本发明涉及脱氢枞胺衍生物
技术领域：
，更具体地说，本发明涉及一种脱氢枞胺衍生物及其制备方法和应用。
背景技术：
：松香是以松树为原料加工得到的一种天然产物，资源多，价格低，用途广。其在化学化工行业发挥重要作用，主要用于制造肥皂、纸、油漆、橡胶等产品。随着科学研究的发展，脱氢枞胺及其衍生物的生物化学性质逐渐被科研工作者们发现，脱氢枞胺衍生物作为其中一个分支，极大地激起了科研人们的热情。目前的研究发现脱氢枞胺衍生物表现出广泛的生物学活性，包括抗菌，抗真菌，杀虫，除草和抗癌活性。癌症已经威胁人类健康生活很长时间，尽管现代医学对于肿瘤的治疗已经出现多种方法如化疗、放疗、手术治疗以及光动力治疗等，这些治疗方法在一定程度上具有效果的同时，也会让病人遭受难以想象的痛苦或产生过敏反应等。目前癌症的主要临床治疗手段为手术切除和化学药物治疗，其中，化学药物治疗由于其昂贵的医药费给广大癌症患者家庭带来巨大的经济负担。因此，为癌症患者们寻找高效低价的化疗药物是一项非常重要科研工作。技术实现要素：本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本发明还有一个目的是提供一种结构式为(1)、(2)、(3)的脱氢枞胺衍生物及其制备方法和应用。为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种脱氢枞胺衍生物，所述脱氢枞胺衍生物的结构式是以下结构式中的任意一种：优选地，所述的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的方法，包括以下步骤：a1：将质量份数为1.3-1.5的脱氢枞胺与质量份数为350-370的正戊醛混合并室温过夜，得到混合物1；a2：冰浴所述混合物1，并向其中加入质量份数为520-600硼氢化钠，得到混合物2；a3：将a2步骤得到的混合物2在室温下搅拌过夜后，减压蒸馏除去溶剂，得到混合物3；a4：向a3步骤得到的混合物3中加入蒸馏水，萃取并收集有机相1，将有机相1用无水硫酸钠干燥，过滤除去溶剂，通过柱色谱纯化得到结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物。优选地，步骤a4中，萃取过程的有机溶剂为采用乙酸乙酯。优选地，所述的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的方法，包括以下步骤：b1：将质量份数为1.3-1.5的脱氢枞胺与质量份数为350-370的异丁醛混合并室温过夜得到混合物4；b2：冰浴所述混合物4，并向其中加入质量份数为520-600的硼氢化钠，得到混合物5；b3：将b2步骤得到的混合物5在室温下搅拌过夜后，减压蒸馏除去溶剂得到混合物6；b4：将b3步骤得到的混合物6中加入蒸馏水后，萃取并收集有机相2，将有机相2用无水硫酸钠干燥，过滤除去溶剂后，通过柱色谱纯化得到结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物。优选地，所述的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的方法，包括以下步骤：c1：将脱氢枞胺与无水甲醇混合得到混合物7，脱氢枞胺的质量与无水甲醇的体积比为1.3-1.5g：35-45ml；c2：向经c1步骤处理的混合物7中滴加质量份数为500-580的1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛，得到混合物3，将混合物3室温静置24h；c3：除去经c2步骤处理的混合物3中的溶剂，加入去离子水后，萃取并收集有机相3，将有机相3用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，通过柱色谱分离得到结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物；其中，步骤c2及c3在氩气保护下进行。优选地，萃取过程使用的有机溶剂为二氯甲烷。优选地，所述色谱柱纯化过程中，使用的流动相为石油醚和乙酸乙酯的混合物，且二者的体积比为石油醚：乙酸乙酯＝4:1。优选地，所述色谱柱纯化过程中，使用的流动相为石油醚和乙酸乙酯的混合物，且二者的体积比为石油醚：乙酸乙酯＝10:1。优选地，所述色谱柱纯化过程中，使用的流动相为乙酸乙酯。所述的脱氢枞胺衍生物在制备抗癌药物中的应用。本发明至少包括以下有益效果：与现有技术比较，本发明的提供的脱氢枞胺衍生物，对6种常见的癌细胞均具有毒性，而且毒性较强，为抗癌药物的制备提供了新的方向。而且本发明提供的脱氢枞胺衍生物的制备方法简单、得率高，制备方法所用原料易得、价格便宜。本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本发明结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物作用于6种癌细胞的毒性测试图；图2为本发明结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物作用于6种癌细胞的毒性测试图；图3为本发明结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物作用于6种癌细胞的毒性测试图；图4为本发明所述结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱图；图5为本发明所述结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱图；图6为本发明所述结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱图；图7为本发明所述结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱图；图8为本发明所述结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱图；图9为本发明所述结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱图；图10为本发明所述结构式为(1)、(2)、(3)的脱氢枞胺作用于6种癌细胞的ic50值的汇总图。具体实施方式下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。如图1-10所示，本发明提供一种脱氢枞胺衍生物，所述脱氢枞胺衍生物的结构式是以下结构式中的任意一种：所述的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的方法，包括以下步骤：a1：将质量份数为1.3-1.5的脱氢枞胺与质量份数为350-370的正戊醛混合并室温过夜，得到混合物1；a2：冰浴所述混合物1，并向其中加入质量份数为520-600硼氢化钠，得到混合物2；a3：将a2步骤得到的混合物2在室温下搅拌过夜后，减压蒸馏除去溶剂，得到混合物3；a4：向a3步骤得到的混合物3中加入蒸馏水，萃取并收集有机相1，将有机相1用无水硫酸钠干燥，过滤除去溶剂，通过柱色谱纯化得到结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物。步骤a4中，萃取过程的有机溶剂为采用乙酸乙酯。所述的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的方法，包括以下步骤：b1：将质量份数为1.3-1.5的脱氢枞胺与质量份数为350-370的异丁醛混合并室温过夜得到混合物4；b2：冰浴所述混合物4，并向其中加入质量份数为520-600的硼氢化钠，得到混合物5；b3：将b2步骤得到的混合物5在室温下搅拌过夜后，减压蒸馏除去溶剂得到混合物6；b4：将b3步骤得到的混合物6中加入蒸馏水后，萃取并收集有机相2，将有机相2用无水硫酸钠干燥，过滤除去溶剂后，通过柱色谱纯化得到结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物。所述的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的方法，包括以下步骤：c1：将脱氢枞胺与无水甲醇混合得到混合物7，脱氢枞胺的质量与无水甲醇的体积比为1.3-1.5g：35-45ml；c2：向经c1步骤处理的混合物7中滴加质量份数为500-580的1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛，得到混合物3，将混合物3室温静置24h；c3：除去经c2步骤处理的混合物3中的溶剂，加入去离子水后，萃取并收集有机相3，将有机相3用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，通过柱色谱分离得到结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物；其中，步骤c2及c3在氩气保护下进行，脱氢枞胺与1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛的质量份数比为1.3-1.5：500-580。萃取过程使用的有机溶剂为二氯甲烷。所述色谱柱纯化过程中，使用的流动相为石油醚和乙酸乙酯的混合物，且二者的体积比为石油醚：乙酸乙酯＝4:1。所述色谱柱纯化过程中，使用的流动相为石油醚和乙酸乙酯的混合物，且二者的体积比为石油醚：乙酸乙酯＝10:1。所述色谱柱纯化过程中，使用的流动相为乙酸乙酯。所述的脱氢枞胺衍生物在制备抗癌药物中的应用。下面结合实施例对本发明进行说明，一、制备结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的方法的实施例如下：实施例1：称取1.3mg脱氢枞胺和350mg的正戊醛加入到干净的250ml圆底烧瓶中，室温反应过夜，然后在冰浴条件下缓慢加入520mg硼氢化钠，室温下继续搅拌过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入少量蒸馏水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂，通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)分离得到结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物。实施例2：称取1.425mg脱氢枞胺和321mg的正戊醛加入到干净的250ml圆底烧中，室温反应过夜，然后在冰浴条件下缓慢加入570mg硼氢化钠，室温下继续搅拌过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入少量蒸馏水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂，通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)分离得到结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物。实施例3：称取1.5mg脱氢枞胺和370mg的正戊醛加入到干净的250ml圆底烧瓶中，室温反应过夜，然后在冰浴条件下缓慢加入600mg硼氢化钠，室温下继续搅拌过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入少量蒸馏水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂，通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)分离得到结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物。其中，实施例2，制备出的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物为1.78g的无色油状化合物，产率为67％。核磁共振的结果如图4-5所示，且分析如下：1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.22(d,j＝8.1hz,1h),7.03(d,j＝8.0hz,1h),6.93(s,1h),2.99-2.81(m,3h),2.60(t,j＝7.1hz,2h),2.54(d,j＝11.7hz,1h),2.36-2.27(m,2h),1.86-1.59(m,6h),1.44(t,j＝12.2hz,5h),1.38-1.29(m,4h),1.26(d,j＝7.1hz,9h),0.95(d,j＝4.2hz,3h),0.92(d,j＝7.0hz,3h)；13cnmr(101mhz,cdcl3):δ147.61,145.39,134.85,126.78,124.34,123.78,61.89,51.12,45.49,38.53,37.44,36.93,36.25,33.47,30.39,29.90,29.61,25.41,24.04,22.69,19.32,18.86(d,j＝12.4hz),14.17。证明，本实施例制备的化合物确实为结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物。二、制备结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的方法的实施例如下：实施例4：称取1.3mg脱氢枞胺和350mg的异丁醛加入到干净的250ml圆底烧瓶中，室温反应过夜，然后在冰浴条件下缓慢加入520mg硼氢化钠，室温下继续搅拌过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入少量蒸馏水和少量二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂，通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)分离得到结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物。实施例5：称取1.425mg脱氢枞胺和361mg的异丁醛加入到干净的250ml圆底烧瓶中，室温反应过夜，然后在冰浴条件下缓慢加入570mg硼氢化钠，室温下继续搅拌过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入少量蒸馏水和少量二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂，通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)分离得到结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物。实施例6：称取1.5mg脱氢枞胺和370mg的异丁醛加入到干净的250ml圆底烧瓶中，室温反应过夜，然后在冰浴条件下缓慢加入600mg硼氢化钠，室温下继续搅拌过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，加入少量蒸馏水和少量二氯甲烷萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂，通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)分离得到结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物。实施例5，制备出的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物为1.14g的淡黄色固体，产率为67％。核磁共振的结果如图6-7所示，且分析如下：1hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.21(d,j＝8.2hz,1h),7.02(dd,j＝8.1,1.5hz,1h),6.92(s,1h),2.87(dt,j＝13.8,6.4hz,3h),2.53(d,j＝11.8hz,1h),2.40(dd,j＝6.8,2.0hz,2h),2.29(t,j＝10.5hz,2h),1.82-1.64(m,7h),1.42(t,j＝13.4hz,3h),1.26(s,3h),1.25(s,6h),0.94(s,3h),0.92(d,j＝0.9hz,3h),0.90(d,j＝0.9hz,3h)；13cnmr(101mhz,cdcl3):δ147.60,145.36,134.87,126.78,124.36,123.77,61.75,59.16,45.32,38.52,37.44,37.01,36.20,33.44,30.44,28.10,25.46,24.02,20.67(d,j＝3.3hz),19.39,18.85(d,j＝16.4hz)。证明，本实施例制备的化合物确实为结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物。三、制备结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的方法的实施例如下：实施例7：在氩气保护下，向250ml圆底烧瓶中依次加入1.3g脱氢枞胺和35ml无水甲醇，然后缓慢滴加500mg1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛，置于室温下反应24h。经柱层析色谱监测反应完全后除去溶剂，加入30ml去离子水，一次用(3×60ml)二氯甲烷萃取，静置分层后收集二氯甲烷层并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，通过柱色谱(乙酸乙酯)分离得到结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物。实施例8：在氩气保护下，向250ml圆底烧瓶中依次加入1.425g脱氢枞胺和40ml无水甲醇，然后缓慢滴加550mg1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛，置于室温下反应24h。经柱层析色谱监测反应完全后除去溶剂，加入30ml去离子水，一次用(3×60ml)二氯甲烷萃取，静置分层后收集二氯甲烷层并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，通过柱色谱(乙酸乙酯)分离得到结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物。实施例9：在氩气保护下，向250ml圆底烧瓶中依次加入1.5g脱氢枞胺和40ml无水甲醇，然后缓慢滴加580mg1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛，置于室温下反应24h。经柱层析色谱监测反应完全后除去溶剂，加入30ml去离子水，一次用(3×60ml)二氯甲烷萃取，静置分层后收集二氯甲烷层并用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，通过柱色谱(乙酸乙酯)分离得到结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物。其中，实施例8，制备出的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物为1.43g的淡黄色油状物化合物，产率为76％。核磁共振的结果如图8-9所示，且分析如下：1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.29(s,1h),7.18(d,j＝8.1hz,1h),7.08(s,1h),6.98(d,j＝8.0hz,1h),6.87(d,j＝2.8hz,2h),3.92(s,3h),3.47(d,j＝12.2hz,1h),3.36(d,j＝12.1hz,1h),2.92-2.71(m,3h),2.28(d,j＝12.7hz,1h),1.93-1.50(m,6h),1.48-1.31(m,2h),1.25-1.19(m,9h),1.03(s,3h)；13cnmr(101mhz,cdcl3):δ153.08,147.30,145.37,143.29,134.82,128.94,126.84,124.67,124.34,123.77,73.52,45.71,38.49,37.92,37.59,36.60,35.57,33.36,30.44,25.56,23.95(d,j＝3.4hz),19.51,18.76(d,j＝19.3hz)。证明，本实施例制备的化合物确实为结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物。四、本发明对6种癌细胞的毒性的检测，通过以下技术方案来证明：所述的脱氢枞胺衍生物用于治疗癌细胞时，具体操作步骤为：用完全培养基配制不同浓度的脱氢枞胺衍生物，孵育细胞24小时后，用mtt比色法检测癌细胞相对存活率。所述的癌细胞为雌激素受体阳性宫颈癌细胞hela、雌激素受体阳性乳腺癌细胞mcf-7、雌激素受体阴性乳腺癌细胞mda-mb-231、雄激素受体阳性前列腺细胞lncap、雄激素受体阴性前列腺细胞pc-3和胃癌细胞mkn45。所述的脱氢枞胺衍生物事先用分析纯dmso配置成脱氢枞胺衍生物质量浓度为20mg/ml的dmso溶液，然后用完全培养基稀释成不同梯度的低浓度溶液，最终溶液中dmso含量不超过1％。所述用于稀释化合物质量浓度为20mg/ml的dmso溶液所用的完全培养基为：对应实验癌细胞为hela细胞和mkn45细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的rpmi-1640培养基；对应实验癌细胞为mcf-7、mda-mb-231、lncap和pc-3细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的dmem培养基。所述脱氢枞胺衍生物的样品质量浓度为0-200μg/ml。所述的mtt法检测癌细胞相对存活率时所选择的吸收波长为490nm。结构式为(1)、(2)、(3)脱氢枞胺衍生物对6种癌细胞的毒性测试试验具体步骤如下,其中，每种衍生物对每种癌细胞的毒性测试实验至少三次以上，试验数据中，每种衍生物作用于每种癌细胞的存活率为平均值：(一)、结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对6种癌细胞的毒性测试试验：1、结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物储备液配制称取20mg结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物溶于1mldmso溶剂，配制成含结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物为20mg/ml的dmso溶液。2、mtt预实验用完全培养基将上述(1)中结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物储备液稀释成质量浓度依次为0、5、10、20、50、100、200μg/ml的溶液(其中，当实验细胞为hela细胞和mkn45细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的rpmi-1640培养基；对应实验癌细胞为mcf-7、mda-mb-231、lncap和pc-3细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的dmem培养基)，细胞贴壁后弃去旧培养基，换用所配溶液继续孵育24h，加入mtt后用酶标仪检测490nm处的吸光度，计算相对细胞存活率，得到结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对实验所用6种癌细胞的作用范围。3、ic50值检测根据上述步骤(2)所得结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物作用于不同癌细胞的杀伤率靠近50％的浓度重新配置含不同浓度结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的完全培养基溶液。其中作用于hela细胞结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、12、14、16、18、20、22μg/ml；作用于mkn45细胞的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、10、20、30、40μg/ml；作用于mcf-7细胞结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、15、20、22、25μg/ml；作用于mda-mb-231细胞结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、15、18、20、22、25、28、30μg/ml；作用于lncap细胞的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、15、20、22、25、28、30μg/ml；作用于pc-3细胞的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、20、22、25、28、30μg/ml。细胞贴壁后弃去旧培养基，换用所配溶液继续孵育24h，加入mtt后用酶标仪检测490nm处的吸光度，计算相对细胞存活率，并计算ic50值。结果如图1所示，结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物作用6种癌细胞的ic50值范围为20～40μg/ml。其中，作用于hela细胞的ic50值为20.8μg/ml，作用于mkn45细胞的ic50值为37.3μg/ml，作用于mcf-7细胞的ic50值为23.1μg/ml，作用于mda-mb-231细胞的ic50值为26.9μg/ml，作用于lncap细胞的ic50值为31.5μg/ml，作用于pc-3细胞的ic50值为25.1μg/ml。具体的试验数据如下表所示：表1为不同浓度的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对mcf-7细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)mcf-7细胞存活率0100596.09111095.974581590.929562083.726172257.936092525.83686表2为不同浓度的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对mda-mb-231细胞的毒性的统计表表3为不同浓度的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对hela细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)hela细胞存活率0100587.083061080.595261273.99961467.678321662.593651858.077852051.785062243.37659表4为不同浓度的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对mkn45细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)mkn45细胞存活率01001099.627392090.508953072.880944040.03701表5为不同浓度的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对pc-3细胞的毒性的统计表表6为不同浓度的结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物对lncap细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)lncap细胞存活率0100593.798761086.906291583.467962078.325272274.375432570.042462860.412763051.43873(二)、结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对6种癌细胞的毒性测试试验：1、结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物储备液配制称取20mg结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物溶于1mldmso溶剂，配制成含结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物为20mg/ml的dmso溶液。2、mtt预实验用完全培养基将上述(1)中结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物储备液稀释成质量浓度依次为0、5、10、20、50、100、200μg/ml的溶液(其中，当实验细胞为hela细胞和mkn45细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的rpmi-1640培养基；对应实验癌细胞为mcf-7、mda-mb-231、lncap和pc-3细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的dmem培养基)，细胞贴壁后弃去旧培养基，换用所配溶液继续孵育24h，加入mtt后用酶标仪检测490nm处的吸光度，计算相对细胞存活率，得到结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对实验所用6种癌细胞的杀伤率靠近50％的浓度。3、ic50值检测根据上述步骤(2)所得结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物作用于不同癌细胞的杀伤率靠近50％的浓度重新配置含不同浓度结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的完全培养基溶液。其中作用于hela细胞结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、15、18、20、22、25、28、30μg/ml；作用于mkn45细胞的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、20、25、30、35、40、45μg/ml；作用于mcf-7细胞结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、15、18、20、22、25、28μg/ml；作用于mda-mb-231细胞结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、15、18、20、22、25、28、30μg/ml；作用于lncap细胞的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、10、20、25、30、32、35、38μg/ml；作用于pc-3细胞的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、10、20、25、30、32、35、38、40μg/ml。细胞贴壁后弃去旧培养基，换用所配溶液继续孵育24h，加入mtt后用酶标仪检测490nm处的吸光度，计算相对细胞存活率，并计算ic50值。结果如图2所示，结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物作用6种癌细胞的ic50值范围为20～40μg/ml。其中，作用于hela细胞的ic50值为23.9μg/ml，作用于mkn45细胞的ic50值为33.6μg/ml，作用于mcf-7细胞的ic50值为22.1μg/ml，作用于mda-mb-231细胞的ic50值为29.1μg/ml，作用于lncap细胞的ic50值为26.5μg/ml，作用于pc-3细胞的ic50值为32.7μg/ml。具体的试验数据如下表所示：表7为不同浓度的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对mcf-7细胞的毒性的统计表表8为不同浓度的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对mda-mb-231细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)mda-mb-231细胞存活率0100596.930761093.584941590.35511887.84442085.849392280.716162568.215562855.381873046.1694表9为不同浓度的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对hela细胞的毒性的统计表表10为不同浓度的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对mkn45细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)mkn45细胞存活率0100598.671841093.349792089.980022583.561353072.425953534.6854011.09838451.07898表11为不同浓度的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对pc-3细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)pc-3细胞存活率01001099.100792099.372652582.183193063.603093254.391473538.090763829.015064020.40987表12为不同浓度的结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物对lncap细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)lncap细胞存活率01001095.150852083.053982559.131893039.382733221.19986357.109382.41013(三)、结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对6种癌细胞的毒性测试试验：1、结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物储备液配制称取20mg结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物溶于1mldmso溶剂，配制成含结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物为20mg/ml的dmso溶液。2、mtt预实验用完全培养基将上述(1)中结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物储备液稀释成质量浓度依次为0、5、10、20、50、100、200μg/ml的溶液(其中，当实验细胞为hela细胞和mkn45细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的rpmi-1640培养基；对应实验癌细胞为mcf-7、mda-mb-231、lncap和pc-3细胞时所用完全培养基为含10％胎牛血清，1％青霉素与链霉素的dmem培养基)，细胞贴壁后弃去旧培养基，换用所配溶液继续孵育24h，加入mtt后用酶标仪检测490nm处的吸光度，计算相对细胞存活率，得到结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对实验所用6种癌细胞的杀伤率靠近50％的浓度。3、ic50值检测根据上述步骤(2)所得结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物作用于不同癌细胞的杀伤率靠近50％的浓度重新配置含不同浓度结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的完全培养基溶液。其中作用于hela细胞结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、2、3、4、5、6、7、8μg/ml；作用于mkn45细胞的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、5、10、12、14、16、18μg/ml；作用于mcf-7细胞结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、2、4、6、7、8μg/ml；作用于mda-mb-231细胞结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、2、4、6、7、8、9、10、11、12μg/ml；作用于lncap细胞的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、2、3、4、5、6、7μg/ml；作用于pc-3细胞的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物的浓度为0、2、4、6、7、8、9、10、11μg/ml。细胞贴壁后弃去旧培养基，换用所配溶液继续孵育24h，加入mtt后用酶标仪检测490nm处的吸光度，计算相对细胞存活率，并计算ic50值。结果如图3所示，结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物作用于不同种类癌细胞，对6种癌细胞都具有较好的杀伤效果，除mkn45细胞外，作用于其他细胞的ic50值都低于10μg/ml。其中，作用于hela细胞的ic50值为5.2μg/ml，作用于mkn45细胞的ic50值为13.9μg/ml，作用于mcf-7细胞的ic50值为6.3μg/ml，作用于mda-mb-231细胞的ic50值为8.3μg/ml，作用于lncap细胞的ic50值为5.4μg/ml，作用于pc-3细胞的ic50值为8.1μg/ml。表13为不同浓度的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对mcf-7细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)mcf-7细胞存活率0100295.7324487.03979661.04066724.77919816.47573表14为不同浓度的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对mda-mb-231细胞的毒性的统计表表15为不同浓度的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对hela细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)hela细胞存活率0100294.94533396.07564480.91692546.96562636.15909717.7996182.25004表16为不同浓度的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对mkn45细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)mkn45细胞存活率0100595.617641082.626651268.876471451.742321623.62503185.43985表17为不同浓度的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对pc-3细胞的毒性的统计表表18为不同浓度的结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物对lncap细胞的毒性的统计表浓度(ug/ml)lncap细胞存活率0100293.77132385.81662480.94556558.09114633.0126978.42202结构式为(1)、(2)、(3)的脱氢枞胺衍生物作用于6种癌细胞的ic50值如图10所示，代表结构式为(1)的脱氢枞胺衍生物，代表结构式为(2)的脱氢枞胺衍生物，代表结构式为(3)的脱氢枞胺衍生物。由图可知，结构式为(1)、(2)、(3)的脱氢枞胺衍生物作用于6种癌细胞的ic50值均不高，说明结构式为(1)、(2)、(3)的脱氢枞胺衍生物对6种癌细胞的杀伤能力强。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。当前第1页12