专利名称：：一种药物组合物的制药新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物组合物的制药新用途，特别涉及儿茶素类药物组合物的制药新用途。
背景技术：
：现有文献中已经记载茶多酚(TeaPolyphenols)及其四种儿茶素具有广泛抗肿瘤活性，但尚无JL茶素类成分相互组合制备抗肿瘤药物的相关报道。
发明内容本发明目的在于提供一种药物组合物的制药新用途，特别涉及儿茶素类药物组合物的制药新用途。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明儿茶素类药物组合物用于制备具有抗肿瘤作用的药物。本发明儿茶素类药物组合物中EGCG:EGC=5-15:1，优选9:1、7:1、12:1;或EGC:ECG=1-5:1，优选3:1、2:1、4:1;或ECG:EC=0.5-1.5:1，优选l:l、0.6:1、1.2:1。上述本发明儿茶素类药物组合物中EGCG即表没食子儿茶素没食子酸酯、EGC即表没食子儿茶素、ECG即表儿茶素没食子酸酯、EC即表儿茶素。本发明儿茶素类药物组合物是一类已知的具有药物活性的物质，因此可以在上述配比的基础上，按照常规的制剂方法，将其制备成临床可用于恶性肿瘤治疗的任何一种药剂，包括但不限于胶囊剂、丸剂(滴丸)、片剂、颗粒剂、口服液体制剂或注射剂。在制备上述制剂的过程中，可以将儿茶素类药物组合物与任何一种适用于制备成临床药剂的赋形剂混合使用，制备成药物制剂。经过实验证明EGCG与EGC在5-15:1比例时对各种移植性肿瘤抑制率高于茶多酚，其中，对于黑色素瘤块类移植性肿瘤的肿瘤抑制率效果尤其显著；EGC与ECG在1-5:1比例时对各种移植性肿瘤的抑制率高于茶多酚，其中，对于乳腺癌类移植性肿瘤的肿瘤抑制率效果尤其显著；ECG与EC在0.5-1.5:1比例时对各种移植性肿瘤的抑制率高于茶多酚组，其中，对于腹水瘤类移植性肿瘤的肿瘤抑制率效果尤其显著。下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1四种儿茶素抗移植性肿瘤实验茶多酚(TeaPolyphenols)也称儿茶素，由4种成分组成，g卩表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)。以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高，占儿茶素的50%。我们在茶多酚抗肿瘤实验基础上，将茶多酚的四种成份进行特定配伍，以观察其是否具有增强抑瘤效应。1材料1.l动物动物品系、来源、饲养条件如下①68周龄SPF级BALB/C-nu裸鼠，雌雄各半，由中国医学科学院肿瘤研究所实验动物室繁育并提供(生产合格证号京动许字(1999)第015号；动物合格证号SCXK京2004—0006)，在中国医学科学院肿瘤研究所动物实验中心屏蔽系统辅以洁净层流柜环境中饲养。②雄性C57种小鼠，体重20士2g，购入由北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证号京动许字004049)，在北京中医药大学第一临床医学院重点实验室的清洁级环境下词养。(D雄性ICR小鼠，体重1820g，由南京中医药大学实验动物中心提供(许可证号SYXK(苏)2002-0053)，在南京中医药大学基础医学院动物中心清洁级环境下饲养。雌性BALB/c小鼠，体重(20士2)g，购自上海斯克莱实验动物有限公司[许可证号SCXK(沪)2003-0003]，在南京中医药大学动物中心屏障系统SPF环境下饲养。1.2细胞系与瘤块人肺腺癌A549，由中国医学科学院肿瘤研究所检测中心常规保存并提供；小鼠黑色素瘤块(B16)由中国医学科学院肿瘤研究所实验中心提供；S180肿瘤细胞系由南京中医药大学基础医学院中心实验室提供；小鼠乳腺癌(EMT6)小鼠乳腺癌细胞系购自中国人民解放军第四军医大学实验动物中心。1.3药物与仪器四种儿茶素由江西绿康天然产物有限责任公司惠赠的茶多酚分离而得；超净工作台系苏州宏瑞净化科技有限公司生产(型号SCW-CJ);实验用离心机系江苏恒瑞制药机械有限公司生产(型号LS150);倒置显微镜系日本NIKON株式会社生产(型号TS100);游标卡尺系中国杭州工具量具有限公司生产(型号HGL-18-1);奥豪斯电子精密天平系美国OHAUS公司产品(型号ARA520);Forma恒温培养箱为美国Forma公司产品(型号3111)。2方法2.1细胞培养与接种不同肿瘤细胞培养与接种方法如下①A549在含有10%小牛血清的DMEM培养液终培养，细胞长满单层后用0.25%胰蛋白酶消化，培养液吹打、离心，收集细胞用PBS稀释，调细胞浓度至1X107个/ml，每只小鼠以0.2ml接种于右腋皮下，肿瘤长至体积约为1000mm3时移植。②选择培养1周的Sw。腹水瘤小鼠，抽取乳白色腹水，加生理盐水适量稀释成1:4的瘤细胞悬液，调细胞数至1X108个/ml，每只鼠种0.2ml于右前肢腋窝下，整个接种时间在1小时内完成。③EMTe细胞用含10%小牛血清的RMPI1640培养液培养，细胞长满单层后用0.25%胰酶消化，培养液吹打离心，收集细胞用PBS稀释，浓度调至5X106,每只小鼠以0.2ml接种于小鼠右后背部。12d后肿瘤长至lg时移植。④黑色素瘤(B16)荷瘤小鼠，无菌条件下取出瘤块，加PBS用玻璃匀浆器按1:4稀释制备成单细胞悬液，调整细胞数约为5XK)6个/ml，分别取0.2ml接种于C57小鼠右前肢腋窝皮下，接种时间在lh内完成。2.2实验分组按照文献造模在S180、EMT6)、A549、B16四种移植性肿瘤造模后分别进行分组，即每种肿瘤模型分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表儿茶素(EC)四大组。每大组又分高、中、低三个剂量组。2.3给药剂量与方法参照茶多酚实验给药剂量，即EGCG、EGC、ECG、EC的大剂量为6.75mg/d，中剂量为2.25mg/d、低剂量为0.75mg/d。各实验组均采用灌胃给药途径。2.4计算方法实验结束后处死荷瘤小鼠，迅速剥离肿瘤称重，并按以下公式计算肿瘤抑制率，即抑瘤率(％)=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重X1000/0。2.5统计方法.所有数据采用SPSS14.0统计软件进行处理，计数资料采用ii^表示；多组资料均数比较采用单因素方差分析，当P〈0.05时，表示有统计学意义。3结果3.1四种儿茶素抑瘤率四种儿茶素的肿瘤抑制率见表l。表1.实验各组肿瘤抑制率(％)<table>complextableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与组间高剂量比较，*P〈0.05从表1可以看出，EGCG、EGC、ECG、EC四种儿茶素对S180、EMT6、A549、B16移植性肿瘤均有不同程度的抑制效果，但以高剂量组抑瘤率最好，中剂量次之。3.2儿茶素与茶多酚抑瘤率依据实验一，四种儿茶素与茶多酚抑瘤率比较见表2-表4。表2.EGCG、茶多酚高剂量肿瘤抑制率比较(％)<table>complextableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与TeaPolyphenols比较，05",A/Y。.。7从表2可以看出，茶多酚、四种儿茶素高剂量比较，以茶多酚抑瘤效应明显，四种儿茶素之间相互比较，无统计学意义。表3.EGC、茶多酚中剂量肿瘤抑制率比较(％)药物名称齐U量S180EMT6A549B16TeaPolyphenols2.25mg/d~46.5037.4040.0035.6EGCG2.25mg/d38.3535.3636.45*35.35EGC2.25mg/d32.87*30.45*29.98A27.67ECG2.25mg/d31.76*32.67*30.34*29.16'EC2.25mg/d29.17AA30.67*32.65*28.34'与TeaPolyphenols比较，VYft05,^尸<%。7从表3可以看出，茶多酚、四种儿茶素中剂量比较，也以茶多酚抑瘤效应明显；四种儿茶素组间比较，无统计学意义。表4.ECG、茶多酚低剂量肿瘤抑制率比较(％)药物名称剂量S180EMT6A549B16TeaPolyphenols0.75mg/d~~iO27.2EGCG0.75mg/d35.1531.3230.2329.14EGC0.75mg/d29.34*29.4725.4326.43ECG0.75mg/d30.3231.1727.7826,35EC0.75mg/d28.0028.9829.6425.45与TeaPolyphenols比较，05从表4可以看出，茶多酚、西种儿茶素中剂量比较，除EGC对S180的抑制率有统计学意义外，其他各组比较均无统计学意义；四种儿茶素组间比较，无统计学意义。4结论按照茶多酚给药剂量，四种儿茶素高、中、低剂量对移植性肿瘤均有一定程度的抑制效应，但抑制效果不及茶多酚各种剂量组。四种儿茶素组间比较，无统计学意义。实验例2儿茶素特定配伍抗移植性肿瘤实验通过实验例1的结果可以看出，4种儿茶素高、中、低剂量组对移植性肿瘤均有一定程度的抑制效应，抑制率无明显差异；但四种儿茶素各剂量组与茶多酚个剂量组比较，以茶多酚抑瘤效果明显。因此，本实验例主要是将四种儿茶素进行不同组合观察对各种移植性肿瘤的抑制率。1实验材料l.l动物动物品系、来源、伺养条件如下①68周龄SPF级BALB/C-nu裸鼠，雌雄各半，由中国医学科学院肿瘤研究所实验动物室繁育并提供(生产合格证号京动许字(1999)第015号；动物合格证号SCXK京2004—0006)，在中国医学科学院肿瘤研究所动物实验中心屏蔽系统辅以洁净层流柜环境中饲养。②雄性C57种小鼠，体重20士2g，购入由北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证号京动许字004049)，在北京中医药大学第一临床医学院重点实验室的清洁级环境下词养。③雄性ICR小鼠，体重1820g，由南京中医药大学实验动物中心提供(许可证号SYXK(苏)2002-0053)，在南京中医药大学基础医学院动物中心清洁级环境下饲养。雌性BALB/c小鼠，体重(20土2)g，购自上海斯克莱实验动物有限公司[许可证号SCXK(沪)2003-0003]，在南京中医药大学动物中心屏障系统SPF环境下饲养。1.2细胞系与瘤块人肺腺癌A549，由中国医学科学院肿瘤研究所检测中心常规保存并提供；小鼠黑色素瘤块(B16)由中国医学科学院肿瘤研究所实验中心提供；S180肿瘤细胞系由南京中医药大学基础医学院中心实验室提供；小鼠乳腺癌(EMT6)小鼠乳腺癌细胞系购自中国人民解放军第四军医大学实验动物中心。1.3药物与仪器四种儿茶素由江西绿康天然产物有限责任公司惠赠的茶多酚分离而得；超净工作台系苏州宏瑞净化科技有限公司生产(型号SCW-CJ);实验用离心机系江苏恒瑞制药机械有限公司生产(型号LS150);倒置显微镜系日本NIKON株式会社生产(型号TS100);游标卡尺系中国杭州工具量具有限公司生产(型号HGL-18-1);奥豪斯电子精密天平系美国OHAUS公司产品(型号ARA520);Forma恒温培养箱为美国Forma公司产品(型号3111)。2方法2.1细胞培养与接种不同肿瘤细胞培养与接种方法如下①A549在含有10%小牛血清的DMEM培养液终培养，细胞长满单层后用0.25%胰蛋白酶消化，培养液吹打、离心，收集细胞用PBS稀释，调细胞浓度至1X107个/ml，每只小鼠以0.2ml接种于右腋皮下，肿瘤长至体积约为1000固3时移植。②选择培养1周的S咖腹水瘤小鼠，抽取乳白色腹水，加生理盐水适量稀释成1:4的瘤细胞悬液，调细胞数至1X108个/ml，每只鼠种0.2ml于右前肢腋窝下，整个接种时间在1小时内完成。③EMT6细胞用含10%小牛血清的RMPI1640培养液培养，细胞长满单层后用0.25%胰酶消化，培养液吹打离心，收集细胞用PBS稀释，浓度调至5X106，每只小鼠以0.2ml接种于小鼠右后背部。12d后肿瘤长至lg时移植。④黑色素瘤(B16)荷瘤小鼠，无菌条件下取出瘤块，加PBS用玻璃匀浆器按1:4稀释制备成单细胞悬液，调整细胞数约为5X106个/ml，分别取0.2ml接种于C57小鼠右前肢腋窝皮下，接种时间在lh内完成。2.2实验分组将四种儿茶素进行不同组合以观察其对各种移植性肿瘤的抑制率。2.3给药剂量与方法参照茶多酚实验给药剂量，即EGCG、EGC、ECG、EC的大剂量为6.75mg/d，中剂量为2.25mg/d、低剂量为0.75mg/d。各实验组均采用灌胃给药途径。2.4计算方法实验结束后处死荷瘤小鼠，迅速剥离肿瘤称重，并按以下公式计算肿瘤抑制率，即抑瘤率(％)二(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重xiooy。。2.5统计方法所有数据采用SPSS14.0统计软件进行处理，计数资料采用^is表示；多组资料均数比较采用单因素方差分析，当P〈0.05时，表示有统计学意义。3结果经过反复预实验筛选，并以茶多酚高剂量组为参照物，观察不同儿茶素组合是否具有明显的增效作用，经过实验高于茶多酚抑瘤率的儿茶素最佳组合见下表5。表5与茶多酚不同剂量对照的不同儿茶素特定组合的肿瘤抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>与TeaPolyphenols比较，Wft。54结论经过反复实验，EGCG高剂量与EGC低剂量组合对各种移植性肿瘤抑制率高于茶多酚高剂量组；EGC高剂量组与ECG中剂量组组合对各种移植性肿瘤的抑制率高于茶多酚高剂量组；ECG高剂量组与EC高剂量组组合对各种移植性肿瘤的抑制率高于茶多酚组。下述实施例均能实现上述实验例的效果。具体实施例方式取EGCG900g，EGC100g,加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂，用于治疗肿瘤；其中，每粒含药0.45g;每次1粒，每日2次。实施例2:取EGCG840g，EGC120g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成滴丸，用于治疗肿瘤；其中，每丸含药0.042g;每次10丸，每日2次。实施例3:取EGCG720g,EGC60g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液，用于治疗肿瘤；其中，每支含药0.36g;每次l支，每日2次。实施例4:取EGCG900g，EGC150g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂，用于治疗肿瘤；其中，每袋含药0.45g;每次l袋，每日2次。实施例5:取EGCG840g，EGC60g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射剂，用于治疗肿瘤；其中，每支含药0.24g;每次1支，每日2次。实施例6:取EGC900g,ECG300g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂，用于治疗肿瘤；其中，每粒含药0.45g;每次1粒，每日2次。实施例7:取EGC800g,ECG400g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成滴丸剂，用于治疗肿瘤；其中，每丸含药0.04g;每次10丸，每日l-2次。实施例8:取EGC840g，ECG210g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液，用于治疗肿瘤；其中，每支含药0.42g;每次1支，每日2次。实施例9:取EGC720g，ECG480g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂，用于治疗肿瘤；其中，每袋含药0.36g;每次1袋，每日2次。实施例10:取EGC900g，ECG200g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射剂，用于治疗肿瘤；其中，每支含药0.45g;每次1支，每日2次。实施例11:取ECG450g，EC450g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂，用于治疗肿瘤；其中，每粒含药0.45g;每次1粒，每日1次。实施例12:取ECG360g，EC600g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成滴丸剂，用于治疗肿瘤；其中，每丸含药0.018g;每次10丸，每日2次。实施例13:取ECG720g,EC600g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液，用于治疗肿瘤；其中，每支含药0.36g;每次1支，每日2次。实施例14:取ECG480g，EC600g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂，用于治疗肿瘤；其中，每袋含药0.24g;每次1袋，每日l-2次。实施例15:取ECG260g，EC520g，加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射剂，用于治疗肿瘤；其中，每支含药0.13g;每次1支，每日2次。权利要求1.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于该药物组合物中表没食子儿茶素没食子酸酯∶表没食子儿茶素＝5-15∶1或表没食子儿茶素∶表儿茶素没食子酸酯＝1-5∶1或表儿茶素没食子酸酯∶表儿茶素＝0.5-1.5∶1。2.如权利要求1所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于该药物组合物中表没食子儿茶素没食子酸酯表没食子儿茶素=9:1、7:1或12:1。3.如权利要求1所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于该药物组合物中表没食子儿茶素表儿茶素没食子酸酯=3:1、2:1或4:1。4.如权利要求1所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于该药物组合物中表儿茶素没食子酸酯表儿茶素=1:1、0.6:1或1.2:1。5.如权利要求1-4任一所述的一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于该药物组合物在上述配比的基础上，按照常规的制剂方法，将其制备成胶囊剂、滴丸、片剂、颗粒剂、口服液体制剂或注射剂。6.如权利要求1-4任一所述的一种抗肿瘤药物组合物在制备具有抗肿瘤作用药物中的应用。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于其中抗肿瘤作用是指提高对黑色素瘤块类移植性肿瘤的肿瘤抑制率。8.如权利要求6所述的应用，其特征在于其中抗肿瘤作用是指提高对乳腺癌类移植性肿瘤的肿瘤抑制率。9.如权利要求6所述的应用，其特征在于其中抗肿瘤作用是指提高对腹水瘤类移植性肿瘤的肿瘤抑制率。全文摘要本发明公开了四种儿茶素类药物组合物的制药新用途。本发明儿茶素类药物组合物特定配比制备的抗肿瘤制剂具备更好的治疗效果。文档编号A61P35/00GK101095672SQ20071011942公开日2008年1月2日申请日期2007年7月24日优先权日2007年7月24日发明者丽侯,苗姜,张燕明,力徐,李冬云,陈信义申请人:北京中医药大学东直门医院