一种制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物防治肥的制备领域，具体涉及一种制备能有效抑制杀灭沙棘病理 真菌的生物肥的方法。
【背景技术】
[0002] 沙棘（HippophaerhamnoidesL.)又名醋柳、酸刺，胡颓子科沙棘属落叶灌木或乔 木，是集生态效益、经济效益和社会效益于一体的优良树种。沙棘果实、叶、皮中含有丰富生 物活性物质和多种维生素、氨基酸、脂肪酸、微量元素等营养成分，具有很高营养保健和药 用价值。沙棘枝繁叶茂，根系发达，有固氮根瘤，可以活化土壤中的微生物，对干旱、瘠薄、高 温、低温、盐碱有很强适应性，在改善土壤肥力，防风固沙，防止水土流失方面成效显著。
[0003] 沙棘病虫害种类较多，其病害主要有沙棘腐朽病、沙棘烂皮病、沙棘干枯病、沙棘 叶斑病、沙棘缩叶病、沙棘猝倒病、菟丝子等；沙棘虫害有沙棘象、沙棘实蝇、沙柳木蠹蛾、柳 干木蠹蛾、红缘天牛、栎黄枯叶蛾、黄褐天幕毛虫、沙棘巢蛾、舞毒蛾、沙枣尺蛾、兰目天蛾、 沙棘木虱、华北蝼蛄、黑绒鳃金龟等。沙棘病虫害如不及时防治，对沙棘园及人工林造成大 量减产，有的危险性病害如国外传来的沙棘干枯病，目前已在国内沙棘产区大量蔓延，造成 人工林成片死亡。在虫害方面，沙棘象、红缘天牛、沙棘蝇等种实害虫和蛀干害虫危害也很 严重，1990年铜川发生大面积沙棘象危害，种实被害率达80%以上，当年沙棘种子颗粒无 收，部分沙棘饮料加工厂被迫停产。蛀干害虫红缘天牛在陕北长城沿线风沙区定边至神木 一线危害猖獗，沙棘被害率达60%以上，平均每株有虫5头以上，常造成大面积风折，给以 沙棘为主的生态林建设带来巨大损失。
[0004] 沙棘干缩病也称干枯病或者枯萎病，是沙棘栽培区都可能出现的一种毁灭性病 害，Fusariummoniliforme是其病原之一。沙棘干缩病病原菌潜伏时间长，侵染于花期，7 月中旬为零星发病阶段，8月中下旬进入发病盛期。大多数病斑分布在树干、大枝基部。该 病发生突然，传染性强，一旦发病，短时间内同一园区将有15% -80%的树发病，造成病株 提前落叶，有效寿命缩短。发病一般当年不严重，第2年表现严重，第3-4年树干枯萎、干缩 死亡。
[0005] 植物病理真菌主要存在于土壤中，在植物生长中感染植物，引起植物病害、造成生 产损失。因此，要从生物防治的角度消除植物真菌病害，除了杀灭植株上的病理真菌，杀灭 或抑制土壤中的病理真菌也至关重要，而使用具有生物防治功效的生物肥是实现这一目的 的有效途径。在各种生物肥中，长久以来我国应用的都是无芽孢菌类。但是无芽孢菌抗逆 性低，对于干燥高温的抵抗能力差，所以当制成液体或者吸附剂时稳定性不高。生物肥发展 的新趋势应是大力发展抗逆性高、能够长期稳定生存的芽孢杆菌。特别是芽孢杆菌能够产 生多种抗真菌物质，对植物病原菌有显著抑制作用，并且对人畜无害，也不会污染环境，将 在防治植物真菌病害中起重要作用。
[0006] 芽孢杆菌形态上呈直或者近直的杆状，好氧或者兼性厌氧，革兰氏阳性，在特定环 境条件下能产生抗逆性内生孢子。芽孢杆菌在植物中广泛定殖，被认为是公认的食品级安 全微生物（generallyregardedassafety,GRAS)。枯草芽抱杆菌是一种典型的芽孢杆菌， 产生抗菌蛋白、多肽类物质、脂类物质及beta葡聚糖酶等抗菌物质，特别是beta葡聚糖酶 等水解酶类与其抗植物病理真菌能力有密切关系，因为真菌细胞壁的组成是葡聚糖。
【发明内容】
[0007] 本发明提供了一种制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，通过将产 beta葡聚糖酶的枯草芽孢杆菌（CICC10339)融入沙棘天然菌群中，制成能够通过生物防 治途径有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥。
[0008] 一种制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，包括以下步骤：
[0009] 1)将枯草芽孢杆菌（CICC10339)进行培养，制成密度109~10 1(lCfu/mL的高密度 菌悬液；
[0010] 2)将沙棘健康枝条剪成小段进行堆肥，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬 液，堆肥结束后进行发酵，经发酵后得到能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥。
[0011] 本发明中，将沙棘健康枝条剪成小节堆肥，使所制备生物肥中的菌群即为健康沙 棘植株本身天然菌群，此菌群与沙棘植株协同进化生长，形成了互益共生体系，对病害真菌 有一定生物防治作用。进一步地，将能够产beta葡聚糖酶的枯草芽孢杆菌（CICC10339)加 入堆肥中，显著加强对沙棘病害真菌的生物防治作用。枯草芽孢杆菌（CICC10339)由于产 beta葡聚糖酶，对沙棘植株纤维有良好分解作用，为堆肥发酵过程所必须，故能够充分融入 到堆肥菌群中稳定持久地增殖。如同乳酸菌对于动物的益生作用，抑制杀灭植物病理真菌 的微生物可以称之为植物益生菌。本发明所制备生物肥中，枯草芽孢杆菌（CICC10339)即 是沙棘益生菌，对沙棘病理真菌有显著生物防治作用。
[0012] 步骤1)中，枯草芽孢杆菌（CICC10339)采用现有技术，来自中国工业微生物菌 种保藏管理中心（CICC)，地址：北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼；保藏日期为2007 年，菌种保持编号为10339。枯草芽孢杆菌（CICC10339)可以向中国工业微生物菌种保藏 管理中心购买。
[0013] 将枯草芽孢杆菌（CICC10339)进行培养，包括：枯草芽孢杆菌（CICC10339)的出 发密度为1〇6~1〇7个/mL，接种至液体培养基中接种量为1%~5%，33°C~39°C振荡培养 20~28h，至菌液密度为109~10 1(lcfu/mL的高密度菌悬液。
[0014] 进一步优选，将枯草芽孢杆菌（CICC10339)进行培养，包括：枯草芽孢杆菌（CICC 10339)的出发密度为106~10 7个/mL，接种至液体培养基中接种量为2%~3%，36°C~ 37°C振荡培养22~26h，至菌液密度为109~10 1(lCfu/mL的高密度菌悬液。
[0015] 所述的液体培养基，以1L计，包括以下组分：
[0016]
【主权项】
1. 一种制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征在于，包括以下步 骤： 1) 将枯草芽孢杆菌CICC10339进行培养，制成密度IO9~10ltlCfuAiL的高密度菌悬 液； 2) 将沙棘健康枝条剪成小段进行堆肥，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬液，堆 肥结束后进行发酵，经发酵后得到能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥。
2. 根据权利要求1所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征 在于，步骤1)中，将枯草芽孢杆菌CICC10339进行培养，包括：枯草芽孢杆菌CICC10339 的出发密度为IO6~10 7个/mL，接种至液体培养基中接种量为1 %~5%，33°C~39°C振荡 培养20~28h，至菌液密度为IO9~10ltlCfuAiL的高密度菌悬液。
3. 根据权利要求2所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征 在于，步骤1)中，将枯草芽孢杆菌CICC10339进行培养，包括：枯草芽孢杆菌CICC10339 的出发密度为IO6~10 7个/mL，接种至液体培养基中接种量为2%~3%，36°C~37°C振荡 培养22~26h，至菌液密度为IO9~10ltlCfuAiL的高密度菌悬液。
4. 根据权利要求2或3所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其 特征在于，所述的液体培养基，以IL计，包括以下组分：
5. 根据权利要求4所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征 在于，所述的液体培养基，以IL计，包括以下组分：
6. 根据权利要求1所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特 征在于，步骤2)中，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬液，包括：在堆肥内部温度达 到30°C~34°C时，喷施步骤1)中的高密度菌悬液，继续堆肥，待堆肥内部温度达到41°C~ 45 °C时堆肥結束。
7. 根据权利要求6所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征 在于，步骤2)中，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬液，包括：在堆肥内部温度达到 32°C时，喷施步骤1)中的高密度菌悬液，继续堆肥，待堆肥内部温度达到43°C时堆肥結束。
8. 根据权利要求1所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征 在于，步骤2)中，堆肥结束后，将堆肥撹拌摊凉。
9.根据权利要求1所述的制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，其特征 在于，步骤2)中，所述的发酵采用自然状态下发酵。
【专利摘要】本发明公开了一种制备能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥的方法，包括：将枯草芽孢杆菌制成109～1010cfu/mL的高密度菌悬液；将沙棘健康枝条剪成小段进行堆肥，堆肥过程中喷施枯草芽孢杆菌菌悬液，经堆肥固态发酵后得到能有效抑制杀灭沙棘病理真菌的生物肥。本发明所制备生物肥中，枯草芽孢杆菌即是沙棘益生菌，对沙棘病理真菌有显著生物防治作用。而其中的菌群来源于健康沙棘植株本身天然菌群，此菌群与沙棘植株协同进化生长，形成了互益共生体系，对病害真菌有一定生物防治作用。堆肥过程处理简便，无废水排放，投资少、能耗低、易操作，易于工业化大规模生产，具有良好的经济效益和广阔的应用前景。
【IPC分类】C05F17-00, C05F11-08
【公开号】CN104628428
【申请号】CN201510058383
【发明人】吴渊, 胡慧雯, 徐薇薇, 阮晖, 梁莹, 许丽珍, 吴孔华, 莫建平, 史金昕波, 缪丹, 俞雨, 吴盛彬, 徐腾洋
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月4日