PIKfyve抑制剂抗辐射损伤的新用图
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，关于PIKfyve抑制剂的抗辐射损伤新用途，主要是它在核/辐射损伤的防治以及肿瘤放射治疗引起的辐射损伤防治中的医学应用。更明确来说，本发明关于单独地或结合其它治疗方法，应用PIKfyve抑制剂来预防和/或治疗各种辐射损伤。
【专利说明】
PI Kfyve抑制剂抗福射损伤的新用途
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，关于PIKfyve抑制剂的抗辐射损伤新用途，主要是它 在核/辐射损伤的防治以及肿瘤放射治疗引起的辐射损伤防治中的医学应用。更明确来 说，本发明关于单独地或结合其它治疗方法，应用PIKfyve抑制剂来预防和/或治疗各种辐 射损伤。
【背景技术】
[0002] 核能与核技术在工农业生产、医疗卫生、科学研究及国防事业等各个领域的应用 日益广泛，它们在给人类带来巨大利益的同时，也存在潜在威胁。核战争、涉核恐怖袭击、地 震或海啸等引起核电站发生核泄漏，以及民用放射源、医疗照射等工作中由于管理不善或 操作失误等都可导致人员受到射线照射。当机体在短时间内受到大剂量（> IGy)电离辐 射照射时会发生急性放射病（Acute Radiation Sickness，ARS)，或统称为急性放射损伤综 合症（Acute Radiation Syndrome disease，ARS)。急性放射病是一种全身性疾病，根据受 损器官的不同，分为骨髓型、肠型和脑型三型；根据受照时间长短不同放射病可分为急性、 亚急性和慢性。急性放射病死亡率高，治愈困难，目前受照射剂量大于SGy的患者尚无救活 的先例。此外，肿瘤患者接受放射治疗过程中，射线杀灭肿瘤细胞的同时对正常细胞也造成 损伤，常常因此而限制了放射治疗的实际应用。因此，为了对抗辐射损伤，给核能与核技术 的高效应用提供安全保障，需要大力发展抗辐射损伤医药技术。
[0003] 磷脂酰肌醇-3-磷酸5-激酶（PIKfyve)是一个240kDa的脂质激酶，能特异地以胞 内体的磷脂酰肌醇-3-磷酸（PI3P)为底物催化产生磷脂酰肌醇-3, 5-磷酸（PI (3, 5) P2)。 PIKfyve及其介导的PI (3, 5) P2信号通路参与维持细胞内内体/溶酶体形态、葡萄糖转运、 逆转录病毒出芽、自噬和离子通道活性等。近两年的研究揭示了 PIKfyve在天然免疫反应 中的重要作用，PIKfyve活性抑制后能够下调TLR信号通路介导的多种促炎性因子表达。研 究表明，PIKfyve抑制剂STA 5326 (STA)直接结合PIKfyve抑制其磷酸转移酶活性，进而特 异性阻断Toll受体（TLR)介导的IL-12/IL-23表达，并抑制辅助性T淋巴细胞亚群Thl型 反应。由于免疫系统及炎症反应在急性放射病病程中的重要地位，我们推测改善炎症免疫 反应可能是防治辐射损伤的重要途径。基于此，我们研究发现PIKfyve特异性抑制剂STA 5326和YM201636对急性辐射损伤小鼠有显著的防治作用。此发现尚属首例，相关内容未见 报道。
[0004] 综上，本发明提供了一类化合物即PIKfyve抑制剂抗辐射损伤的新用途。
【发明内容】
[0005] 关于PIKfyve抑制剂的抗辐射损伤新用途，主要是它在核/辐射损伤救治以及肿 瘤放射治疗引起的辐射损伤防治中的医学应用。更明确来说，本发明关于单独地或结合其 它治疗方法，应用PIKfyve抑制剂来预防和/或治疗各种辐射损伤。
[0006] 发明人经研究发现：PIKfyve抑制剂对电离辐射所引起的骨髓抑制及与之相关的 疾病具有预防及/或治疗作用。本发明据此产生。
[0007] 根据本发明的具体发现，提供了
[0008] 1.治疗各种原因引起的急性放射病例如轻度骨髓型急性放射病、中度骨髓型急性 放射病、重度骨髓型急性放射病、极重度骨髓型急性放射病和肠型放射病的方法，该方法包 括照射前至少1天内及/或照射后至少1天内施用治疗有效量的PIKfyve抑制剂、例如下 文所定义的化合物1至化合物24。
[0009] 2.治疗射线照射引起的骨髓抑制的方法，该方法包括照射前至少1天内及/或照 射后至少1天内施用治疗有效量的PIKfyve抑制剂、例如下文所定义的1至24的化合物。
[0010] 3.治疗肿瘤放射治疗所引起的骨髓抑制的方法，该方法包括照射前至少1天、放 射治疗期间及/或照射后至少1天施用治疗有效量的PIKfyve抑制剂、例如下文所定义的 1至24的化合物。
[0011] 4.治疗与化学治疗或外科手术结合进行的放射治疗所引起的骨髓抑制的方法，该 方法包括照射前至少1天、放射治疗期间及/或照射后至少1天施用治疗有效量的PIKfyve 抑制剂、例如下文所定义的化合物1至化合物24。
[0012] 此等骨髓抑制是，大体而言，以PIKfyve抑制剂作治疗而可得益的个体包括，排定 要开始或正在接受放射治疗。可自这种治疗中特别得益的个体包括，有骨髓抑制者或可能 易发生骨髓抑制者。例如，这些个体可能正要接受、可能正在接受，或已经接受放射治疗。
[0013] 根据本发明的一个方而，治疗因放射所引起的骨髓抑制的方法包括，对需要此等 治疗的个体给药治疗有效量的PIKfyve抑制剂。
[0014] 在某些具体实例中，将PIKfyve抑制剂在个体放射治疗首剂之前至少一天内给 药。
[0015] 在一些其它具体实例中，PIKfyve抑制剂在个体的放射治疗首剂之前至少一天到 放射治疗停止后至少一天的期间内给药。
[0016] 在某些具体实例中，将PIKfyve抑制剂在个体放射治疗、化学治疗的首剂之前至 少一天内给药。
[0017] 其它具体实例包括，将PIKfyve抑制剂在放射治疗、化学治疗期间内给药。
[0018] PIKfyve抑制剂通常为氨基嘧啶类化合物，例如结构式（I)的化合物。
[0019]
[0020] 其中：X和Y分别是含有1-5个杂原子取代的C6-C20的烷基，芳基，烷氧基，芳氧 基，或取代的氨基；W为取代的氨基，与X可以连接成环，也可以不存在；Z为烷氧基，取代的 氨基或取代的巯基，Z可以与Y连接成环，也可以不与Y连接；U为氧原子或亚甲基。
[0021] 另一方面，其中：X和Y也可以分别是含有1-5个杂原子取代的烷基，芳基，烷氧 基，芳氧基，或取代的氨基；W为取代的氨基，与X可以连接成环，也可以不存在；Z为烷氧 基，取代的氨基或取代的巯基；U为氧原子，亚甲基。
[0022] 再一方面，其中X和Y分别是含有1-5个杂原子取代的C10-C16的烷基，烷氧基， 芳基，或取代的氨基；W为取代的氨基，与X可以连接成环，也可以不存在；Z为氢原子；U为 氧原子。
[0023] 或者，其中X和Y分别是含有1-5个杂原子取代的C10-C16的烷氧基，芳基，或取 代的氨基；W为取代的氨基，与X可以连接成环，也可以不存在；Z为氢原子；U为氧原子。
[0024] 包括但不限于以下化合物1至化合物24的化合物。
[0025] (E) -4- (6- (2- (3-氯苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）吗啉 (化合物1)
[0026]
[0027] (E) -4- (6- (2- (3-氟苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）吗啉 (化合物2)
[0028]
[0029] (E) -4- (6- (2- (3-碘苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）吗啉 (化合物3)
[0030]
[0031] (E)-4-(6-(2-(3-甲基苯烯肼基）-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）吗 啉（化合物4)
[0032]
[0033] (E) -4- (6- (2- (3-溴苯烯肼基）-2- (2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）吗啉 (化合物5)
[0034]
[0035] 3-溴-N' -(6-吗啉基-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼 (化合物6)
[0036]
[0037] 3-甲基W -(6-吗啉基-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼 (化合物7)
[0038]
[0039] 3-甲基-N' -(6-吗啉基-2-(2-(吡啶-2-基）乙胺基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼 (化合物8)
[0040]
[0041] 3-甲基W -(6-吗啉基-2-(苯乙胺基）嘧啶-4-基）苯甲酰肼（化合物9)
[0042]
[0043] f -(6-吗啉基-2-(苯乙胺基）嘧啶-4-基）-3-吡啶甲酰肼（化合物10)
[0044]
[0045] K -(6-吗啉基-2-(苯乙胺基）嘧啶-4-基）-4_吡啶甲酰肼（化合物11)
[0046]
[0047] 4-吗啉基-N-苯乙基-吡啶[3'上：4, 5]呋喃[3, 2-d]并嘧啶-2-胺（化合 物12)
[0048]
[0049] N-(3-(4-吗啉基-吡啶C ^ :4,5]呋喃[3,2-d]并嘧啶-2-基）苯基）尼 可酰胺（化合物13)
[0050]
[0051] 6-氨基-N-(3-(4-吗啉基-吡啶[3'，2\4,5]呋喃[3,2-d]并嘧啶-2-基）苯 基）尼可酰胺（化合物14)
[0052]
[0053] (E)-4-(5-(2-(3-甲基苯甲烯基）肼基）-2-苯基吡唑并[l，5-a]嘧啶-7-基）吗 啉（化合物15)
[0054]
[0055] (E) -4- (5- (2- (3-甲基苯甲烯基）肼基）-2- (4-吡啶基）吡唑并[I，5-a]嘧 啶-7-基）吗啉（化合物16)
[0056]
[0057] 3-甲基W -(7-吗啉基-2-(吡啶-4-基）吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基）苯甲酰 肼（化合物17)
[0058]
[0059] 3-氯W - (7-吗啉基-2-(吡啶-4-基）吡唑[I，5-a]嘧啶-5-基）苯甲酰肼 (化合物18)
[0060]
[0061 ] (E) -4- (5- (2- (3-氯苯甲烯基）肼基）-2- (4-吡啶基）吡唑并[I，5-a]嘧 啶-7-基）吗啉（化合物19)
[0062]
[0063] 3-氟-N' - (7-吗啉基-2-(吡啶-4-基）吡唑[I，5-a]嘧啶-5-基）苯甲酰肼 (化合物20)
[0064]
[0065] (E)-5_(2-(3-甲基苯甲烯基）肼）-7-(哌啶-1-基）-2-(吡啶-4-基）吡唑[1， 5-a]嘧啶（化合物21)
[0066]
[0067] 3-甲基-N' -(7-哌啶-1-基-2-(吡啶-4-基）吡唑[l，5_a]嘧啶-5-基）苯 甲酰肼（化合物22)
[0068]
[0069] (E)-4-(6-(2-(3-甲基苯烯肼基）-2-(2-(吡啶-2-基）乙氧基）嘧啶-4-基）哌 啶（化合物23)
[0070]
[0071] 6-氨基-N-(3-(4-哌啶-1-基-吡啶 C，2\4,5]呋喃[3,2-d]并嘧啶-2-基） 苯基）尼可酰胺（化合物24)
[0072]
[0073] 应当理解，本文所述化合物可以是直接活性物质，或者可以是前药。例如，化合物 可以为磷酸化的形式。
[0074] 在给出引用专利申请或科学出版物的每种情况下，与化合物相关的主题在此处被 并入本申请作为参考。还包括其可药用盐、相应的外消旋物、非对映异构体、对映异构体、互 变异构体以及上述化合物的相应晶体变体（存在时），例如其中公开的溶剂合物、水合物和 多晶型物。可以如所引用文献中的描述分别制备和施用用作本发明组合中活性成分的化合 物。本发明范围内还包括如上所示的两种以上的单独的活性成分的组合，即本发明范围内 的药物组合可包括三种或更多的活性成分。此外，第一种活性剂和活性助剂不是相同的成 分。如本文所用，给药优选属于口服、注射给药。
【具体实施方式】
[0075] 本说明书揭露预防和/或治疗电离辐射损伤的方法。
[0076] 有此需要的群体包括可能即将受到辐射暴露，例如核武器袭击、核脏弹恐怖袭击， 或即将进入放射污染区域，于（可能）辐射暴露前数小时或至少1天接受有效量的PIKfyve 抑制剂预防治疗。
[0077] 有此需要的个体包括已经受到可能会引起造血损伤的照射剂量的伤员或事故病 人，于受照后即刻、数小时或至少1天内接受有效量的PIKfyve抑制剂治疗。
[0078] 本说明书还揭露治疗因放射疗法所引起的骨髓抑制的方法。
[0079] 放射疗法（radiation therapy)及放射治疗（radiotherapy)于本文可交换使用， 且包括外照射（external irradiation)和内照射（internal irradiation)，亦指称为近 接治疗（brachytherapy)、腔内近接治疗（intracavitary brachytherapy)，或组织间近接 治疗（interstitial brachytherapy)。可虑及的放射源包括纯伽马（pure Gamma)、纯贝塔 (pure Beta)，及混合放射。
[0080] 在本文中使用，术语"化学治疗"及"化学治疗剂"可交换使用，以及意指显现抗癌 效果且用在恶性肿瘤的治疗中的化学治疗剂或药。
[0081] 在本文中使用，放射所引起的骨髓抑制包括全身照射或胸肺部、骨盆、躯干部等局 部照射所引起的放射损伤。照射常造成急性放射病或骨髓造血抑制。症状可包括呕吐、造血 细胞减少、贫血、血小板减少症、白细胞减少症、造血细胞增殖障碍、血小板减少性出血等。
[0082] 本发明又另外方面关于以PIKfyve抑制剂治疗有此需要的个体（例如，哺乳类、人 类、马、狗、猫）的方法。确认个体是否有此等治疗的需求，可依个体本身或健康照射防护专 业人员的评判，且可为主观的（例如，看法）或客观的（例如，藉由试验或诊断方法而可量 测）。
[0083] 有此需要的个体包括将要接受放射治疗的个体，不论是单独接受放射治疗或组合 其它可导致骨髓抑制的化学药物治疗。此需要可能显现于个体接受放射治疗、化学治疗、或 (数种）治疗的结合之前；个体正在接受放射治疗、化学治疗或（数种）治疗的结合；个体正 在接受放射治疗、化学治疗、或（数种）治疗的结合之后。例如，个体可能正要、可能正在， 或已经接受，放射治疗组合化学治疗。
[0084] 在本文中使用，治疗有效量意指，当给药人类或非人类的个体时，有效提供治疗益 处（比如，对症状的改良）的量，例如，有效改善贫血症状的量。
[0085] 根据某些具体实例，PIKfyve抑制剂可用于各种治疗方案，此等方案可根据个体及 治疗类型而变化。
[0086] PIKfyve抑制剂可在治疗之前、期间，及/或之后给药。例如，可在个体的放射治疗 首剂之前至少一天内给药、在放射治疗期间给药、在放射治疗停止后至少一天内给药。
[0087] 较佳地在骨髓抑制治疗之前、治疗期间、以及治疗之后给药PIKfyve抑制剂。例 如，从放射治疗、化学治疗的首剂及结合治疗之前的至少一天到放射治疗停止后、化学治疗 停止后的至少一天的期间内给药。
[0088] 根据特定具体实例，PIKfyve抑制剂可结合其它化合物一起给药，例如，化 学治疗剂、抗发炎剂、解热剂、放射增敏剂、放射防护剂、泌尿道用剂、抗吐剂，及/或 止泻剂。例如，顺钼（cisplatin)、卡钼（carboplatin)、多西紫杉醇（docetaxel)、太 平洋紫杉醇（paclitaxel)、氟尿啼啶（flurouracil)、卡培他滨（capecitabine)、吉 西他滨（gelncitabine)、伊立替康（irinotecan)、托泊替康（topotecan)、依托泊苷 (etoposide)、丝裂霉素（mitomycin)、吉非替尼（geftinib)、长春新碱（vincristine)、长 春碱（vinblastine)、阿霉素（doxorubicin)、环磷酰胺（cyclophosphamide)、塞来昔布 (celecoxib)、罗非昔布（rofecoxib)、伐地考昔（valdccoxib)、布洛芬（ibuprofen)、萘普 生（naproxen)、酮洛芬（ketoprofen)、地塞米松（dexamethasone)、泼尼松（prednisone)、 泼尼松龙（prednisolone)、氢化可的松（hydrocortisone)、醋氨酸（acetaminophen)、 米索石肖唑（misonidazole)、氨磷汀（amifostine)、坦索罗辛（tamsulosin)、非那 P比啶（phenazopyridine)、昂丹司琼（ondansetron)、格拉司琼（granisetron)、阿洛 司琼（alosctron)、帕洛诺司琼（palonosetron)、异丙嗪（promethazine)、丙氯拉嗪 (prochlorperazine)、三甲氧苯酿胺（trimethobenzamide)、阿瑞吡坦（aprcpitant)、地芬 诺酯加阿托品（diphenoxylate with atropine)，巴柳氮（balsalizide)，及 / 或洛哌丁胺 (loperamide)〇
[0089] 本文揭露的方法，对有此需要的个体给药治疗有效量的PIKfyve抑制剂，以保护 个体对抗放射所引起的全身性损伤也是有用的。例如，预防性的服用可在患者接受放射之 前给药。
【附图说明】
[0090] 图I. STA照射前Ih灌胃对8. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠存活的影响
[0091] 结果表明，照射对照组小鼠于照射后第10天开始出现死亡，两周内无一存活，而 STA组小鼠则自第14天才开始出现死亡，30天时存活40%。
[0092] 图2. STA照射前Ih灌胃对6. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠外周血细胞数的影响
[0093] 结果显示，与照射对照组相比，照射前Ih给小鼠单次灌胃STA5326 10、20和30mg/ kg均能够促进外周血血小板数、红细胞数恢复；而且随着用药剂量增加，该效应呈现增强 的趋势，以30mg/kg组促恢复效果最为明显
[0094] 图3.不同剂量STA照射前Ih灌胃对6. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠外周血细胞 数的影响
[0095] 与照射对照组相比，照射前Ih分别给C57小鼠灌胃20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg 和50mg/kg STA5326时，各组小鼠外周白细胞恢复趋势无显著差异，但是30和40mg/kg给 药组小鼠外周血血小板和红细胞的恢复趋势基本一致而明显优于照射对照组，20mg/kg和 50mg/kg组与照射对照组的差异不明显。
[0096] 图4. STA照射前不同时间灌胃对6. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠外周血细胞数的 影响
[0097] 照射前24h内单次灌胃STA 30mg/kg均能促进6. 5Gy γ射线全身照射小鼠的造血 细胞恢复，其中以照射前3h给药的作用效果最明显。
[0098] 图5. STA照射前3h灌胃对8. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠存活的影响
[0099] 与照射对照组比较，STA5326 20mg/kg组小鼠存活率无明显提高，但小鼠开始死亡 时间推迟；而STA 30mg/kg和40mg/kg给药不仅延长了死亡鼠的存活时间，而且30天存活 率提高50% (照射对照组为0)。
[0100] 图6. STA照射前3h灌胃对6. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠骨髓造血干细胞的影 响
[0101] STA组小鼠在照射后3h骨髓中活的的单个有核细胞数量明显高于照射对照组；分 析Lin c_kit+Sca_l细胞和Lin c-kit+Sca_l+含量显示，照射后14天STA组该两种细胞的 数量均高于照射对照组。
[0102] 图7. STA照射后不同时间灌胃对6. 5Gyy射线全身照射C57小鼠外周血细胞数的 影响
[0103] 结果表明，照射后24h内单次灌胃STA 30mg/kg均能促进6. 5Gy γ射线全身照射 小鼠的造血细胞恢复，尤其是对血小板和红细胞数的促恢复作用显著，其中以照射后24h 给药组作用效果最明显。
[0104] 图8. STA照射前3h腹腔注射对6. 5Gy γ射线全身照射C57小鼠外周血细胞数的 影响
[0105] 结果发现，6. 5Gy全身照射前3h给C57小鼠腹腔注射STA5326 30mg/kg可以提高 小鼠外周血白细胞的最低值，并促进血小板和红细胞数的恢复。
[0106] 图9. STA照射前3h腹腔注射对8. 5Gy 丫射线全身照射C57小鼠存活的影响
[0107] 8. 5Gy全身照射C57小鼠在照射后30天内全部死亡（照射对照组），而在照射前 3h单次腹腔注射STA5326 30mg/kg可使小鼠的活存率提高90 %。 具体实施例
[0108] 1，STA5326照射前1小时单次灌胃即可提高致死性照射小鼠存活率。
[0109] 为初步观察STA5326的辐射防护作用，将健康的雄性成年C57小鼠分为照射对照 组和STA给药组，每组10只。STA组小鼠于照射前Ih单次灌胃20mg/kg的STA5326 (0. 2ml/ 鼠），照射对照组灌胃PEG400 0.2ml/鼠。小鼠受照射剂量为6°C〇y射线全身一次照射 8. 5Gy，照射剂量率为61. 6cGy/min，照射后每天两次观察小鼠的存活情况，连续观察30天。 结果表明，照射对照组小鼠于照射后第10天开始出现死亡，两周内无一存活，而STA组小鼠 则自第14天才开始出现死亡，30天时存活40% (图1)。
[0110] 2, STA5326在照射前1小时单次灌胃可促进受照射小鼠造血细胞恢复
[0111] 射线照射后，机体造血功能受到损伤，血细胞数迅速减少，而白细胞、血小板数量 锐减导致的感染和出血并发症常常引起病人死亡，红细胞数量和血红蛋白含量的减少引发 贫血也不容忽视。为了观察STA对受照射机体造血功能的影响，我们用6. 5Gy6°C〇y射线一 次全身照射（照射剂量率61. 6cGy/min)C57小鼠建立急性照射引起的造血系统损伤模型。 小鼠分为照射对照和STA 10mg/kg、20mg/kg和30mg/kg共四组，每组8只。STA三个给药 组小鼠分别在照射前Ih单次灌胃10mg/kg、20mg/kg和30mg/kgSTA5326,照射对照组灌胃 0.2ml/鼠的PEG400。于照射后不同时间取尾静脉血检测外周血细胞数。结果显示，与照射 对照组相比，照射前Ih给小鼠单次灌胃STA532610、20和30mg/kg均能够促进小鼠外周血 细胞的恢复，尤其是对外周血血小板数、红细胞数的促恢复作用显著；而且随着用药剂量增 加，该效应呈现增强的趋势，以30mg/kg组促血细胞恢复效果最为明显（图2)。
[0112] 3,不同剂量的STA5326在照射前1小时单次灌胃对受照射小鼠造血恢复的影响
[0113] 进一步观察不同剂量的STA5326于照射前单次灌胃给药对6. 5Gy6°C〇 γ身线全身 照射（照射剂量率60.0 cGy/min)小鼠造血细胞恢复的影响。实验发现，与照射对照组相 比，照射前111分别给057小鼠（11 = 8)灌胃2〇11^/1^、3〇11^/1^、4〇11^/1^和5〇11^/1^51厶5326 时，各组小鼠外周白细胞恢复趋势无显著差异，但是30和40mg/kg给药组小鼠外周血血小 板和红细胞的恢复趋势基本一致而明显优于照射对照组，20mg/kg和50mg/kg组与照射对 照组的差异不明显（图3)。
[0114] 4, STA5326在照射前不同时间预防给药对受照射小鼠造血恢复的影响
[0115] 在上述实验基础上，以6. 5Gy6°C〇 γ射线全身照射（照射剂量率60.0 cGy/min) 小鼠为模型，观察了 STA在照射前不同时间给药对辐射损伤小鼠造血恢复的影响。C57小 鼠分为照射对照和STA给药组，其中STA的给药时间分别设为照射前24h(-24h)、照射前 12h (_12h)、照射前3h (_3h)和照射前Ih (-Ih)共4组，每组8只。STA给药组分别在照射 前相应时间单次灌胃STA5326 30mg/kg(0. 2ml/鼠），照射对照组灌胃0. 2ml/鼠的PEG400。 检测小鼠外周血细胞，结果表明，照射前24h内单次灌胃STA 30mg/kg均能促进6. 5Gyy射 线全身照射小鼠的造血细胞恢复，其中以照射前3h给药的作用效果最明显（图4)。
[0116] 5, STA5326在照射前3h单次灌胃给药显著提高致死剂量照射小鼠存活率
[0117] 上述实验中观察到STA在照射前给药时以照射3h给约对辐射损伤小鼠造血系统 恢复的促进作用最为明显，为了确证STA的辐射防护作用，本实验观察了 8. 5Gy6°C〇 γ射线 (照射剂量率60.0 cGy/min)全身照射前3h给C57小鼠分别灌服STA5326 20mg/kg、30mg/ kg和40mg/kg(η = 10)，观察小鼠30天的存活情况。如图5所示，与照射对照组比较， STA532620mg/kg组小鼠存活率无明显提高，但小鼠开始死亡时间推迟；而STA 30mg/kg和 40mg/kg给药不仅延长了死亡鼠的存活时间，而且30天存活率提高50% (照射对照组为 0) 〇
[0118] 6, STA5326在照射前3h单次灌胃给药对受照射小鼠骨髓造血干细胞的影响
[0119] 现已证明STA5326在照射前3h单次灌胃给药可以显著促进受照射小鼠造血细胞 恢复，并能提高致死剂量照射小鼠的存活率。基于此，我们进一步观察了 STA5326预防给药 对受照射小鼠造血干细胞的影响。将40只健康成年的雄性C57分为照射对照组和STA组， 每组20只。STA组小鼠于照射前3h单次灌胃STA5326 30mg/kg (0. 2ml/鼠），照射对照组灌 服PEG400 0. 2ml/鼠。小鼠均接受6. 5Gy 6°C〇y射线全身照射。分别在照射后3小对、1、 10和14天每组处死5只小鼠，收集股骨骨髓细胞，以LinFITC、c-kit APC和Sca-I PE-Cy7 标记细胞后用流式细胞仪检测骨髓细胞中造血干祖细胞的含量。如图6所示，STA组小鼠在 照射后3h骨髓中活的的单个有核细胞数量明显高于照射对照组；分析Lin c-kit+Sca-l细 胞和Lin c-ki/Sca-Γ含量显示，照射后14天STA组该两种细胞的数量均高于照射对照组。 该结果表明，STA照射前给药不仅能保护受照射小鼠骨髓细胞，还能刺激恢复期造血干细胞 生成。
[0120] 7, STA5326在照射后不同时间单次灌胃给药对受照射小鼠造血恢复的影响
[0121] 明确了 STA在照射前给药对急性辐射损伤小鼠有明显的防护作用后，为进一步研 究STA在照射后给药对急性辐射损伤有无治疗作用，将6. 5Gy 6°Co γ射线全身照射（照 射剂量率60.0 cGy/min)C57小鼠分为照射对照组和STA治疗组，其中STA组分为照射后 Ih (+Ih)、照射后3h (+3h)、照射后12h (+12h)、照射后24h (+24h)。STA给药组分别在照射后 相应时间单次灌胃STA5326 30mg/kg (0. 2ml/鼠），照射对照组灌胃0. 2ml/鼠的PEG400。检 测小鼠外周血象结果表明，照射后24h内单次灌胃STA 30mg/kg均能促进6.5Gyy射线全 身照射小鼠的造血细胞恢复，尤其是对血小板和红细胞数的促恢复作用显著，其中以照射 后24h给药组作用效果最明显（图7)。
[0122] 8, STA5326在照射前3小时单次腹腔注射给药可促进受照射小鼠造血恢复，并使 致死剂量照射小鼠活存率提高90 %。
[0123] 上述研究发现STA在照射前及照射后灌胃给药不仅可以促进辐照小鼠造血功能 恢复，还显著提高致死剂量照射小鼠的存活率，延长存活时间。本实验中将STA的给药方 式改为腹腔注射进一步观察其对小鼠的辐射防护效果。结果发现，6. 5Gy全身照射前3h给 C57小鼠腹腔注射STA5326 30mg/kg可以提高小鼠外周血白细胞的最低值，并促进血小板 和红细胞数的恢复（图8)。提示，STA腹腔注射给药对小鼠的造血系统同样有辐射防护作 用。以8. 5Gy致死剂量照射小鼠为模型的研究结果显示，照射前3h单次腹腔注射STA5326 30mg/kg可使小鼠的活存率提高90% (图9)。
【主权项】
1. PIKfyve抑制剂如结构式（I)的氨基喀晚类化合物的抗福射损伤的医药用途，用于 在有其需要的个体内预防和/或治疗电离福射所引起的损伤的方法。其中：X和Y分别是含有1-5个杂原子取代的C6-C20的烷基，芳基，烷氧基，芳氧基，或 取代的氨基；W为取代的氨基，与X可W连接成环，也可W不存在；Z为烷氧基，取代的氨基 或取代的琉基，Z可W与Y连接成环，也可W不与Y连接；U为氧原子或亚甲基。2. 如权利1所述的化合物的抗福射损伤的药物用途，其中X和Y分别是含有1-5个杂 原子取代的烷基，芳基，烷氧基，芳氧基，或取代的氨基；W为取代的氨基，与X可W连接成 环，也可W不存在；Z为烷氧基，取代的氨基或取代的琉基；U为氧原子，亚甲基。3. 如权利2所述的化合物的抗福射损伤的药物用途，其中X和Y分别是含有1-5个杂 原子取代的C10-C16的烷基，烷氧基，芳基，或取代的氨基；W为取代的氨基，与X可W连接 成环，也可W不存在；Z为氨原子；U为氧原子。4. 如权利3所述的化合物的抗福射损伤的药物用途，其中X和Y分别是含有1-5个杂 原子取代的C10-C16的烷氧基，芳基，或取代的氨基；W为取代的氨基，与X可W连接成环， 也可W不存在；Z为氨原子；U为氧原子。5. 如权利4所述的化合物的抗福射损伤的药物用途，包括但不限于W下化合物。 巧)-4- (6- (2- (3-氯苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）吗嘟（化 合物1)巧)-4- (6- (2- (3-氣苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）吗嘟（化 合物2)巧)-4- (6- (2- (3-舰苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）吗嘟（化 合物3)巧)-4-(6-(2-(3-甲基苯締阱基）-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）吗嘟 (化合物4)巧)-4- (6- (2- (3-漠苯締阱基）-2- (2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）吗嘟（化 合物5)3-漠-Ν' -(6-吗嘟基-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）苯甲酯阱（化合 物6)3-甲基-Ν' -(6-吗嘟基-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）苯甲酯阱（化 合物7)3-甲基-Ν' -(6-吗嘟基-2-(2-(化晚-2-基）乙胺基）喀晚-4-基）苯甲酯阱（化 合物8)N-(3-(4-吗嘟基-化晚巧'，2' :4,5]巧喃[3,2-d]并喀晚-2-基）苯基）尼可酷 胺（化合物13)6-氨基-N-(3-(4-吗嘟基-化晚巧'，2' :4, 5]巧喃[3, 2-d]并喀晚-2-基）苯基） 尼可酷胺（化合物14)巧)-4-(5-(2-(3-甲基苯甲締基）阱基）-2-苯基化挫并[l，5-a]喀晚-7-基）吗嘟 (化合物15)巧)-4-(5-(2-(3-甲基苯甲締基）阱基）-2-(4-化晚基）化挫并[l，5-a]喀晚-7-基） 吗嘟（化合物16)3-甲基-Ν' -(7-吗嘟基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯阱（化 合物17)3-氯-Ν' -(7-吗嘟基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯阱（化 合物18)η 巧)-4-(5-(2-(3-氯苯甲締基）阱基）-2-(4-化晚基）化挫并[l，5-a]喀晚-7-基） 吗嘟（化合物19)3-氣-Ν' -(7-吗嘟基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯阱（化 合物20)巧)-5-(2-(3-甲基苯甲締基）阱）-7-(赃晚-1-基）-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a] 喀晚（化合物21)3-甲基-Ν' -(7-赃晚-1-基-2-(化晚-4-基）化挫[l，5-a]喀晚-5-基）苯甲酯 阱（化合物22)巧)-4-(6-(2-(3-甲基苯締阱基）-2-(2-(化晚-2-基）乙氧基）喀晚-4-基）赃晚 (化合物23)6-氨基-N-(3-(4-赃晚-1-基-化晚巧'，2' :4,引巧喃[3, 2-d]并喀晚-2-基）苯 基）尼可酷胺（化合物24)应当理解，本文所述化合物可W是直接活性物质，或者可W是前药。例如，化合物可W 为憐酸化的形式。 在给出引用专利申请或科学出版物的每种情况下，与化合物相关的主题在此处被并入 本申请作为参考。还包括其可药用盐、相应的外消旋物、非对映异构体、对映异构体、互变异 构体W及上述化合物的相应晶体变体（存在时），例如其中公开的溶剂合物、水合物和多晶 型物。可W如所引用文献中的描述分别制备和施用用作本发明组合中活性成分的化合物。 本发明范围内还包括如上所示的两种W上的单独的活性成分的组合，即本发明范围内的药 物组合可包括Ξ种或更多的活性成分。此外，第一种活性剂和活性助剂不是相同的成分。如 本文所用，给药优选属于口服、注射给药。
【文档编号】A61P39/00GK105963300SQ201510109560
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2015年3月13日
【发明人】余祖胤, 邢爽, 熊国林, 何新华, 从玉文, 罗庆良
【申请人】中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所