本发明涉及一种鸭蛋去污除菌效果的评价方法，特别是一种鸭蛋清洗剂去污除菌效果的评价方法以及该鸭蛋清洗剂。
背景技术：
我国鸭蛋年产量达到500多万吨，约占禽蛋总量的20％，鸭蛋生产已经成为我国农业重要的一部分。鸭蛋味道鲜美可口，营养丰富,长期以来，人们都将鸭蛋加工成皮蛋和咸蛋等蛋制品，但近年来的调查表明，消费者也越来越喜欢鲜鸭蛋，因此，鲜鸭蛋的质量与卫生直接关系到消费者的食用安全。相关研究表明，由于产蛋鸭采用放养、散养的特殊饲养方式，蛋壳表面很容易粘有污泥、垫草、粪便，导致细菌生长繁殖，而随着贮藏时间延长，蛋壳表面的细菌会经过蛋壳上的气孔进入蛋内，在温度条件适宜时会大量生长繁殖，导致蛋白质的腐败变质，破坏鸭蛋的营养价值，甚至造成食用者食物中毒。
为防止鸭蛋常温贮藏腐败变质，延长其货架期，减少经济损失，一方面，人们加强了对市售鲜鸭蛋细菌污染的监测，通过对市售鲜鸭蛋细菌污染情况的随机抽样检测，调查市售鲜鸭蛋的卫生质量状况，为鲜鸭蛋的市场流通和食用安全提供参考，例如，游洋，彭义，刘力等在(市售鲜鸭蛋细菌污染的调查[j].畜禽业，2015(4)：61-62)中对某地区市售鲜鸭蛋的菌落总数、大肠菌群数和沙门氏菌进行了随机抽样检测，并按照我国相关标准，对被检鲜鸭蛋的质量安全进行了分析评定。其结果：在抽检的15批次鲜鸭蛋中，各项细菌学指标均符合卫生标准为86.7％；不合格鲜鸭蛋样品中，6.7％为菌落总数超标，13.3％为大肠菌群数超标，鸭蛋内未检出沙门氏菌。根据gb4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定方法，杨伊磊、李梦丹、陈力力、青文哲、张依凡等在(禽蛋表面细菌污染及影响因素的调查分析[j].《食品安全质量检测学报》,2015，05.)中对饲养场的蛋壳表面、饲料、垫草中的细菌菌落总数进行测定，采用沉降法测定饲养场空气中的细菌数,并进行统计分析，认为饲养场的禽蛋均受到不同程度的细菌污染，并且饲养场的空气、饲料、垫草是造成禽蛋表面细菌污染的主要原因。
另一方面，开展了洁蛋保鲜研究，并把鲜蛋的清洗消毒作为洁蛋生产的必要步骤，刘会珍在(鸡蛋涂膜保鲜工艺的试验研究[d],中国农业大学,2005年)中采用经济适用、操作简便的物理化学方法对鲜鸡蛋蛋壳表面进行清洗处理，比较不同消毒方法的杀菌效果，并认为适宜实际应用的消毒方法为过氧乙酸熏蒸和甲醛熏蒸。崔红艳，苏瑛，区永龙等在(不同涂膜剂对雷州黑鸭蛋保鲜效果的研究[c].中国畜牧兽医学会家禽学分会第九次代表会议暨第十六次全国家禽学术讨论会论文集，2015,05.)中研究采用壳聚糖涂膜剂、白芨为主要原料的中药涂膜剂、壳聚糖和中药复合涂膜剂及植物油(花生油)涂膜剂四种不同涂膜保鲜剂对雷州黑鸭蛋保鲜效果的影响，综合各项指标，植物油组保鲜效果最优，其为筛选最适合鸭蛋保鲜涂膜剂提供依据。刘力，彭义，游洋等在(羧甲基壳聚糖对室温贮藏鲜鸭蛋质量安全的影响[j].中国畜牧杂志2013，49(4)：61-65)中开展了羧甲基壳聚糖对室温贮藏鲜鸭蛋质量安全影响的研究。相对而言，人们把研究重点放在了鸡蛋的清洗上，对于鸭蛋的去污除菌研究较少，甚至有的传统产品生产没有清洗工序。
另外，目前，没有一套科学的禽蛋清洗剂去污除菌效果的评价方法。一般现有的的洗蛋只感官评价去污的情况，即通过肉眼观察来评分，这样人为误差比较大，并且不能量化，关于除菌大多只是冲洗掉污渍的同时带走细菌，看是不是洗干净了，没有除菌的检测和描述，
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提供一种结果客观、直接且准确的鸭蛋清洗剂去污除菌效果的评价方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种鸭蛋清洗剂去污除菌效果的评价方法，其包括下列步骤：
1)称取油茶籽粉加入自来水中，60℃水浴溶解，随后加入聚丙烯酸钠、凯松防腐剂混合均匀，油茶籽粉、聚丙烯酸钠、凯松防腐剂的添加量为每100ml自来水中加入油茶籽粉1.25-5.00g、聚丙烯酸钠0.1-0.3g、凯松防腐剂0.02-0.06ml，制得清洗剂；
2)选择表面没有污渍和粪便杂草、色泽均匀的鲜鸭蛋，用无菌生理盐水振摇洗涤1min，37℃晾干，随后放置在鸭场垫草、泥粪制备的污染液中浸泡5min，37℃晾干，制成人工污染蛋；
3)将人工污染蛋用步骤1)配制的清洗剂清洗，清洗方法为：首先用喷壶喷雾清洗剂在置于塑料筐中的人工污染蛋的表面，随后持续均匀地喷洒试液，同时刷子轻轻地刷洗鸭蛋表面，最后自来水冲洗，全过程5min完成；
4)对人工污染蛋清洗前后进行称重分别为wt前、wt后，以清洗后减轻的重量为污物，计算两组人工污染蛋的去污率，即
去污率＝(wt前-wt后)/wt前×100％；
用白度仪测定人工污染蛋清洗前后的白度分别为whi前、whi后，每个人工污染蛋测定其上下两端、中部四面共六个点的白度，取平均值为每个样品蛋的白度，以白度增加值计算白度提高率：
白度提高率＝(whi前-whi后)/whi前×100％；
去污率和白度提高率越高，清洗越彻底干净；
5)对经步骤3)清洗后的鸭蛋再次用无菌水清洗得洁蛋清洗水，采用国标《gb4789.2.2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定》方法、微量培养法测定细菌数量，洁蛋清洗水的菌数越少，除菌效果越好。
所述油茶籽粉的制备方法为：取榨油后薄片状的茶枯烘干粉碎至200目，按照固液比1g:6ml加入体积浓度为80％的乙醇，于75℃水浴搅拌3h，趁热抽滤，收集滤液，将滤渣以相同条件再提取1次，合并滤液，55℃旋转蒸发至初始体积的1/10，将浓缩液真空干燥即得。
所述油茶籽粉的茶皂素含量为65％-70％。
所述清洗剂配方为每100ml清洗剂中含有油茶籽粉2.50g、聚丙烯酸钠0.3g、凯松防腐剂0.04ml。
另外，采用抑菌圈实验检测步骤1)所得清洗剂的抑菌能力，抑菌圈越大，则抑菌能力越强。
本发明还提供了一种鸭蛋清洗剂，其中，每100ml鸭蛋清洗剂中含有油茶籽粉1.25-5.00g、聚丙烯酸钠0.1-0.3g、凯松防腐剂0.02-0.06ml。
同时，本发明还提供了一种鸭蛋清洗剂的制备方法，其具体为，称取油茶籽粉加入自来水中，60℃水浴溶解，随后加入聚丙烯酸钠、凯松防腐剂混合均匀，油茶籽粉、聚丙烯酸钠、凯松防腐剂的添加量为每100ml自来水中加入油茶籽粉1.25-5.00g、聚丙烯酸钠0.1-0.3g、凯松防腐剂0.02-0.06ml，即得。
本发明采用以油茶籽粉这种天然成分为主要原料添加具有抗沉淀作用的聚丙烯酸钠及具有抑菌作用的凯松防腐剂复配而成的鸭蛋清洗剂，然后对用清洗剂清洗前后的人工污染蛋进行去污率、白度评价，使得鸭蛋清洗剂去污除菌效果的评价更为客观、直接且准确。
与现有技术相比，本发明所具有的特点为：
1.本发明的去污除菌剂是以茶籽粕中天然提取成分和化学试剂聚丙烯酸钠、凯松防腐剂复配而成的。油茶籽粉是油茶籽提油后的副产物，主要成分为茶皂素(65％-70％)，茶皂素又名茶皂苷，属于齐墩果烷型五环三萜类皂苷，是一种优良的非离子表面活性剂，具有发泡、乳化、去污、洗涤等用途。聚丙烯酸钠为食品级添加剂，具有抗沉淀作用。凯松防腐剂是国际公认的高效、低毒、广谱高效的新型杀菌剂，对常见细菌、真菌、藻类等具有很强的抑制和杀灭作用,主要用于化妆品防腐。三种成分组合制备清洗剂具有去污能力强、抑菌效果好，使用安全并利于环保的特点。
2.清洗效果评价方法有特点
一般对禽蛋清洗效果的评价仅采用人为的感官评分，本发明采用仪器检测去污率及白度，拥有量化的指标，采用人工污染蛋进行清洗比较，结果更加准确可靠。
3.实际应用效果好
运用自配的鸭蛋去污除菌剂清洗了蛋鸭场采集的鲜蛋，清洗效果好，并且清洗方式模拟了工厂流水线，接近实际生产。
具体实施方式
1.原料准备：
油茶籽粉参考龚秋实,肖瑜,梁美娜,刘以清,黄浦等的文献报道(油茶茶枯中茶皂素的提取工艺研究[j].广西植物,2015,(1)：120-125.)加以改进，采用有机溶剂法制备油茶籽粉，即取榨油后薄片状的茶枯烘干粉碎至200目左右，按照固液比1:6加入80％乙醇，于75℃水浴搅拌3h。趁热抽滤，收集滤液，将滤渣以相同条件再提取1次。合并滤液，55℃旋转蒸发至初始体积的1/10，将浓缩液真空干燥得油茶籽粉。本发明所用油茶籽粉的茶皂素含量为65％-70％。茶皂素又名茶皂苷，属于齐墩果烷型五环三萜类皂苷，是一种优良的非离子表面活性剂，具有良好的乳化、分解、发泡、湿润功能，有很好的去污作用，可用于厨房用品、果蔬清洗，洗发洗手等，是一种天然绿色、高效环保的家用洗洁用品。
聚丙烯酸钠、凯松防腐剂两种试剂均从化学试剂公司购买，聚丙烯酸钠为食品级添加剂，在此具有抗沉淀作用。凯松防腐剂是国际公认的高效、低毒、广谱高效的新型杀菌剂，对常见细菌、真菌、藻类等具有很强的抑制和杀灭作用,主要用于化妆品防腐。因此本发明所用原料均能安全地用于鸭蛋表面清洗。
人工污染蛋人工污染蛋的制备方法为选择表面没有污渍和粪便杂草、色泽均匀的鲜鸭蛋，用无菌生理盐水振摇洗涤1min，37℃晾干，随后放置在鸭场垫草、泥粪制备的污染液中浸泡5min，37℃晾干，备用。
鲜鸭蛋直接从蛋鸭场购买，蛋壳无破损、3d之内的鲜鸭蛋。
2.清洗剂配制：
流程：油茶籽粉提取——称量油茶籽粉——加水溶解——聚丙烯酸钠、凯松防腐剂溶解——混匀
具体操作为首先称取1.25-5.00g油茶籽粉加入自来水100ml，60℃水浴溶解，随后加入0.1-0.3g聚丙烯酸钠、0.02-0.06ml凯松防腐剂混合均匀。在此基础上设计四因素三水平正交试验，优化得到清洗剂最佳配方为油茶籽粉2.50g/100ml、聚丙烯酸钠0.3g/100ml、凯松防腐剂0.04ml/100ml。
3.试验过程中鸭蛋清洗：将人工污染蛋分为两组，一组以配制的清洗剂清洗，另一组用自来水清洗，清洗方法为：首先用喷壶喷配制的清洗剂或自来水在置于塑料筐中的人工污染鸭蛋的表面，随后持续均匀地喷洒试液，同时刷子(写毛笔字的排笔)轻轻地刷洗鸭蛋表面，最后自来水冲洗，全过程5min完成。
4.去污除菌效果评价
对清洗前后的鸭蛋进行比较，评价清洗剂的去污除菌效果。
评价方法如下：
对人工污染蛋清洗前后进行称重分别为wt前、wt后，以清洗后减轻的重量为污物。计算去污率，即
去污率＝(wt前-wt后)/wt前×100％
用wsb-1便携式白度仪测定鸭蛋清洗前后的白度分别为whi前、whi后，每个蛋测定蛋的上下两端、中部的四面共六个点的白度，取平均值为每个样品蛋的白度，以白度增加值为洁蛋效果。计算白度提高率：
白度提高率＝(whi前-whi后)/whi前×100％；
由此得到试验结果如下：
(1).鸭蛋去污除菌剂配制结果
以油茶籽粉这种天然成分为主要原料添加具有抗沉淀作用的聚丙烯酸钠、抑菌作用的凯松防腐剂化学试剂复配配制鸭蛋去污除菌剂，通过单因素试验、正交试验优化配方，结果表明采用油茶籽粉原液2.5％、kathon0.0375％和聚丙烯酸钠0.3％配制的油茶籽粉清洗液去污除菌效果好。以此清洗剂和自来水清洗人工污染蛋的结果如下表，由此表明清洗剂组具有较好的去污除菌效果。
表1鸭蛋去污除菌剂清洗人工污染蛋的效果
以聚丙烯酸钠0.3％、油茶籽粉2.5％作为基础配方，分别添加a:次氯酸钙3.5％、b:山梨酸钾4.0％、c:kathon0.04％、d:过氧化氢3％、e:氧净3％、f:生理盐水复配，采用微量培养法比较抑菌效果。结果见表，c组添加kathon0.04％时抑菌效果最好。
不同配方清洗剂的抑菌效果
(2).鸭蛋去污除菌剂应用效果
分别以最佳配方的清洗剂清洗和自来水清洗蛋鸭场新鲜蛋各100枚，比较两组鸭蛋蛋壳表面的白度、去污率，并且随机取清洗剂组、自来水组清洁鸭蛋各30枚，每个洁蛋分别用100ml生理盐水清洗表面，收集洁蛋清洗水，微量培养法培养清洗水测定od值，比较清洗剂组、自来水组清洗的抑菌效果。两种清洗方法处理后的鸭蛋感官评价均无明显的残留污物或颜色混杂不清晰的现象，但称重和白度测定有区别，具体请见下表。
三种清洗方法处理后鸭蛋的白度变化
结果表明清洗剂组蛋表面色白均匀，重量减轻率大于自来水组，去污能力强；通过采用微量培养法检测清洗剂组、自来水组洁蛋清洗水，酶标仪660nm测定培养物od值，培养物中菌体浓度越大则od值越大，清洗剂组od值为0.178±0.0054，自来水组od值为0.273±0.0364，结果表明自配清洗剂的抑菌效果好。另外取清洗剂组、自来水组洗蛋后的污水培养测定od值，分别为0.161和0.385，说明清洗过程中清洗剂不仅对蛋表面细菌有去除作用，同时能使排放的洗蛋污水中细菌数量明显减少，起到保护环境的作用。