专利名称：止痒抗过敏的中药提取物及制备方法、应用和药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物领域，具体涉及止痒抗过敏的中药提取物及制备方法、应用和药物组合物。
背景技术：
随着社会的发展、人们的生活水平不断提高，但伴随而来的是，来自工作、生活等各方面的社会压力却也越来越大，各类疾病困扰 着人们，特别是过敏、瘙痒等疾病的困扰，更是让广大人们苦不堪言。人们对安全有效的天然抗过敏、止痒产品的需求也越来越大。人们皮肤病的主要类型之一就是，来自外源或内源的物质，刺激肥大细胞，进而产生组织胺作用于神经末梢，从而产生红斑、丘疹、瘙痒、疼痛、过敏等症状。现有技术中，抗过敏、止痒产品中以化学合成成分居多，副作用较大，而现今的纯天然、安全的止痒抗过敏药物或产品基本没有。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服了现有技术中的抗过敏、止痒产品中以合成成分居多，副作用较大，并且基本没有纯天然、安全的止痒抗过敏药物或产品的缺陷，提供了一种具有明显的协同抗过敏、止痒效果，纯天然、安全、副作用小的中药提取物及其制备方法、应用和药物组合物。本发明提供一种中药提取物的制备方法，按下述任一方式进行方式一，将原料均匀混合后，用水和/或亲水性溶剂提取即可；方式二，将原料的各成分单独用水和/或亲水性溶剂提取后，均匀混合即可；其中，所述的原料含有下述重量份数的地肤子1-97份，蛇床子1-97份，花椒1-97份，苦参
1-97份，总重量份数为100份。本发明中，所述的地肤子、蛇床子、花椒和苦参本领域技术人员均知，均为中国药典收录名称定义的中药材。本发明中，所述的原料较佳的为含有下述重量份数的地肤子15-55份，蛇床子15-55份，花椒15-55份，苦参15-55份，总重量份数为100份；更佳的为蛇床子25份，花椒25份，苦参25份，总重量份数为100份。本发明中，所述的原料在使用之前，较佳的可按本领域常规操作粉碎后使用，较佳的粉碎的粒径为20 60目。本发明中，所述的亲水性溶剂为本领域常见的亲水性溶剂，较佳的为乙醇、甲醇、
甘油、丙二醇、丁二醇和二丙二醇中的一种或多种。本发明中，所述的原料与水和/或亲水性溶剂的用量关系可为本领域常规使用，较佳的为质量比1:5 1:20，更佳的为质量比1:8 1: 15。当同时使用水和亲水性溶剂时，亲水性溶剂用量较佳的为亲水性溶剂占水和亲水性溶剂体积总量的50% 85%。本发明中，方式一和方式二中，所述的提取的条件为本领域常规条件，提取温度较佳的为50°C 100°C，提取的时间较佳的为2 4小时，提取的次数较佳的为Γ3次。本发明中，方式一和方式二中，所述的提取的步骤之后，较佳的还将获得的水和/或亲水性溶剂的提取物浓缩至温度20°C时相对密度为I. O I. 2后，上非极性大孔吸附树脂柱，之后以体积浓度为60% 95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液即可。其中，所述的非极性大孔吸附树脂为本领域常规所说的非极性大孔吸附树脂，较佳的如HPD100型非极性大孔吸附树脂或DlOl型非极性大孔吸附树脂。其中，所述的水和/或亲水性溶剂的提取物的上样量较佳的为非极性大孔吸附树脂质量的1/10 10倍。其中，所述的洗脱的洗脱液用量较佳的为水和/或亲水性溶剂的提取物的质量的I 4倍。 其中，所述的洗脱的流速较佳的为2 4BV/h。本发明中，所述的中药提取物制备之后还可按照本领域常规将获得的提取液浓缩至含水量小于质量百分比10%。其中，所述的浓缩为本领域常规操作，较佳的为减压浓缩。本发明还提供如前述中药提取物的制备方法制得的中药提取物。本发明还提供一种药物组合物，其含有前述的中药提取物和药学上可接受的赋形剂。本发明中，所述的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，其中，稀释剂如淀粉、糖粉、糊精、微晶纤维素、甘露醇、乳糖和大豆油等；粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素等；崩解剂如羧甲基纤维素钠或低取代羟丙纤维素等；润滑剂如硬脂酸镁或滑石粉等；稳定剂如羧甲基纤维素钠或环糊精等；防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或苯甲酸钠等。另外，还可以在该药物组合物中加入其他辅助剂如香味剂和/或甜味剂如蔗糖、果糖和天冬甜素等。该药物组合物的活性成分是治疗有效量的上述的本发明的石菖蒲提取物。该药物组合物可采用医学领域常规的方法，将所述的活性成分与药学上可接受的载体制成各种剂型。当用于口服时，可将其制备成常规的固体制剂如片剂、胶囊、软胶囊、液体制剂、颗粒剂、煎膏剂、丸剂、悬浮剂、分散剂、糖浆剂或栓剂等；用于注射时，可将其制备成注射液。在各种制剂中，中药提取物的含量为质量百分比1°/Γ100%，优选的含量为质量百分比509^100%。本发明还提供前述的中药提取物在制备抗过敏和/或止痒的药物、护肤品或洗护产品中的应用。本发明中，所述的护肤品或洗护产品为本领域常规所说，可为常规的气雾剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、软膏剂、半流体制剂、片剂或粉剂。本发明中，制备护肤品或洗护产品时，本领域技术人员可以选用任意合适的香精或防腐剂；如，防腐剂一般选用尼泊金酯类、苯甲酸/苯甲醇及衍生物类、咪唑烷基脲或甲基异噻唑琳酮及其氯代物等；香精一般根据实际需要选用。本发明所用试剂和原料除特殊说明外均市售可得。在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征的优选条件可以任意组合得到本发明较佳实例。本发明的积极进步效果在于本发明的中药提取物抑制组织胺释放效果，所用药物浓度明显低于单一中药提取物使用时的浓度，具有更高的抑制组织胺的作用，安全无刺激，能够起到止痒、抗过敏的作用。本发明方式一制得的中药提取物具有更优的抗过敏、止痒效果。
图I为效果实施例I的各种中药提取物对抗原致敏的大鼠肥大细胞组织胺释放的抑制作用比较图。
具体实施例方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算；各实施例中的相对密度均为20°C时测得的值。实施例I取地肤子25kg，蛇床子25kg，花椒25kg，苦参25kg，配制提取溶剂体积浓度50%乙醇水溶液(V/V)，配置洗脱液体积浓度95%乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂柱(HPD100型，上海摩速科学器材有限公司)，原药提取溶剂质量比=1 :20，提取液树脂洗脱液质量比=10 1 10o将地肤子粉碎至20 60目，用500L提取溶剂，在75 °C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将乙醇蒸干，浓缩至10 15kg (地肤子提取物)，为便于检测活性做定量比较，稀释至相同倍数，加入35kg丙二醇，加水补充到50kg使用，即得地肤子提取液(单独使用，作为对比例I)。将蛇床子粉碎至20 60目，用500L提取溶剂，在75 °C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将乙醇蒸干，浓缩至10 15kg (蛇床子提取物)，为便于检测活性做定量比较，稀释至相同倍数，加入35kg丙二醇，加水补充到50kg使用，即得蛇床子提取液(单独使用，作为对比例2)。将花椒粉碎至20 60目，用500L提取溶剂，在75 °C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将乙醇蒸干，浓缩至10 15kg (花椒提取物)，为便于检测活性做定量比较，稀释至相同倍数，加入35kg丙二醇，加水补充到50kg使用，即得花椒提取液(单独使用，作为对比例3)。将苦参粉碎至20 60目，用500L提取溶剂，在75 °C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将乙醇蒸干，浓缩至10 15kg，即得苦参提取液，为便于检测活性做定量比较，稀释至相同倍数，加入35kg丙二醇，加水补充到50kg使用(单独使用，作为对比例4)。取上述地肤子提取液10kg、蛇床子提取液10kg，花椒提取液10kg、苦参提取液10kg，充分混匀，即得本发明的中药提取物。
实施例2取地肤子15kg，蛇床子15kg，花椒15kg，苦参55kg，配制提取溶剂体积浓度50%乙醇水溶液(V/V)，配置洗脱液体积浓度95%乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂柱(D101型，天津欧瑞生物科技有限公司)，原药提取溶剂的质量比=1 :5，提取液树脂洗脱液的质量比=1 10 :4。将地肤子、蛇床子、花椒、苦参粉碎至20 60目混匀，用2000L提取溶剂，在65 °C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为4BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将乙醇蒸干,浓缩至40 60kg，为便于检测活性做定量比较，稀释至相同倍数，加入140kg丙二醇，加水补充到200kg，即得中药提取物。实施例3
取地肤子97kg，蛇床子1kg，花椒1kg，苦参Ikg ;配置洗脱液体积浓度85%乙醇水溶液(V/V)。选择非极性树脂柱(HPD100型，上海摩速科学器材有限公司)，原药提取溶剂质量比=1 :15,提取液树脂洗脱液的质量比=1 1 :2。将地肤子、蛇床子、花椒、苦参分别粉碎至20 60目，用水作为提取溶剂，分别在100°C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将4味药材的洗脱段混合，把乙醇蒸干至含水量小于质量百分比10%，即得中药提取物。实施例4取地肤子55kg，蛇床子15kg，花椒15kg，苦参15kg，配制提取溶剂体积浓度10%丙二醇水溶液(V/V)，配置洗脱液体积浓度80%乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂柱(D101型，天津欧瑞生物科技有限公司)，原药提取溶剂质量比=1 :8，提取液树脂洗脱液的质量比=5 1 20o将地肤子、蛇床子、花椒、苦参粉碎至20 60目混匀，用2000L提取溶剂，在100°C条件下提取3小时，浓缩至相对密度为I. O I. 2之间，经非极性树脂柱吸附洗脱，洗脱流速为2BV/h，收集通过树脂柱的洗脱液，将乙醇蒸干至含水量小于质量百分比10%，即得中药提取物。实施例5取地肤子20kg，蛇床子20kg，花椒35kg，苦参25kg，配制提取溶剂体积浓度50%乙醇水溶液(V/V)。将地肤子、蛇床子、花椒、苦参粉碎至20 60目混匀，用2000L提取溶剂，在65 °C条件下提取3小时，过滤，将滤液中乙醇蒸干，浓缩至40 60kg，加入140kg丙二醇，加水补充到200kg，即得中药提取物。实施例6取地肤子10kg，蛇床子55kg，花椒10kg，苦参25kg，配制提取溶剂体积浓度25%甲醇和25%甘油的水溶液(V/V)，提取温度50度，提取3次；其余条件同实施例2。实施例7取地肤子10kg，蛇床子10kg，花椒55kg，苦参25kg，配制提取溶剂体积浓度50%丁二醇溶液(V/V)，提取温度85度，提取I次，提取时间4小时；其余条件同实施例2。实施例8-10
实施例8-10分别取实施例2-4的中药提取物用量为质量百分比1%、20%和50%，与微晶纤维素、预胶化淀粉和交联聚乙烯吡咯烷酮(此三种成分等量，与中药提取物一起总量至100%)均匀混合，然后与5%乙醇溶液混合，制粒、干燥，之后再与润滑剂混合，压片即可，即得中药提取物的片剂。效果实施例I、设备与材料仪器C02培养箱(日本三洋)；405型酶标仪(美国Bio-Rad公司)；微量加样器(eppendorf ) ;^[>|/L(eppendorf)0试剂待测样品为实施例I、实施例2、实施例I中获得的对比例1-4地肤子提取液蛇床子提取液、花椒提取液和苦参提取液，用PBS溶液稀释为10mg/ml和lmg/ml，置冰箱中·于2°C _8°C保存；牛血清白蛋白(BSA)(上海生工);二甲基苯二醛(OPT) (sigma)；Compound48/80 (sigma)。Tyrode 培养液(1L):葡萄糖 lg、NaCl 8g、KCl 0. 2g、CaCl2 · 2H20 0. 2g、MgCl2O. lg、NaH2PO4O. 5g、HEPES 2. 4g, 115。。2Omin 高压灭菌。实验动物SD大鼠，雄性，体重约200克(购买于上海西普尔-必凯实验动物有限公司)。2、实验方法2· I、大鼠腹腔肥大细胞(Rat peritoneal mast cells, RPMC)的分离将正常大鼠断颈椎处死，置于75%消毒酒精消毒(保持其头部在酒精液面以上防止酒精灌入其腹中)，剪开腹部毛皮，腹腔注射预冷的TyiOde培养液(含0. 1%BSA) 40ml，轻轻按摩腹部以漂洗腹腔，吸取漂洗液置于已灭菌的离心管中离心(41，1500印111，101^11)，弃上清，吸取适量Tyrode培养液(含0. 1%BSA)重悬细胞，肥大细胞浓度约为105cells/ml。2. 2、肥大细胞脱颗粒实验将混匀后的肥大细胞液分装到灭菌后的印pendorf管，每管200 μ 1，在不同样本中以25μ I的相同体积加入不同的中药提取物，立即混匀，置入5%C0237°C孵箱孵育IOmin0取出样本，以25 μ I相同体积加入Compound 48/80(终浓度为10 μ g/ml),再次置入5%C0237°C孵箱孵育20min后取出，将样本置入冰盒冷却IOmin以终止反应。其中，Control样本不添加任何中草药提取物和诱导剂，以50 μ I Tyrode培养液(含0. 1%BSA)补足体积，Model样本只添加25 μ I的Compound 48/80以诱导肥大细胞脱颗粒，并以25 μ I的Tyrode培养液(含0. 1%BSA)补足剩余体积。2. 3、组织胺的测定将反应终止后的样本离心(4°C，1500rpm，10min)，离心后的样本中肥大细胞会沉淀在EP管底部，将上清取出，置入4°C冰箱待用。以250 μ I的Tyrode培养液(含0. 1%BSA)重悬沉淀的肥大细胞，重悬后，置入90 °C水浴锅加热,5min后取出，立即置入冰盒,待样本彻底冷却后取出，再次置入90 V水浴锅加热，反复多次，利用热胀冷缩的原理以达到破碎细胞的目的。将破碎后的样本离心(4°C，1500rpm，lOmin)，取上清。取各样品以250 μ I双蒸水稀释后，加入125 μ I浓度为0. 4mol/L的NaOH碱化，震荡混勻并迅速加入质量分数为0. 1%的邻苯二甲醒(o-phthaldialdehyde, OPT)的甲醇液100 μ 1，立即混匀，冰浴反应40min。最后在每个样品加如125 μ I浓度为0. 5mol/L的HCl酸化以终止缩合反应并使荧光物质稳定。处理过的样品以每个样品3孔、每孔200 μ I的方式加入96孔板,测定突光值(激发波长350nm,发射波长443nm)。3、结果与讨论数据的处理与分析每个数据均为3个平行复管的平均数。根据测得的荧光强度，计算各样本的组织胺释放率。并根据组织胺释放率计算各样本中中药提取物对肥大细胞脱颗粒反应的抑制率。计算公式如下组织胺释放率(Histamine Release Ratio)=上清液组织胺吸光值/ (上清液组织胺吸光值+细胞内组织胺吸光值)X 100%抑制率(Inhibition Ratio) =[1-(样本组织胺释放率一正常对照组织胺释放率)/ (模型对照组织胺释放率一正常对照组织胺释放率)]X100%经统计，各样品中药提取物对抗原致敏的大鼠肥大细胞组织胺释放的抑制作用比较图如图I所示，具体的组织胺释放率和组织胺释放抑制率结果记载于表I。表I中药提取物对抗原致敏的大鼠肥大细胞组织胺释放的抑制作用
权利要求
1.一种中药提取物的制备方法，其特征在于，其按下述任一方式进行 方式一，将原料均匀混合后，用水和/或亲水性溶剂提取即可； 方式二，将原料的各成分单独用水和/或亲水性溶剂提取后，均匀混合即可； 其中，所述的原料含有下述重量份数的地肤子1-97份，蛇床子1-97份，花椒1-97份，苦参1-97份，总重量份数为100份。
2.如权利要求I所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述的原料为含有下述重量份数的地肤子15-55份，蛇床子15-55份，花椒15-55份，苦参15-55份，总重量份数为100份；较佳的为蛇床子25份，花椒25份，苦参25份，总重量份数为100份；所述的原料在使用之前，较佳的粉碎后使用；所述的粉碎的粒径较佳的为20 60目。
3.如权利要求I所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述的亲水性溶剂为乙醇、甲醇、甘油、丙二醇、丁二醇和二丙二醇中的一种或多种。
4.如权利要求I所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述的原料与水和/或亲水性溶剂的用量关系为质量比1:5 1:20，较佳的为质量比1:8 1:15 ;当同时使用水和亲水性溶剂时，亲水性溶剂用量较佳的为亲水性溶剂占水和亲水性溶剂体积总量的50% 85% ;所述的提取的条件较佳的为提取温度为50°C 100°C，提取的时间为2 4小时，提取的次数为3次。
5.如权利要求I所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述的提取的步骤之后，还将获得的水和/或亲水性溶剂的提取物浓缩至温度20°C时相对密度为I. O I. 2后，上非极性大孔吸附树脂柱，之后以体积浓度为60% 95%的乙醇水溶液或甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液即可。
6.如权利要求5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述的非极性大孔吸附树脂为HPD100型非极性大孔吸附树脂或DlOl型非极性大孔吸附树脂；所述的水和/或亲水性溶剂的提取物的上样量为非极性大孔吸附树脂质量的1/10 10倍；所述的洗脱的洗脱液用量为水和/或亲水性溶剂的提取物的质量的I 4倍；所述的洗脱的流速为2 4BV/h0
7.如权利要求I或5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述的中药提取物制备之后还将获得的提取液浓缩至含水量小于质量百分比10%;所述的浓缩较佳的为减压浓缩。
8.—种如权利要求1-7任一项所述的中药提取物的制备方法制得的中药提取物。
9.一种药物组合物，其特征在于，其含有权利要求8所述的中药提取物和药学上可接受的赋形剂；所述的中药提取物的含量较佳的为质量百分比ι°/Γιοο%，更佳的为质量百分比 50%"I00%ο
10.如权利要求8所述的中药提取物在制备抗过敏和/或止痒的药物、护肤品或洗护产品中的应用。
全文摘要
本发明公开一种止痒抗过敏的中药提取物及制备方法、应用和药物组合物。该中药提取物制备方法按下述任一方式进行方式一，将原料均匀混合后，用水和/或亲水性溶剂提取即可；方式二，将原料的各成分单独用水和/或亲水性溶剂提取后，均匀混合即可；其中，所述的原料含有下述重量份数的地肤子1-97份，蛇床子1-97份，花椒1-97份，苦参1-97份，总重量份数为100份。该中药提取物的药物组合物具有明显的协同抗过敏、止痒效果，副作用小。
文档编号A61Q19/00GK102949506SQ201210140968
公开日2013年3月6日 申请日期2012年5月8日 优先权日2012年5月8日
发明者李成亮, 翟春涛, 孙常磊, 朱丽平, 侯伟伟 申请人:上海莱博生物科技有限公司