本发明属于天然药物提取分离领域，尤其涉及一种熊果苷的提取分离方法。
背景技术：
熊果苷属氢醌苷化合物，化学名为4-羟基苯基-d-吡喃葡萄糖苷，是源于绿色植物的天然活性皮肤脱色组分，存在于熊果、越橘等植物中，是一种新兴的无刺激、无过敏、配伍性强的天然美白活性物质。熊果苷是国际上正在极力推广的高功效医药、化妆品添加剂，国际公认的高效祛斑美白剂，是美白化妆品理想的添加成份，国内外需求巨大，市场前景广阔。熊果苷具有显著的抑制酪氨酸酶活性，减少酪氨酸酶在皮肤中的沉积，对皮肤有漂白、防色变和祛斑的功效。
目前，熊果苷的制备方法主要有两大类型，其一是从熊果、越橘等植物中直接提取，来获取熊果苷；其二是以葡萄糖苷、对苯二酚等为起始原料通过化学合成制备熊果苷。方法一的提取率过低，而且所得熊果苷纯度不高，方法二的生产成本较高，制备过程用到大量化学试剂，不仅对实验人员健康造成损伤，而且生产过程产生的废液试剂对环境也不利。
技术实现要素：
发明目的：为克服现有技术中的问题，本发明提供了一种高纯度的熊果苷的制备方法。
技术方案：本发明所述的熊果苷的制备方法，包括：将熊果叶粉末置于醇中进行提取，提取结束后过滤，除去滤液中的醇后用有机溶剂进行萃取，取水层；用型号为ab-8与hpd-100大孔吸附树脂混合后对水层进行吸附，然后用浓度为20～30％醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；将洗脱液析晶、干燥后得熊果苷。
所述的醇为乙醇，浓度为40-50％。
所述提取的液料比为0.8-1.4:1，优选的，液料比为1-1.2:1。
所述提取为微波提取，微波提取功率为400-600w，次数为2-3次，温度为30-40℃，每次提取时间为0.5-1h。
所述的有机溶剂为乙醚、氯仿、石油醚等与水不互溶的有机溶剂。
ab-8与hpd-100大孔吸附树脂的体积比为0.5-1.5：1。
洗脱时，柱流速为1-2bv/min，用20～25％乙醇进行洗脱。
所述的洗脱液一般于50-55℃真空浓缩至至1/2体积，至5-10℃下，搅拌析晶0.5-1.5h，过滤，46-54℃下真空干燥4-6h，即得高纯度熊果苷。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明利用浸渍法配合微波对熊果叶粉末进行粗提，结合大孔树脂混合技术对熊果苷进行纯化，然后进行重结晶，即可得到高纯度的熊果苷。本专利的方法对环境友好，工艺稳定，易于实现工业化生产，同时树脂可以重复使用，生产成本较低，可用于工业生产。
本发明工艺获得的产品质量好，收率高，巧妙地利用混合树脂(非极性和弱极性的混合树脂，对上样液中杂质的吸附能力更强，即可一步得到强极性的熊果苷洗脱液)，使得工艺一步即可得到高纯度的熊果苷洗脱液。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于
本技术：
所附权利要求所限定的范围。
实施例1
称取熊果叶粉末300g，置于烧杯中，按1g熊果叶粉末：1ml40％乙醇的比例加入300ml40％乙醇，于35℃下，微波功率500w提取0.5h，每隔15min搅拌一次，共浸提两次，合并浸提液，过滤，50℃旋转蒸发1h，除去乙醇，加0.5倍体积的有机溶剂萃取(可以为乙醚、氯仿、石油醚等与水不互溶的有机溶剂，本实施例为乙醚)，萃取2次，合并水层后稀释2倍体积，冷却至室温，上ab-8与hpd-100按1：1体积比例混合大孔吸附树脂柱(径高比为1:6)进行吸附，吸附完成后，以25％乙醇为洗脱液，柱流速为1.5bv/min，收集乙醇洗脱液，55℃真空浓缩至1/2体积，至5℃下，搅拌析晶1.0h，过滤，50℃下，真空干燥4h，即得高纯度熊果苷，纯度为99.5％，收率为6.1％。
实施例2
称取熊果叶粉末600g，置于烧杯中，按1g熊果叶粉末：1ml40％乙醇比例加入600ml40％乙醇，于35℃下，微波(微波功率为400w)提取0.5h，每隔15min搅拌一次，共浸提两次，合并浸提液，过滤，50℃旋转蒸发1h，除去乙醇，加0.5倍体积的有机溶剂萃取(可以为乙醚、氯仿、石油醚等与水不互溶的有机溶剂，本实施例为氯仿)，萃取2次，合并水层后稀释2倍体积，冷却至室温后，上ab-8与hpd-100按0.5：1体积比例混合大孔吸附树脂柱(径高比为1:7)进行吸附，吸附完成后，以25％乙醇为洗脱液，柱流速为1.5bv/min，收集乙醇洗脱液，55℃真空浓缩至一定至1/2体积，至5℃下，搅拌析晶1.0h，过滤，50℃下，真空干燥4h，即得高纯度熊果苷，纯度为99.2％，收率为5.6％。
实施例3
称取熊果叶粉末1200g，置于烧杯中，按1g熊果叶粉末：1ml40％乙醇加入1200ml40％乙醇，于35℃下，微波(微波功率为600w)提取0.5h，每隔15min搅拌一次，共浸提两次，合并浸提液，过滤，50℃旋转蒸发1h，除去乙醇，加0.5倍体积的有机溶剂萃取(可以为乙醚、氯仿、石油醚等与水不互溶的有机溶剂，本实施例为石油醚)，萃取2次，合并水层后稀释2倍体积，冷却至室温后，上ab-8与hpd-100按1.5：1体积比例混合大孔吸附树脂柱(径高比为1:5)进行吸附，吸附完成后，以25％乙醇为洗脱液，柱流速为1.5bv/min，收集乙醇洗脱液，55℃真空浓缩至一定至1/2体积，至5℃下，搅拌析晶1.0h，过滤，50℃下，真空干燥4h，即得高纯度熊果苷，纯度为99.0％，收率为5.8％。
实施例4
水层仅用ab-8型大孔吸附树脂柱进行吸附，其余方法参数同实施例1，所得熊果苷的纯度为89.6％，收率为6.5％。