反柄灵芝酚a和b及其药物组合物与其在制药和食品中的应用的制作方法
【专利摘要】反柄灵芝酚A和B及其药物组合物与其在制药和食品中的应用。本发明从反柄灵芝中分离鉴定二个消旋体，后经拆分为二对光学对映体，分别命名为左旋或右旋反柄灵芝酚A和B，研究表明消旋体和对映体均可显著抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞产生纤粘连蛋白(fibronectin)，I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，进一步发现其也可显著抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞Smad3磷酸化，显示该类化合物在制备抗肾脏纤维化和慢性肾病药物中的应用前景。
【专利说明】反柄灵芝齡A和B及其药物组合物与其在制药和食品中的 应用
【技术领域】：
[0001] 本发明属于药物技术和食品领域，具体涉及反柄灵芝酷A和B及其药物组合物，W 及其在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病的药物或保健食品中的应用。
【背景技术】：
[0002] 慢性肾病的危害、病理机制及药物研究的方法和原理，本发明人在已公开的中国 专利（公布号；CN 102153630A)中均有明确的描述。由于药物、饮食等诸多因素影响，慢性 肾病的发病率已超过10%，慢性肾病进展至肾衰竭时就只能依赖肾移植和血液透析。但由 于治疗药物的缺乏，慢性肾病目前尚无好的干预方法。
[0003] 研究表明慢性肾病包括纤维化过程中均伴有细胞外基质如collagen I、纤粘连蛋 白（fibronectin)过度分泌，a-SMA表达升高。TGF-目/Smad3磯酸化是导致上述指标升高 的重要原因之一，该通路Smad3的磯酸化也是其它脏器纤维化的主要原因之一。因此，观察 化合物对肾小管上皮细胞胶原蛋白分泌的影响，或观察其对TGF-目1诱导的肾小管上皮细 胞Smad3磯酸化的抑制作用，已成为目前研究慢性肾病包括肾纤维化药物的常用方法。但 目前关于该方面的小分子药物还比较缺乏。
[0004] 灵芝被称为仙草，中药之王，我国有近百种。灵芝自古为名贵中药，在我国已有 2000多年应用历史，据称灵芝可治疗百病，其不仅在我国，且在东亚和美国都有应用。我国 关于灵芝的保健品众多，表明其功能备受关注。反柄灵芝（Ganoderma cochlear)市场流通， 具有与《中华人民共和国药典》I部收载的紫芝类似的功效。本发明人认为其可能含有抗慢 性肾病活性物质，而现有技术中未见有本发明涉及的化合物及其抗慢性肾病的相关报道。
【发明内容】
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[0005] 本发明的目的在于提供具有抗慢性肾病或肾脏纤维化价值的化合物反柄灵芝酷 化合物（+)-或（-)-Cochlearol A[(+)-l 或（-)-1]和（+)-或（-)-CochlearolB[(+)-2 或 (-)-2];及其该发明的化合物在制备抗慢性肾病和/或抗肾脏纤维化的药物中的应用，W 及W该化合物为有效成分的药物组合物。
[0006] 本发明的上述目的是由下述的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的反柄灵芝酷化合物（+)-或（-)-Cochlearol A[(+)-l或 和（+)-或（-)-Cochlearol B[(+)-2 或（-)-2]，（其中 cochlearol A 的晶体结构，其晶体 数据存于 Cambridge Crystallographic Data Cen1:re withno.CCDC1012020),
[0008]
【权利要求】
1. 具有下述结构式的反柄灵芝酚A和B，
2. 制备权利要求1所述的反柄灵芝酚A和B的方法，取反柄灵芝，粉碎，用70%乙醇 室温提取，合并提取液并减压回收溶剂得粗提取物，将粗提取物混悬于适量水中，然后用等 体积乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯萃取物，经硅胶柱层析，100:0， 99:1，98:2,97:3,96:4,95:5,94:6,93:7,92:8,90:10,85:15,80:20, 50:50 的氯仿-甲醇系 统梯度洗脱，每种溶剂梯度为1. 5倍柱体积，按照每份500mL收集得7个合并组份；组份4 经S印hadexLH-20 (Me0H/H20, 80:20)柱层析得7个亚组份，其中组份4. 7经RP-18柱层析 (Me0H/H20, 10 % -60 % )，TLC检测合并斑点相同组分，该合并组分经半制备RP-HPLC(MeOH/ H20, 78% )纯化得化合物2,该化合物为消旋体，经手性拆分（CHIRALPAKIC:正己烷/乙 醇，75:25)得化合物（)-2(0. 55mg)和（+)-2(0. 53mg);组分 5 经MCIgelCHP20P柱层析 (Me0H/H20, 10% -50% )得 5 个亚组分，组份 5. 1 经S印hadexLH-20(Me0H/H20, 80:20)柱 层析，根据薄层显色跟踪合并相同流份得5个组分，其中组分5. 1. 5经反相RP-18柱层析， 10-60%的甲醇-水洗脱，薄层指导合并斑点，然后经半制备反相RP-18高效液相色谱纯化 (Me0H/H20, 43% )，得化合物1，该化合物为消旋体，经手性拆分（CHIRALPAKAD-H:正己烷/ 乙醇（含 0.05% 甲酸），72:28)得化合物（)-1(1. 08mg)和（+)-1(0. 98mg)。
3. 治疗肾脏纤维化或慢性肾病的药物组合物，含有治疗有效量的权利要求1所述的化 合物和药学上可接受的载体。
4. 权利要求1所述的化合物在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病的药物中的应用。
5. 权利要求1所述的化合物在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病的保健食品中的应用。
6. 权利要求3所述的药物组合物在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病的药物中的应用。
7. 权利要求3所述的药物组合物在制备治疗肾脏纤维化或慢性肾病的保健食品中的 应用。
【文档编号】C07D493/10GK104447783SQ201410624823
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】程永现, 豆曼, 邸磊, 吕青 申请人:中国科学院昆明植物研究所