本发明涉及一种肽的分离方法，特别是涉及一种从鳄鱼中运用生物酶解技术进行小分子活性肽的提取方法。
背景技术：
鳄鱼骨、肉、血、油、内脏等全身各部富含蛋白质、DHA、卵磷脂、不包含脂肪酸、铁锌磷镁等10种微量元素、18种以上氨基酸及维生素A、维生素E等，是一种科研价值、经济价值较高的动物。
目前市面上鳄鱼的用途最多的多为鳄皮制品，对鳄鱼骨、肉、血的应用并不广泛，因其资源的稀缺性，使得鳄鱼资源的应用更显珍贵，而对鳄鱼系列产品生物学及营养学的精细化深开发以及研究应用在全球更是少之又少。
技术实现要素：
本发明是为了解决以上技术问题而提供了一种鳄鱼肽的提取方法，本发明的方法将人工养殖鳄鱼的骨、肉、血运用双蛋白酶定向酶切进行小分子肽的转化和提取，鳄鱼肽其分子量均在1000道尔顿以下，既保留了鳄鱼原有的有效成份又具有极高的消化吸收性和利用率。它可以不经胃肠消化，直接被人体利用。
本发明涉及一种鳄鱼肽的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：
一、清洗破碎：将新鲜去皮的鳄鱼骨肉用70～80℃的水浸泡30～60min后，用水冲洗10～20min，然后将洗净的鳄鱼骨肉用破骨机锯成长度为8～10cm的鳄鱼骨肉段；
二、高压蒸煮：向蒸煮罐中加水，边搅拌边投入鳄鱼骨肉段，升温至120～150℃，保温8～9h；然后停止搅拌，静置0.5～1.5h，上清即为一次汤(静置结束立即排汤)；
三、排汤：用真空抽提罐将一次汤抽提入灭菌后的一次汤储罐；静置结束立即排汤(此时汤温在60℃左右)；
四、水解：将一次汤由汤储罐泵入灭菌后的水解罐，升温至98～100℃保持15min灭菌，降温至50～60℃并保温，加入碱液调整pH值至8.5，加入碱性蛋白酶，酶解1～2h，随着蛋白质的溶解，溶液pH值降低，当溶液pH值降至7.5时，加入胰酶保温3～5h，当pH值降至6.6～7.0时，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1调节pH值为5.4～5.5，升温灭酶活；
五、过滤：投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，粗过滤后，利用板框过滤器循环过滤1.5～2.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度18～22°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：当浓缩液澄清时，进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽；
当浓缩液浑浊时，先将浓缩液进行板框过滤或用管式离心机分离，然后再进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽。
优选地，所述步骤一中浸泡时，新鲜去皮鳄鱼骨肉与水的质量比为1:1～3。
优选地，所述步骤三中去除一次汤后剩余的骨肉挤压出汤，挤压出汤后的骨肉可用作饲料原料。
优选地，所述步骤四中的碱液为NaOH溶液。
优选地，所述步骤四中升温灭酶活的参数为90℃，30min。
优选地，所述步骤五中粗过滤为依次采用桶式过滤器、两级板框过滤器过滤。
优选地，所述步骤六中喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃。
本发明鳄鱼肽的提取方法与现有技术不同之处在于：
1.本发明的方法制得的鳄鱼肽含有从鳄体内提取的高效抗体和奇特构造的血红蛋白，可以极快地提高人体免疫力和血液摄氧能力，可极大地提高人体的健康质量；本发明制得鳄鱼肽含有强有力的抗癌物质和防止癌肿瘤新生细胞的生长因子，含有强有力的抗菌物质，含有可优化核酸的物质，这种物质使核酸充满活力，抗病能力加强，同时激活体内的触酶和SOD的活性，有效地清除体内垃圾，从而延缓生命衰老，含有大量的活性钙和磷、镁等，可用于治疗老年骨质疏松、促进儿童生长发育等特殊功效。
2.采用本发明的方法制得的鳄鱼肽无需搅拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，为淡黄色透明液体，不会析出任何杂质和沉淀物。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明的鳄鱼肽的提取方法作进一步的说明。
实施例1
本实施例的鳄鱼肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗破碎：将新鲜去皮的鳄鱼骨肉用70℃的水浸泡40min后，用水冲洗15min，然后将洗净的鳄鱼骨肉用破骨机锯成长度为9cm的鳄鱼骨肉段；
二、高压蒸煮：向蒸煮罐中加水，边搅拌边投入鳄鱼骨肉段，升温至120℃，保温9h；然后停止搅拌，静置0.5h，上清即为一次汤(静置结束立即排汤)；
三、排汤：用真空抽提罐将一次汤抽提入灭菌后的一次汤储罐；静置结束立即排汤(此时汤温在62℃)；去除一次汤后剩余的骨肉挤压出汤，挤压出汤后的骨肉可用作饲料原料。
四、水解：将一次汤由汤储罐泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至55℃并保温，加入NaOH溶液调整pH值至8.5，加入碱性蛋白酶，酶解1h，随着蛋白质的溶解，溶液pH值降低，当溶液pH值降至7.5时，加入胰酶保温4h，当pH值降至6.8时，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1调节pH值为5.5，升温灭酶活，升温灭酶活的参数为90℃，30min；
五、过滤：投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器、两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤1.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度18°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液澄清，进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽；
喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃；
其中，步骤一中浸泡时，新鲜去皮鳄鱼骨肉与水的质量比为1:1。
实施例2
本实施例的鳄鱼肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗破碎：将新鲜去皮的鳄鱼骨肉用80℃的水浸泡50min后，用水冲洗15min，然后将洗净的鳄鱼骨肉用破骨机锯成长度为8cm的鳄鱼骨肉段；
二、高压蒸煮：向蒸煮罐中加水，边搅拌边投入鳄鱼骨肉段，升温至150℃，保温8h；然后停止搅拌，静置1.5h，上清即为一次汤(静置结束立即排汤)；
三、排汤：用真空抽提罐将一次汤抽提入灭菌后的一次汤储罐；静置结束立即排汤(此时汤温在60℃)；
四、水解：将一次汤由汤储罐泵入灭菌后的水解罐，升温至98℃保持15min灭菌，降温至55℃并保温，加入KOH溶液调整pH值至8.5，加入碱性蛋白酶，酶解1h，随着蛋白质的溶解，溶液pH值降低，当溶液pH值降至7.5时，加入胰酶保温4h，当pH值降至6.7时，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1调节pH值为5.4，升温灭酶活，升温灭酶活的参数为90℃，30min；
五、过滤：投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器、两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤2.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度20°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液澄清，进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽；
喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃；
其中，步骤一中浸泡时，新鲜去皮鳄鱼骨肉与水的质量比为1:3。
实施例3
本实施例的鳄鱼肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗破碎：将新鲜去皮的鳄鱼骨肉用75℃的水浸泡35min后，用水冲洗20min，然后将洗净的鳄鱼骨肉用破骨机锯成长度为9cm的鳄鱼骨肉段；
二、高压蒸煮：向蒸煮罐中加水，边搅拌边投入鳄鱼骨肉段，升温至130℃，保温9h；然后停止搅拌，静置1h，上清即为一次汤(静置结束立即排汤)；
三、排汤：用真空抽提罐将一次汤抽提入灭菌后的一次汤储罐；静置结束立即排汤(此时汤温在59℃)；
四、水解：将一次汤由汤储罐泵入灭菌后的水解罐，升温至99℃保持15min灭菌，降温至60℃并保温，加入NaOH溶液调整pH值至8.5，加入碱性蛋白酶，酶解1.5h，随着蛋白质的溶解，溶液pH值降低，当溶液pH值降至7.5时，加入胰酶保温3h，当pH值降至7.0时，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1调节pH值为5.4，升温灭酶活，升温灭酶活的参数为90℃，30min；
五、过滤：投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器、两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤1.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度21°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液浑浊，先将浓缩液进行板框过滤或用管式离心机分离，然后再进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽；
喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃；
其中，步骤一中浸泡时，新鲜去皮鳄鱼骨肉与水的质量比为1:2。
实施例4
本实施例的鳄鱼肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗破碎：将新鲜去皮的鳄鱼骨肉用80℃的水浸泡30min后，用水冲洗20min，然后将洗净的鳄鱼骨肉用破骨机锯成长度为8cm的鳄鱼骨肉段；
二、高压蒸煮：向蒸煮罐中加水，边搅拌边投入鳄鱼骨肉段，升温至140℃，保温8h；然后停止搅拌，静置1.5h，上清即为一次汤(静置结束立即排汤)；
三、排汤：用真空抽提罐将一次汤抽提入灭菌后的一次汤储罐；静置结束立即排汤(此时汤温在60℃)；去除一次汤后剩余的骨肉挤压出汤，挤压出汤后的骨肉可用作饲料原料。
四、水解：将一次汤由汤储罐泵入灭菌后的水解罐，升温至100℃保持15min灭菌，降温至60℃并保温，加入NaOH溶液调整pH值至8.5，加入碱性蛋白酶，酶解2h，随着蛋白质的溶解，溶液pH值降低，当溶液pH值降至7.5时，加入胰酶保温5h，当pH值降至6.6时，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1调节pH值为5.4，升温灭酶活，升温灭酶活的参数为90℃，30min；
五、过滤：投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器、两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤2h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度22°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液澄清，进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽；
喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃；
其中，步骤一中浸泡时，新鲜去皮鳄鱼骨肉与水的质量比为1:1。
实施例5
本实施例的鳄鱼肽的提取方法按以下步骤进行：
一、清洗破碎：将新鲜去皮的鳄鱼骨肉用70℃的水浸泡60min后，用水冲洗10min，然后将洗净的鳄鱼骨肉用破骨机锯成长度为10cm的鳄鱼骨肉段；
二、高压蒸煮：向蒸煮罐中加水，边搅拌边投入鳄鱼骨肉段，升温至125℃，保温9h；然后停止搅拌，静置0.5h，上清即为一次汤(静置结束立即排汤)；
三、排汤：用真空抽提罐将一次汤抽提入灭菌后的一次汤储罐；静置结束立即排汤(此时汤温在61℃)；去除一次汤后剩余的骨肉挤压出汤，挤压出汤后的骨肉可用作饲料原料。
四、水解：将一次汤由汤储罐泵入灭菌后的水解罐，升温至98℃保持15min灭菌，降温至50℃并保温，加入NaOH溶液调整pH值至8.5，加入碱性蛋白酶，酶解1h，随着蛋白质的溶解，溶液pH值降低，当溶液pH值降至7.5时，加入胰酶保温5h，当pH值降至6.9时，加入中性蛋白酶水解2h，然后加入HC1调节pH值为5.5，升温灭酶活，升温灭酶活的参数为90℃，30min；
五、过滤：投入硅藻土、活性炭搅拌，静置，依次采用桶式过滤器、两级板框过滤器过滤后，利用板框过滤器循环过滤2.5h，得到清液；
六、浓缩：利用真空浓缩器将清液浓缩至浓度18°Bé，得到浓缩液；
七、喷雾干燥：此时浓缩液浑浊，先将浓缩液进行板框过滤或用管式离心机分离，然后再进行喷雾干燥，即制得鳄鱼肽；
喷雾干燥的参数为：进风温度200℃，出风温度95℃；
其中，步骤一中浸泡时，新鲜去皮鳄鱼骨肉与水的质量比为1:2。
实施例1-5中将鳄鱼骨肉进行生物酶解提取而成小分子肽类物质，鳄鱼肽中的精华成分活性超强，极易被人体吸收，可全面调节人体免疫力。
本发明方法制得的产品不含任何化学成分与激素，对人体没有任何毒副作用，是十分纯净的营养物质。采用本发明的方法制得的鳄鱼肽无需搅拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，为淡黄色透明液体，不会析出任何杂质和沉淀物。对人体的生长、发育、代谢、繁衍等生理活动有至关重要的作用。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。