一种重组枯草芽孢杆菌细胞在酶法生物降解N-甲基有机氮农药中的应用的制作方法

文档序号:20688293发布日期:2020-05-08 19:00阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组bacillussubtiliswb600细胞在酶法生物降解n-甲基有机氮农药中的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞为转化带有pma5-trsox基因质粒或pma5-ywbn-trsox基因质粒的重组细胞。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞制备方法如下:将thermomicrobiumroseum肌氨酸氧化酶基因构建于pma5-trsox质粒,并转化bacillussubtiliswb600细胞中,并进行胞内表达,得到重组bacillussubtiliswb600细胞;其中,所述pma5-trsox质粒的基因序列如seqidno.1所示。

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞制备方法如下:将thermomicrobiumroseum肌氨酸氧化酶基因构建于ma5-ywbn-trsox质粒,并转化bacillussubtiliswb600细胞中,并进行内分泌表达,得到重组bacillussubtiliswb600细胞;其中,所述pma5-ywbn-trsox质粒的基因序列如seqidno.2所示。

4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞在酶法生物降解n-甲基有机氮农药的具体方法步骤如下:将所得重组bacillussubtiliswb600细胞进行发酵培养,并与n-甲基有机氮农药溶液混合,进行生物降解。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞的酶法生物降解n-甲基有机氮农药的具体方法步骤如下:将所得重组bacillussubtiliswb600细胞进行发酵培养,得到培养液上清,并将所得培养液上清与n-甲基有机氮农药溶液混合,进行生物降解。

6.根据权利要求4或5所述的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞发酵的方法为:使用tb培养基,在30-50℃下,发酵36-72h。

7.根据权利要求4或5所述的应用,其特征在于,所述生物降解的反应条件为:ph值为6-8,温度为30-50℃,时间为3-5h。

8.根据权利要求4或5所述的应用,其特征在于,所述重组bacillussubtiliswb600细胞或培养液上清与n-甲基有机氮农药溶液的体积用量比为1:1-1:50。

9.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述n-甲基有机氮农药为西维因、速灭威、涕灭威、害扑威、残杀威、涕灭威、灭多威、异丙威、混杀威、牙根灵中一种或多种。


技术总结
本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌细胞在酶法生物降解N‑甲基有机氮农药中的应用,属于生物工程技术领域。其具体应用工艺包括:将Thermomicrobium roseum肌氨酸氧化酶基因构建于pMA5‑trsox或pMA5‑YwbN‑trsox质粒,并转化Bacillus subtilis WB600细胞中进行胞内表达或分泌性表达,将转入pMA5‑trsox或pMA5‑YwbN‑trsox基因质粒的Bacillus subtilis WB600细胞进行发酵,获得的细胞及培养液上清与有机氮农药溶液混合进行生物降解。本发明具有较强生物安全性,生物降解活性高。

技术研发人员:辛瑜;张梁
受保护的技术使用者:江南大学
技术研发日:2020.01.09
技术公布日:2020.05.08
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