本发明涉及基因检测领域,具体涉及一种hpv检测中黏性样本dna提取方法。
背景技术:
人乳头瘤病毒(hpv)可以通过多种途径感染生殖道,从而导致尖锐湿疣以及宫颈病变,甚至可能引起宫颈癌的发生,从高危型hpv的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要5~10年。因此,有针对性地进行hpv的分型检测对于宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要意义。
目前大都常用的基因芯片技术在检测人乳头瘤病毒(hpv)时,会遇到样本中有大量宫颈黏液,对提取dna操作时影响甚大。
在吸取样本时,如果遇到大量宫颈黏液,离心后没办法得到底部的沉淀,可能抑制扩增。同时,去上清时吸走黏液可能带走大部分宫颈脱落细胞,使结果呈假阴性。此外,如果为了破坏那些黏液加入过量细胞裂解液的话,很大可能会影响dna模板含量,影响后续扩增、杂交。
技术实现要素:
为解决现有技术的hpv检测过程中样本黏液含量过高导致dna提取困难的技术问题,本发明提供一种解决上述问题的hpv检测中黏性样本dna提取方法。
一种hpv检测中黏性样本dna提取方法,运用所述hpv检测中黏性样本dna提取方法需使用以下组分:
离心管、naoh溶液、生理盐水、细胞裂解液。
所述hpv检测中黏性样本dna提取方法包括以下步骤:
步骤一:吸取1ml黏性样本至所述离心管中;
步骤二:向所述离心管中加入100μl的所述naoh溶液,振荡混匀后,消化处理一定时间;
步骤三:将所述离心管于13000rpm下离心10min后,去除上清液,保留细胞沉淀;
步骤四:向所述离心管中加入1ml所述生理盐水,反复吹打混匀;
步骤五:重复所述步骤三和所述步骤四;
步骤六:再次重复所述步骤三,然后向所述离心管中加入50μl细胞裂解液,悬浮所述细胞沉淀;
步骤七:将所述离心管沸水浴加热10min;
步骤八:将所述离心管于13000rpm下离心10min后,保留上清液作为检测样本。
在本发明提供的hpv检测中黏性样本dna提取方法的一种较佳实施例中,所述naoh溶液为1.75mol/l的naoh溶液。
在本发明提供的hpv检测中黏性样本dna提取方法的一种较佳实施例中,所述步骤二中消化处理10min。
相较于现有技术,本发明提供的所述hpv检测中黏性样本dna提取方法具有以下有益效果:
一、所述hpv检测中黏性样本dna提取方法采用naoh溶液对宫颈黏液进行处理。宫颈黏液的主要成分是糖蛋白,一定浓度的naoh溶液能有效的消化这部分蛋白质,使其转化为稀液,离心时上清液与底部沉淀正常分离,细胞裂解液也以正常量添加。保证了后续的扩增、杂交等操作的正常进行,以及最终检测结果的准确无误。
二、所述hpv检测中黏性样本dna提取方法在消化处理后不使用酸性试剂中和处理,而利用生理盐水进行多次洗涤,使所述细胞沉淀处于趋向于中性的弱碱性环境。此环境中的dna性状更为稳定,后续的检测操作也更为方便。
三、所述hpv检测中黏性样本dna提取方法使得对黏性样本的处理具有了一套通用的处理方法,无需根据样本情况调整处理流程,提取效率得到明显改善,保证了实验结果,降低了复查率。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。
运用所述hpv检测中黏性样本dna提取方法需使用以下组分:1.5ml的离心管、1.75mol/l的naoh溶液、生理盐水、细胞裂解液。
所述hpv检测中黏性样本dna提取方法包括以下步骤:
步骤一:吸取1ml黏性样本至所述离心管中;
步骤二:向所述离心管中加入100μl的所述naoh溶液,振荡混匀后,消化处理10min;
步骤三:将所述离心管于13000rpm下离心10min后,去除上清液,保留细胞沉淀;
步骤四:向所述离心管中加入1ml所述生理盐水,反复吹打混匀;
步骤五:重复所述步骤三和所述步骤四;
步骤六:再次重复所述步骤三,然后向所述离心管中加入50μl细胞裂解液,悬浮所述细胞沉淀;
步骤七:将所述离心管沸水浴加热10min;
步骤八:将所述离心管于13000rpm下离心10min后,保留上清液作为检测样本。
相较于现有技术,本发明提供的所述hpv检测中黏性样本dna提取方法具有以下有益效果:
一、所述hpv检测中黏性样本dna提取方法采用naoh溶液对宫颈黏液进行处理。宫颈黏液的主要成分是糖蛋白,一定浓度的naoh溶液能有效的消化这部分蛋白质,使其转化为稀液,离心时上清液与底部沉淀可正常分离,细胞裂解液也以正常量添加。保证了后续的扩增、杂交等操作的正常进行,以及最终检测结果的准确无误。
二、所述hpv检测中黏性样本dna提取方法在消化处理后不使用酸性试剂中和处理,而利用生理盐水进行多次洗涤,使所述细胞沉淀处于趋向于中性的弱碱性环境。此环境中的dna性状更为稳定,后续的检测操作也更为方便。
三、所述hpv检测中黏性样本dna提取方法使得对黏性样本的处理具有了一套通用的处理方法,无需根据样本情况调整处理流程,提取效率得到明显改善,保证了实验结果,降低了复查率。
以上所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其它相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围之内。