早期鉴定‘Hort16A’猕猴桃开放性授粉后代性别的方法与流程

技术特征：

1.早期鉴定‘Hort 16A’猕猴桃开放性授粉后代性别的方法，包括以下步骤：

（1）取‘Hort 16A’猕猴桃开放性授粉后代植株，利用Ezup柱式法提取植物基因组DNA作为样本；

（2）SNP标记的筛选，包括：

针对性别相关基因片段，建立PCR反应体系，配置25μLPCR反应体系，其反应体系以下表的引物序列作为PCR扩增SNP差异的上下游引物，扩增样本，筛选雌雄株之间的SNP差异；

表 SNP标记的引物序列

（3）将步骤（2）扩增的核苷酸序列作为雌雄株之间的SNP标记的对照序列，比对雌雄株之间的SNP位点，筛选区分‘Hort 16A’猕猴桃开放授粉后代性别的SNP标记位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述的步骤（2）是针对性别相关基因片段，以引物2-1R：5’ttagcacgctagggtcac3’和2-1F：5’aaggttagggtcgcaagt3’ 作为PCR扩增SNP差异的上下游引物，使扩增出的序列具有雌雄之间的SNP差异。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征是：所述的步骤（3）是将步骤（2）扩增的295bp核苷酸序列的雄性6号样本（X6）：

atgaatttaa aacttgacgt agagttatag gataattggt gtacctgaat catgattata 60

tttgaatctt gacagatagt taagggttga cctacttgag ccatggattg acaaaaagtg 120

attttatatt tttaaatgaa cctgattttc atatgttttc atggatgcat gtatatttta 180

tataacttga cttacactag cctagtgctt aagacgttgt cgatcgtaac tcattttagg 240

tgatgaaaat gaggagtaac ccaattgagg gtgggtgacc ctaatgtgct aaaag 295

作为雌雄株之间的SNP标记的对照序列，比对雌雄株之间的SNP位点，以59bp和71bp处作为区分‘Hort 16A’猕猴桃开放授粉后代性别的SNP标记位点：

其中，59bp处碱基表现为t纯合的为雌性个体，表现为t/c杂合的为雄性个体，71bp处碱基表现为g纯合的为雌性个体，表现为g/a杂合的雄性个体。