专利名称：一种治疗心脏病的组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药类，涉及一种以从乌头属植物中提取的脂类生物碱为活性成分的治疗心脏病的组合物。
背景技术：
心力衰竭是一组临床上极为常见的心血管综合征，是多数器质性心脏病人几乎不可避免的结局。高血压性心脏病、冠心病、陈旧性心肌梗塞、风湿性心脏病、肺源性心脏病、扩张型心肌病、肥厚型心肌病、心肌炎、心动过速心肌病、糖尿病性心肌病、甲亢性心脏病、酒精性心肌病、克山病、先天性心脏病等心血管疾病，发展到一定阶段，均可出现心力衰竭。心力衰竭轻重程度不，临床表现不同，轻者仅活动时感觉心慌、气短、胸闷、乏力、夜间阵发性呼吸困难或咳嗽，较重者出现尿量减少、夜尿多、下肢水肿、腹胀、食欲不振。恶心、呕吐、运动耐量明显下降、动则气喘，发展到严重阶段，患者不能平卧，下肢及全身浮肿，即使休息状态下亦感心慌、气短、胸憋等。心脏病人一旦出现心力衰竭，其一年死亡率为43％，五年死亡率达75％。心力衰竭迄今仍是公共卫生重大问题，严重危害心脏病人的身心健康。
毛莨科(Ranunculaceae)乌头属(Aconitum)植物在我国品种很多，约160多种，主产于西南各省，约有44种已作为药用，其中附子(Radix Aconiti Lateralis)、川乌(Radix Aconiti)和草乌(Radix Aconiti Kusnezoffii)是最常用的中药。附子为毛莨科植物乌头(Aconitum carmichaeli Debx)的子根，川乌为毛茛科植物乌头的干燥母根，草乌为毛莨科植物北乌头(Aconitum kusnezoffiiReichb)的干燥块根。中医认为乌头具有温中止痛、治风寒湿痹的效用；附子能回阳救逆、补火助阳。附子及乌头属植物是传统中医临床用药的常用中药材，具有强心、利尿、镇痛、麻醉、消炎、提高免疫力等作用。附子是中医临床常用药，性味甘、辛、大热有毒，早在《神农本草经》中就有对附子的记载，《伤寒论》、《金匮要略》中很多方剂也含有附子，多用于畏寒、肢冷、脉微欲绝或沉迟无力等症的阳虚或亡阳病人，用以“回阳救逆”。
附子及乌头属植物中主要含有三类生物碱双酯型生物碱、单酯型生物碱和脂类生物碱。现代药理研究证明，双酯型生物碱为附子及乌头属植物中的剧毒成分，中乌头碱、乌头碱、次乌头碱小鼠腹腔注射的半数致死量分别为0.22mg/kg、0.27mg/kg和1.01mg/kg(阮海林，陆宁.乌头碱中毒的特点及治疗.华西医科大学学报，2000，17(1)160.吴汝彪等)。29年来我国乌头类药物中毒635例(中医药信息，1998，15(2)40)。其有效剂量与中毒剂量非常接近，没有应用价值。为了降低乌头属植物的毒性，达到入药标准，多采用炮制和药对法入药，但其作用机制并不明确。为确保临床用药安全有效，国内外学者在乌头类生物碱的炮制、含量测定及与其它药物配伍减毒方面做了大量工作。日本学者Kawata等发现双酯型生物碱在肠内菌的作用下能够转变成脂类生物碱(Kawata Y.et al.由人体肠内细菌及其效应引起的乌头碱转化为脂类乌头碱(服部争雄，等.人体肠道细菌作用下乌头碱转化为脂类乌头碱及其对小鼠的抗伤害效应.传统医学杂志，1999，1615-23.(Kawata Y.et al.Conversion ofaconitine to lipoaconitine by human intestinal bacteria and theirantinociceptive effects in mice.J.Trad.Med.，1999，1615-23))；对乌头属植物炮制配伍研究过程中也发现，经过炮制配伍减毒的药材或复方中，脂类生物碱的含量均有所提高(王勇，等.四逆汤中脂类生物碱来源于酯交换反应的研究.中草药，2006，151-54)，提示脂类生物碱可能在体内发挥药理作用。
由于脂类生物碱在药材中的量很低，结构又十分相似并且没有对照品，所以采用传统的植物化学分离方法和常用的高效液相色谱法都难以对它们进行分析，而且在处理过程中还可能造成脂类生物碱的损失。国内采用酸水渗漉法提取附子中的生物碱，由于脂类生物碱难溶于酸水，很难有效提取。因为脂类生物碱提取的困难程度，导致对多年来对脂类生物碱的药理研究及其临床应用较少。
利用脂类生物碱具有长酯链、极性小、难溶于水的特点，发明了一种从附子及乌头属植物中分离提取脂类生物碱的方法，分离得到纯度相当高的脂类生物碱。(中国专利申请号200410010820.5)三、发明内容发明人通过对从附子及乌头属植物中分离提取脂类生物碱的药效学及毒理学研究，发现该脂类生物碱具有显著的增强心肌收缩力，改善心脏功能的作用，而对心率无明显影响；同时毒副作用低。它是一种用于治疗急、慢性心力衰竭、心源性休克、感染性休克或心肌梗塞、心肌炎、心绞痛引起的心功能下降等疾病的很好的药物。
本发明提供了一种治疗心脏病的组合物，它是由活性成分，或者活性成分和药学上可以接受的载体，或者活性成份和药学上可以接受的载体和辅料组成，所述的活性成分为从乌头属植物中提取的脂类生物碱。其结构式为 其中，R1＝CH3或C2H5；R2＝C16-24H32-44O2；R3＝H或OH；R4＝H或OH。
本发明提供的活性成分可以以药学常规方法制备成各种药物剂型，以片剂、注射剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、悬浮剂、溶液、糖浆、栓剂等形式存在。
本发明所述的活性成分在用于上述任一用途时，其临床用量范围为2-70mg/kg，优选范围为5-25mg/kg，每日分两次服用。
发明人通过药效学试验，证实了脂类生物碱可显著增强离体蛙心和大鼠心脏的心肌收缩力，增加冠脉流量；强心作用起效较快，用药40mg/kg，即可使心衰动物的左心室内压上升，增加左心室内压最大上升速率和最大下降速率，改善心衰动物的血流动力学，增强心脏功能；对实验动物的心率无明显影响；毒性小，属于安全级。本发明所述的活性成分具有治疗或预防急、慢性心力衰竭、心源性休克，其他心血管疾病，如心肌炎、心肌梗塞、心绞痛引起的心功能下降等疾病的作用，但并不限于此试验。
本发明经过长春应用化学研究所质谱检测，申请人生产的脂类生物碱样品纯度较高，无双酯型生物碱和单酯型生物碱混合，如图1所示。
本发明具有以下特殊的效果1.脂类生物碱可显著增强离体蛙心和大鼠心脏的心肌收缩力，增加冠脉流量。
2.脂类生物碱强心作用起效较快，用药40mg/kg，即可使心衰动物的左心室内压上升，增加左心室内压最大上升速率和最大下降速率，改善心衰动物的血流动力学，增强心脏功能。
3.脂类生物碱对实验动物的心率无明显影响。
4.脂类生物碱毒性小，属于安全级。
图1是脂类生物碱的电喷雾质谱图。
具体实施例方式制备实施例110g脂类生物碱，加淀粉适量，混匀，制粒，压片，制成每片含脂类生物碱10mg的片剂1000片。
制备实施例2
10g脂类生物碱，加可溶性淀粉适量，混匀，制粒，装入胶囊，制成每粒含脂类生物碱20mg的胶囊500粒。
制剂实施例3取20mL注射用蒸馏水，加入吐温-80适量，再加入10mg脂类生物碱，加热溶解，过滤、分装、灭菌，制成每mL含0.5mg的脂类生物碱的注射液10支。
药效实验例1.脂类生物碱对离体蛙心收缩力的影响1.1方法1.1.1动物与材料动物中华大蟾蜍，购自吉林大学基础医学院实验动物中心，100-150g，雌雄不拘。
样品的配制任氏液配方NaCl6.5g/L，KCl0.14g/L，CaCl20.12g/L，NaHCO30.20g/L，NaH2PO40.01g/L，葡萄糖2.0g/L。将分离得到的脂类生物碱溶于0.1％的DMSO-任氏液配成实验所需浓度。生脉注射液由吉林省集安益盛药业股份有限公司生产，批号060123。
仪器BL-420四道生理记录仪，成都泰盟科技有限公司制造。
1.1.2离体蛙心的制备改进的斯氏蛙心插管法取蛙，用探针毁脑及脊髓，仰卧位固定于蛙板，打开蛙胸腔，暴露心脏。结扎左主动脉，于动脉圆锥前端剪一“V”形切口，将充有任氏液的蛙心插管插入心室，连同近旁血管一起结扎固定，将心脏离体。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。然后，保持套管内液面高度恒定(约1.0ml液体)，划线作标记。
1.1.3心肌收缩活动的记录将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住心肌尖部肌肉。将蛙心夹上的系线绕过心动杠杆与张力换能器相连，然后将张力换能器接入BL-420智能生物信号显示与处理系统，通过BL-420智能生物信号显示与处理系统，在显示器上显示蛙心心肌收缩活动的变化。各组均记录1.0ml任氏液时的正常曲线作对照，分别加入不同浓度的待测样品，使液面保持1.0ml，以保持加药前后心肌的负荷一致，通过BL-420系统记录加药后5min的心搏曲线。
1.1.4统计学处理所有数据均以x±s来表示，组间比较采用t检验。
1.2结果表1脂类生物碱对离体蛙心张力的影响(x±s)
与正常组比较*p＜0.05从表1结果可以看出，脂类生物碱250、500μg/mL均可以显著增加离体蛙心的收缩力(p＜0.05)，而对心率无明显影响。
药效实验例2.脂类生物碱对离体大鼠心脏冠脉流量、心肌收缩幅度及心率的影响2.1方法2.1.1动物与材料试剂洛氏液配方NaCl9g/L，KCl0.42g/L，CaCl20.24g/L，NaHCO30.5g/L，葡萄糖1.0g/L，临用前通95％O2-5％CO2。将分离得到的脂类生物碱溶于0.1％的DMSO-洛氏液配成实验所需浓度。生脉注射液由吉林省集安益盛药业股份有限公司生产，批号060123。
动物Waster大鼠，由吉林大学基础医学部实验动物中心提供。
仪器BL-420四道生理记录仪，成都泰盟科技有限公司。
2.1.2实验方法取200~250g大鼠32只，雌雄兼用，随机分为4组，分组及给药情况如下I组、II组、III组的大鼠离体心脏分别给予不同剂量的脂类生物碱(溶液的配置方法同1)，IV组给予阳性对照药生脉注射液。
采用Langendorf离体心脏灌流法，调节恒温恒压灌流装置后，用木棒击大鼠后脑致昏、打开胸腔迅速取出心脏，在接近心脏的主动脉留1cm长，以便结扎于心脏管套上。取出的心脏立即放入用氧饱和的洛氏液中，并轻轻挤压心脏，使残留血液完全流出。然后将动脉固定于心脏套管上，同时，用连有长线的蛙心夹夹住心尖，线的另一端通过滑轮与张力换能器相连，然后将张力换能器接入BL-420智能生物信号显示与处理系统，通过BL-420智能生物信号显示与处理系统，在显示器上显示心肌收缩活动的变化。通以38.0℃的用氧饱和的洛氏液开始灌流，灌流液瓶的高度距心脏60cm。当心脏恢复稳定(心肌收缩力、心率规律需15min左右)后连续测1、3、5、10min的每分钟冠流量，取平均值作为给药前的正常流量。然后由动脉套管胶管插管旁侧的三通管分别注入药物0.2ml，立即收集给药后1、3、5、10min的每分钟流出量，同时记录心搏幅度及心率变化。结果见表2。
表2脂类生物碱对离体大鼠心脏冠脉流量、心搏幅度及心率的影响(x±s)
与给药前相比较，*p＜0.05，**p＜0.01表2结果表明，脂类生物碱具有明显增加大鼠离体心脏冠脉流量的作用，高剂量组、中剂量组及生脉注射液组与给药前比较分别增加83.6％、56.6％、82.6％(p＜0.01)，提示该药具有增加冠脉流量的作用，其高剂量组作用与生脉注射液相近，对心肌收缩力也具有明显的增加作用(p＜0.05或p＜0.01)，与给药前比高剂量组、中剂量组及生脉注射液组分别增加了49.4％、24.7％、42.4％，但是该药对心率无明显改变。
药效实验例3.脂类生物碱对大鼠心力衰竭的影响3.1方法3.1.1实验动物与材料试剂肝素钠天津化学制药厂生产，批准文号津卫药准字第001562号，规格6250u/ml，2ml/支。戊巴比妥钠由国药集团化学试剂有限公司生产，批号No.WS20050411。脂类生物碱用3％CMC-Na制成混悬液，配至所需浓度。阳性对照药生脉注射液由吉林省集安益盛药业股份有限公司生产，批号060123。
动物Waster大鼠，由吉林大学基础医学部实验动物中心提供。
仪器BL-420四道生理记录仪，成都泰盟科技有限公司。
3.1.2实验方法雄性大鼠随机分组，每组10只。乌拉坦(1300mg/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定四肢，于颈部腹侧偏右纵向切开皮肤。在胸锁乳突肌内侧分离右颈总动脉1.5cm，动脉夹夹住近心端，经颈动脉朝远心端方向注入肝素钠生理盐水，立即结扎远心端，然后再经颈动脉插入已准备好的充满肝素的左室导管，松紧度应以切口处不漏血，导管又能自由进出为度。左手用镊子夹住颈总动脉及导管，右手将导管插入左室腔，当感到导管随心脏搏动而明显抖动时，则应减慢插进速度(这时通常已插入4cm左右)。当显示器上的波形由血压波变成下沿达0mmHg附近具有明显舒张期而峰顶平坦的波形时表明导管已经通过主动脉瓣进入左室腔内，再送入导管约0.2～0.3cm，若还保持同样波形则固定导管于胸锁乳头肌上。记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压最大上升和下降速率(±LVdp/dtmax)；皮下针状电极记录心电图ECG(II)及心率(HR)。所有信号均同步记录在四道生理记录仪上，记录一段正常值后，于舌下静脉注射戊巴比妥钠，当+LVdp/dtmax降到正常值的2/3以下，并维持5min以上即视为心衰模型形成。股静脉给药，恒速输注脂类生物碱，给药体积1mL/kg，给药前和给药后10，30，60min分别测算上述指标，与对照组比较进行t检验。
3.2结果3.2.1对左心室内压最大上升速率和最大下降速率的影响的影响表3脂类生物碱对左心室内压最大上升速率(+LVdp/dt max)的影响(x±s)
与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01表4脂类生物碱对左心室内压最大下降速率(-LVdp/dt max)的影响(x±s)
与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01从表3，表4结果可以看出，模型对照组大鼠左心室内压最大上升速率+LVdp/dt max和最大下降速率-LVdp/dt max均明显降低，各给药组大鼠左心室压力最大上升速率均有不同程度的升高。
3.2.2脂类生物碱对心衰大鼠左心室内压的影响模型对照组大鼠左心室内压明显降低，各给药组大鼠左心室内压有不同程度的升高，结果详见表5。
表5脂类生物碱对心衰大鼠左心室内压的影响(x±s)
与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.013.2.3脂类生物碱对心衰大鼠心率的影响模型对照组大鼠心率次数明显减少，与模型对照组比较，各给药组大鼠心率次数均没有明显的增加，结果详见表6。
表6脂类生物碱对心衰大鼠心率的影响(x±s)
与模型对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01以上各项试验结果显示，脂类生物碱可以显著增强离体蛙心、大鼠心脏的心肌收缩力(P＜0.01)，显著增强离体大鼠心脏的冠脉流量(P＜0.01)，对心率无明显影响。对实验性心力衰竭大鼠，脂类生物碱可以明显升高心衰大鼠的左心室内压最大上升速率和最大下降速率(±LVdp/dt max)，升高心衰大鼠的左心室内压，对心率无明显影响。实验结果显示该药具有增强心肌收缩和舒张功能，改善心肌功能的作用。
权利要求
1.一种治疗心脏病的药物，其特征在于，它是由从乌头属植物中提取的脂类生物碱为活性成分，结构式如下 其中，R1＝CH3或C2H5；R2＝C16-24H32-44O2；R3＝H或OH；R4＝H或OH。
2一种治疗心脏病的药物组合物，其特征在于，它是由活性成分和药学上可以接受的载体组成；所述的活性成分的结构式为 其中，R1＝CH3或C2H5；R2＝C16-24H32-44O2；R3＝H或OH；R4＝H或OH；它是从乌头属植物中提取的脂类生物碱。
3.如权利要求2所述的一种治疗心脏病的药物组合物，其特征在于，它是由活性成分和药学上可以接受的载体和辅料组成。
全文摘要
本发明提供了一种治疗心脏病的组合物，它是由活性成分，或者活性成分和药学上可以接受的载体，或者活性成份和药学上可以接受的载体或辅料组成；所述的活性成分为从乌头属植物中提取的脂类生物碱。它具有增强心肌收缩力、改善心功能，用于治疗急、慢性心力衰竭、心源性休克、感染性休克、心肌梗塞、心肌炎及心绞痛等引起的心功能下降的药物。本发明的活性成分结构式如上，其中，R
文档编号A61P9/04GK1907285SQ20061001711
公开日2007年2月7日 申请日期2006年8月18日 优先权日2006年8月18日
发明者皮子凤, 越皓, 刘志强, 宋凤瑞, 刘淑莹 申请人:中国科学院长春应用化学研究所