专利名称：尾叶香茶菜中Kamebanin的制备新工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物领域。本发明涉及一种以尾叶香茶菜/socfo" ^ci'se (Maxim.) Hara茎叶为原料 制备Kamebanin的新工艺，其纯度达到98%以上。此种化合物为二萜类物质，结构类型属于贝壳杉烷型， 在其分子结构内存在环外亚甲基环戊酮的结构，此类化合物可以作为抗肿瘤药物的前导化合物。
背景技术：
尾叶香茶菜e;r"幼(Maxim.) Hara，又名龟叶草、狗日草、野苏子，性凉味甘，为多年生 草本植物，分布于我国的吉林、山西、陕西、甘肃等省，在亚洲的朝鲜、苏联和日本也有一定的分布， 生长海拔为550-1100m，大部分生长于草丛、路边、林中和林缘等阴生地带，具有分布广，产量大的特点。 作为香茶菜属众多植物中的一种，尾叶香茶菜同样具有良好的生理活性，在我国民间很早就被用来 治疗风湿感冒、咽喉肿痛、胃炎、膀胱胀痛、关节疼痛、经闭、乳腺炎、跌打损伤、蛇虫咬伤等，该 植物还具有明显的抗癌生理作用，主要取决于其主要成分——二萜类化合物。此类二萜类化合物最大的一 个结构特点就是具有一个环外亚甲基环戊酮的环状结构。已有大量的分子结构与药效关系研究实验证明， 大部分的香茶菜属植物所具有的良好抗癌活性，其活性中心就是这个环外亚甲基环戊酮的环状结构。
对具有药效的香茶菜属植物的化学成分研究，始于日本学者八木等于1910年从延命草中分离得到结 晶苦味质plectranthin。 1958年Takahashi等首次从延命草中(/socto". Ja/ra ica)中分离得到具有抗病 毒作用的的贝壳杉烯型二萜(e"卜kaurene diterpene)类化合物延命素(enmein)，由于这些苦味二萜 化合物对革兰氏阳性菌呈现高度选择的抗菌活性和抗肿瘤活性，因此，从二十世纪八十年代起唇形科香茶 菜植物化学成分的研究非常活跃。到目前为止，人们从尾叶香茶菜中共分离鉴定了23个二萜类成分。
目前获得以上成分的手段均是应用经典的提取分离方法，即选择不同极性的有机溶剂作为提取溶媒， 获得不同极性的组分，不同组分再通过硅胶柱进行单体化合物的分离。
1、 二萜类化合物的提取
甲醇或乙醇提取，醇提取液浓縮至一定体积，并调整适当的醇浓度，再用不同极性的亲脂性有机溶剂 按极性由小到大的递增顺序依次萃取，得到不同脂溶性的萜类提取物。
2、 二萜类化合物的分离
(1) 柱色谱法分离常用的吸附剂为硅胶、中性氧化铝，其中硅胶应用最广。常用的洗脱剂多以石油 醚、正己垸、环己垸等溶剂或用氯仿-乙醇洗脱。
(2) 结晶法分离将其提取液浓縮，再用适当溶剂或方法重结晶。 采用上述提取方法获得Kamebanin单体纯品量较小，不能满足生产和科研需要。
发明内容
本发明涉及一种以尾叶香茶菜/wcto/j eATke (Maxim.) Hara茎叶为原料制备Kamebanin的新工艺， 其纯度达到98%以上。此种化合物为二萜类物质，结构类型属于贝壳杉垸型，在其分子结构内存在环外亚 甲基环戊酮的结构，此类化合物可以作为抗肿瘤药物的前导化合物。本发明的目的是为满足生产和科研上 的需求量，提高收率，降低成本。
(1) 本发明是将尾叶香茶菜茎叶中的杂物除去，然后烘干或晒干，粉碎成40目粉末，采取超声波提 取法，提取频率为100Hz，温度为5(TC，提取时间为30min，提取3次，提取溶剂为70%的乙醇。
(2) 将(1)中的70%的乙醇提取液合并，减压浓縮至小体积，用石油醚脱脂后，加入2倍体积量的 水，放入冰箱内12h后，离心，得上清液。
(3) 将(2)中的上清液通过D,。,大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和杂质，然后再分 别用浓度为10%、 40%的乙醇溶液洗脱，分部收集乙醇洗脱液。
(4) 将(3)中的40%乙醇洗脱液回收乙醇溶剂，获得黄白色粉末。
(5) 将(4)中的黄白色粉末拌入等量的反相树脂，上JTY-1反相树脂柱。用20%-30%乙醇溶液洗脱， 合并乙醇溶液，回收乙醇溶剂后，得白色粉末。
(6) 将(5)中的白色粉末再进行硅胶柱层析，用溶剂系统氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: 1溶液
洗脱,洗脱溶液放置，有结晶状物质析出。
(7) 将(6)中的结晶状物质以95%乙醇进行重结晶，得到化合物Kamebanin，其纯度达到98%以上。
根据本发明，本发明中的是重量百分比。
具体实施例方式
下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。 实施例l:
(1) 取尾叶吞茶菜葶叶2000g，除去萁中的杂物，然后晒干，粉碎成40目粉末，采取轺声波提取 法，提取频率为100Hz，温度为50'C，提取时间为30min，提取3次，提取溶剂为70%的乙醇。
(2) 将(1)中的70%的乙醇提取液合并，减压浓縮至小体积，用石油醚脱脂后，加入2倍体积量的 水，放入冰箱内12h后，离心，得上清液。
(3) 将(2)中的上清液通过DuH大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和杂质，然后再分 别用浓度为10%、 40%的乙醇溶液洗脱，分部收集乙醇洗脱液。
(4) 将(3)中的40%乙醇洗脱液回收乙醇溶剂，获得黄白色粉末。
(5) 将(4)中的黄白色粉末拌入等量的反相树脂，上JTY-1反相树脂柱。用20%-30%乙醇溶液洗脱， 合并乙醇溶液，回收乙醇溶剂后，得白色粉末。(6) 将(5)中的白色粉末再进行硅胶柱层析，用溶剂系统氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: 1溶液
洗脱,洗脱溶液放置，有结晶状物质析出。
(7) 将(6)中的结晶状物质用95%的乙醇进行重结晶，得到化合物Kamebanin (21mg)，其纯度 达到98%以上。
实施例2:
(1) 取尾叶香茶菜茎叶2000g，除去其中的杂物，然后烘干，粉碎成40目粉末，采取超声波提取法， 提取频率为100Hz，温度为50。C，提取时间为30min,提取3次，提取溶剂为70%的乙醇。
(2) 将(1)中的70%的乙醇提取液合并，减压浓縮至小体积，用石油醚脱脂后，加入2倍体积量的 水，放入冰箱内12h后，离心，得上清液。
(3) 将(2)中的上清液通过D,。,大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和杂质，然后再分 别用浓度为10%、 40%的乙醇溶液洗脱，分部收集乙醇洗脱液。
(4) 将(3)中的40%乙醇洗脱液回收乙醇溶剂，获得黄白色粉末。
(5) 将(4)中的黄白色粉末拌入等量的反相树脂，上JTY-1反相树脂柱。用20%-30%乙醇溶液洗脱， 合并乙醇溶液，回收乙醇溶剂后，得白色粉末。
(6) 将(5)中的白色粉末再进行硅胶杵层析，用溶剂系统氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: 1溶液
洗脱，洗脱溶液放置，有结晶状物质析出。
(7) 将(6)中的结晶状物质用95%的乙醇进行重结晶，得到化合物Kamebanin (20 mg)，其纯度 达到98%以上。
权利要求
1、一种以尾叶香茶菜茎叶为原料制备Kamebanin的新工艺，其纯度达到98％以上。
2、 一种制备Kamebanin的新工艺，.其特征在于该工艺包括以下过程(1) 除去尾叶香茶菜茎叶中的杂物，然后烘干或晒干，粉碎成40目粉末，采取超声波 提取法，提取频率为100Hz,温度为50°C,提取时间为30min，提取3次，提取溶剂为70% 的乙醇。(2) 将(1)中的70%的乙醇提取液合并，减压浓縮至小体积，用石油醚脱脂后，加入 2倍体积量的水，放入冰箱内12h后，离心，得上清液。(3) 将(2)中的上清液通过D,。,大孔吸附树脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和杂 质，然后再分别用浓度为10%、 40%的乙醇溶液洗脱，分部收集乙醇洗脱液。(4) 将(3)中的40%乙醉洗脱液回收乙醇溶剂，获得黄白色粉末。(5) 将(4)中的黄白色粉末拌入等量的反相树脂，上JTY-1反相树脂柱。用209i-30% 乙醇溶液洗脱，合并乙醇溶液，回收乙醇溶剂后，得白色粉末。(6) 将(5)中的白色粉末再进行硅胶柱层析，用溶剂系统氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: l溶液洗脱,洗脱溶液放置，有结晶状物质析出。(7) 将(6)中的结晶状物质进行重结晶，得到化合物Kamebanin,其纯度均达到98 %以上。
3、权利要求1-2所述的制备Kamebanin的原料为尾叶香茶菜/soflte arc/sa ( Maxin.) Hara的茎叶。
全文摘要
本发明属于天然药物领域。本发明涉及以尾叶香茶菜Isodon excisa(Maxin.)Hara茎叶为原料制备Kamebanin的新工艺。提取方法为超声波提取法，提取频率为100Hz，温度为50℃，提取时间为30min，提取3次，提取溶剂为70％的乙醇；分离方法用D101型大孔吸附树脂和JTY-1反相树脂柱，再进行硅胶柱层析，并结合重结晶得到化合物，其纯度达到98％以上。此化合物为二萜类物质，结构类型属于贝壳杉烷型，在其分子结构内存在环外亚甲基环戊酮的结构，此类化合物可以作为抗肿瘤药物的前导化合物。本发明的目的是为满足生产和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文档编号C07C45/78GK101306987SQ20081005079
公开日2008年11月19日 申请日期2008年6月4日 优先权日2008年6月4日
发明者雪 王, 蔡恩博, 微 那, 郑友兰 申请人:吉林农业大学