用于演示牙刷刷毛的抗细菌功效的方法与流程

本发明涉及向消费者演示含有抗细菌活性物质的牙刷刷毛的抗细菌功效。

发明背景

对于新产品的推广上市，或者为了向消费者推广现有产品的新益处，演示是低成本且有效的手段。牙刷是为人熟知的。最近，牙刷刷毛包含活性物质，例如抗细菌活性物质(例如，银、活性炭等)。然而，消费者可能无法完全领会或理解具有所述抗细菌活性物质的牙刷刷毛的益处。因此，需要以科学且易懂的方式向消费者演示这些益处。

技术实现要素：

本发明涉及一种评估含抗细菌物质的牙刷刷毛的抗细菌效果的方法，其包括如下步骤：(a)使对照牙刷刷毛和所述含抗细菌物质的刷毛暴露至细菌；(b)在营养琼脂板上孵育细菌处理的对照刷毛和含抗细菌物质的刷毛；和(c)比较该孵育的对照牙刷刷毛和该孵育的含抗细菌物质的刷毛之间的细菌生长结果，以评估所述含抗细菌物质的牙刷刷毛的抗细菌效果。

本发明的另一方面提供一种评估牙刷刷毛的抗细菌效果的方法，其包括如下步骤：(a)使牙刷刷毛暴露至细菌；(b)在营养琼脂板上孵育该细菌处理的牙刷刷毛；和(c)观察该孵育的牙刷刷毛的细菌生长，以评估该抗细菌效果。

本发明的上述及其他特征在本领域技术人员结合所附权利要求阅读以下详细描述之后将变得显而易见。

附图的简要说明

虽然说明书以权利要求书作结，具体指出并明确限定了本发明，据信结合附图通过以下内容将更好地理解本发明，这些附图中类似的附图标记指示类似的元件。

图1关于第一步骤，细菌收集；

图2关于第二步骤，其中，将(第一步骤的)收集的细菌转移至对照和非对照容器；

图3a和3b关于第三步骤，其中，移出牙刷刷毛(来自对照和含抗细菌物质的牙刷)(图3a)，并且用紫外光灭菌(图3b)；

图4关于第四步骤，其中，使经移出和灭菌的牙刷刷毛暴露至(第二步骤的)所述对应的容器中所含的细菌溶液；

图5关于第五步骤，从(第四步骤的)所述容器移出细菌暴露的刷毛；

图6关于第六步骤，营养琼脂平板上孵育(第五步骤的)移出的刷毛，所述营养琼脂平板包含营养琼脂，其中对照刷毛在一侧，而含抗细菌物质的刷毛在另一侧；和

图7关于第七步骤，评估对照和含抗细菌物质的刷毛上的细菌生长。相对于对照刷毛，含抗细菌物质的刷毛不存在细菌生长或至少存在的细菌生长较少，指示所希望的结果。

发明详述

应当理解，权利要求的范围不限于本文所述和/或附图所示的具体设备、装置、方法、条件或参数，本文所用的术语仅用于通过举例描述特定实施方式的目的，不是为了限制请求保护的发明。另外，说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数。

本文所用术语“包括”、“包含”、“含有”、“含”表示可以加入不会对最终结果造成不利影响的其他步骤、成分、元素等等。这些术语中的每个术语包括术语“由……组成”和“基本上由……组成”。除非另有具体说明，本文中的元件和/或设备据信可广泛购自全球许多供应商和来源。

本发明涉及评估含抗细菌物质的牙刷刷毛的抗细菌效果的方法。第一步骤涉及收集细菌。细菌可获自市售来源，或者获自人类口腔，或典型的盥洗室环境。可采用一种或多种细菌菌种。可采用革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。细菌菌种的一个实例是大肠杆菌(e.coli)。第四军医大学研究发现，在部分消费者使用过的牙刷中检测出通常存在于人或动物的肠道和粪便中的大肠杆菌。因此，本实验方法中采用大肠杆菌作为测试菌种是适合的。参见图1，细菌(1)可在营养琼脂(3)(适于支持细菌生长)上于合适条件(例如，环境温度或优选高于环境温度的温度(约37℃)以模拟人类口腔条件)下生长。当然，贯穿本文所述的步骤，应始终采用工业认可的实验室技术。

第二步骤，参见图2，涉及将(第一步骤)收集的细菌(1)转移至对照和非对照容器(分别是5、7)。将长成的细菌转移至含有pbst缓冲液(磷酸盐缓冲盐水ph(7.2～7.4)，包含0.1％吐温80)的容器，以提供含细菌的溶液。该细菌溶液包含所述细菌以及优选一般处于ph中性条件的ph缓冲液。一个容器(5)指定用于对照牙刷刷毛，而另一个容器(7)指定用于含抗细菌物质的牙刷刷毛。使所述容器(5、7)经历相同条件(即，一般而言相同数量的细菌和相同体积的溶液等)。容器的一个实例是实验室孵育瓶。

第三步骤，参见图3a，涉及将牙刷刷毛从对照和非对照牙刷器具(分别是9、11)移出。牙刷刷毛被移出，优选通过剃刀刀片(13)割下。或者，移出该牙刷器具的头部断面的部分(其中，附着有刷毛)。参见图3b，刷毛(9、11)经灭菌，优选通过紫外光(15)灭菌，然后使其暴露至(步骤1和2的)细菌，以排除来自原始刷毛上的细菌的潜在干扰。本文中所用的牙刷器具广泛地包括手动牙刷、用于电动牙刷的替代性牙刷头等。将这些移出的刷毛(或者头部断面的部分)分别置入对照和非对照容器。牙刷刷毛是本领域熟知的由，例如，聚对苯二甲酸丁二酯、聚酰胺(例如，尼龙)、聚丙烯、聚酯，或其组合，制得的那些。牙刷刷毛可以如下方式包含抗微生物活性物质：微小金颗粒的形式，以0.0005重量百分比(“wt％”)～0.002wt％的水平包含，或微小银颗粒的形式，以0.01wt％～0.1wt％的水平包含，其平均粒径为1.7+/-0.5微米(casno.7440-22-4)，或木炭颗粒，以0.05wt％～0.2wt％的水平包含。牙刷刷毛可以是锥形的。牙刷刷毛的直径可以是约5密耳或6密耳。牙刷刷毛的供应商是南韩的bbc公司。参见例如，us8,512,611b2。抗微生物活性物质的其它实例有：磷酸盐或酯，或玻璃微粉，其载有银、锌或银-锌复合物。参见例如，ep2493289b1。出于美观目的，可对牙刷刷毛的尖部着色。

第四步骤涉及将该移出的牙刷刷毛添加到(第二步骤的)所述对应的容器中包含的含细菌溶液，从而对其进行处理。使所述刷毛暴露至细菌，持续数分钟至数天范围的一定长度的时间。在一个特定实例中，该暴露在高温条件(例如，37℃)下持续20小时。参见图4，在这段时间中，(连续或间歇地)搅拌或在其它情况中振荡所述对照和非对照容器(5、7)。当然，对照和非对照容器(5、7)经历相同条件。

第五步骤，参见图5，涉及从第四步骤的容器移出细菌暴露的刷毛(9、11)。可将所述容器的内容物简单地倾倒进入无菌容器，例如培养皿(17)，并且优选(例如采用磷酸盐缓冲盐水)漂洗一次，然后，可用镊子(未显示)将各牙刷刷毛(9、11)从所述培养皿(17)移出。

第六步骤，参见图6，涉及将(第五步骤的)经移出/经漂洗的刷毛(9、11)转移至营养琼脂板(18)孵育。优选将含抗细菌物质的刷毛置于一侧(11)，且将对照刷毛(9)置于另一侧。由此，可容易地比较细菌生长结果。该孵育随时间推移而进行，优选从数小时至一天或更多天，这取决于所用的细菌菌种，并且优选在高温(例如，37℃)下进行。

第七步骤，参见图7，涉及观察刷毛(9、11)上的细菌生长。相对于对照刷毛(9)，含抗细菌物质的刷毛(11)上不存在细菌生长，或至少存在的细菌生长较少，指示所希望的结果。细菌生长可由肉眼容易地识别，这归因于琼脂中添加的细菌特异性染料。显微镜，例如光学显微镜或扫描电子显微镜(sem)，也可用于形成更大且更具细节的图像，以供该比较。对照和含抗微生物物质的刷毛的光学显微镜图像(19、21)以及对照和抗微生物物质刷毛(23、25)的sem图像示于图7。当然，该方法可采用第二或第三或更多非对照牙刷器具(从而可以同时评估多个牙刷)。任选地，该比较还可包括采用计算机软件生成的分析结果。

该方法优选以广告视频的形式通过电视或网络展示。或者，该方法用于研究中，以支持广告诉求或鉴定出众的牙刷刷毛。

实施例

为了更充分地理解本文所述的本发明，提供以下实施例。应当理解，该实施例仅用于说明目的，不应理解为以任何方式限制本发明。

下述实施例评估了含抗细菌物质的牙刷刷毛的抗细菌效果。利用该方法以通过视频向消费者展示以下牙刷相较于对照牙刷(prohealthcomplete7，(来自宝洁公司(中国)的产品，批号：om009,编码:6903148095881,gcas#:92290149))的抗细菌性能：含抗细菌物质的牙刷(vitalizerplus，anti-bacteria(来自宝洁公司(procter&gamblecompany)(美国)的产品,批号:om027,编码:3014260838256,gcas#:99684037))。

视频中采用如下方案：

1.新鲜大肠杆菌(e.coli)atcc8739，18小时-24小时孵育物从胰蛋白胨大豆琼脂(tsa)板收集，并转移至10mlpbst缓冲液(磷酸盐缓冲盐水ph(7.2～7.4)，包含0.1％吐温80)，以获得细菌悬液(约10⁶cfu/ml)。然后，该悬液用pbst缓冲液稀释至10^-3，并在后续步骤中用作细菌接种物。

2.转移5ml的接种物进入包含95mlpbst缓冲液的无菌250ml孵育瓶。

3.刷毛(用剃刀刀片)从刷头切下并置入9mm培养皿，然后经紫外光(zw9d12y-h145，天津瑞森特紫外仪器有限公司)灭菌(15分钟，两次)。

4.将经紫外灭菌的刷毛转移至步骤2的细菌溶液，并将孵育瓶置于定轨振荡器(incubatorshaker，hny-2112b，天津欧诺仪器有限公司)(37℃、150rpm)上，并连续振荡20小时。

5.从(步骤4)的孵育瓶移出经细菌暴露的刷毛，并用磷酸盐缓冲盐水漂洗该刷毛一次。

6.将步骤5的刷毛转移至包含细菌特异性染料2,3,5-氯化三苯基四氮唑，ttc)的营养琼脂板，其中anti-bacteria刷毛位于一侧，且对照刷毛位于另一侧。该琼脂板在37℃孵育24小时。

7.通过肉眼并通过扫描电子显微镜(sem)观察刷毛上的细菌生长。

讨论结果。通过该方法显示了anti-bacteria手动牙刷和对照牙刷的抗细菌效果。对于来自对照牙刷的对照牙刷刷毛，观察到刷毛周围显示为红色的密集细菌生长。sem图像显示对照刷毛周围的密集数量的细菌细胞。对于来自anti-bacteria牙刷的含抗细菌物质的牙刷刷毛，没有观察到细菌生长。sem图像显示其刷毛周围基本无细菌细胞。

应理解，本说明书全文中给出的每个最大数值限定包括每个较低的数值限定，如同这些较低的数值限定清楚写在这里。本说明书全文中给出的每个最小数值限定包括每个较高的数值限定，如同这些较高的数值限定清楚写在这里。本说明书全文中给出的每个数值范围包括落入所述较宽数值范围的每个较窄数值范围，如同本文中明确写明这些较窄数值范围。

本文所述的尺寸和值不应理解为严格限定为所述的精确的数值。相反，除非另有具体说明，这种尺寸各自用于指所述的值和该值周围的功能等同的范围。例如，公开为“40mm”的尺寸意在表示“约40mm。”

本文引用的每份文件，包括任何交叉参考或相关的专利或申请，以及本申请要求其优先权或权益的专利申请或专利，均通过参考完整地纳入本文，除非明确排除在外或以其他方式加以限制。对任何文件的引用并不是承认其为本文所公开或请求保护的任何发明的现有技术，或者其单独或与其他任何一份或多份参考文献的任何组合教导、暗示或公开任何这样的发明。此外，就本书面文本中的术语的任何含义或定义与通过参考引入的文件的同一术语的任何含义或定义相抵触时，以本书面文本中赋予该术语的含义或定义为准。

虽然已经阐述和说明了本发明的具体实施方式，但是对本领域技术人员显而易见的是，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以进行各种其他的改变和改进。因此，所附权利要求意在涵盖本发明范围内的所有这些改变和改进。