决的上述技术问题通过W下技术方案予W实现： 一种化橘红有效部位，通过包含如下步骤的方法制备得到： 51. 首先将化橘红用有机溶剂提取，得有机溶剂提取物； 52. 将有机溶剂提取物上大孔吸附树脂柱，先用体积分数为10%~30%的乙醇洗脱除杂， 再用体积分数为50%~70%的乙醇洗脱，收集体积分数为50%~70%的乙醇洗脱部位； 53. 将步骤S2得到的50%~70%的乙醇洗脱部位经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红 有效部位。
[000引所述化橘红为芸香科植物化州抽的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。
[0009] 优选地，步骤S1所述的有机溶剂为乙醇或甲醇。
[0010] 优选地，步骤S2中将有机溶剂提取物上大孔吸附树脂柱，先用体积分数为25%的乙 醇洗脱除杂，再用体积分数为65%的乙醇洗脱，收集体积分数为65%的乙醇洗脱部位。
[0011] 更优选地，体积分数为25%的乙醇的用量为所用的大孔树脂柱柱体积的2~5倍;体 积分数为65%的乙醇的用量为所用的大孔树脂柱柱体积的3~6倍。
[0012] 最优选地，体积分数为25%的乙醇的用量为所用的大孔树脂柱柱体积的3倍;体积 分数为65%的乙醇的用量为所用的大孔树脂柱柱体积的5倍。
[0013] 所述大孔树脂柱柱体积是指用大孔树脂装柱后，从柱底到大孔树脂沉积表面的体 积。
[0014] 优选地，所述的大孔树脂为非极性大孔树脂。
[0015] 更优选地，所述的大孔树脂的型号为D101型大孔树脂。
[0016] 优选地，所述大孔树脂的用量为Ig干燥的有机溶剂提取物使用柱体积为40~60ml 的大孔树脂柱。
[0017] 最优选地，所述大孔树脂的用量为Ig干燥的有机溶剂提取物使用柱体积为50ml的 大孔树脂柱。
[0018] 优选地，步骤S3中硅胶柱层析富集的具体方法为：将经步骤S2制备得到的乙醇洗 脱部位上硅胶柱，先用首先用体积比为95:5~90:10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进 行洗脱除杂;然后再用体积比为85:15~80:20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱 并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位;所述的溶剂A为二氯甲烧，溶剂B为丙酬。
[0019] 优选地，所用硅胶的重量为乙醇洗脱部位干重的20~40倍。
[0020] 更优选地，所用硅胶的重量为乙醇洗脱部位干重的30倍。
[0021] 更优选地，步骤S3中硅胶柱层析富集的具体方法为：将经步骤S2制备得到的乙醇 洗脱部位上硅胶柱，先用首先用体积比为90:10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗 脱除杂;然后再用体积比为85:15的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱 部位，即得化橘红有效部位;所述的溶剂A为二氯甲烧，溶剂B为丙酬。
[0022] 进一步优选地，体积比为95: 5~90:10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系的用量 为硅胶柱柱体积的1~3倍;体积比为85:15~80: 20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系的用 量为硅胶柱柱体积的3~5倍。
[0023] 最优选地地，体积比为90:10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱 柱体积的2倍;体积比为85 :15的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积 的5倍。
[0024] 所述硅胶柱柱体积是指用硅胶装柱后，从柱底到硅胶沉积表面的体积。
[0025] 上述化橘红有效部位在制备治疗糖尿病屯、肌病的药物中的应用。
[0026] 上述化橘红有效部位作为NF-KB蛋白调节剂的应用。
[0027] 有益效果：（1)本发明所述的化橘红有效部位能显著降低大鼠屯、肌NF-KB蛋白的含 量，可W用于治疗糖尿病屯、肌病；（2)所述的化橘红有效部位制备步骤简便，适合大规模生 产。
[002引
【具体实施方式】
[0029] W下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限 定。
[0030] 实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。其中，所用 试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可W通过市购获得的常规产品。
[0031] 实施例1 一种化橘红有效部位，通过包含如下步骤的方法制备得到： 51. 首先将化橘红用体积分数为95%的乙醇提取，得乙醇提取物； 52. 将乙醇提取物上大孔吸附树脂柱(大孔树脂的用量为：lg干燥的乙醇提取物，使用 柱体积为50ml的大孔树脂柱），先用3倍柱体积的体积分数为25%的乙醇洗脱除杂，再用体积 分数为65%的乙醇洗脱，收集体积分数为65%的乙醇洗脱部位； 53. 将步骤S2得到的65%的乙醇洗脱部位经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红有效 部位;所述硅胶柱层析富集的方法为:将经步骤S2制备得到的乙醇洗脱部位浓缩干燥后上 硅胶柱(硅胶的用量为干燥后乙醇洗脱部位重量的30倍，硅胶的规格为200目），先用首先用 体积比为90:10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系（用量为2倍柱体积)进行洗脱除杂;然 后再用体积比为85:15的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系（用量为5倍柱体积)进行洗脱并 收集洗脱部位，即得化橘红有效部位;所述的溶剂A为二氯甲烧，溶剂B为丙酬。
[0032] 实施例2 一种化橘红有效部位，通过包含如下步骤的方法制备得到： 51. 首先将化橘红用体积分数为95%的乙醇提取，得乙醇提取物； 52. 将乙醇提取物上大孔吸附树脂柱(大孔树脂的用量为：lg干燥的乙醇提取物，使用 柱体积为50ml的大孔树脂柱），先用3倍柱体积的体积分数为10%的乙醇洗脱除杂，再用体积 分数为70%的乙醇洗脱，收集体积分数为70%的乙醇洗脱部位； 53. 将步骤S2得到的70%的乙醇洗脱部位经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红有效 部位;所述硅胶柱层析富集的方法为:将经步骤S2制备得到的乙醇洗脱部位浓缩干燥后上 硅胶柱(硅胶的用量为干燥后乙醇洗脱部位重量的30倍，硅胶的规格为200目），先用首先用 体积比为95:5的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系（用量为2倍柱体积)进行洗脱除杂;然后 再用体积比为80:20的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系（用量为5倍柱体积)进行洗脱并收 集洗脱部位，即得化橘红有效部位;所述的溶剂A为二氯甲烧，溶剂B为丙酬。
[0033] 实施例3 一种化橘红有效部位，通过包含如下步骤的方法制备得到： 51. 首先将化橘红用体积分数为95%的乙醇提取，得乙醇提取物； 52. 将乙醇提取物上大孔吸附树脂柱(大孔树脂的用量为：lg干燥的乙醇提取物，使用 柱体积为50ml的大孔树脂柱），先用3倍柱体积的体积分数为30%的乙醇洗脱除杂，再用体积 分数为70%的乙醇洗脱，收集体积分数为50%的乙醇洗脱部位； 53. 将步骤S2得到的50%的乙醇洗脱部位经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红有效 部位;所述硅胶柱层析富集的方法为:将经步骤S2制备得到的乙醇洗脱部位浓缩干燥后上 硅胶柱(硅胶的用量为干燥后乙醇洗脱部位重量的30倍，硅胶的规格为200目），先用首先用 体积比为95:5的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系（用量为2倍柱体积)进行洗脱除杂;然后 再用体积比为85:15的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系（用量为5倍柱体积)进行洗脱并收 集洗脱部位，即得化橘红有效部位;所述的溶剂A为二氯甲烧，溶剂B为丙酬。
[0034] 实施例4本发明所述的化橘红有效部位对糖尿病屯、肌病大鼠屯、脏炎症的调控作用 主要试验材料:Wistar大鼠，雄性，体重（160 ± 20)克，SPF级，合格评号SCXK粤2006- 0015,由南方医科大学实验动物中屯、提供。饲养于广东医学院动物实验室，饲养条件为恒溫 (24 ± 2 rC，相对湿度50 %~70 %，饲养环境符合实验动物环境设施要求。链脈佐菌素(STZ， 美国Sigma公司）；NF-KB多克隆抗体试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司）。
[0035] 动物建模试验方法:采用高糖高脂饲料喂养6周诱导大鼠膜岛素抵抗状态，然后一 次性给予腹腔注射1%链脈佐菌素30 mg/kg，72小时后连续2次空腹血糖1.1 mmol/L 确定为糖尿病模型，持续高糖高脂饲料喂养6周。
[0036] 实验方法:大鼠分为正常对照组（10只，采用基础饲料喂养）、模型组（10只建模后 的大鼠），实验组组1、2和3(每组10只建模后的大鼠，分别注射实施例1、2和3制备得到的化 橘红有效部位，给药剂量为20mg/kg)。于实验结束时禁食12小时，麻醉，腹主动脉采血后迅 速取出屯、脏，用免疫组织化学法检测屯、肌NF-KB表达W及外周血炎症因子的含量，结果如表 1所示：
从表1数据中可W看出，与正常组比较模型组大鼠屯、肌NF-kB蛋白及外周血TNF-a、Ik 6、化-1β分泌增加，说明建模成功。经注射实施例1、2和3制备得到的化橘红有效部位，可W 显著降低大鼠屯、肌NF-KB蛋白及外周血TNF-a、化-6、IL-li3的含量，运说明本发明所述的化 橘红有效部位能有效降低糖尿病屯、肌病大鼠 NF-kB蛋白及外周血TNF-a、化-6、IL-li3的含 量，进一步说明其对糖尿病屯、肌病具有一定的治疗作用。从上述实验数据中还可W看出，实 施例1制备得到的化橘红有效部位对大鼠屯、肌NF-kB蛋白及外周血TNF-a、化-6、IL-Ιβ的含 量的含量降低得更明显，说明在实施例1条件下制备得到的化橘红有效部位效果更好。
【主权项】
1. 一种化橘红有效部位，其特征在于，通过包含如下步骤的方法制备得到：51. 首先将化橘红用有机溶剂提取，得有机溶剂提取物；52. 将有机溶剂提取物上大孔吸附树脂柱，先用体积分数为10%~30%的乙醇洗脱除杂， 再用体积分数为50%~70%的乙醇洗脱，收集体积分数为50%~70%的乙醇洗脱部位；53. 将步骤S2得到的50%~70%的乙醇洗脱部位经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红 有效部位。2. 根据权利要求1所述的化橘红有效部位，其特征在于，步骤Sl所述的有 机溶剂为乙醇或甲醇。3. 根据权利要求1所述的化橘红有效部位，其特征在于，步骤S2中将有机 溶剂提取物上大孔吸附树脂柱，先用体积分数为25%的乙醇洗脱除杂，再用体积分数为 65%的乙醇洗脱，收集体积分数为65%的乙醇洗脱部位;优选地，所述大孔树脂的用量为Ig干 燥的有机溶剂提取物使用柱体积为40~60ml的大孔树脂柱;优选地，所述的大孔树脂为非极 性大孔树脂。4. 根据权利要求3所述的化橘红有效部位，其特征在于，体积分数为25%的乙醇的用量 为所用的大孔树脂柱柱体积的2~5倍;体积分数为65%的乙醇的用量为所用的大孔树脂柱柱 体积的3~6倍。5. 根据权利要求4所述的化橘红有效部位，其特征在于，体积分数为25%的乙醇的用量 为所用的大孔树脂柱柱体积的3倍;体积分数为65%的乙醇的用量为所用的大孔树脂柱柱体 积的5倍;优选地，所述的大孔树脂为非极性大孔树脂。6. 根据权利要求1所述的化橘红有效部位，其特征在于，步骤S3中硅胶柱层析富集的具 体方法为:将经步骤S2制备得到的乙醇洗脱部位上硅胶柱，先用首先用体积比为95:5~90: 10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为85:15~80:20的溶 剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位;所述的溶 剂A为二氯甲烷，溶剂B为丙酮;优选地，所用硅胶的重量为乙醇洗脱部位干重的20~40倍。7. 根据权利要求6所述的化橘红有效部位，其特征在于，步骤S3中硅胶柱层析富集的具 体方法为:将经步骤S2制备得到的乙醇洗脱部位上硅胶柱，先用首先用体积比为90:10的溶 剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为85:15的溶剂A:溶剂B组 成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位;所述的溶剂A为二氯甲 烷，溶剂B为丙酮。8. 根据权利要求6所述的化橘红有效部位，其特征在于，体积比为95:5~90:10的溶剂A: 溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积的1~3倍;体积比为85:15~80: 20的溶剂 A:溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积的3~5倍。9. 权利要求1~8任一项所述的化橘红有效部位在制备治疗糖尿病心肌病的药物中的应 用。10. 权利要求1~8任一项所述的化橘红有效部位作为NF-kB蛋白调节剂的应用。
【文档编号】A61K36/752GK105920152SQ201610346430
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月24日
【发明人】吴铿, 郭润民, 游琼, 莫海亮, 黄瑞娜, 吴子君, 刘畅, 姜佳美
【申请人】广东医学院