专利名称：红花总黄色素及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及从活血化淤中药红花中制备的一种总成分及其制备方法，此总成分的新用途及其组成的药物及保健品组合物。
中药红花为菊科植物Carthamus tinctorius L.的干燥花，为一常用的活血化淤药，可用于冠心病，心绞痛等诸多血液循环障碍疾病的治疗。临床上红花以水煎液入药，红花黄色素为红花的主要水溶性成分，为一混合查耳酮甙[参见.高其铭，中药红花的药理研究概况，中西医结合杂志，1984，4(12)758-760.]红花总黄色素粗品为一国家允许使用的食品色素(GB2760-86)[参见周立国，食用天然色素及其提取应用。158-160.济南，山东科学技术出版社.]，研究表明，它具多方面的心血管药理作用，可抗凝，促进纤溶，抗血栓形成，改善微循环等[参见.高其铭，中药红花的药理研究概况，中西医结合杂志，1984，4(12)758-760.]。此粗品红花总黄色素的制备方法为水提醇沉法，因其未经层析等方法除杂质，其薄层图谱为一从原点到前沿的拖尾色带[参见天津医药工业研究所等，红花的研究(二)红花黄色素及其分离物的药理研究。山西医药杂志。19809(1)2-8]，提示其纯度较低。红花总黄色素目前仅有水提醇沉法制得的粗品作为食品色素生产，尚无红花总黄色素药品或保健品制剂。
本发明提供了一种红花总黄色素，该红花总黄色素可用下述方法制得以红花为原料，加入适量的极性溶剂浸提，滤除药渣合并浸提液，浓缩得到浓缩液；把经上述步骤得到的浓缩液进行柱层析，以极性洗脱液洗脱除去杂质后再以另一极性洗脱液洗脱红花总黄色素；或以层析担体对提取浓缩液进行吸附，以极性洗脱液直接洗下红花总黄色素并使杂质吸附于层析担体上，红花总黄色素洗脱液回收溶剂，浓缩干燥即得。
本发明还提供了一种红花总黄色素的制备方法，该方法包括下述步骤以红花为原料，加入适量的极性溶剂浸提，滤除药渣合并浸提液，浓缩得到提取浓缩液；把上述步骤得到的提取浓缩液进行柱层析，以极性洗脱液洗脱除去杂质后再以另一极性洗脱液洗脱红花总黄色素；或以层析担体对提取浓缩液进行吸附，以极性洗脱液直接洗下红花总黄色素并使杂质吸附于层析担体上，红花总黄色素洗脱液回收溶剂，浓缩干燥即得。
在本发明的制备方法的一个优选实施方案中，所述的提取是以极性溶剂提取2-4次，每次1-3天，提取用极性溶剂用量为红花生药量的5-50倍。
在本发明的制备方法的另一优选实施方案中，所述的用于除杂质的红花提取浓缩液浓度相当于0.5-10克生药/毫升。
在本发明的制备方法的另一优选实施方案中，所述的柱层析除杂质方法为以聚酰胺柱层析法去除红花提取浓缩液中的杂质，且其红花提取浓缩液与所用聚酰胺粉之比按体积计为1∶1-30。
在本发明的制备方法的另一优选实施方案中，所述的柱层析担体除杂质方法是以硅胶吸附红花提取浓缩液中的杂质，且其红花提取浓缩液与所用硅胶粉之比按体积计为1∶1-30。
在本发明的制备方法的另一优选实施方案中，所述的柱层析担体除杂质方法是以大孔树脂吸附红花提取浓缩液中的红花总黄色素，以洗脱液洗脱杂质，且其红花提取浓缩液与所用大孔树脂之比按体积计为1∶1-30。
在本发明的制备方法的另一优选实施方案中，所述的极性洗脱液为水或者浓度为20-100重量百分比的乙醇，甲醇或丙醇水溶液。
在本发明的制备方法的另一优选实施方案中，所述的极性洗脱液为水或者浓度为40-95重量百分比的乙醇，甲醇或丙醇水溶液。
本发明提供了一种红花总黄色素在制备预防及治疗涉及组织缺血特别是心肌缺血及脑缺血，血栓形成及血小板激活因子与自由基所致损伤疾病的药物中的应用。
本发明提供了一种红花总黄色素在制备预防及治疗涉及组织缺血特别是心肌缺血及脑缺血，血栓形成及血小板激活因子与自由基所致损伤疾病的保健品中的应用。
本发明提供了一种治疗及预防心脑血管疾病等血液循环障碍性疾病的药物，其中含有治疗心脑血管等疾病有效量的红花总黄色素和可药用的载体。
本发明提供了一种治疗及预防心脑血管疾病等血液循环障碍性疾病的保健品，其中含有治疗心脑血管疾病有效量的红花总黄色素和可药用的载体。
本发明用于制备治疗及预防涉及组织缺血特别是心肌缺血及脑缺血，血栓形成及具血小板激活因子及自由基损伤的血液循环障碍性疾病特别是血栓性疾病及心肌缺血性疾病的药物及保健品组合物。此组合物含活性成分为红花总黄色素及药物可接受的赋形剂，载体或稀释剂，以常规方法将其制成药物或保健品制剂。
制备该组合物时，可将红花总黄色素与载体混合或用载体包埋，此载体可以是胶囊或其他装载形式。载体可为固体，半固体或液体物质，它作为红花总黄色素的载体，赋形剂或介质。该组合物可以是片剂，丸剂，栓剂，粉末，醑剂，悬浮液，乳浊液，溶液，糖浆，注射剂等多种形式。
多种载体，赋形剂或稀释剂可用于本组合物。如乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨醇，甘露醇，淀粉，聚乙二醇，明胶等。该制剂中还可加入润滑剂，湿润剂，矫味剂，悬浮剂，防腐剂等。本发明的组合物可使用本领域通常采用的任何方法制备，以达到对患者使用后，活性成分发挥最大药效的目的。
此药物及保健品组合物可经口服，静脉注射，肌肉注射，经皮或皮下注射给药，经直肠等各种途径给药。可单次或多次连续使用，而药物组合物使用剂量则应根据病人的具体情况决定，一般应控制在0.001-1.0克红花总黄色素/公斤体重·天。
本发明采取水提，聚酰胺柱层析洗脱法，硅胶吸附法或大孔树脂吸附法除杂质后制得一纯度较高的红花总黄色素，这些方法在红花成分提取制备的过程中的应用尚未见报道。它们可有效地除去多种杂质，明显提高红花总黄色素的纯度，三种方法制备所得的红花总黄色素的薄层图谱均可见6-8个荧光斑点，而水提醇沉法所得的粗品在同样条件下薄层荧光图谱则为一拖尾严重的色带，其上仅见2-3个轮廓模糊的斑点(见附图
)，提示本发明的红花总黄色素纯度较粗品为高。且此法操作简便，易于掌握，可作为红花总黄色素制备及红花水溶性成分检测的初步净化方法。据报道红花黄色素具抗凝，促进纤溶，抗血栓形成，改善微循环等心血管药理作用，实验结果表明，本发明制得的红花总黄色素具清除自由基，抗血小板激活因子，抑制血小板聚集，抗血栓形成，抗心肌缺血等作用，因此它可用于诸多血液循环障碍疾病的治疗及预防，特别可用于脑血栓，脑缺血及心绞痛，心肌梗塞等具血栓形成及缺血性疾患的治疗及预防。
本发明制得的红花总黄色素(简称黄素)具下述药效(下述实验中所用黄素均为实施例4方法制备)
(1)黄素抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集的作用新西兰家兔，体重3-4公斤，雌雄不限。Chronolog型血小板聚集仪，血小板激活因子(PAF)为Sigma公司产品，其他试剂均为国产分析纯。取家兔耳正中动脉血10毫升(ACD∶全血＝1∶6抗凝)，500转/分离心5分钟，得富血小板血浆，2000转/分离心5分钟得血小板，以pH6.5的无钙台氏液洗涤两次，每次洗后2000转/分离心5分钟，弃上清，加pH7.4含0.25％牛血清白蛋白50mM Tris台氏液(TTBSA)调整血小板浓度至2×108/毫升，即为家兔洗涤血小板悬液(WRP)。取0.18毫升WRP，37度(本文所提及的温标均为摄氏温标)预热后加入0.01毫升红花总黄色素溶液，加0.01毫升血小板激活因子后以比浊法记录血小板聚集曲线。空白对照管以蒸馏水代替黄素溶液。以黄素管血小板聚集率与空白管血小板聚集率比较，计算血小板聚集抑制率衡量其药效。
结果PAF浓度 黄素浓度(g/L)血小板聚集抑制率(％)2nM 0.0 0.00.21 28.00.42 32.90.85 60.01.69 79.4结果表明，黄素抑制血小板激活因子诱发的家兔洗涤血小板聚集具明显的量效关系。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(2)黄素抑制血小板激活因子诱发的血小板释放5-羟色胺(5-TH)的作用以上法制得的WRP，取0.8毫升WRP，加入黄素溶液，37℃预热2分钟后加10微升血小板激活因子37℃反应4分钟2000转/分离心10分钟，取上清液0.3毫升加TTBSA0.7毫升，再加0.3毫升100％三氯醋酸3500转/分离心20分钟，取0.5毫升上清液，加2毫升0.05％邻苯二甲醛/HCl溶液，100℃水浴加热10分钟，水冷后加2毫升氯仿混匀后3500转/分离心20分钟，取上清1毫升测定5-TH荧光(Ex360nm，Em475nm)。阴性对照管以蒸馏水代替黄素溶液，以同浓度黄素TTBSA稀释液代替WRP管为试剂空白。各反应管测定值均扣除试剂空白值测得5-TH荧光值F(Ex360nm，Em475nm)。
结果PAF黄素浓度(g/L) F(Ex360nm，Em475nm)2nM0 354.70.103 329.60.207 309.00.414 263.80.828 234.6
结果表明，黄素抑制血小板激活因子导致的5-TH释放具明显的量效关系。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(3)黄素抑制血小板激活因子诱发的小鼠毛细血管通透性增加的作用昆明种小鼠，雌雄不限，体重20-40克，随机分组，小鼠腹腔注射黄素溶液后30分钟，尾静脉注射3％依文斯蓝生理盐水溶液2毫升/公斤，尾静脉注射后30分钟于小鼠一侧后腿股四头肌注射PAF 0.25％牛血清白蛋白生理盐水溶液以造成局部炎症反应，于同一动物另一侧后腿股四头肌注射同体积生理盐水，注射后30分钟处死动物，分别取两后腿肌肉剪碎，每只后腿肌肉碎块中加入2毫升甲酰胺，56℃提取24小时，3000转/分离心20分钟后取上清液，于620nm以每只动物生理盐水侧后腿提取液为空白，测定对侧后腿提取液吸光度，以此数据衡量小鼠毛细血管通透性的改变。无损伤空白对照组以生理盐水代替PAF，生理盐水代替黄素溶液为阴性空白。
结果空白对照组 PAF组低剂量组 中剂量组 高剂量组PAF剂量-191nM×0.05ml 同左 同左 同左黄素剂量 - - 0.05g/kg 0.07g/kg 0.100g/kgn 12121212 12A620 0.080±0.045 0.456±0.156▲▲0.342±0.129* 0.322±0.135* 0.222±0.071*与空白组对照比较▲▲P＜0.01与PAF组对照比较*P＜0.05_上述结果表明，黄素腹腔注射，可明显抑制PAF致小鼠局部毛细血管通透性增加的作用具明显的量效关系。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(4)黄素清除自由基作用以邻二氮菲铁氧化法检测黄素清除羟自由基的作用，反应体系中含邻二氮菲0.75mmol/L，FeSO40.75mol/L，150mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液，H2O20.01％，加黄素后及其他试剂加H2O2，37℃保温60分钟后，测A536nm。以蒸馏水为阴性对照，未损伤管不加H2O2及抗氧化药。以同浓度黄素稀释液为比色空白，羟自由基清除率计d算法d＝[(A536加药-A536损伤)/(A536未损伤-A536损伤)]×100％结果黄素浓度(g/L) 羟自由基清除率(％)0.0 0.010.153.911.060.8
11.870.012.668.914.374.7结果表明，黄素清除羟自由基的作用具明显的量效关系。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(5)黄素小鼠血栓形成的作用雄性昆明小鼠，体重18-22克，按体重均衡随机分为五组，即正常对照组，阿司匹林组，黄素低，中，高剂量组。实验前禁食12小时，灌胃给药后30分钟将小鼠依次放置于固定器中，使其尾部垂直，在距尾尖1.5mm处剪断后立即开始计时并迅速将其尾尖浸入37℃生理盐水液面下1.5cm处，记录出血终止时间。
结果分组 剂量(g/kg) 出血时间(秒)生理盐水 --- 203±169阿司匹林 0.20 500±186***黄素低剂量0.10 334±249*黄素中剂量0.26 398±201**黄素高剂量0.62 461±193***与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001结果表明本发明制得的黄素抑制小鼠血栓形成的作用具明显的量效关系。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(6)黄素抑制ADP诱发血小板聚集的作用新西兰家兔，体重3-4公斤，雌雄不限。仪器Chronolog型血小板聚集仪，ADP为BM公司产品，其他试剂均为国产分析纯。取家兔耳正中动脉血(3.8％枸橼酸钠∶全血＝1∶9抗凝)，500转/分离心5分钟，得富血小板血浆(PRP)，下层液3000转/分离心10分钟得贫血小板血浆(PPP)，以PPP调整PRP血小板浓度为2×108/毫升，取0.165毫升PRP，37度(本文所提及的温标均为摄氏温标)预热后加入0.03毫升黄素溶液，加0.005毫升1g/L ADP后以比浊法记录血小板聚集曲线。空白对照管以蒸馏水代替黄素溶液。以黄素管血小板聚集率与空白管血小板聚集率比较，计算血小板聚集抑制率。
结果药物 剂量 血小板聚集抑制率(％)H2O - 0.0
阿司匹林 4.8mmol/L52.4黄素 1.5g/L 14.1黄素 2.2g/L 27.8黄素 3.3g/L 42.9黄素 5.0g/L 56.9黄素 7.5g/L 66.9结果表明本发明制得的黄素抑制ADP诱发的家兔血小板聚集具明显的量效关系。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(7)黄素抑制垂体后叶素诱发的大鼠心肌缺血的作用雄性wistar大鼠，体重180-220克，实验前依下法筛选动物大鼠腹腔注射乌拉坦1-1.2g/kg麻醉，静注垂体后叶素0.5或1.0u/kg，选择T波上升0.1毫伏以上或下降超过50％的敏感动物随机分为三组，即生理盐水组，硝酸甘油组和红花总黄色素组，4-6小时后进行药效学实验。抗心肌缺血药物或生理盐水腹腔注射后30分钟静脉注射垂体后叶素(各实验组每组15只大鼠中静注0.75u/kg者均为7只，静注1.0u/kg者均为8只)，静脉注射垂体后叶素前及静注后5，10，15，20，30，45s，1，2，3，5，10，15，20min记录第II导联心电图，以静注垂体后叶素后较注射前T波上升1毫伏以上或下降超过50％为药物抗心肌缺血作用无效，T波上升不足1毫伏或下降不足50％为药物作用有效。
结果n 分组 剂量(mg/kg) 有效例数 无效例数15 生理盐水组 -51015 硝酸甘油组 512*315 黄素组 500 12*3与生理盐水组比较*P＜0.05结果表明本发明制得的黄素具抑制垂体后叶素诱发的大鼠心肌缺血的作用。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
(8)黄素抑制异丙肾上腺素诱发的大鼠心肌缺血的作用雄性wistar大鼠，体重240-260克，随机分为两组即生理盐水组和红花总黄色素组，腹腔注射乌拉坦1g/kg麻醉，红花总黄色素或生理盐水腹腔注射30分钟后腹腔注射异丙肾上腺素0.05mg/kg，首次给红花总黄色素或生理盐水后12小时及24小时同样方式各给红花总黄色素或生理盐水一次。首次腹注异丙肾24小时后再同法注射同剂量异丙肾上腺素，记录初次注射异丙肾前与末次注射异丙肾后3min第II导联心电图。选取心电图中五个J点计算J/R值，取平均值作为该点数据，以每只动物首次给异丙肾前及末次给异丙肾后J/R值进行自身对照，计算首次给异丙肾前及末次给异丙肾后J/R值之差的绝对值，以t检验法比较。给异丙肾前后J/R值的变化，以变化显著者为心肌缺血明显，变化不显著者为缺血被抑制。
结果n 分组 剂量(g/kg) J/R差值8 生理盐水组 -0.146±0.126*8红花总黄色素组0.75 0.175±0.203*给异丙肾前与给异丙肾后比较P＜0.05。
结果表明，红花总黄色素腹腔注射可明显抑制异丙肾诱发的大鼠心肌缺血。其它实施例方法制得的黄素依本法实验所得数据与上述结果趋势相同。
本发明制得的红花总黄色素(简称本发明黄素)与市售水提醇沉法制得的红花黄色素(简称市售黄素)的比较(1).本发明黄素与市售黄素抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集作用的比较依本说明书前述“黄素抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集的作用”方法，以同一动物血制备WRP于同一次试验比较两种黄素作用，结果如下PAF浓度 本发明黄素浓度(g/L) 市售黄素浓度(g/L)血小板聚集抑制率(％)1nM 0.0 0.0 0.05.0 -16.110.0 -38.720.0 -98.410.0 15.920.0 20.3上述结果表明，本发明制得的红花总黄色素药效明显高于市售黄素。
(2)本发明黄素急性毒性实验1)灌胃给药实验取昆明小鼠20只，雌雄各半，小鼠体重18-22克，给药后观察动物情况，连续观察七天，记录死亡动物只数。灌胃给药组结果n＝20 本发明黄素剂量(g/kg) 动物死亡数(只)100结果表明，本发明黄素灌胃剂量达10g/kg时，小鼠无一死亡。
2)腹腔注射实验取昆明小鼠80只，随机分为四组，每组20只，雌雄各半，小鼠体重18-22克，给药后观察动物情况，连续观察七天，以各组死亡动物率计算半数致死量(LD50)。
腹腔给药组结果
n＝20 本发明黄素剂量(g/kg)动物死亡数(只)8.46 167.80 117.20 106.64 2计算得本发明黄素腹腔注射LD50＝7.54±0.24g/kg据文献报道，市售黄素腹腔注射LD50＝5.49g/kg(95％可信限5.11-5.59g/kg)，灌胃给药LD50＝5.53g/kg(95％可信限5.39-5.69g/kg)，[参见黄正良等红花黄色素的毒理研究，甘肃医药，1983，(4)22-24]因此上述结果表明，本发明制得的红花总黄色素毒性明显低于市售黄素。
(3)本发明黄素与市售黄素薄层层析结果的比较见附图，层析结果表明，本发明制得的红花总黄色素纯度较市售黄素明显提高。
实施例以下实施例是为了更详细地说明本发明的实施方法，而不是为了限制本发明。实施例1 聚酰胺层析法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤水室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次水提液，过滤除去药渣，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液，取上述红花水提浓缩液，上柱床体积为3000毫升的聚酰胺柱，以蒸馏水洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以40重量百分比乙醇洗脱聚酰胺柱上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例2 聚酰胺层析法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤20重量百分比甲醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收溶剂，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液。取上述红花水提浓缩液，上柱床体积为3000毫升的聚酰胺柱，以蒸馏水洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以95重量百分比乙醇洗脱聚酰胺柱上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例3 聚酰胺层析法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加3000毫升20重量百分比乙醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收乙醇，50-90度减压浓缩至40毫升即得红花提取浓缩液。取上述红花提取浓缩液，上柱床体积为1200毫升的聚酰胺柱，以蒸馏水洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以75重量百分比乙醇洗脱聚酰胺柱上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例4 硅胶吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤水室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次水提液，过滤除去药渣，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液。取上述红花提取浓缩液与1000克柱层析用硅胶粉拌匀，60度减压烘干后以2000毫升40重量百分比乙醇洗脱上述硅胶即得红花总黄色素洗脱液。取红花总黄色素洗脱液，回收乙醇，50-90度减压浓缩蒸干后即得红花总黄色素。实施例5 硅胶吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤20重量百分比甲醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收溶剂，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液，取上述红花提取浓缩液与1000克柱层析用硅胶粉拌匀，60度减压烘T后以2000毫升95重量百分比乙醇洗脱上述硅胶即得红花总黄色素洗脱液。取红花总黄色素洗脱液，回收乙醇，50-90度减压浓缩蒸干后即得红花总黄色素。实施例6 硅胶吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加3000毫升20重量百分比乙醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收乙醇，50-90度减压浓缩至40毫升即得红花提取浓缩液。取上述红花提取浓缩液与1200克柱层析用硅胶粉拌匀，60度减压烘干后以2000毫升75重量百分比乙醇洗脱上述硅胶即得红花总黄色素洗脱液。取红花总黄色素洗脱液，回收乙醇，50-90度减压浓缩蒸干后即得红花总黄色素。实施例7 大孔树脂吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤水室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次水提液，过滤除去药渣，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液。取上述红花水提浓缩液，与体积为3000毫升的大孔树脂拌匀，60度减压烘干后，以蒸馏水反复洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以40重量百分比乙醇洗脱大孔树脂上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例8 大孔树脂吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤20重量百分比甲醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收溶剂，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液。取上述红花水提浓缩液，与体积为3000毫升的大孔树脂拌匀，60度减压烘干后，以蒸馏水反复洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以95重量百分比乙醇洗脱大孔树脂上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例9 大孔树脂吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加3000毫升20重量百分比乙醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收乙醇，50-90度减压浓缩至40毫升即得红花提取浓缩液。取上述红花提取浓缩液，与体积为1200毫升的大孔树脂拌匀，60度减压烘干后，以蒸馏水反复洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以75重量百分比乙醇洗脱大孔树脂上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例10 大孔树脂吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤水室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次水提液，过滤除去药渣，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液。取上述红花水提浓缩液，上柱床体积为3000毫升的大孔树脂柱，以蒸馏水洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以40重量百分比乙醇洗脱大孔树脂柱上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例11 大孔树脂吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加0.5公斤20重量百分比甲醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收溶剂，50-90度减压浓缩至200毫升即得红花水提浓缩液。取上述红花水提浓缩液，上柱床体积为3000毫升的大孔树脂柱，以蒸馏水洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以95重量百分比乙醇洗脱大孔树脂柱上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。实施例12 大孔树脂吸附法制备红花总黄色素取100克红花生药药粉，每次加3000毫升20重量百分比乙醇室温浸48小时，其间不时搅拌，共提取两次，合并两次提取液，过滤除去药渣，回收乙醇，50-90度减压浓缩至40毫升即得红花提取浓缩液。取上述红花提取浓缩液，上柱床体积为1200毫升的大孔树脂柱，以蒸馏水洗脱至洗脱液Molish反应及茚三酮反应阴性，以75重量百分比乙醇洗脱大孔树脂柱上吸附的红花黄色素至洗脱液无色即可。上述洗脱液回收乙醇，50-90度减压浓缩，干燥即得红花总黄色素。
以本发明方法制得红花总黄色素按以下实施例方法制得可使用的制剂。制剂实施例1 红花总黄色素口服硬胶囊剂红花总黄色素 100克干淀粉 100克上述组分混合后装入1000个硬胶囊，即得红花总黄色素口服硬胶囊剂制剂实施例2红花总黄色素注射剂红花总黄色素 50克注射用水 适量全量 1000毫升取50克红花总黄色素以适量注射用水溶解后加至1000毫升按常规方法经灌装，封口等步骤制得红花总黄色素注射剂。制剂实施例3 红花总黄色素栓剂红花总黄色素500克半合成脂肪酸甘油脂 适量制成 1000粒取半合成脂肪酸甘油脂加热使融，适当降温后加入500克红花黄色素混匀，制栓，冷却即得红花总黄色素栓剂。制剂实施例4 红花总黄色素口服液红花总黄色素0.5克蒸馏水 10毫升红花总黄色素溶解后按常规方法经灌装，封口等步骤生产即得红花总黄色素口服液。制剂实施例5 红花总黄色素片剂红花总黄色素500克硬脂酸镁 5克淀粉 20克制成 1000片红花总黄色素，硬脂酸镁与淀粉混匀后按常规方法经压片，包衣，装瓶等工艺即得红花总黄色素片剂。
此外，在未违背本发明精神内，可以对给定的实施例进行各种变化和改进。由本技术领域中熟练的技术人员认识到的可选择的实施例，它们也被包括在权利要求的范围内。
权利要求
1.一种红花总黄色素，该红花总黄色素可用下述方法制备获得(1)以红花为原料，加入适量的极性溶剂浸提，滤除药渣合并浸提液，浓缩得到提取浓缩液；(2)把上述步骤得到的提取浓缩液进行柱层析，以极性洗脱液洗脱除去杂质后再以另一极性洗脱液洗脱红花总黄色素；或以层析担体对提取浓缩液进行吸附，以极性洗脱液直接洗下红花总黄色素并使杂质吸附于层析担体上；(3)收集去除杂质的红花总黄色素洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥即得。
2.一种红花总黄色素的制备方法，该方法包括下述顺序的步骤(1)以红花为原料，加入适量的极性溶剂浸提，滤除药渣合并浸提液，浓缩得到提取浓缩液；(2)把上述步骤得到的提取浓缩液进行柱层析，以极性洗脱液洗脱除去杂质后再以另一洗脱液洗脱红花总黄色素；或以层析担体对提取浓缩液进行吸附，以极性洗脱液直接洗下红花总黄色素并使杂质吸附于层析担体上；(3)收集去除杂质的红花总黄色素洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥即得。
3.权利要求2的制备方法，其特征在于所述的提取是以极性溶剂提取2-4次，每次1-3天，提取用适量极性溶剂用量为红花生药重量的5-50倍。
4.权利要求2的制备方法，其特征在于提取所用的极性溶剂为水或乙醇，甲醇及丙醇水溶液。
5.权利要求2的制备方法，其特征在于所述的用于除杂质的红花提取浓缩液浓度相当于0.1-10克生药/毫升。
6.权利要求2的制备方法，其特征在于以聚酰胺柱层析法去除红花提取浓缩液中的杂质，且其红花提取浓缩液与所用聚酰胺粉之比按体积计为1∶1-30。
7.权利要求2的制备方法，其特征在于以硅胶吸附红花提取浓缩液中的杂质，且其红花提取浓缩液与所用硅胶粉之比按体积计为1∶1-30。
8.权利要求2的制备方法，其特征在于以大孔树脂吸附红花提取浓缩液中有效组分，去除杂质，且其红花提取浓缩液与所用之大孔树脂比按体积计为1∶1-30。
9.权利要求2的制备方法，其特征在于所述的极性洗脱液为水或者浓度为20-100重量百分比的乙醇，甲醇或丙醇水溶液。
10.权利要求2的制备方法，其特征在于所述的极性洗脱液为水或者浓度为40-95重量百分比的乙醇，甲醇或丙醇水溶液。
11.一种治疗心脑血管疾病的药物及保健品，其特征在于含有治疗或预防心脑血管疾病等血液循环障碍性疾病有效量的权利要求1的红花总黄色素和可药用的载体。
12.权利要求11的药物及保健品，其特征在于可以制成胶囊，针剂，片剂，栓剂和口服液等可使用的制剂。
13.权利要求1的红花总黄色素在制备预防及治疗涉及组织缺血特别是心肌缺血及脑缺血，血栓形成及血小板激活因子与自由基所致损伤疾病的药物及保健品中的应用。
全文摘要
本发明涉及从中药红花中提取的药花总黄色素,其制备方法及其制药领域中的新用途,上述总黄色素制成的药物及保健品制剂。红花总黄色素具抗血栓形成,抑制血小板聚集,抗心肌缺血,清除自由基,抑制血小板激活因子的作用,可治疗或预防多种心脑血管疾病等血液循环障碍性疾病。
文档编号C07H15/00GK1272500SQ9912371
公开日2000年11月8日 申请日期1999年11月16日 优先权日1998年11月24日
发明者金鸣, 李家实, 王玉芹, 臧宝霞, 杨树东, 陈文梅, 吴伟, 朴永哲, 李金荣, 李蔚然 申请人:北京市心肺血管疾病研究所