一种石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的制备方法及其应用与流程

文档序号:18108633发布日期:2019-07-06 11:50阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:

(1)将含有石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白基因的重组质粒pET32a-NNV转化到大肠杆菌BL21中,37℃、250rpm条件下,当OD600达到0.6时加入IPTG,直至IPTG终浓度为1mM,降温至25℃,诱导表达12h;

(2)诱导表达完成后离心收集菌体,破碎,对包涵体进行纯化,将纯化后的包涵体冷冻干燥,碾磨成粉末,过80目筛;

所述石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白大小为37kDa;

所表达石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白的基因序列为Seq ID No1。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于所表达石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白序列为Seq ID No2。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中离心是在10000rpm转速下离心20min,弃上清。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中破碎是将收集的菌体用裂解液重悬后采用高压均质机破碎,每次破碎压力为1000bar,时间为10min,共破碎3次;

其中,所述裂解液组成为:10mM的pH为 7.1的Tris-HCl、100mM NaCl、125mM咪唑。

5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,石斑鱼神经坏死病毒衣壳蛋白包涵体纯化步骤为:(1)取破碎后的菌体在20000rpm条件下离心30min后弃去上清,沉淀加入缓冲液B1,混匀后25℃振荡30min;(2)20000rpm离心30min后弃去上清,加入缓冲液B2,混匀后25℃振荡30min;(3)20000rpm离心30min后弃去上清,加入纯水,混匀后25℃振荡30min;(4)重复步骤(3)两次;(5)20000rpm离心30min后弃去上清,沉淀冷冻干燥后碾磨成粉末。

6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述缓冲液B1组成为:10mM 的pH为 7.1的Tris-HCl、100mM NaCl、1%TritonX-100;缓冲液B2组成为:10mM 的pH为 7.1的Tris-HCl、100mMNaCl。

7.根据权利要求1-6任一项所述的衣壳蛋白的应用方法,其特征在于,将所述衣壳蛋白粉末添加到饲料中,喂食3龄期黄粉虫,培养至4龄期时,将虫体冷冻干燥并碾磨成粉末,并过80目筛,即得抗神经坏死病毒天然药剂。

8.根据权利要求7所述的应用方法,其特征在于,所述抗神经坏死病毒天然药剂的应用方法为,将衣壳蛋白粉末按黄粉虫平均体重的1%添加到饲料中。

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