丁胺卡那霉素半抗原及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及一种丁胺卡那霉素半抗原。本发明还公开了所述半抗原的制备方法及其应用。基于丁胺卡那霉素半抗原建立的快速检测试剂盒产品，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时进行丁胺卡那霉素残留的现场监控和大量样本的筛查。
【专利说明】丁胺卡那霉素半抗原及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及丁胺卡那霉素半抗原及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]氨基糖苷类抗生素(AGs)是由氨基糖与氨基环醇形成的苷，AGs的结构和理化性质相似。由于结构中含有多个氨基和羟基，故呈碱性，极性和水溶性较高。AGs的抗菌作用强，属常用的抗生素。常用的氨基糖苷类药物含有I个1，3或1，4 二氨基环多醇和I或2个氨基糖。根据氨基环多醇的结构，可将AGs划分为两大类:链霉胺类和2-脱氧链霉胺类。按其来源，AGs又可分为:由链霉菌产生的抗生素，包括链霉素族、卡那霉素族和新霉素族；有小单孢菌产生的抗生素，主要包括庆大霉素族。
[0003]丁胺卡那霉素(Amikin)又名阿米卡星，是卡那青霉素a的半合成衍生物的硫酸盐。临床主要用于对庆大霉素、卡那霉素耐药的革兰阴性杆菌如大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌引起的各种感染。长期或反复大量摄入丁胺卡那霉素可导致前庭神经和听神经损害，肾脏出现轻度损害，严重者可出现肾功能衰竭。卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，被广泛用于治疗猪、牛、鸡等由金黄色葡萄球菌及结核杆菌所致的各种感染。为保证我国出口禽肉的卫生质量和食用安全，促进禽肉出口，国家质量监督检验检疫局2002年第37号文件中规定了禁用药物和允许使用药物。其中，丁胺卡那霉素最大残留限量为:肌肉100 μ g/kg ;肝300yg/kg。日本肯定列表制度将其列为使用一律标准物质，即最大残留为10 μ g/kg。目前对氨基糖苷类抗生素残留的检测方法主要有高效液相法、微生物法、免疫分析法，此外还有一些其他方法用于氨基糖苷类药物的分析，例如电化学法、薄层色谱法、质谱法等。采用微生物法，不适于快速检测。色谱法需要复杂`昂贵的仪器，且样品前处理过程繁琐，不适应现场大量样本的筛查。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种丁胺卡那霉素半抗原及其制备方法。
[0005]本发明提供的丁胺卡那霉素半抗原分子结构式为:
【权利要求】
1.一种丁胺卡那霉素半抗原，其特征在于分子结构式为:
2.一种制备权利要求1所述丁胺卡那霉素半抗原的方法，其特征在于包括如下步骤: 0.59 g 丁胺卡那霉素 、0.18 g对羧基苯甲醛和I ml吡啶在20 ml DMSO中的混合液，在60°C搅拌反应20小时，蒸除溶剂，柱层析纯化后在乙醇-水体系中重结晶得到丁胺卡那霉素与对羧基苯甲醛的缩合产物，得率70%。
3.一种丁胺卡那霉素抗原，其特征在于由权利要求1所述的丁胺卡那霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，分子结构式为:
4.一种制备权利要求3所述的丁胺卡那霉素抗原的方法，其包括如下步骤: 取丁胺卡那霉素半抗原15mg用1.5ml水溶解，得到溶液I ;取50%的GAlO μ I加入溶液I中，室温下搅拌反应18h得到溶液II ;取载体蛋白60mg用4.5ml水稀释后加入溶液II中；反应过夜后加入24mg NaBH4反应3h，用三蒸水透析48小时，即得免疫原。 取EDC 50mg用2ml水使之充分溶解，得到溶液III ;取丁胺卡那霉素半抗原18mg用2ml水溶解得到溶液IV ;取载体蛋白30mg溶于Iml 0.01mol/L PBS (pH=8.0)溶液中得到溶液V ;将溶液IV与溶液V混合，在磁力搅拌下逐滴加入溶液III，室温下搅拌反应24小时，用三蒸水透析48小时，得到包被原。
5.一种丁胺卡那霉素抗体，其是由丁胺卡那霉素免疫原免疫动物制备得到。
6.如权利要求5所述的抗体，其特征在于所述抗体为丁胺卡那霉素单克隆抗体。
7.如权力要求6所述的抗体，其特征在于丁胺卡那霉素单克隆抗体是由丁胺卡那霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株D-4-3 CGMCC N0.6141分泌获得。
8.由权利要求7所述的抗体制备的丁胺卡那霉素酶联免疫试剂盒。
9.权利要求8所述的丁胺卡那霉素酶联免疫试剂盒检测鸡蛋中丁胺卡那霉素残留的应用。
【文档编号】C07K14/75GK103509068SQ201210208658
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月19日 优先权日:2012年6月19日
【发明者】何方洋, 万宇平, 杨昌松, 孙震, 蒲小容, 刘琳, 靳开颜, 韩雪倩 申请人:北京勤邦生物技术有限公司