一种提高集胞藻PCC6803乙醇耐受能力的方法及应用与流程

技术特征：

1.一种提高集胞藻PCC6803乙醇耐受能力的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)以序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2为上、下游引物，以野生型集胞藻PCC6803基因组为模板，通过PCR扩增得到sll0687基因上游序列sigI-up，如序列表中SEQ ID NO：7所示；以SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4为上、下游引物，以野生型集胞藻PCC6803基因组为模板，通过PCR扩增得到sll0687基因下游序列sigI-down，如SEQ ID NO：8所示；以SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6为上、下游引物，以pET-30b质粒为模板，通过PCR扩增得到包含卡那霉素基因及其上下游部分序列Km^r，如SEQ ID NO：9所示；

(2)以限制性内切酶EcoRI和KpnI处理pUC118载体和步骤(1)得到的sigI-up片段，将sigI-up插入到pUC118上得到pUC118-up质粒；以限制性内切酶BamHI和HindIII处理pUC118-up和步骤(1)得到的sigI-down片段，将sigI-down插入到pUC118-up上得到pUC118-up-down质粒；以限制性内切酶BamHI和KpnI处理pUC118-up-down和步骤(1)得到的Km^r片段，将Km^r插入到pUC118-up-down上得到pUC118-up-down-Km^r同源双交换质粒；

(3)将pUC118-up-down-Km^r质粒以自然转化的方式转入集胞藻PCC6803中，得到的转化子以不同浓度的卡那霉素进行筛选，并在DNA水平上进行鉴定，最终得到sll0687基因完全敲除的单克隆藻株，即对乙醇耐受性显著提高的集胞藻PCC6803藻株，命名为IK2。

2.一种对乙醇耐受性显著提高的集胞藻PCC6803藻株，其特征在于通过权利要求1所述的方法得到。

3.根据权利要求2所述的对乙醇耐受性显著提高的集胞藻PCC6803藻株，其特征在于：所述的对乙醇耐受性显著提高的集胞藻PCC6803藻株，在含1.5％v/v乙醇的BG11培养基中的生长状态明显优于野生型藻株。

4.权利要求2或3所述的对乙醇耐受性显著提高的集胞藻PCC6803藻株的应用，其特征在于：所述的对乙醇耐受性显著提高的集胞藻PCC6803藻株用于构建生产燃料乙醇的基因工程菌。