一种从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于，包括：在提取之前，选取少量对叶百部样品，利用高效液相色谱检测其金刚大碱或百部新碱的含量；当少量对叶百部样品溶液与金刚大碱对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于50％，剩余样品进行金刚大碱的提取；当少量对叶百部样品溶液与百部新碱对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于50％，剩余样品进行百部新碱的提取。依照本发明的方法从对叶百部样品中筛选出金刚大碱或百部新碱含量较高的样品，从而提取到纯度较高的金刚大碱或百部新碱。
【专利说明】一种从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法。
【背景技术】
[0002] 对叶百部的块根是中药百部的主要来源之一，用于止咳和杀虫。金刚大碱和百部 新碱是其主要的止咳成分之一。对叶百部化学成分较为复杂，金刚大碱和百部新碱是其四 种主成分类型中的两种。此外，金刚大碱具有中枢止咳效应。但是由于生物碱含量较低，二 者的分离提取都较困难。
【发明内容】
[0003] 为了从对叶百部中获得大量的金刚大碱或百部新碱对照品，本发明提供一种从对 叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，依照本发明的方法从对叶百部样品中筛选出金 刚大碱或百部新碱含量较高的样品，从而提取到纯度较高的金刚大碱或百部新碱。
[0004] 本发明提供的技术方案为：
[0005] -种从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，包括：在提取之前，选取少量 对叶百部样品，利用高效液相色谱检测其金刚大碱或百部新碱的含量；
[0006] 当所述少量对叶百部样品溶液与金刚大碱对照品相同保留时间的色谱峰峰面积 大于50%，剩余样品进行金刚大碱的提取；
[0007] 当所述少量对叶百部样品溶液与百部新碱对照品相同保留时间的色谱峰峰面积 大于50%，剩余样品进行百部新碱的提取。这样可以保证要提取的样品中确实含有大量的 金刚大碱或者百部新碱，提高产物的产率和纯度，若该少量对叶百部样品溶液与对照品相 同保留时间的色谱峰峰面积小于50%，虽然也能提取到产物，但是产物中的杂质较多，纯化 较为麻烦，纯度较低。
[0008] 优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，在提取之前， 选取少量对叶百部样品，利用高效液相色谱检测其金刚大碱或百部新碱的含量；
[0009] 在没有金刚大碱对照品时，保留时间10. 5-12. 5min内，具有紫外末端吸收的色谱 峰峰面积大于50%，剩余样品进行金刚大碱的提取；
[0010] 在没有百部新碱对照品时，保留时间15. 5-17. 5min内，具有201nm最大紫外吸收 的色谱峰峰面积大于50%，剩余样品进行百部新碱的提取。这样在没有金刚大碱或者百部 新碱对照品的时候也能判断出样品中金刚大碱或者百部新碱的含量是否丰富，可否用于提 取金刚大碱或者百部新碱。
[0011] 较优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，在没有金 刚大碱对照品或百部新碱对照品时，利用高效液相色谱检测金刚大碱或百部新碱的含量的 色谱条件为：
[0012] 色谱柱：耐喊C18柱，其规格为4· 6_X 250_X 5 μ m ;
[0013] 流动相：0· 02%?0· 05%氨水和乙腈；
[0014] 梯度洗脱：0?2min，使用40%乙腈洗脱；2?30min，使用40 %?65%乙腈洗脱， 洗脱流速为1. OmL/min ;
[0015] 检测波长：200nm-210nm ;
[0016] 柱温：40°C。
[0017] 优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，还包括：
[0018] 金刚大碱的提取：
[0019] 步骤（1)，首先将对叶百部的剩余样品粉碎为粒径彡20目的颗粒，加入95%乙醇 超声提取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩得沉淀，然后加入盐酸酸化溶解，过滤 得滤液，向滤液中加入氨水调节pH为9?10,最后利用氯仿萃取，除去氯仿后即得总生物 碱；
[0020] 步骤⑵，利用硅胶柱进行多次层析，重结晶后即得到金刚大碱。
[0021] 较优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，金刚大碱的 提取的所述步骤（2)中，利用丙酮-石油醚系统重结晶得到金刚大碱。
[0022] 优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，还包括：
[0023] 百部新碱的提取：
[0024] 步骤（1)，首先将对叶百部的剩余样品粉碎为粒径彡20目的颗粒，加入95%乙醇 超声提取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩得沉淀，然后加入盐酸酸化溶解，过滤 得滤液，向滤液中加入氨水调节pH为9?10,最后利用氯仿萃取，除去氯仿后即得总生物 碱；
[0025] 步骤（2)，利用硅胶柱进行多次层析，即得到百部新碱。
[0026] 较优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，利用硅胶 柱进行层析时使用体积比为4:1的石油醚-丙酮混合溶剂作为洗脱剂。
[0027] 较优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，在提取之 前，选取lg对叶百部加入10mL醇溶剂超声提取30分钟得到所述少量对叶百部样品溶液。 [0028] 更优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，所述醇溶 剂为甲醇、70 %甲醇、乙醇、和50 %乙醇中的任意一种。
[0029] 更优选的是，所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法中，所述对叶 百部样品为多株对叶百部的粉末。
[0030] 高效液相色谱相关概念：
[0031] 色谱峰：组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。 正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
[0032] 峰面积：峰与峰底所包围的面积。
[0033] 保留时间：从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
[0034] 峰面积所占百分数是在积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算得 出的，即指金刚大碱或百部新碱的峰面积占此次色谱中所述峰的总面积的百分比。
[0035] 本发明首先使用高效液相色谱检测样品中的金刚大碱或百部新碱的含量，简单实 用，来判断对叶百部样品中是否含有较单一的组分金刚大碱或者百部新碱，不需要再进行 其他额外的操作，使用的试剂为常用试剂，生产成本低，对环境无污染，即可得到组分较单 一的金刚大碱或者百部新碱；而且，依照本发明的方法得到的金刚大碱的纯度可达90%以 上，百部新碱的纯度达到85%以上，具有良好的市场价值。
【专利附图】
【附图说明】
[0036] 图1是本发明所述的金刚大碱的化学结构的示意图；
[0037] 图2是本发明所述的百部新碱的化学结构的示意图；
[0038] 图3是本发明实施例1中的样品的高效液相色谱图；
[0039] 图4是本发明实施例2中的样品的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0040] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文 字能够据以实施。
[0041] 实施例1 :
[0042] 如图1和图3所示，本发明提供一种从对叶百部中提取金刚大碱的方法：取1克对 叶百部加入10毫升甲醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。高效液相色谱仪 的色谱条件为：色谱柱：耐碱(：18柱，其规格为4.611111^25〇11111^511111 ;流动相：0.05%氨水 和乙腈；采用梯度洗脱：〇?2min,使用40%乙腈洗脱；2?30min,使用40%乙腈洗脱，洗 脱流速为1. OmL/min ;检测波长：200nm-210nm之间；柱温：40°C。保留时间10. 5-12. 5min 内，金刚大碱对应的色谱峰面积为85% (积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法 计算），则该样品的剩余样品可作为金刚大碱提取的材料。取500克该样品，粉碎过20目筛 取筛下物，加入95 %乙醇超声提取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩得沉淀，然后 加入盐酸酸化溶解，过滤得滤液，向滤液中加入氨水调节pH为9,最后利用氯仿萃取，除去 氯仿后即得总生物碱。采用体积比为4:1的石油醚-丙酮系统进行多次硅胶柱层析后， 丙酮-石油醚系统进行重结晶得白色晶体1. 2克。经核磁检验该物质为金刚大碱，经液相 检测其纯度大于90%。
[0043] 实施例2 :
[0044] 如图2和图4所示，本发明提供一种从对叶百部中提取百部新碱的方法：取1克对 叶百部加入10毫升70%甲醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。与百部新碱 对照品相同保留时间的色谱峰峰面积为80 % (积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一 化法计算），则该样品的剩余样品可作为百部碱提取的材料。取500克该样品，粉碎过20目 筛取筛下物，加95 %乙醇超声提取2次，每次30分钟，过滤得滤液，合并滤液。之后浓缩得 到沉淀，加盐酸酸化溶解，滤除沉淀，滤液加入氨水调节pH为10,氯仿萃取后回收氯仿即得 总生物碱。采用体积比为4 : 1的石油醚-丙酮系统进行多次硅胶柱层析，干燥后即得淡 黄色至黄色油状固体4. 8克。经核磁检验该固体为百部新碱，经液相检测其纯度大于90%。
[0045] 实施例3 :
[0046] 本发明提供一种从对叶百部中提取百部新碱的方法：取1克对叶百部加入10毫升 乙醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。与百部新碱对照品相同保留时间的色 谱峰峰面积为55% (积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算），则该样品的 剩余样品可作为百部碱提取的材料。取500克该样品，粉碎过20目筛取筛下物，加95%乙 醇超声提取2次，每次30分钟，过滤得滤液，合并滤液。之后浓缩得到沉淀，加盐酸酸化溶 解，滤除沉淀，滤液加入氨水调节pH为9. 5,氯仿萃取后回收氯仿即得总生物碱。采用体积 比为4 : 1的石油醚-丙酮系统进行多次硅胶柱层析，干燥后即得淡黄色至黄色油状固体 2. 1克。经核磁检验该固体为百部新碱，经液相检测其纯度大于85%。
[0047] 实施例4 :
[0048] 本发明提供一种从对叶百部中提取百部新碱的方法：取1克对叶百部加入10毫升 50%乙醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。高效液相色谱仪的色谱条件为： 色谱柱：耐碱C18柱，其规格为4. 6mmX250mmX5 μ m ;流动相：0· 02%氨水和乙腈；采用梯 度洗脱：〇?2min，使用40%乙腈洗脱；2?30min，使用65%乙腈洗脱，洗脱流速为1. OmL/ min ;检测波长：201nm ;柱温：40°C。保留时间在15. 5-17. 5min内，同时具有201nm最大紫 外吸收的色谱峰面积（积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算）为65%，则 该样品的剩余样品可作为百部碱提取的材料。取500克该样品，粉碎过20目筛取筛下物， 加95 %乙醇超声提取2次，每次30分钟，过滤得滤液，合并滤液。之后浓缩得到沉淀，加盐 酸酸化溶解，滤除沉淀，滤液加入氨水调节pH为10,氯仿萃取后回收氯仿即得总生物碱。采 用体积比为4 : 1的石油醚-丙酮系统进行多次硅胶柱层析，干燥后即得淡黄色至黄色油 状固体3. 4克。经核磁检验该固体为百部新碱，经液相检测其纯度大于85%。
[0049] 实施例5 :
[0050] 本发明提供一种从对叶百部中提取金刚大碱的方法：取1克对叶百部加入10毫升 甲醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。与百部新碱对照品相同保留时间的色 谱峰峰面积为86%，则该样品的剩余样品可作为金刚大碱提取的材料。取500克该样品，粉 碎过20目筛去筛下物，加入95 %乙醇超声提取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩 得沉淀，然后加入盐酸酸化溶解，过滤得滤液，向滤液中加入氨水调节pH为9,最后利用氯 仿萃取，除去氯仿后即得总生物碱。采用体积比为4 : 1的石油醚-丙酮系统进行多次硅 胶柱层析后，丙酮-石油醚系统进行重结晶得淡黄色晶体1. 2克。经核磁检验该物质为金 刚大碱，其纯度经液相检测大于90 %。
[0051] 实施例6:
[0052] 本发明提供一种从对叶百部中提取金刚大碱的方法：取1克对叶百部加入10毫 升甲醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。高效液相色谱仪的色谱条件为：色 谱柱：耐碱(：18柱，其规格为4.611111^25〇11111^511111 ;流动相：0.05%氨水和乙腈；采用梯度 洗脱：〇?2min，使用40 %乙腈洗脱；2?30min，使用40 %乙腈洗脱，洗脱流速为1. OmL/ min ;检测波长：200nm-210nm之间；柱温：40°C。保留时间10. 5-12. 5min内，金刚大碱对应 的色谱峰面积为50. 5 % (积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算），则该样 品的剩余样品可作为金刚大碱提取的材料。取500克该样品，粉碎过20目筛取筛下物，力口 入95 %乙醇超声提取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩得沉淀，然后加入盐酸酸 化溶解，过滤得滤液，向滤液中加入氨水调节pH为9,最后利用氯仿萃取，除去氯仿后即得 总生物碱。采用体积比为4 : 1的石油醚-丙酮系统进行多次硅胶柱层析后得到固体粉 末，将固体粉末重结晶：首先用少量丙酮溶解，40°C -50°C水浴加热中慢慢滴加石油醚直至 溶液澄清。将澄清液体取出静置过夜，有白色或浅黄色针状晶体析出。称量白色晶体或粉 末为1. 0克。经核磁检验该物质为金刚大碱，经液相检测其纯度为91%。
[0053] 实施例7 :
[0054] 本发明提供一种从对叶百部中提取百部新碱的方法：取1克对叶百部加入10毫升 乙醇超声提取30分钟后，进入高效液相色谱仪检测。与百部新碱对照品相同保留时间的色 谱峰峰面积为51 % (积分后除掉前5分钟色谱峰采用峰面积归一化法计算），则该样品的 剩余样品可作为百部碱提取的材料。取500克该样品，粉碎过20目筛取筛下物，加95%乙 醇超声提取2次，每次30分钟，过滤得滤液，合并滤液。之后浓缩得到沉淀，加盐酸酸化溶 解，滤除沉淀，滤液加入氨水调节pH为9. 5,氯仿萃取后回收氯仿即得总生物碱。采用体积 比为4 : 1的石油醚-丙酮系统进行多次硅胶柱层析，干燥后即得淡黄色至黄色油状固体 2.0克。经核磁检验该固体为百部新碱，经液相检测其纯度为86%。尽管本发明的实施方 案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各 种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背 离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描 述的图例。
【权利要求】
1. 一种从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于，包括：在提取之 前，选取少量对叶百部样品，利用高效液相色谱检测其金刚大碱或百部新碱的含量； 当所述少量对叶百部样品溶液与金刚大碱对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于 50%，剩余样品进行金刚大碱的提取； 当所述少量对叶百部样品溶液与百部新碱对照品相同保留时间的色谱峰峰面积大于 50%，剩余样品进行百部新碱的提取。
2. 如权利要求1所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于， 在提取之前，选取少量对叶百部样品，利用高效液相色谱检测其金刚大碱或百部新碱的含 量； 在没有金刚大碱对照品时，保留时间10. 5-12. 5min内，具有紫外末端吸收的色谱峰峰 面积大于50%，剩余样品进行金刚大碱的提取； 在没有百部新碱对照品时，保留时间15. 5-17. 5min内，具有201nm最大紫外吸收的色 谱峰峰面积大于50%，剩余样品进行百部新碱的提取。
3. 如权利要求2所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于， 在没有金刚大碱对照品或百部新碱对照品时，利用高效液相色谱检测金刚大碱或百部新碱 的含量的色谱条件为： 色谱柱：耐碱C18柱，其规格为4. 6mmX 250mmX 5 μ m ; 流动相：〇. 02%?0. 05%氨水和乙腈； 梯度洗脱：〇?2111；[11，使用40%乙腈洗脱；2?3〇1]1；[11，使用40%?65%乙腈洗脱，洗脱 流速为 1· OmL/min ; 检测波长：200nm-210nm ; 柱温：40 C。
4. 如权利要求1?3任一项所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其 特征在于，还包括： 金刚大碱的提取： 步骤（1)，首先将对叶百部的剩余样品粉碎为粒径<20目的颗粒，加入95%乙醇超声 提取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩得沉淀，然后加入盐酸酸化溶解，过滤得滤 液，向滤液中加入氨水调节pH为9?10,最后利用氯仿萃取，除去氯仿后即得总生物碱； 步骤（2)，利用硅胶柱进行多次层析，重结晶后即得到金刚大碱。
5. 如权利要求4所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于， 所述步骤（2)中，利用丙酮-石油醚系统重结晶得到金刚大碱。
6. 如权利要求1?3任一项所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其 特征在于，还包括： 百部新喊的提取： 步骤（1)，首先将对叶百部的剩余样品粉碎粒径< 20目的颗粒，加入95%乙醇超声提 取2次，每次进行30分钟，合并滤液，之后浓缩得沉淀，然后加入盐酸酸化溶解，过滤得滤 液，向滤液中加入氨水调节pH为9?10,最后利用氯仿萃取，除去氯仿后即得总生物碱； 步骤（2)，利用硅胶柱进行多次层析，即得到百部新碱。
7. 如权利要求4或6任一项所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其 特征在于，利用硅胶柱进行层析时使用体积比为4 : 1的石油醚-丙酮混合溶剂作为洗脱 剂。
8. 如权利要求4或6任一项所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其 特征在于，在提取之前，选取lg对叶百部加入10mL醇溶剂超声提取30分钟得到所述少量 对叶百部样品溶液。
9. 如权利要求8所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于， 所述醇溶剂为甲醇、70 %甲醇、乙醇、和50 %乙醇中的任意一种。
10. 如权利要求8所述的从对叶百部中提取金刚大碱或百部新碱的方法，其特征在于， 所述对叶百部样品为多株对叶百部的粉末。
【文档编号】C07D491/20GK104086557SQ201410344157
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月18日 优先权日:2014年7月18日
【发明者】樊兰兰, 廖静妮, 覃山丁, 林葵, 黄岛平, 屈啸声 申请人:广西壮族自治区药用植物园