一种胸腺五肽的制备方法与流程

文档序号:17688756发布日期:2019-05-17 20:52阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种胸腺五肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)以羟甲基树脂为起始原料,以Fmoc保护的氨基酸为单体,第一个氨基酸采用Fmoc-Tyr-OH,以TBTU为缩合剂,逐个接上氨基酸,最后一个肽链采用Boc-Arg-OH;

(2)将2N HCl/HAc加入步骤(1)的产物进行切肽,加入乙酸乙酯沉淀,过滤、洗涤得五肽粗品;

(3)将步骤(2)的粗品采用C18柱进行分离纯化,流动相为2%硫酸铵-甲醇溶液;

(4)将上柱收集得到的溶液,减压浓缩至原体积的十分之一,加乙酸乙酯沉淀,获得目标产物。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,以羟甲基树脂为起始原料,以Fmoc保护的氨基酸为单体,第一个氨基酸采用Fmoc-Tyr-OH,以TBTU为缩合剂,逐个接上氨基酸,最后一个肽链采用Boc-Arg-OH的方法包括如下步骤:

(1)制备Fmoc-Tyr-树脂:

将羟甲基树脂用DMF浸泡,使树脂充分溶胀,抽干;

加入溶解于DMF 中的Fmoc-Tyr-OH和DIPEA中,20-40℃反应0.5-1.5小时,加甲醇,20-40℃反应0.5-1.5小时,抽干,分别用DMF、甲醇洗涤,抽干,获得Fmoc-Tyr-树脂;

(2)制备Fmoc-Val-Tyr-树脂:

将上述Fmoc-Tyr-树脂中,加入7.5%DBU的DMF溶液,20-35℃反应15-25分钟,分别用DMF、甲醇洗涤,抽干;

加入Fmoc-Val-OH、TBTU溶解于DMF,20-30℃反应1.0-2小时,抽干,分别用DMF、甲醇洗涤,抽干,获得Fmoc-Val-Tyr-树脂;

DMF中,Fmoc-Tyr-树脂的重量浓度为5-15%,Fmoc-Val-OH的摩尔比为树脂的2-5倍,TBTU的摩尔比为树脂的2-5倍;

(3)制备Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂:

将上述的Fmoc-Val-Tyr-树脂中,加入7.5%DBU的DMF溶液,20-35℃反应15-45分钟,分别用DMF、甲醇洗涤,抽干;

加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH、TBTU溶解于DMF,20-35℃反应1.0-2小时,其余操作同(2),获得Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂;

DMF中,Fmoc-Val-Tyr-树脂的重量浓度为5-15%,Fmoc-Asp(OtBu)-OH的摩尔比为树脂的2-5倍,TBTU的摩尔比为树脂的2-5倍;

Fmoc-Val-Tyr-树脂与7.5%DBU的DMF溶液的重量比例为:

Fmoc-Val-Tyr-树脂∶7.5%DBU的DMF溶液= 1∶5-15;

(4)制备Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂:

将上述Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂中,加入7.5%DBU的DMF溶液,20-35℃反应15-45分钟,分别用DMF、甲醇洗涤,抽干;

加入Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU溶解于DMF,20-30℃反应1.0-2小时,DMF、甲醇、DMF分别洗涤三次,获得Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂;

DMF中,Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂的重量浓度为5-15%,Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔比为树脂的2-5倍,TBTU的摩尔比为树脂的2-5倍;

Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂与7.5%DBU的DMF溶液的重量比例为:

Fmoc-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂∶7.5%DBU的DMF溶液= 1∶5-15;

(5) 制备Boc-Arg-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂:

将上述Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂中,加入7.5%DBU的DMF溶液,20-35℃反应15-45分钟,分别用DMF、甲醇洗涤,抽干;

加入Boc-Arg-OH、TBTU溶解于DMF,20-35℃反应1.0-2小时,其余操作同(2),获得Boc-Arg-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂;

DMF中,Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂的重量浓度为5-15%,Boc-Arg-OH的摩尔比为树脂的2-5倍,TBTU的摩尔比为树脂的2-5倍;

Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂与7.5%DBU的DMF溶液的重量比例为:

Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂∶7.5%DBU的DMF溶液= 1∶5-15。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述切肽包括如下步骤:

将切肽试剂2N HCl/HAc加入Boc-Arg-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-Tyr-树脂, 15-35℃反应1.5-3小时,加入乙酸乙酯沉淀,过滤,收集沉淀物,用乙酸乙酯洗, P2O5真空干燥,得粗品。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述分离纯化包括如下步骤:

将粗品溶于醋酸铵的水溶液中,过滤,滤液经C18柱纯化,流动相为0.1M硫酸铵 :甲醇=95:5;流速为1000-1500ml/min;检测波长为275nm;用液相色谱仪跟踪收集所需要的流出液,样品峰合并后脱盐,减压浓缩至原体积的十分之一,加乙酸乙酯沉淀,获得成品。

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