T细胞调节性多聚体多肽及其使用方法与流程
本申请要求2016年3月2日提交的美国临时专利申请号62/302,654的权益，所述临时专利申请以引用的方式整体并入本文。
引言
适应性免疫应答涉及存在于t细胞表面上的t细胞受体(tcr)与抗原呈递细胞(apc)表面上非共价呈递的小肽抗原通过主要组织相容性复合物(mhc；在人类中也称为人白细胞抗原(hla)复合物)接合。这种接合代表了免疫系统靶向机制，并且是t细胞调节(活化或抑制)和效应子功能的必需分子相互作用。在表位特异性细胞靶向后，通过apc上发现的共刺激蛋白与t细胞的对应物共刺激蛋白的接合而活化靶向的t细胞。两种信号–表位/tcr结合和apc共刺激蛋白与t细胞共刺激蛋白的接合–均是驱动t细胞特异性和活化或抑制所必需的。tcr对给定表位具有特异性；然而，共刺激蛋白不是表位特异性的，而是通常在所有t细胞或大t细胞亚群上表达。
技术实现要素：
本公开提供了变体免疫调节多肽，以及包含所述变体免疫调节肽的融合多肽。本公开提供了t细胞调节性多聚体多肽，以及包含所述t细胞调节性多聚体多肽的组合物，其中所述t细胞调节性多聚体多肽包含本公开的变体免疫调节多肽。本公开提供了包含编码所述t细胞调节性多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，以及包含所述核酸的宿主细胞。本公开提供了调节t细胞的活性的方法；所述方法包括使所述t细胞与本公开的t细胞调节性多聚体多肽接触。
本公开提供了一种变体cd80免疫调节多肽，所述变体cd80免疫调节多肽包含与图2a中描绘的cd80氨基酸序列或与seqidno:1中列出的cd80氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中所述变体cd80免疫调节多肽相对于图2a中描绘的cd80氨基酸序列或seqidno:1中列出的cd80氨基酸序列具有一个或多个氨基酸取代；并且其中所述变体cd80免疫调节多肽对具有图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd86多肽表现出的结合亲和力与图2a中描绘的cd80氨基酸序列对所述cd86多肽的结合亲和力相比或与seqidno:1中列出的cd80氨基酸序列对所述cd86多肽的结合亲和力相比降低。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代n19、n63、i67、k86、q157、d158、l25、y31、q33、m38、v39、i49、y53、d60、f108或s156。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代n19。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代i67。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代k86。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代q157。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代d158。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代l25。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代y31。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代q33。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代m38。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代v39。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代i49。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代y53。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代d60。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代f108。在一些情况下，所述多肽包含氨基酸取代s156。在一些情况下，所述变体免疫调节多肽表现出由图2a中描绘或如seqidno:1中列出的cd80氨基酸序列对所述cd86多肽表现出的结合亲和力的小于10％至小于50％。
本公开提供了一种多聚体多肽，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)第一主要组织相容性复合物(mhc)多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)任选的免疫球蛋白(ig)fc多肽或非ig支架，其中所述多聚体多肽包含一个或多个免疫调节结构域，其中所述一个或多个免疫调节结构域：a)在所述第一多肽的c-末端；b)在所述第二多肽的n-末端；c)在所述第二多肽的c-末端；或d)在所述第一多肽的c-末端且在所述第二多肽的n-末端，其中所述免疫调节结构域是如上文或本文其他地方所描述的变体免疫调节多肽；并且其中所述多聚体多肽对具有图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽表现出的结合亲和力与包含含有图2a中描绘的cd80氨基酸序列的免疫调节结构域的对照多聚体多肽对所述cd28多肽的结合亲和力相比或与包含含有seqidno:1中列出的cd80氨基酸序列的免疫调节结构域的对照多聚体多肽对所述cd28多肽的结合亲和力相比降低。在一些情况下，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)第一mhc多肽；和iii)免疫调节结构域；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)igfc多肽。在一些情况下，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)免疫调节结构域；iii)第二mhc多肽；和iv)免疫球蛋白(ig)fc多肽。在一些情况下，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)igfc多肽；以及iii)免疫调节结构域。在一些情况下，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)免疫调节结构域。在一些情况下，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)免疫调节结构域；和ii)第二mhc多肽。在一些情况下，所述多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)第一mhc多肽；和iii)免疫调节结构域；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽。在一些情况下，所述非ig支架是xten多肽、转铁蛋白多肽、弹性蛋白样多肽、丝状多肽或丝-弹性蛋白样多肽。在一些情况下，所述第一mhc多肽是β2-微球蛋白多肽；并且其中所述第二mhc多肽是mhci类重链多肽。在一些情况下，所述β2-微球蛋白多肽包含与图6中列出的氨基酸序列之一具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述mhci类重链多肽是hla-a、hla-b或hla-c重链。在一些情况下，所述mhci类重链多肽包含与图5a-5c之一中列出的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhcii类α链多肽；并且其中所述第二mhc多肽是mhcii类β链多肽。在一些情况下，所述表位是t细胞表位。在一些情况下，所述多聚体多肽包含fc多肽，并且其中所述igfc多肽是igg1fc多肽、igg2fc多肽、igg3fc多肽、igg4fc多肽、igafc多肽或igmfc多肽。在一些情况下，所述igfc多肽包含与图4a-4c中描绘的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述第一多肽和所述第二多肽是非共价缔合的。在一些情况下，所述第一多肽和所述第二多肽是共价连接的。在一些情况下，共价键联是经由二硫键。在一些情况下，所述第一mhc多肽或所述表位与所述第一mhc多肽之间的接头包含氨基酸取代以提供第一cys残基，并且所述第二mhc多肽包含氨基酸取代以提供第二cys残基，并且其中所述二硫键联位于所述第一cys残基与所述第二cys残基之间。在一些情况下，所述多聚体多肽包含插入在所述表位与所述第一mhc多肽之间的第一接头。在一些情况下，所述变体cd80免疫调节多肽包含氨基酸取代n19、n63、i67、k86、q157、d158、l25、y31、q33、m38、v39、i49、y53、d60、f108或s156。在一些情况下，所述多聚体多肽包含2种或更多种免疫调节多肽。在一些情况下，所述多聚体多肽包含3种免疫调节多肽。在一些情况下，所述2种或更多种(例如3种)免疫调节多肽处于串联形式。在一些情况下，所述多聚体多肽包含第三多肽，其中所述第三多肽包含免疫调节多肽，所述免疫调节多肽包含与所述第一多肽或所述第二多肽的免疫调节多肽具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述第三多肽与所述第一多肽共价连接。在一些情况下，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)所述第二mhc多肽；ii)所述igfc多肽；以及iii)亲和标签。
本公开提供了一种核酸，所述核酸包含编码重组多肽的核苷酸序列，i)其中所述重组多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位；b)第一主要组织相容性复合物(mhc)多肽；c)免疫调节多肽；d)蛋白水解可裂解的接头或核糖体跳过信号；e)第二mhc多肽；以及f)免疫球蛋白(ig)fc多肽；其中所述免疫调节多肽是如上文或本文其他地方所描述的变体免疫调节多肽；或ii)其中所述重组多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位；b)第一mhc多肽；c)蛋白水解可裂解的接头或核糖体跳过信号；d)免疫调节多肽；e)第二mhc多肽；以及f)igfc多肽，其中所述免疫调节多肽是如上文或本文其他地方所描述的变体免疫调节多肽。在一些情况下，所述第一mhc多肽是β2-微球蛋白多肽；并且其中所述第二mhc多肽是mhci类重链多肽。在一些情况下，所述β2-微球蛋白多肽包含与图6中列出的氨基酸序列之一具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述mhci类重链多肽是hla-a、hla-b或hla-c重链。在一些情况下，所述mhci类重链多肽包含与图5a-5c之任一个中列出的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhcii类α链多肽；并且其中所述第二mhc多肽是mhcii类β链多肽。在一些情况下，所述表位是t细胞表位。在一些情况下，所述igfc多肽是igg1fc多肽、igg2fc多肽、igg3fc多肽、igg4fc多肽、igafc多肽或igmfc多肽。在一些情况下，所述igfc多肽包含与图4a-4c中描绘的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80免疫调节多肽包含氨基酸取代n19、n63、i67、k86、q157、d158、l25、y31、q33、m38、v39、i49、y53、d60、f108或s156。在一些情况下，所述多聚体多肽包含选自cd7、cd30l、cd40、cd70、cd83、hla-g、mica、micb、hvem、淋巴毒素β受体、3/tr6、ilt3、ilt4以及hvem的第二免疫调节多肽。在一些情况下，所述蛋白水解可裂解的接头或核糖体跳过信号包含选自以下的氨基酸序列：a)levlfqgp(seqidno:78)；b)enlytqs(seqidno:79)；c)弗林蛋白裂解位点；d)lvpr(seqidno:80)；e)gsgatnfsllkqagdveenpgp(seqidno:81)；f)gsgegrgslltcgdveenpgp(seqidno:82)；g)gsgqctnyallklagdvesnpgp(seqidno:83)；以及h)gsgvkqtlnfdllklagdvesnpgp(seqidno:84)。在一些情况下，所述重组多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)第一前导肽；b)所述表位；c)所述第一mhc多肽；d)所述免疫调节多肽；e)所述蛋白水解可裂解的接头或核糖体跳过信号；f)第二前导肽；g)所述第二mhc多肽；以及h)所述免疫球蛋白(ig)fc多肽。在一些情况下，所述第一前导肽和所述第二前导肽是β2-m前导肽。在一些情况下，所述核苷酸序列与转录控制元件可操作地连接。在一些情况下，所述转录控制元件是在真核细胞中有功能的启动子。在一些情况下，所述第一mhc多肽或所述表位与所述第一mhc多肽之间的接头包含氨基酸取代以提供第一cys残基，并且所述第二mhc多肽包含氨基酸取代以提供第二cys残基，并且其中所述第一和第二cys残基提供在所述第一mhc多肽与所述第二mhc多肽之间的二硫键联。本公开提供了一种重组表达载体，其包含如上文或本文其他地方所描述的核酸。在一些情况下，所述载体是病毒载体或非病毒载体。本公开提供了一种用如上文或本文其他地方所描述的重组表达载体遗传修饰的宿主细胞。在一些情况下，所述宿主细胞是在体外。在一些情况下，对所述宿主细胞进行遗传修饰以使得所述细胞不产生内源性mhcβ2-微球蛋白多肽。在一些情况下，所述宿主细胞是t淋巴细胞。
本公开提供了一种组合物，其包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含编码第一多肽的核苷酸序列，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)第一mhc多肽；iii)免疫调节结构域，其中所述免疫调节结构域是如上文或本文其他地方所描述的变体免疫调节多肽；b)第一核酸，所述第一核酸包含编码第二多肽的核苷酸序列，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)igfc多肽。在一些情况下，所述第一和/或第二核酸存在于重组表达载体中。本公开提供了一种组合物，其包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含编码第一多肽的核苷酸序列，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第一核酸，所述第一核酸包含编码第二多肽的核苷酸序列，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)免疫调节结构域，其中所述免疫调节结构域是如上文或本文其他地方所描述的变体免疫调节多肽；ii)第二mhc多肽；和iii)igfc多肽。在一些情况下，所述第一和/或第二核酸存在于重组表达载体中。本公开提供了一种用如上文或本文其他地方所描述的核酸组合物遗传修饰的宿主细胞。
本公开提供了一种产生如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽的方法，所述方法包括：a)在使得遗传修饰的宿主细胞合成所述多聚体多肽的条件下在培养基中在体外培养如上文或本文其他地方所描述的所述宿主细胞；以及b)从所述宿主细胞和/或所述培养基中分离所述多聚体多肽。在一些情况下，所述第二多肽包含亲和标签，并且其中所述分离包括使由所述细胞产生的多聚体多肽与所述亲和标签的结合配偶体接触，其中所述结合配偶体被固定，从而固定所述多聚体多肽。在一些情况下，所述方法包括洗脱所述固定的多聚体多肽。
本公开提供了一种选择性地调节表位特异性t细胞的活性的方法，所述方法包括使所述t细胞与如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽多肽接触，其中所述接触选择性地调节所述表位特异性t细胞的活性。在一些情况下，所述免疫调节多肽是活化多肽，并且其中所述多聚体多肽活化所述表位特异性t细胞。在一些情况下，所述免疫调节多肽是抑制性多肽，并且其中所述多聚体多肽抑制所述表位特异性t细胞。在一些情况下，所述接触是在体外进行。在一些情况下，所述接触是在体内进行。
本公开提供了一种选择性地调节个体中的表位特异性t细胞的活性的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽，所述多聚体多肽可有效选择性地调节个体中的表位特异性t细胞的活性。在一些情况下，所述免疫调节多肽是活化多肽，并且其中所述多聚体多肽活化所述表位特异性t细胞。在一些情况下，所述表位是癌症相关表位，并且其中所述施用选择性地增加对所述癌症相关表位具有特异性的t细胞的活性。在一些情况下，所述免疫调节多肽是抑制性多肽，并且其中所述多聚体多肽抑制所述表位特异性t细胞的活性。在一些情况下，所述表位是自身表位，并且其中所述施用选择性地抑制对所述自身表位具有特异性的t细胞的活性。
本公开提供了一种治疗个体中的感染的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的a)如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽；或b)一种或多种重组表达载体，所述重组表达载体包含编码如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽的核苷酸序列；或c)一种或多种mrna，所述mrna包含编码如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽的核苷酸序列，其中所述表位是病原体相关表位，其中所述免疫调节多肽是活化多肽，并且其中所述施用可有效选择性地调节个体中的病原体相关表位特异性t细胞的活性。在一些情况下，所述病原体是病毒、细菌或原生动物。在一些情况下，所述施用是皮下施用。在一些情况下，所述施用是静脉内施用。在一些情况下，所述施用是肌内施用。在一些情况下，所述施用是全身性施用。在一些情况下，所述施用是在治疗部位的远端。在一些情况下，所述施用是局部的。在一些情况下，所述施用是在治疗部位处或附近。
本公开提供了一种组合物，其包含：a)如上文或本文其他地方所描述的多聚体多肽；以及b)药学上可接受的赋形剂。
本公开提供了一种组合物，其包含：a)如上文或本文其他地方所描述的核酸，或如上文或本文其他地方所描述的重组表达载体；以及b)药学上可接受的赋形剂。
附图说明
图1a-1d示意性地描绘本公开的t细胞调节性多聚体多肽的各种实施方案。在这些实施方案中，二硫键在单独的多肽中存在的mhc(例如，hla)多肽之间形成。
图2a-2ii提供cd80(图2a)的氨基酸序列和变体cd80多肽的实例(图2b-2ii)。
图3a-3d提供cd28(图3a-3c)和ctla4(图3d)的氨基酸序列。
图4a-4c提供免疫球蛋白fc多肽的氨基酸序列。
图5a-5c提供人白细胞抗原(hla)i类重链多肽的氨基酸序列。信号序列加下划线。
图6提供来自智人(np_004039.1；seqidno:52)、黑猩猩(np_001009066.1；seqidno:53)、猕猴(np_001040602.1；seqidno:54)、黄牛(np_776318.1；seqidno:55)以及小家鼠(np_033865.2；seqidno:56)的β-2微球蛋白(β2m)前体(即，包括前导序列)的多重氨基酸序列比对。氨基酸1-20是信号肽。
图7a-7b提供pd-l1多肽的氨基酸序列。
图8提供4-1bbl多肽的氨基酸序列。
图9提供icos-l多肽的氨基酸序列。
图10提供ox40l多肽的氨基酸序列。
图11提供pd-l2多肽的氨基酸序列。
图12提供cd86(b7-2)多肽的氨基酸序列。
图13提供fas配体(fas-l)多肽的氨基酸序列。
图14描绘根据本公开的一个实施方案，由与syntac多肽接触的靶细胞进行的干扰素-γ(ifn-γ)分泌。
图15描绘根据本公开的一个实施方案，由与syntac多肽接触的靶细胞进行的白细胞介素-2(il-2)分泌。
图16描绘根据本公开的一个实施方案，由与syntac多肽接触的靶细胞进行的白细胞介素-6(il-6)分泌。
图17描绘根据本公开的一个实施方案，由与syntac多肽接触的靶细胞进行的肿瘤坏死因子(tnf)分泌。
图18描绘根据本公开的一个实施方案，与syntac多肽接触的靶细胞的增殖。
图19描绘根据本公开的一个实施方案，与syntac多肽接触的靶细胞的存活力。
图20描绘本公开的syntac多肽对肿瘤体积的体内作用。
定义
本文可互换使用的术语“多核苷酸”和“核酸”是指任何长度的核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)的聚合形式。因此，此术语包括但不限于单链、双链或多链dna或rna、基因组dna、cdna、dna-rna杂交体、或包含嘌呤碱基和嘧啶碱基或其他天然的、化学或生物化学修饰的、非天然的或衍生的核苷酸碱基的聚合物。
术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用并且是指任何长度的氨基酸的聚合形式，其可包括编码和非编码氨基酸、化学或生物化学修饰的或衍生的氨基酸以及具有修饰的肽骨架的多肽。
多核苷酸或多肽与另一多核苷酸或多肽具有一定的“序列同一性”百分比，这意味着当比对时碱基或氨基酸的百分数为相同的，并且当比较两个序列时在相同的相对位置上。可以许多不同的方式来确定序列同一性。为了确定序列同一性，可使用在包括ncbi.nlm.nili.gov/blast、ebi.ac.uk/tools/msa/tcoffee/、ebi.ac.uk/tools/msa/muscle/、mafft.cbrc.jp/alignment/software/的万维网网址上可获得的各种方便的方法和计算机程序(例如，blast、t-coffee、muscle、mafft等)来比对序列。参见，例如altschul等人(1990),j.mol.bioi.215:403-10。
术语“保守氨基酸取代”是指具有类似侧链的氨基酸残基的蛋白质中的可互换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸由甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸组成；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸由丝氨酸和苏氨酸组成；具有含酰胺侧链的一组氨基酸由天冬酰胺和谷氨酰胺组成；具有芳香族侧链的一组氨基酸由苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸组成；具有碱性侧链的一组氨基酸由赖氨酸、精氨酸和组氨酸组成；具有酸性侧链的一组氨基酸由谷氨酸酯和天冬氨酸酯组成；并且具有含硫侧链的一组氨基酸由半胱氨酸和甲硫氨酸组成。示例性保守氨基酸取代基团是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸-甘氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。
如本文所用的“结合”(例如参考本公开的t细胞调节性多聚体多肽与t细胞上的多肽(例如，t细胞受体)的结合)是指之间的非共价相互作用。结合相互作用通常特征在于解离常数(kd)小于10-6m、小于10-7m、小于10-8m、小于10-9m、小于10-10m、小于10-11m、小于10-12m、小于10-13m、小于10-14m或小于10-15m。“亲和力”是指结合的强度，增加的结合亲和力与较低的kd相关。
如本文所用的术语“免疫突触”或“免疫突触”通常是指适应性免疫应答的两种相互作用免疫细胞之间的天然界面，包括例如抗原呈递细胞(apc)或靶细胞与效应细胞，例如淋巴细胞、效应t细胞、天然杀伤细胞等之间的界面。apc与t细胞之间的免疫突触通常由t细胞抗原受体与主要组织相容性复合物分子的相互作用引发，例如，如bromley等人,annurevimmunol.2001；19:375-96中所描述；所述参考文献的公开内容以引用的方式整体并入本文。
“t细胞”包括所有类型的表达cd3的免疫细胞，包括t-辅助细胞(cd4+细胞)、细胞毒性t-细胞(cd8+细胞)、t-调控细胞(treg)以及nk-t细胞。
“共刺激多肽”(如所述术语在本文中使用)包括特异性结合t细胞上的同源共刺激多肽的抗原呈递细胞(apc)(例如，树突细胞、b细胞等)上的多肽，从而提供除了由例如tcr/cd3复合物与负载有肽的主要组织相容性复合物(mhc)多肽的结合提供的主要信号之外的信号，所述信号介导t细胞应答，包括但不限于增殖、活化、分化等。共刺激配体可包括但不限于cd7、b7-1(cd80)、b7-2(cd86)、pd-l1、pd-l2、4-1bbl、ox40l、fas配体(fasl)、诱导型共刺激配体(icos-l)、细胞间粘附分子(icam)、cd30l、cd40、cd70、cd83、hla-g、mica、micb、hvem、淋巴毒素β受体、3/tr6、ilt3、ilt4、hvem、结合toll配体受体的激动剂或抗体以及与b7-h3特异性结合的配体。共刺激配体还尤其包括与t细胞上存在的共刺激分子特异性结合的抗体，如但不限于cd27、cd28、4-1bb、ox40、cd30、cd40、pd-1、icos、淋巴细胞功能相关抗原-1(lfa-1)、cd2、light、nkg2c、b7-h3以及特异性结合cd83的配体。
本公开的t细胞调节性多聚体多肽的“调节结构域”包含共刺激多肽。
如本文所用的“异源的”是指分别不存在于天然核酸或蛋白质中的核苷酸或多肽。
如本文所使用的“重组”意指具体核酸(dna或rna)为克隆、限制、聚合酶链反应(pcr)和/或连接步骤的各种组合的产物，所述步骤产生具有可与天然系统中发现的内源核酸区别开的结构编码或非编码序列的构建体。编码多肽的dna序列可由cdna片段或由一系列合成寡核苷酸组装以提供能够由包含在细胞中或无细胞转录和翻译系统中的重组转录单元表达的合成核酸。
术语“重组表达载体”或“dna构建体”在本文中可互换用于指包含载体和一种插入物的dna分子。通常出于表达和/或繁殖插入物的目的或出于构建其他重组核苷酸序列而产生重组表达载体。插入物可以或可以不可操作地连接至启动子序列并且可以或可以不可操作地连接至dna调节序列。
当此类dna引入到细胞内部时，细胞被外源dna例如重组表达载体“遗传修饰”或“转化”或“转染”。外源dna的存在导致永久或瞬时的遗传变化。转化dna可以或可以不整合(共价连接)到细胞基因组中。在例如原核生物、酵母和哺乳动物细胞中，转化dna可维持在游离元件如质粒上。相对于真核细胞，稳定转化的细胞为其中转化dna逐渐整合到染色体中以使得通过染色体复制遗传给子细胞的一种细胞。
如本文所用的“宿主细胞”指代体内或体外真核细胞或作为单细胞实体培养的来自多细胞生物的细胞(例如，细胞系)，所述真核细胞可用作或已用作核酸的受体(例如，包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列的表达载体)，并且包括已经通过核酸遗传修饰的原始细胞的子代。应该理解由于天然、偶然或有意突变，单细胞的子代可不必在形态或在基因组或总dna互补序列上与原始亲本完全相同。“重组宿主细胞”(又称为“遗传修饰的宿主细胞”)是已将异源核酸例如表达载体引入到其中的宿主细胞。例如，遗传修饰的真核宿主细胞通过将异源核酸(例如，对真核宿主细胞来说外来的外源性核酸，或通常不存在于真核宿主细胞中的重组核酸)引入到合适的真核宿主细胞中而进行遗传修饰。
本文使用术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等一般意指获得希望的药理作用和/或生理作用。作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可为预防性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于疾病的副作用而言可为治疗性的。如本文所使用的“治疗”涵盖哺乳动物体内疾病或症状的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病或症状在可易于获得疾病或症状但尚未诊断为患有所述疾病或症状的受试者体内发生；(b)抑制疾病或症状，即阻止其发展；或(c)减轻疾病，即引起疾病消退。可在疾病或损伤发作之前、期间或之后施用治疗剂。对其中治疗使患者的不希望临床症状稳定或减少的正在进行的疾病的治疗为特别感兴趣的。此种治疗希望在受影响组织功能完全失去之前进行。本发明疗法将希望在疾病的症状阶段过程中施用，并且在一些情况下在疾病的症状阶段之后施用。
术语“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”在本文中可互换使用并且是指希望诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者。哺乳动物包括例如人、非人灵长类动物、啮齿类动物(例如，大鼠；小鼠)、兔类动物(例如兔)、有蹄类动物(例如，牛、绵羊、猪、马、山羊等)等。
在进一步描述本发明之前，应当理解本发明不限于所描述的特定实施方案，因而，当然也可有所变化。还应理解，本文使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，且并不意图是限制性的，因为本发明的范围将仅受所附权利要求限制。
在提供值的范围的情况下，应理解本发明内涵盖所述范围的上限与下限之间的各介入值，准确到下限的单位的十分之一(除非上下文另外清楚指示)，以及所述陈述范围内的任何其他陈述值或介入值。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在所陈述的较小范围内，并且也包括在本发明内，服从所陈述范围中任何特别排除的限值。在所陈述的范围包括一个或两个限制时，排除了那些被包括的限制的任一个或两者的范围也被包括在本发明之内。
除非另外定义，本文使用的所有技术性和科学性术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。虽然在实践或检测本发明时也可使用与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料，但是现在描述优选的方法和材料。为了公开和描述公布在引用时所涉及的方法和/或材料，本文中提到的所有公布均以引用的方式并入本文。
必须指出，如本文和在所附权利要求书中所使用，单数形式“一个(a)/一种(an)”和“所述(the)”包括复数对象，除非上下文另外清楚地指出。因此，例如，提及“调节结构域”包括多个此类调节结构域并且提及“hla多肽”包括提及一种或多种hla多肽及其本领域技术人员已知的等效物，等等。进一步指出，权利要求书可经拟订以排除任何任选的要素。因此，这样的陈述旨在用作使用与权利要求要素的叙述有关的排他性术语如“单独”、“仅”等或使用“否定型”限定的前提基础。
应理解，出于清晰目的而在分开的实施方案的上下文中所描述的本发明的某些特征也可在单个实施方案中组合提供。相反，为简洁起见而在单个实施方案的背景下描述的本发明的不同特征也可单独地或以任何适合的子组合形式提供。属于本发明的实施方案的所有组合确切地涵盖在本发明中并且在本文中公开如同每个和每一种组合均单独地和明确地公开一样。另外，各种实施方案及其要素的所有子组合也确切地涵盖在本发明中并且在本文中公开如同每个和每一种这样的子组合均单独地和明确地在本文中公开一样。
本文中讨论的公布仅仅提供它们在本申请的提交日期之前的公开内容。本文没有任何内容被解释为承认本发明不能由于现有发明而有权先于此种公布。此外，所提供的公布日期可不同于可能需要独立确认的实际公布日期。
具体实施方式
本公开提供了变体免疫调节多肽，以及包含所述变体免疫调节肽的融合多肽。本公开提供了t细胞调节性多聚体多肽，以及包含所述t细胞调节性多聚体多肽的组合物，其中所述t细胞调节性多聚体多肽包含本公开的变体免疫调节多肽。本公开提供了包含编码所述t细胞调节性多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，以及包含所述核酸的宿主细胞。本公开提供了调节t细胞的活性的方法；所述方法包括使所述t细胞与本公开的t细胞调节性多聚体多肽接触。
本公开的t细胞调节性多聚体多肽也称为“syntac多肽”。本公开的syntac多肽包含变体调节结构域，其中所述变体调节结构域对免疫调节多肽表现出的结合亲和力与野生型调节结构域对所述免疫调节多肽的亲和力相比降低。本公开的syntac多肽可调节靶t细胞的活性。本公开的syntac多肽提供增强的靶细胞特异性。
变体免疫调节多肽
本公开提供了变体cd80调节多肽。人cd80的野生型氨基酸序列提供于图2a中。人cd80的胞外结构域包含图2a中描绘的氨基酸序列的氨基酸1-208。因此，人cd80的胞外结构域的野生型氨基酸序列可如下：
vihvtkevkevatlscghnvsveelaqtriywqkekkmvltmmsgdmniwpeyknrtifditnnlsivilalrpsdegtyecvvlkyekdafkrehlaevtlsvkadfptpsisdfeiptsnirriicstsggfpephlswlengeelnainttvsqdpetelyavsskldfnmttnhsfmclikyghlrvnqtfnwnttkqehfpdn(seqidno:1)。
野生型cd80结合至cd28和ctla4。cd28的氨基酸序列在图3a-3c中提供。ctla4的氨基酸序列在图3d中提供。与野生型cd80与cd28或ctla4的结合相比，本公开的变体cd80多肽结合至cd80和/或ctla4的亲和力降低。
在一些情况下，与包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28的结合亲和力相比，本公开的变体cd80多肽对cd28表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力小于包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力比包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
在一些情况下，与包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28的结合亲和力相比，本公开的变体cd80多肽对cd28表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力小于包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力比包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽对cd28具有100nm至100μm的结合亲和力。作为另一个实例，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，与包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽的结合亲和力相比，本公开的变体cd80多肽对ctla4表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽结合ctla4的结合亲和力小于包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对包含图3d中描绘的氨基酸序列的ctla4多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽结合ctla4的结合亲和力比包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对ctla4(例如，包含图3d中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
本公开的变体cd80多肽可相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有单个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有2至10个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有2个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有3个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有4个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有5个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有6个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有7个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有8个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有9个氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有10个氨基酸取代。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有11至50个氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有11至15、15至20、20至25、25至30、30至35、35至40、40至45或45至50个氨基酸取代。
本公开的变体cd80多肽可具有150至254个氨基酸的长度。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽具有150个氨基酸至175个氨基酸、175个氨基酸至200个氨基酸、200个氨基酸至225个氨基酸或225个氨基酸至254个氨基酸的长度。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽具有200个氨基酸至225个氨基酸的长度。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽具有200个氨基酸至210个氨基酸的长度。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽具有205个氨基酸至210个氨基酸的长度。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽具有208个氨基酸的长度。
n19取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸19是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在n19处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在n19处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2c中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
n63取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在n63处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在n63处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2e中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
i67取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是leu。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在i67处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在i67处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在i67处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2g中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
k86取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在k86处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在k86处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是除赖氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2i中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
q157取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在q157处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在q157处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是除谷氨酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2k中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
d158取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在d158处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在d158处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2m中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
l25取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是ala、gly、val或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在l25处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在l25处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是除亮氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2o中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
y31取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在y31处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在y31处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是除酪氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
q33取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在q33处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在q33处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是除谷氨酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2s中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
m38取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在m38处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在m38处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是除甲硫氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2u中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
v39取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在v39处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在v39处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是除缬氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2w中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
i49取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是leu。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在i49处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在i49处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是除异亮氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2y中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
y53取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在y53处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在y53处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是除酪氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2aa中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
d60取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在d60处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在d60处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2cc中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
f108取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在f108处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在f108处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是除苯丙氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ee中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
s156取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是除丝氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸156是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在s156处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在s156处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是除丝氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2gg中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
p111取代
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在p111处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在p111处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是除脯氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的变体cd80多肽包含图2ii中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
融合多肽
本公开提供了cd80融合多肽。本公开的融合多肽包含：a)本公开的变体cd80多肽；以及b)异源融合配偶体。在一些情况下，所述异源融合配偶体融合至变体cd80多肽的n-末端。在一些情况下，所述异源融合配偶体融合至变体cd80多肽的c-末端。在一些情况下，本公开的cd80融合多肽包含与变体cd80多肽的n-末端融合的第一异源融合配偶体，以及与变体cd80多肽的c-末端融合的第二异源融合配偶体。
本公开的cd80融合多肽的总长度可在215个氨基酸至2000个氨基酸的范围内。例如，本公开的cd80融合多肽可在215个氨基酸至225个氨基酸、225个氨基酸至250个氨基酸、250个氨基酸至275个氨基酸、275个氨基酸至300个氨基酸、300个氨基酸至350个氨基酸、350个氨基酸、350个氨基酸至400个氨基酸、400个氨基酸、400个氨基酸至450个氨基酸、450个氨基酸至500个氨基酸、500个氨基酸至600个氨基酸、600个氨基酸至700个氨基酸、700个氨基酸至800个氨基酸、800个氨基酸至900个氨基酸、900个氨基酸至1000个氨基酸、1000个氨基酸至1250个氨基酸、1250个氨基酸至1500个氨基酸、1500个氨基酸至1750个氨基酸或1750个氨基酸至2000个氨基酸的范围内。
合适的融合配偶体包括但不限于，跨膜结构域；抗体fc区；抗体的抗原结合区；细胞因子；免疫调节结构域；细胞内信号传导结构域；等。
t细胞调节性多聚体多肽
本公开提供了多聚体(例如，异二聚体、异三聚体)多肽。所述多聚体多肽是t细胞调节性多肽，并且在本文中也称为“t细胞调节性多聚体多肽”或“syntac”(对于“t细胞活化的免疫突触”而言)。图1a-1d提供本公开的t细胞调节性多聚体多肽的示意性描述。本公开的t细胞调节性多聚体多肽也称为“syntac多肽”或“多聚体多肽”。
本公开的syntac多肽包含本公开的变体免疫调节多肽。如上所述，与野生型cd80与cd86的结合亲和力相比，存在于本公开的多聚体多肽中的变体cd80多肽对cd86表现出降低的结合亲和力。与包含野生型cd80(例如，包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽)的对照多聚体多肽相比，包含本公开的变体cd80多肽的本公开的多聚体多肽也对cd86表现出降低的结合亲和力。
在一些情况下，与包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28的结合亲和力相比，本公开的syntac多肽对cd28表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽结合cd28的结合亲和力小于包含cd80多肽(其包含图2a中描绘的氨基酸序列)的对照syntac多肽对包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽结合cd28的结合亲和力比包含cd80多肽(其包含图2a中描绘的氨基酸序列)的对照syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
在一些情况下，与包含cd80多肽(其包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列)的对照syntac多肽对cd28的结合亲和力相比，本公开的syntac多肽对cd28表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽结合cd28的结合亲和力小于包含cd80多肽(其包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列)的对照syntac多肽对包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽结合cd28的结合亲和力比包含cd80多肽(其包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列)的对照syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28具有100nm至约100μm的结合亲和力。在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28具有约100nm至500nm的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约100nm至约150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约450nm或约450nm至约500nm的结合亲和力。在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约500nm至1μm的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm或约900nm至约1μm的结合亲和力。在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约1μm至10μm的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约1μm至2μm、约2μm至约3μm、约3μm至约4μm、约4μm至约5μm、约5μm至约6μm、约6μm至约7μm、约7μm至约8μm、约8μm至约9μm或约9μm至约10μm的结合亲和力。在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约10μm至100μm的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的syntac多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约10μm至约20μm、约20μm至约30μm、约30μm至约40μm、约40μm至约50μm、约50μm至约60μm、约60μm至约70μm、约70μm至约80μm、约80μm至约90μm或约90μm至约100μm的结合亲和力。
在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽可相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有单个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有2至10个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有2个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有3个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有4个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有5个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有6个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有7个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有8个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有9个氨基酸取代。在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有10个氨基酸取代。
在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有11至50个氨基酸取代。例如，在一些情况下，在本公开的syntac多肽中存在的变体cd80多肽相对于野生型cd80多肽(例如，包含图2a中描绘或如seqidno:1中列出的氨基酸序列的cd80多肽)具有11至15、15至20、20至25、25至30、30至35、35至40、40至45或45至50个氨基酸取代。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽从氨基末端(n-末端)至羧基末端(c-末端)依次包含：a)表位(例如，t细胞表位)；b)第一主要组织相容性复合物(mhc)多肽和c)免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；并且其中所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)第二mhc多肽；和b)免疫球蛋白(ig)fc多肽。在其他情况下，本公开的多聚体多肽包含第一多肽和第二多肽，其中所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位(例如，t细胞表位)；和b)第一mhc多肽；并且其中所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；b)第二mhc多肽；和c)igfc多肽。在一些情况下，所述第一和第二mhc多肽是i类mhc多肽；例如，在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhci类β2-微球蛋白(b2m或β2m)多肽，并且所述第二mhc多肽是mhci类重链(h链)；或所述第一mhc多肽是mhci类h链，并且所述第二mhc多肽是mhci类β2m多肽)。在其他情况下，所述第一和第二mhc多肽是ii类mhc多肽；例如，在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhcii类α链多肽，并且所述第二mhc多肽是mhcii类β链多肽。在其他情况下，所述第一多肽是mhcii类β链多肽，并且所述第二mhc多肽是mhcii类α链多肽。在一些情况下，所述多聚体多肽包含两种或更多种免疫调节多肽，其中所述免疫调节多肽中的至少一种是本公开的变体cd80免疫调节多肽。在本公开的多聚体多肽包含两种或更多种免疫调节多肽的情况下，在一些情况下，所述两种或更多种免疫调节多肽存在于同一多肽链中，并且可处于串联形式。在本公开的多聚体多肽包含两种或更多种免疫调节多肽的情况下，在一些情况下，所述两种或更多种免疫调节多肽存在于单独多肽中。在一些情况下，本公开的多聚体多肽是异二聚体。在一些情况下，本公开的多聚体多肽是三聚体多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)igfc多肽；以及iii)免疫调节结构域(例如，本公开的变体cd80多肽)。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽；和ii)免疫调节结构域(例如，本公开的变体cd80多肽)。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)第一mhc多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)免疫调节结构域(例如，本公开的变体cd80多肽)；和ii)第二mhc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)第一mhc多肽；和iii)免疫调节结构域(例如，本公开的变体cd80多肽)；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)第二mhc多肽。在一些情况下，在本公开的多聚体多肽包含非ig支架的情况下，所述非ig支架是xten肽、转铁蛋白多肽、fc受体多肽、弹性蛋白样多肽、丝状多肽或丝-弹性蛋白样多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽是单价的。在一些情况下，本公开的多聚体多肽是多价的。在一些情况下，本公开的多价多聚体多肽在所述第一或第二多肽中的一个上包含免疫球蛋白fc多肽。例如，取决于本公开的多聚体多肽中存在的fc多肽，所述多聚体多肽可以是同二聚体，其中所述多聚体多肽的两个分子存在于所述同二聚体中，其中所述多聚体多肽的两个分子可彼此例如二硫键连接，例如经由所述两个分子中存在的fc多肽。作为另一个实例，本公开的多聚体多肽可包含多聚体多肽的三个、四个或五个分子，其中所述多聚体多肽的分子可彼此二硫键连接，例如，经由所述分子中存在的fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)本公开的变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的变体cd80多肽；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽具有相同的氨基酸序列。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽在氨基酸序列上彼此不同。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽具有相同的氨基酸序列。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽在氨基酸序列上彼此不同。
接头
本公开的多聚体多肽可包含插入在例如表位与mhc多肽之间；在mhc多肽与免疫调节多肽之间；在mhc多肽与igfc多肽之间；在第一变体cd80多肽与第二变体cd80多肽之间；或在第二变体cd80多肽与第三变体cd80多肽之间的接头肽。
合适的接头(也称为“间隔物”)可容易地选择，并且可具有许多合适长度中的任一种，如1个氨基酸至25个氨基酸、3个氨基酸至20个氨基酸、2个氨基酸至15个氨基酸、3个氨基酸至12个氨基酸，包括4个氨基酸至10个氨基酸、5个氨基酸至9个氨基酸、6个氨基酸至8个氨基酸或7个氨基酸至8个氨基酸酸。合适的接头的长度可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸。
示例性接头包括甘氨酸聚合物(g)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括，例如，(gs)n，(gsggs)n(seqidno:65)和(gggs)n(seqidno:66)，其中n是至少一的整数)、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物以及本领域中已知的其他柔性接头。可使用甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物；gly和ser两者均是相对非结构化的，并且因此可充当组分之间的中性系链。可使用甘氨酸聚合物；甘氨酸比甚至丙氨酸获得显著更多的phi-psi空间，并且比具有更长侧链的残基限制少的多(参见scheraga,rev.computationalchem.11173-142(1992))。示例性接头可包含氨基酸序列，包括但不限于ggsg(seqidno:67)、ggsgg(seqidno:68)、gsgsg(seqidno:69)、gsggg(seqidno:70)、gggsg(seqidno:71)、gsssg(seqidno:72)等。示例性接头可包括例如gly(ser4)n，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些情况下，接头包含氨基酸序列(gssss)n(seqidno:73)，其中n是4。在一些情况下，接头包含氨基酸序列(gssss)n(seqidno:73)，其中n是5。在一些情况下，接头包含氨基酸序列(ggggs)n(seqidno:74)，其中n是4。在一些情况下，接头包含氨基酸序列(ggggs)n(seqidno:74)，其中n是5。
在一些情况下，在本公开的多聚体多肽的第一多肽中存在的接头多肽包含半胱氨酸残基，所述半胱氨酸残基可与本公开的多聚体多肽的第二多肽中存在的半胱氨酸残基形成二硫键。在一些情况下，例如，合适的接头包含氨基酸序列
表位
在本公开的多聚体多肽中存在的表位可具有约4个氨基酸至约25个氨基酸的长度，例如，所述表位可具有4个氨基酸(aa)至10aa、10aa至15aa、15aa至20aa或20aa至25aa的长度。例如，在本公开的多聚体多肽中存在的表位可具有4个氨基酸(aa)、5aa、6aa、7、aa、8aa、9aa、10aa、11aa、12aa、13aa、14aa、15aa、16aa、17aa、18aa、19aa、20aa、21aa、22aa、23aa、24aa或25aa的长度。在一些情况下，在本公开的多聚体多肽中存在的表位具有5个氨基酸至10个氨基酸，例如，5aa、6aa、7aa、8aa、9aa或10aa的长度。
在本公开的多聚体多肽中存在的表位被t细胞特异性结合，即所述表位被表位特异性t细胞特异性结合。表位特异性t细胞结合具有参考氨基酸序列的表位，但基本上不结合不同于参考氨基酸序列的表位。例如，表位特异性t细胞结合具有参考氨基酸序列的表位，并且结合与参考氨基酸序列不同的表位(如果发生的话)的亲和力小于10-6m、小于10-5m或小于10-4m。表位特异性t细胞可结合对其具有特异性的表位的亲和力是至少10-7m、至少10-8m、至少10-9m或至少10-10m。
合适的表位包括但不限于存在于癌症相关抗原中的表位。癌症相关抗原包括但不限于α-叶酸受体；碳酸酐酶ix(caix)；cd19；cd20；cd22；cd30；cd33；cd44v7/8；癌胚抗原(cea)；上皮糖蛋白-2(egp-2)；上皮糖蛋白-40(egp-40)；叶酸结合蛋白(fbp)；胎儿乙酰胆碱受体；神经节苷脂抗原gd2；her2/neu；il-13r-a2；κ轻链；ley；l1细胞粘附分子；黑色素瘤相关抗原(mage)；mage-a1；间皮素；muc1；nkg2d配体；癌胚抗原(h5t4)；前列腺干细胞抗原(psca)；前列腺特异性膜抗原(psma)；肿瘤相关糖蛋白-72(tag-72)；以及血管内皮生长因子受体-2(vegf-r2)。参见例如，vigneron等人(2013)cancerimmunity13:15；和vigneron(2015)biomedres.int’larticleid948501。
mhc多肽
如上所述，本公开的多聚体多肽包含mhc多肽。出于本公开的目的，术语“主要组织相容性复合物(mhc)多肽”意在包括各种物种的mhc多肽，包括人mhc(也称为人白细胞抗原(hla))多肽、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠等)、mhc多肽和其他哺乳动物物种(例如，兔类动物、非人灵长类动物、犬科动物、猫科动物、有蹄类动物(例如，马科动物、牛科动物、绵羊科动物、山羊科动物等)的mhc多肽等。术语“mhc多肽”意在包括i类mhc多肽(例如，β-2微球蛋白和mhci类重链)和mhcii类多肽(例如，mhcii类α多肽和mhcii类β多肽)。
如上所述，在本公开的多聚体多肽的一些实施方案中，所述第一和第二mhc多肽是i类mhc多肽；例如，在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhci类β2-微球蛋白(β2m)多肽，并且所述第二mhc多肽是mhci类重链(h链)。在其他情况下，所述第一和第二mhc多肽是ii类mhc多肽；例如，在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhcii类α链多肽，并且所述第二mhc多肽是mhcii类β链多肽。在其他情况下，所述第一多肽是mhcii类β链多肽，并且所述第二mhc多肽是mhcii类α链多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽的mhc多肽是人mhc多肽，其中人mhc多肽也称为“人白细胞抗原”(“hla”)多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的mhc多肽是i类hla多肽，例如β2-微球蛋白多肽，或i类hla重链多肽。i类hla重链多肽包括hla-a重链多肽、hla-b重链多肽、hla-c重链多肽、hla-e重链多肽、hla-f重链多肽和hla-g重链多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的mhc多肽是ii类hla多肽，例如ii类hlaα链或ii类hlaβ链。mhcii类多肽包括mchii类dpα和β多肽、dmα和β多肽、doaα和β多肽、dobα和β多肽、dqα和β多肽以及drα和β多肽。
作为实例，本公开的多聚体多肽的mhci类重链多肽可包含与图5a中描绘的人hla-a重链多肽的氨基酸序列的氨基酸25-365具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
作为实例，本公开的多聚体多肽的mhci类重链多肽可包含与以下人hla-a重链氨基酸序列的氨基酸序列的氨基酸25-365具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：gshsmryfftsvsrpgrgeprfiavgyvddtqfvrfdsdaasqrmeprapwieqegpeywdgetrkvkahsqthrvdlgtlrgyynqseagshtvqrmygcdvgsdwrflrgyhqyaydgkdyialkedlrswtaadmaaqttkhkweaahvaeqlraylegtcvewlrrylengketlqrtdapkthmthhavsdheatlrcwalsfypaeitltwqrdgedqtqdtelvetrpagdgtfqkwaavvvpsgqeqrytchvqheglpkpltlrwep(seqidno:76)。
作为另一个实例，本公开的多聚体多肽的mhci类重链多肽可包含与图5b中描绘的人hla-b重链多肽的氨基酸序列的氨基酸25-362具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
作为另一个实例，本公开的多聚体多肽的mhci类重链多肽可包含与图5c中描绘的人hla-c重链多肽的氨基酸序列的氨基酸25-362具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
作为另一个实例，本公开的多聚体多肽的mhci类重链多肽可包含与以下氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：
gphslryfvtavsrpglgeprfiavgyvddtqfvrfdsdadnprfeprapwmeqegpeyweeqtqraksdeqwfrvslrtaqryynqskggshtfqrmfgcdvgsdwrllrgyqqfaydgrdyialnedlktwtaadtaalitrrkweqagdaeyyraylegecvewlrrylelgnetllrtdspkahvtyhprsqvdvtlrcwalgfypaditltwqlngedltqdmelvetrpagdgtfqkwaavvvplgkeqnytchvhhkglpepltlrw(seqidno:77)。
本公开的多聚体多肽的β2-微球蛋白(β2m)多肽可以是人β2m多肽、非人灵长类动物β2m多肽、鼠β2m多肽等。在一些情况下，β2m多肽包含与图6中描绘的β2m氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，β2m多肽包含与图6中描绘的β2m氨基酸序列的氨基酸21至119具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在一些情况下，mhc多肽相对于参考mhc多肽(其中参考mhc多肽可以是野生型mhc多肽)包含单个氨基酸取代，其中所述单个氨基酸取代用半胱氨酸(cys)残基取代氨基酸。当在本公开的多聚体多肽的第一多肽的mhc多肽中存在时，此类半胱氨酸残基可与本公开的多聚体多肽的第二多肽链中存在的半胱氨酸残基形成二硫键。
在一些情况下，在本公开的多聚体多肽的第一多肽中存在的第一mhc多肽和/或在本公开的多聚体多肽的第二多肽中存在的第二mhc多肽包含氨基酸取代以用半胱氨酸取代氨基酸，其中所述第一mhc多肽中的取代的半胱氨酸与所述第二mhc多肽中的半胱氨酸形成二硫键，其中所述第一mhc多肽中的半胱氨酸与所述第二mhc多肽中的取代的半胱氨酸形成二硫键，或其中所述第一mhc多肽中的取代的半胱氨酸与所述第二mhc多肽中的取代的半胱氨酸形成二硫键。
例如，在一些情况下，hlaβ2-微球蛋白和hlai类重链中的以下残基对中的一个被半胱氨酸取代(其中残基数是成熟多肽的残基数)：1)β2m残基12，hlai类重链残基236；2)β2m残基12，hlai类重链残基237；3)β2m残基8，hlai类重链残基234；4)β2m残基10，hlai类重链残基235；5)β2m残基24，hlai类重链残基236；6)β2m残基28，hlai类重链残基232；7)β2m残基98，hlai类重链残基192；8)β2m残基99，hlai类重链残基234；9)β2m残基3，hlai类重链残基120；10)β2m残基31，hlai类重链残基96；11)β2m残基53，hlai类重链残基35；12)β2m残基60，hlai类重链残基96；13)β2m残基60，hlai类重链残基122；14)β2m残基63，hlai类重链残基27；15)β2m残基arg3，hlai类重链残基gly120；16)β2m残基his31，hlai类重链残基gln96；17)β2m残基asp53，hlai类重链残基arg35；18)β2m残基trp60，hlai类重链残基gln96；19)β2m残基trp60，hlai类重链残基asp122；20)β2m残基tyr63，hlai类重链残基tyr27；21)β2m残基lys6，hlai类重链残基glu232；22)β2m残基gln8，hlai类重链残基arg234；23)β2m残基tyr10，hlai类重链残基pro235；24)β2m残基ser11，hlai类重链残基gln242；25)β2m残基asn24，hlai类重链残基ala236；26)β2m残基ser28，hlai类重链残基glu232；27)β2m残基asp98，hlai类重链残基his192；以及28)β2m残基met99，hlai类重链残基arg234。mhc/hlai类重链的氨基酸编号是参考无信号肽的成熟mhc/hlai类重链。例如，在图5a中描绘的包含信号肽的氨基酸序列中，gly120是gly144；gln96是gln120；等。在一些情况下，所述β2m多肽包含r12c取代，并且所述hlai类重链包含a236c取代；在此类情况下，在β2m多肽的cys-12与hlai类重链的cys-236之间形成二硫键。例如，在一些情况下，成熟hla-a氨基酸序列的残基236(即图5a中描绘的氨基酸序列的残基260)被cys取代。在一些情况下，成熟hla-b氨基酸序列的残基236(即图5b中描绘的氨基酸序列的残基260)被cys取代。在一些情况下，成熟hla-c氨基酸序列的残基236(即图5c中描绘的氨基酸序列的残基260)被cys取代。在一些情况下，图6中描绘的氨基酸序列的残基32(对应于成熟β2m的arg-12)倍cys取代。
在一些情况下，β2m多肽包含氨基酸序列：
在一些情况下，hlai类重链多肽包含氨基酸序列：
在一些情况下，hlai类重链多肽包含氨基酸序列：
在一些情况下，所述β2m多肽包含以下氨基酸序列：
免疫调节多肽
本公开的多聚体多肽包含如上所述的变体免疫调节多肽。因此，本公开的多聚体多肽包含本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽。
在一些情况下，与包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28的结合亲和力相比，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽对cd28表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力小于包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力比包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
在一些情况下，与包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28的结合亲和力相比，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽对cd28表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力小于包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽结合cd28的结合亲和力比包含seqidno:1中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低至少50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽对cd28具有100nm至100μm的结合亲和力。作为另一个实例，在一些情况下，在本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽对cd28(例如，包含图3a-3c之一中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，与包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽的结合亲和力相比，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽对ctla4表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽结合ctla4的结合亲和力小于包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对包含图3d中描绘的氨基酸序列的ctla4多肽的结合亲和力。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽结合ctla4的结合亲和力比包含图2a中描绘的氨基酸序列的cd80多肽对ctla4(例如，包含图3d中描绘的氨基酸序列的cd28多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少15％、低至少20％、低至少25％、低至少30％、低至少35％、低至少40％、低至少45％、低50％、低至少55％、低至少60％、低至少65％、低至少70％、低至少75％、低至少80％、低至少85％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
n19取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸19是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在n19处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在n19处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2b中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2c中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
n63取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在n63处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在n63处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2d中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2e中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
i67取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是leu。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在i67处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在i67处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2f中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2g中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
k86取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在k86处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在k86处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是除赖氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2h中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2i中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
q157取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在q157处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在q157处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是除谷氨酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2j中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2k中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
d158取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在d158处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在d158处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2l中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2m中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
l25取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是ala、gly、val或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在l25处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在l25处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是除亮氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2n中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2o中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
y31取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在y31处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在y31处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是除酪氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2p中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
q33取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在q33处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在q33处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是除谷氨酰胺以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2r中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2s中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
m38取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在m38处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在m38处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是除甲硫氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2t中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2u中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
v39取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在v39处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在v39处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是除缬氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2v中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2w中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
i49取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是leu。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在i49处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在i49处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是除异亮氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val或leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2x中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2y中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
y53取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在y53处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在y53处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是除酪氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2z中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2aa中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
d60取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在d60处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在d60处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是除天冬氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2bb中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2cc中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
f108取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在f108处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在f108处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是除苯丙氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2dd中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ee中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
s156取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是除丝氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在s156处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在s156处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是除丝氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ff中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2gg中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
p111取代
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是ile。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2a中列出的氨基酸序列，在p111处具有氨基酸取代。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含seqidno:1中列出的氨基酸序列，在p111处具有氨基酸取代。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是除脯氨酸以外的任何氨基酸；例如，“x”可以是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是ala。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是val。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是leu。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是gly。在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2hh中列出的氨基酸序列，其中“x”是ile。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽中存在的变体cd80多肽包含图2ii中列出的氨基酸序列。在一些情况下，所述变体cd80多肽对cd28具有约100nm至150nm、约150nm至约200nm、约200nm至约250nm、约250nm至约300nm、约300nm至约350nm、约350nm至约400nm、约400nm至约500nm、约500nm至约600nm、约600nm至约700nm、约700nm至约800nm、约800nm至约900nm、约900nm至约1μm、约1μm至约5μm、约5μm至约10μm、约10μm至约15μm、约15μm至约20μm、约20μm至约25μm、约25μm至约50μm、约50μm至约75μm或约75μm至约100μm的结合亲和力。
另外的免疫调节多肽
本公开的多聚体多肽的免疫调节多肽可以是活化免疫调节多肽或抑制性免疫调节多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含单一免疫调节多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含两种免疫调节多肽。在一些情况下，所述两种免疫调节多肽在多肽链中串联。在一些情况下，所述两种免疫调节多肽位于单独的多肽链中。在一些情况下，所述两种免疫调节多肽位于单独的多肽链中并且彼此二硫键连接。
本公开的多聚体多肽的免疫调节多肽在一些情况下是t细胞调节性多肽。在一些情况下，所述t细胞调节性多肽是刺激性(活化)t细胞调节性多肽。在一些情况下，所述t细胞调节性多肽是抑制性t细胞调节性多肽。t细胞调节性多肽可以是抗体、肽配体、t细胞共刺激多肽、细胞因子或毒素。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽的免疫调节多肽是基于抗体或基于非抗体的识别部分，所述识别部分特异性地结合在表位特异性t细胞的表面上表达的共刺激多肽。基于抗体的识别部分包括例如抗体；保留与抗原的特异性结合的抗体片段，包括但不限于fab、fv、单链fv(scfv)和fd片段；嵌合抗体；人源化抗体；单链抗体(scab)、单结构域抗体(dab)；单结构域重链抗体；单结构域轻链抗体；等。合适的基于非抗体的识别部分包括例如亲和体；工程化kunitz结构域；单域抗体(adnectin)；抗运载蛋白；适体；设计的锚蛋白重复结构域(darpin)；富含半胱氨酸的多肽(例如，富含半胱氨酸的打结素肽)的结合位点；高亲合性多聚体；afflin；等。基于抗体或基于非抗体的识别部分特异性地结合在表位特异性t细胞的表面上表达的共刺激多肽，其中此类共刺激多肽包括但不限于ctla4、pd1、icos、ox40、cd20以及4-1bb。在表位特异性t细胞的表面上表达的共刺激多肽是本领域已知的。
多个免疫调节结构域
如上所述，在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含两种或更多种免疫调节多肽，其中所述两种或更多种免疫调节多肽中的至少一种是本公开的变体cd80多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含本公开的变体cd80多肽的两个或更多个拷贝。在一些情况下，所述两种或更多种变体cd80多肽位于本公开的多聚体多肽的同一多肽链上。在一些情况下，所述两种或更多种变体cd80多肽位于本公开的多聚体多肽的单独多肽链上。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含第一免疫调节多肽和至少第二免疫调节多肽，其中所述第一免疫调节多肽是本公开的变体cd80多肽，并且所述第二免疫调节多肽不是cd80多肽。例如，在一些情况下，所述第二免疫调节多肽是肿瘤坏死因子(tnf)超家族的成员；例如，fasl多肽、4-1bbl多肽、cd40多肽、ox40l多肽、cd30l多肽、cd70多肽等。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的第二免疫调节多肽是t-细胞共刺激多肽，并且是免疫球蛋白(ig)超家族的成员；例如，cd7多肽、cd86多肽、icam多肽等。在一些情况下，所述第二免疫调节多肽是4-1bbl、ox40l、icos-l、icam、pd-l1、fasl和pd-l2。本公开的多聚体多肽的合适的免疫调节多肽包括例如，cd7、cd30l、cd40、cd70、cd83、hla-g、mica、micb、hvem、淋巴毒素β受体、3/tr6、ilt3、ilt4或hvem。
可包含于本公开的多聚体多肽中的其他t细胞调节结构域(mod)包括天然存在的或合成的人基因产物(蛋白质)；靶向人基因产物的亲和试剂(例如，抗体、抗体片段、单链fv、适体、纳米抗体)，包括但不限于由经典和非经典(例如，fgf2、il1、s100a4)分泌机制产生的所有分泌蛋白；以及由天然存在的遗传编码的蛋白质区段(单个或多个膜跨度)或翻译后修饰，如gpi键联)锚定的所有细胞表面蛋白的胞外结构域。靶向细胞表面聚糖或其他翻译后修饰(例如，硫酸化)的任何天然存在的或合成的亲和试剂(例如，抗体、抗体片段、单链fv、适体、纳米抗体、凝集素等)。实例包括但不限于tnf/tnfr家族的成员(ox40l、icosl、fasl、lta、ltbtrail、cd153、tnfsf9、rankl、tweak、tnfsf13、tnfsf13b、tnfsf14、tnfsf15、tnfsf18、cd40lg、cd70)或针对tnf/tnfr家族成员的亲和试剂；免疫球蛋白超家族的成员(vista、pd1、pd-l1、pd-l2、b71、b72、ctla4、cd28、tim3、cd4、cd8、cd19、t细胞受体链、icos、icos配体、hhla2、嗜乳脂蛋白、btla、b7-h3、b7-h4、cd3、cd79a、cd79b、igsfcams(包括cd2、cd58、cd48、cd150、cd229、cd244、icam-1)、白细胞免疫球蛋白样受体(lilr)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir))；凝集素超家族成员，选择素、细胞因子/趋化因子和细胞因子/趋化因子受体、生长因子和生长因子受体)；粘附分子(整联蛋白、纤连蛋白、钙粘蛋白)；或多跨整合膜蛋白的胞外结构域；或针对免疫球蛋白超家族和列出的基因产物的亲和试剂。此外，这些基因产物的活性同源物/直向同源物包括但不限于病毒序列(例如，cmv、ebv)、细菌序列、真菌序列、真核病原体(例如，血吸虫属、疟原虫属、巴贝虫属、艾美球虫属、泰勒虫属、弓形虫属、内阿米巴属、利什曼原虫属和锥虫属)以及哺乳动物来源的编码区。此外，mod可包含靶向人基因产物的小分子药物。
支架多肽
本公开的t细胞调节性多聚体多肽包含fc多肽或另一种合适的支架多肽。
合适的支架多肽包括基于抗体的支架多肽和基于非抗体的支架。基于非抗体的支架包括例如，白蛋白、xten(延伸的重组)多肽、转铁蛋白、fc受体多肽、弹性蛋白样多肽(参见例如，hassouneh等人(2012)methodsenzymol.502:215；例如，包含(val-pro-gly-x-gly)的五肽重复单元的多肽，其中x是除脯氨酸以外的任何氨基酸)、白蛋白结合多肽、丝状多肽(参见例如，valluzzi等人(2002)philostransrsoclondbbiolsci.357:165)、丝-弹性蛋白样多肽(selp；参见例如，megeed等人(2002)advdrugdelivrev.54:1075)等。合适的xten多肽包括例如在wo2009/023270、wo2010/091122、wo2007/103515、us2010/0189682和us2009/0092582中公开的那些；还参见schellenberger等人(2009)natbiotechnol.27:1186)。合适的白蛋白多肽包括例如人血清白蛋白。
在一些情况下，合适的支架多肽将是延长半衰期的多肽。因此，在一些情况下，与缺乏支架多肽的对照多聚体多肽相比，合适的支架多肽增加多聚体多肽的体内半衰期(例如，血清半衰期)。例如，在一些情况下，与缺乏支架多肽的对照多聚体多肽相比，所述支架多肽使多聚体多肽的体内半衰期(例如，血清半衰期)增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约50％、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约25倍、至少约50倍、至少约100倍或超过100倍。作为一个实例，在一些情况下，与缺乏fc多肽的对照多聚体多肽相比，所述fc多肽使多聚体多肽的体内半衰期(例如，血清半衰期)增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约50％、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约25倍、至少约50倍、至少约100倍或超过100倍。
fc多肽
在一些情况下，本公开的多聚体多肽的第一和/或第二多肽链包含fc多肽。本公开的多聚体多肽的fc多肽可以是人igg1fc、人igg2fc、人igg3fc、人igg4fc等。在一些情况下，所述fc多肽包含与图4a-c中描绘的fc区的氨基酸序列具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fc区包含与图4a中描绘的人igg1fc多肽具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fc区包含与图4a中描绘的人igg1fc多肽具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含n77的取代；例如，所述fc多肽包含n77a取代。在一些情况下，所述fc多肽包含与图4a中描绘的人igg2fc多肽具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；例如，所述fc多肽包含与图4a中描绘的人igg2fc多肽的氨基酸99-325具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fc多肽包含与图4a中描绘的人igg3fc多肽具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；例如，所述fc多肽包含与图4a中描绘的人igg3fc多肽的氨基酸19-246具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fc多肽包含与图4b中描绘的人igmfc多肽具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；例如，所述fc多肽包含与图4b中描绘的人igmfc多肽的氨基酸1-276具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fc多肽包含与图4c中描绘的人igafc多肽具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；例如，所述fc多肽包含与图4c中描绘的人igafc多肽的氨基酸1-234具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
另外的多肽
本公开的多聚体多肽的多肽链可包含一种或多种除上述那些以外的多肽。合适的另外多肽包括表位标签和亲和结构域。所述一种或多种另外的多肽可包含在本公开的多聚体多肽的多肽链的n-末端，本公开的多聚体多肽的多肽链的c-末端，或在本公开的多聚体多肽的多肽链内部。
表位标签
合适的表位标签包括但不限于，血凝素(ha；例如，ypydvpdya(seqidno:89)；flag(例如，dykddddk(seqidno:90)；c-myc(例如，eqkliseedl；seqidno:91)等。
亲和结构域
亲和结构域包括可与结合配偶体相互作用的肽序列，例如，如固定在固体载体上的肽序列，其适用于鉴定或纯化。当与表达的蛋白质融合时，编码多个连续单一氨基酸(如组氨酸)的dna序列可通过与树脂柱(如镍琼脂糖凝胶)的高亲和力结合用于重组蛋白质的一步纯化。示例性亲和结构域包括his5(hhhhh)(seqidno:92)；hisx6(hhhhhh)(seqidno:93)；c-myc(eqkliseedl)(seqidno:94)；flag(dykddddk)(seqidno:95)；streptag(wshpqfek)(seqidno:96)；血凝素，例如，ha标签(ypydvpdya)(seqidno:97)；谷胱甘肽-s-转移酶(gst)；硫氧还蛋白；纤维素结合结构域；ryirs(seqidno:98)；phe-his-his-thr(seqidno:99)；壳多糖结合结构域；s-肽；t7肽；sh2结构域；c-端rna标签，weaaareaccreccara(seqidno:100)；金属结合结构域，例如，锌结合结构域或钙结合结构域，如来自钙结合蛋白的那些，例如，钙调蛋白、肌钙蛋白c、钙调磷酸酶b、肌球蛋白轻链、恢复蛋白、s-调控蛋白、视锥蛋白、vilip、神经钙蛋白、海马钙蛋白、聚集蛋白、钙牵蛋白、钙蛋白酶大亚基、s100蛋白、小清蛋白、钙结合蛋白d9k、钙结合蛋白d28k以及钙网膜蛋白；内含肽；生物素；链霉抗生物素蛋白；myod；id；亮氨酸拉链序列；以及麦芽糖结合蛋白。
示例性多聚体多肽
下文描述本公开的示例性多聚体多肽。
n19
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸19是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸19是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸19是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸19是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸19是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸19是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2b中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸19是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸19是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸19是ala、val、gly、leu或ile。
n63
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；iv)本公开的第三变体cd80多肽；v)i类mhc重链；和vi)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2d中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸63是除天冬酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸63是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸63是ala、gly、val、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
i67
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸67是val、gly或leu；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸67是val、gly或leu；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸67是ala、val、gly或leu。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vi)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸67是ala、val、gly或leu。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸67是ala、val、gly或leu。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2f中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸67是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸67是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸67是ala、val、gly或leu。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
k86
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸86是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸86是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸86是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸86是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸86是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2h中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸86是除赖氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸86是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸86是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
q157
与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸157是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸157是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸157是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸157是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸157是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2j中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸157是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸157是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸157是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
d158
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸158是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸158是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸158是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸158是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸158是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vi)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2l中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸158是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸158是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸158是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
l25
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸25是ala、val、gly或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸25是ala、val、gly或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸25是ala、val、gly或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸25是ala、val、gly或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸25是ala、val、gly或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2n中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸25是除亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸25是gly、ala、val、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸25是ala、val、gly或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
y31
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸31是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸31是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸31是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸31是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸31是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2p中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸31是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸31是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸31是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
q33
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸33是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸33是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸33是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸33是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸33是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2r中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸33是除谷氨酰胺以外的氨基酸，例如，其中氨基酸33是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸33是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
m38
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸38是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸38是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸38是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸38是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸38是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2t中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸38是除甲硫氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸38是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸38是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
v39
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu、或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2v中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸39是除缬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸39是gly、ala、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸39是ala、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
i49
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸49是ala、val、gly或leu；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸49是ala、val、gly或leu；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸49是ala、val、gly或leu。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸49是ala、val、gly或leu。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸49是ala、val、gly或leu。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2x中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸49是除异亮氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸49是gly、ala、val、leu、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸49是ala、val、gly或leu。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
y53
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸53是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸53是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸53是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸53是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸53是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2z中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸53是除酪氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸53是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸53是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
d60
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸60是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸60是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸60是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸60是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸60是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2bb中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸60是除天冬氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸60是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his或glu，例如，其中氨基酸60是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
f108
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸108是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸108是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸108是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸108是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸108是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2dd中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸108是除苯丙氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸108是gly、ala、val、leu、ile、pro、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸108是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
d111
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
s156
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；和iii)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2ff中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸156是除丝氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸156是gly、ala、val、leu、ile、pro、phe、tyr、trp、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸156是ala、val、gly、leu或ile；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)变体cd80多肽，所述变体cd80多肽包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile；ii)i类mhc重链；和iii)fc多肽。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)本公开的第二变体cd80多肽；和v)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；ii)β2m多肽；iii)本公开的第一变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第二变体cd80多肽；vi)接头；和vii)本公开的第三变体cd80多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)i类mhc重链；和ii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)本公开的第二变体cd80多肽；和iii)本公开的第三变体cd80多肽；iv)i类mhc重链；和v)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽包含：a)第一多肽，所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)表位；和ii)β2m多肽；以及b)第二多肽，所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：i)本公开的第一变体cd80多肽；ii)接头；iii)本公开的第二变体cd80多肽；iv)接头；v)本公开的第三变体cd80多肽；vi)i类mhc重链；和vii)fc多肽。在一些情况下，所述第一、第二和第三变体cd80多肽各自包含与图2hh中描绘的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸111是除脯氨酸以外的氨基酸，例如，其中氨基酸111是gly、ala、val、leu、ile、phe、tyr、trp、ser、thr、cys、met、asn、gln、lys、arg、his、asp或glu，例如，其中氨基酸111是ala、val、gly、leu或ile。在一些情况下，所述接头包含(gssss)n(seqidno:73)序列，其中n是1、2、3、4或5。在一些情况下，n是4。在一些情况下，n是5。
核酸
本公开提供了一种核酸，所述核酸包含编码本公开的变体cd80多肽的核苷酸序列。本公开提供了一种核酸，所述核酸包含编码本公开的cd80融合多肽的核苷酸序列。
本公开提供了核酸，所述核酸包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的单独多肽链在单独的核酸中编码。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的所有多肽链都在单一核酸中编码。在一些情况下，第一核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽的核苷酸序列；第二核酸包含编码本公开多聚体多肽的第二多肽的核苷酸序列。在一些情况下，单一核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽和本公开的多聚体多肽的第二多肽的核苷酸序列。
编码多聚体多肽的单独多肽链的单独核酸
本公开提供了核酸，所述核酸包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列。如上所述，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的单独多肽链在单独的核酸中编码。在一些情况下，编码本公开的多聚体多肽的单独多肽链的核苷酸序列与转录控制元件(例如启动子，如在真核细胞中有功能的启动子)可操作地连接，其中所述启动子可以是组成型启动子或诱导型启动子。
本公开提供第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽的核苷酸序列，其中所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位(例如，t细胞表位)；b)第一种mhc多肽；和c)免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；并且其中所述第二核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第二多肽的核苷酸序列，其中所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)第二mhc多肽；和b)igfc多肽。在上文描述了合适的t细胞表位、mhc多肽、免疫调节多肽和igfc多肽。在一些情况下，编码第一和第二多肽的核苷酸序列与转录控制元件可操作地连接。在一些情况下，所述转录控制元件是在真核细胞中有功能的启动子。在一些情况下，所述核酸存在于单独的表达载体中。
本公开提供第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽的核苷酸序列，其中所述第一多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位(例如，t细胞表位)；和b)第一mhc多肽；并且其中所述第二核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第二多肽的核苷酸序列，其中所述第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；b)第二mhc多肽；和c)igfc多肽。在上文描述了合适的t细胞表位、mhc多肽、免疫调节多肽和igfc多肽。在一些情况下，编码第一和第二多肽的核苷酸序列与转录控制元件可操作地连接。在一些情况下，所述转录控制元件是在真核细胞中有功能的启动子。在一些情况下，所述核酸存在于单独的表达载体中。
编码多聚体多肽中存在的两种或更多种多肽的核酸
本公开提供了一种核酸，所述核酸包含至少编码本公开的多聚体多肽的第一多肽和第二多肽的核苷酸序列。在一些情况下，当本公开的多聚体多肽包含第一、第二和第三多肽时，所述核酸包含编码所述第一、第二和第三多肽的核苷酸序列。在一些情况下，编码本公开的多聚体多肽的第一多肽和第二多肽的核苷酸序列包含插入在编码所述第一多肽的核苷酸序列与编码所述第二多肽的核苷酸序列之间的蛋白水解可裂解的接头。在一些情况下，编码本公开的多聚体多肽的第一多肽和第二多肽的核苷酸序列包含插入在编码所述第一多肽的核苷酸序列与编码所述第二多肽的核苷酸序列之间的内部核糖体进入位点(ires)。在一些情况下，编码本公开的多聚体多肽的第一多肽和第二多肽的核苷酸序列包含插入在编码所述第一多肽的核苷酸序列与编码所述第二多肽的核苷酸序列之间的核糖体跳过信号(或顺式作用水解酶元件，chysel)。下文描述了核酸的实例，其中蛋白水解可裂解的接头提供在编码本公开的多聚体多肽的第一多肽和第二多肽的核苷酸序列之间；在这些实施方案中的任一个中，可使用ires或核糖体跳过信号来代替编码蛋白水解可裂解接头的核苷酸序列。
在一些情况下，第一核酸(例如，重组表达载体、mrna、病毒rna等)包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽链的核苷酸序列；并且第二核酸(例如，重组表达载体、mrna、病毒rna等)包含编码本公开的多聚体多肽的第二多肽链的核苷酸序列。在一些情况下，编码第一多肽的核苷酸序列和编码第二多肽的第二核苷酸序列各自可操作地连接至转录控制元件，例如启动子，如在真核细胞中有功能的启动子，其中所述启动子可以是组成型启动子或诱导型启动子。
本公开提供了一种核酸，所述核酸包含编码重组多肽的核苷酸序列，其中所述重组多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位(例如，t细胞表位)；b)第一mhc多肽；c)免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；d)蛋白水解可裂解的接头；e)第二mhc多肽；以及f)免疫球蛋白(ig)fc多肽。本公开提供了一种核酸，所述核酸包含编码重组多肽的核苷酸序列，其中所述重组多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)第一前导肽；b)所述表位；c)所述第一mhc多肽；d)所述免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；e)所述蛋白水解可裂解的接头；f)第二前导肽；g)第二mhc多肽；以及h)所述igfc多肽。本公开提供了一种核酸，所述核酸包含编码重组多肽的核苷酸序列，其中所述重组多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)表位；b)第一mhc多肽；c)蛋白水解可裂解的接头；d)免疫调节多肽(例如，本公开的变体cd80多肽)；e)第二mhc多肽；以及f)igfc多肽。在一些情况下，所述第一前导肽和所述第二前导肽是β2-m前导肽。在一些情况下，所述核苷酸序列与转录控制元件可操作地连接。在一些情况下，所述转录控制元件是在真核细胞中有功能的启动子。
在上文描述了合适的mhc多肽。在一些情况下，所述第一mhc多肽是β2-微球蛋白多肽；并且其中所述第二mhc多肽是mhci类重链多肽。在一些情况下，所述β2-微球蛋白多肽包含与seqidno:52中列出的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性或与seqidno:87中列出的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列)。在一些情况下，所述mhci类重链多肽是hla-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f、hla-g、hla-k或hla-l重链。在一些情况下，所述mhci类重链多肽包含与seqidno:49中列出的氨基酸序列的氨基酸25-365具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述mhci类重链多肽包含与seqidno:50中列出的氨基酸序列的氨基酸25-362具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述mhci类重链多肽包含与seqidno:51中列出的氨基酸序列的氨基酸25-366具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述第一mhc多肽是mhcii类α链多肽；并且其中所述第二mhc多肽是mhcii类β链多肽。
在上文描述了合适的fc多肽。在一些情况下，所述igfc多肽是igg1fc多肽、igg2fc多肽、igg3fc多肽、igg4fc多肽、igafc多肽或igmfc多肽。在一些情况下，所述igfc多肽包含与图4a-4c中描绘的氨基酸序列具有至少85％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在上文描述了合适的免疫调节多肽。
在上文描述了合适的蛋白水解可裂解的接头。在一些情况下，所述蛋白水解可裂解的接头包含选自以下的氨基酸序列：a)levlfqgp(seqidno:78)；b)enlytqs(seqidno:79)；c)ddddk(seqidno:101)；d)lvpr(seqidno:80)；以及e)gsgatnfsllkqagdveenpgp(seqidno:81)。在一些情况下，所述蛋白水解可裂解的接头包含选自以下的氨基酸序列：a)levlfqgp(seqidno:78)；b)enlytqs(seqidno:79)；c)弗林蛋白裂解位点；d)lvpr(seqidno:80)；e)gsgatnfsllkqagdveenpgp(seqidno:81)；f)gsgegrgslltcgdveenpgp(seqidno:82)；g)gsgqctnyallklagdvesnpgp(seqidno:83)；以及h)gsgvkqtlnfdllklagdvesnpgp(seqidno:84)。
在一些情况下，所述表位与所述第一mhc多肽之间的接头包含第一cys残基，并且所述第二mhc多肽包含氨基酸取代以提供第二cys残基，以使得所述第一和第二cys残基提供在所述接头与所述第二mhc多肽之间的二硫键联。在一些情况下，第一mhc多肽包含氨基酸取代以提供第一cys残基，并且所述第二mhc多肽包含氨基酸取代以提供第二cys残基，以使得所述第一cys残基和第二cys残基提供在所述第一mhc多肽与所述第二mhc多肽之间的二硫键联。
重组表达载体
本公开提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含本公开的核酸。在一些情况下，所述重组表达载体是非病毒载体。在一些实施方案中，所述重组表达载体是病毒构建体，例如重组腺伴随病毒构建体(参见，例如美国专利号7,078,387)、重组腺病毒构建体、重组慢病毒构建体、重组逆转录病毒构建体、非整合病毒载体等。
合适的表达载体包括但不限于病毒载体(例如基于以下的病毒载体：牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；腺病毒(参见，例如li等人,investopthalmolvissci35:25432549,1994；borras等人,genether6:515524,1999；li和davidson,pnas92:77007704,1995；sakamoto等人,hgenether5:10881097,1999；wo94/12649；wo93/03769；wo93/19191；wo94/28938；wo95/11984以及wo95/00655))；腺伴随病毒(参见，例如ali等人,humgenether9:8186,1998；flannery等人,pnas94:69166921,1997；bennett等人,investopthalmolvissci38:28572863,1997；jomary等人,genether4:683690,1997；rolling等人,humgenether10:641648,1999；ali等人,hummolgenet5:591594,1996；srivastava的wo93/09239；samulski等人,j.vir.(1989)63:3822-3828；mendelson等人,virol.(1988)166:154-165；以及flotte等人,pnas(1993)90:10613-10617)；sv40；单纯疱疹病毒；人免疫缺陷病毒(参见，例如miyoshi等,pnas94:1031923,1997；takahashi等,jvirol73:78127816,1999)；逆转录病毒载体(例如，鼠白血病病毒、脾坏死病毒和源自如劳斯肉瘤病毒、哈维肉瘤病毒的逆转录病毒的载体、禽白血病病毒、慢病毒、人免疫缺陷病毒、骨髓增生肉瘤病毒以及乳腺肿瘤病毒)等。
众多合适的表达载体为本领域技术人员已知并且许多为可商购获得的。通过实例的方式对于真核宿主细胞提供以下载体：pxt1、psg5(stratagene)、psvk3、pbpv、pmsg以及psvlsv40(pharmacia)。然而，可使用任何其他载体，只要所述载体与宿主细胞相容。
取决于所使用的宿主/载体系统，可在表达载体中使用任何许多合适的转录和翻译控制元件，包括组成型和诱导型启动子、转录增强子元件、转录终止子等(参见，例如bitter等人(1987)methodsinenzymology,153:516-544)。
在一些实施方案中，编码靶向dna的rna和/或定点修饰多肽的核苷酸序列可操作地连接至控制元件，例如转录控制元件，如启动子。转录控制元件可在真核细胞(例如，哺乳动物细胞)或原核细胞(例如，细菌或古细菌细胞)中起作用。在一些实施方案中，编码靶向dna的rna和/或定点修饰多肽的核苷酸序列可操作地连接至允许编码靶向dna的rna和/或定点修饰多肽的核苷酸序列在原核细胞和真核细胞中表达的多个控制元件。
合适的真核启动子(在真核细胞中起作用的启动子)的非限制性实例包括来自巨细胞病毒(cmv)立即早期、单纯疱疹病毒(hsv)胸苷激酶、早期和晚期sv40、逆转录病毒的长末端重复序列(ltr)以及小鼠金属硫蛋白-i的那些启动子。选择适当的载体和启动子在本领域普通技术人员的水平内。表达载体还可含有用于翻译起始的核糖体结合位点和转录终止子。表达载体还可包括用于扩增表达的适当序列。
遗传修饰的宿主细胞
本公开提供了一种遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞用本公开的核酸进行遗传修饰。
合适的宿主细胞包括真核细胞，如酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。在一些情况下，所述宿主细胞是哺乳动物细胞系的细胞。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系、非人灵长类动物细胞系、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)细胞系等。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于hela细胞(例如，美国典型培养物保藏所(atcc)号ccl-2)、cho细胞(例如，atcc号crl9618、ccl61、crl9096)、293细胞(例如，atcc号crl-1573)、vero细胞、nih3t3细胞(例如，atcc号crl-1658)、huh-7细胞、bhk细胞(例如，atcc号ccl10)、pc12细胞(atcc号crl1721)、cos细胞、cos-7细胞(atcc号crl1651)、rat1细胞、小鼠l细胞(atcc号ccli.3)、人胚肾(hek)细胞(atcc号crl1573)、hlhepg2细胞等。
在一些情况下，所述宿主细胞是已经遗传修饰以使得其不合成内源性mhcβ2-m的哺乳动物细胞。
产生多聚体多肽的方法
本公开提供了产生本公开的多聚体多肽的方法。所述方法通常涉及在培养基中培养用包含编码多聚体多肽的核苷酸序列的重组表达载体进行遗传修饰的宿主细胞；以及从所述遗传修饰的宿主细胞和/或所述培养基中分离所述多聚体多肽。用包含编码多聚体多肽的核苷酸序列的重组表达载体进行遗传修饰的宿主细胞也称为“表达宿主”。如上所述，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的单独多肽链在单独的重组表达载体中编码。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的所有多肽链都在单一重组表达载体中编码。
可使用标准蛋白质纯化方法来从表达宿主细胞(例如，从表达宿主细胞的溶解产物)和/或培养所述宿主细胞的培养基中分离多聚体多肽。
例如，可由表达宿主制备溶解产物，并且使用高效液相色谱法(hplc)、排阻色谱法、凝胶电泳、亲和色谱法或其他纯化技术来纯化溶解产物。或者，当多聚体多肽从表达宿主细胞分泌到培养基中时，可使用hplc、排阻色谱法、凝胶电泳、亲和色谱法或其他纯化技术从培养基中纯化多聚体多肽。在一些情况下，所使用的组合物包含相对于与产物制备及其纯化的方法相关的污染物至少80重量％的所需产物、至少约85重量％、至少约95重量％或至少约99.5重量％。所述百分比可基于总蛋白质。
在一些情况下，例如，在多聚体多肽包含亲和标签的情况下，可使用所述亲和标签的固定化结合配偶体来纯化多聚体多肽。
组合物
本公开提供了组合物，包括药物组合物，所述组合物包含本公开的变体cd80多肽。本公开提供了组合物，包括药物组合物，所述组合物包含本公开的多聚体多肽。本公开提供了组合物，包括药物组合物，所述组合物包含本公开的核酸或重组表达载体。
包含多聚体多肽的组合物
本公开的组合物可包含除了本公开的多聚体多肽以外的以下中的一种或多种：盐，例如nacl、mgcl2、kcl、mgso4等；缓冲剂，例如tris缓冲液、n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-(2-乙磺酸)(hepes)、2-(n-吗啉代)乙磺酸(mes)、2-(n-吗啉代)乙磺酸钠盐(mes)、3-(n-吗啉代)丙磺酸(mops)、n-三[羟甲基]甲基-3-氨基丙磺酸(taps)等；增溶剂；去污剂，例如非离子型去污剂如吐温-20等；蛋白酶抑制剂；甘油等。
所述组合物可包含药学上可接受的赋形剂，各种药学上可接受的赋形剂是本领域已知的并且无需在本文中详细讨论。药学上可接受的赋形剂已充分描述于多种出版物中，所述出版物包括例如“remington:thescienceandpracticeofpharmacy”,第19版(1995),或最新版本,mackpublishingco；a.gennaro(2000)"remington:thescienceandpracticeofpharmacy",第20版,lippincott,williams,&wilkins；pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems(1999)h.c.ansel等人编,第7版,lippincott,williams,&wilkins；以及handbookofpharmaceuticalexcipients(2000)a.h.kibbe等人编,第3版amer.pharmaceuticalassoc。
药物组合物可包含本公开的多聚体多肽和药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，主题药物组合物将适于施用至受试者，例如将是无菌的。例如，在一些实施方案中，例如当主题药物组合物为无菌的并且不含可检测的热原和/或其他毒素时，所述组合物将适于施用至人受试者。
蛋白质组合物可包含其他组分，如药物级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。所述组合物可含有模拟生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如ph调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如，乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠、盐酸盐、硫酸盐、溶剂化物(例如，混合离子盐、水、有机物)、水合物(例如，水)等。
例如，组合物可包括水溶液、粉末形式、颗粒、片剂、丸剂、栓剂、胶囊、悬浮液、喷雾剂等。可根据下文描述的各种施用途径来配制组合物。
当本公开的多聚体多肽作为可注射剂(例如皮下、腹膜内、肌内和/或静脉内)直接施用到组织中时，制剂可作为可立即使用的剂型提供，或者作为非水性形式(例如可重构的储存稳定的粉末)或水性形式(如由药学上可接受的载体和赋形剂组成的液体)提供。还可提供含蛋白质的制剂，以便在施用后增强主题蛋白质的血清半衰期。例如，蛋白质可以脂质体制剂形式提供，制备成胶体，或用于延长血清半衰期的其他常规技术。多种方法可用于制备脂质体，如在例如szoka等人1980ann.rev.biophys.bioeng.9:467、美国专利号4,235,871、4,501,728和4,837,028中所描述。所述制剂也可以控释或缓释形式提供。
适于肠胃外施用的制剂的其他实例包括等渗无菌注射溶液、抗氧化剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质、悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂以及防腐剂。例如，主题药物组合物可存在于容器，例如无菌容器，如注射器中。所述制剂可以单剂量或多剂量密封容器，如安瓿和小瓶形式呈现，并且可储存于冷冻干燥(冻干)的条件下，仅需在使用前即刻添加无菌液体赋形剂(例如水)以供注射。临时注射溶液和悬浮液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
制剂中本公开的多聚体多肽的浓度可广泛变化(例如，从小于约0.1重量％，通常在或至少约2重量％至多至20重量％至50重量％或更多)并且将通常根据所选择的特定施用方式和患者的需要，主要基于流体体积、粘度和基于患者的因素来选择。
本公开提供了一种容器，所述容器包括本公开的组合物，例如液体组合物。所述容器可以是例如注射器、安瓿等。在一些情况下，所述容器是无菌的。在一些情况下，所述容器和组合物两者均是无菌的。
本公开提供了组合物，包括药物组合物，所述组合物包含本公开的变体cd80多肽。组合物可包含：a)本公开的变体cd80多肽；和b)赋形剂，如上文针对多聚体多肽所描述。在一些情况下，所述赋形剂是药学上可接受的赋形剂。
包含核酸或重组表达载体的组合物
本公开提供了组合物，例如药物组合物，所述组合物包含本公开的核酸或重组表达载体。多种多样的药学上可接受的赋形剂在本领域中是已知的且无需在本文中详细论述。药学上可接受的赋形剂已充分描述于多种出版物中，所述出版物包括例如a.gennaro(2000)"remington:thescienceandpracticeofpharmacy",第20版,lippincott,williams,&wilkins；pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems(1999)h.c.ansel等编,第7版,lippincott,williams,&wilkins；以及handbookofpharmaceuticalexcipients(2000)
a.h.kibbe等编,第3版amer.pharmaceuticalassoc。
本公开的组合物可包含：a)主题核酸或重组表达载体；和b)以下中的一种或多种：缓冲剂、表面活性剂、抗氧化剂、亲水性聚合物、糊精、螯合剂、悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、抑菌剂、润湿剂以及防腐剂。合适的缓冲剂包括但不限于(如n,n-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(bes)、双(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷(bis-tris)、n-(2-羟乙基)哌嗪-n'3-丙磺酸(epps或hepps)、甘氨酰甘氨酸、n-2-羟乙基哌嗪-n'-2-乙磺酸(hepes)、3-(n-吗啉代)丙磺酸(mops)、哌嗪-n,n'-双(2-乙烷-磺酸)(pipes)、碳酸氢钠、3-(n-三(羟甲基)-甲基-氨基)-2-羟基-丙磺酸)tapso、(n-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(tes)、n-三(羟甲基)甲基-甘氨酸(tricine)、三(羟甲基)-氨基甲烷(tris)等)。合适的盐包括例如，nacl、mgcl2、kcl、mgso4等。
本公开的药物制剂可包含约0.001％至约90％(w/w)的量的本公开的核酸或重组表达载体。在下文的制剂描述中，“主题核酸或重组表达载体”应理解为包括本公开的核酸或重组表达载体。例如，在一些实施方案中，主题制剂包含本公开的核酸或重组表达载体。
可将主题核酸或重组表达载体与其他化合物或化合物的混合物混合、包封、缀合或以其他方式缔合；此类化合物可包括例如脂质体或受体靶向分子。主题核酸或重组表达载体可与一种或多种有助于摄取、分布和/或吸收的组分组合在制剂中。
主题核酸或重组表达载体组合物可被配制成任何许多可能的剂型，如但不限于片剂、胶囊、凝胶胶囊、液体糖浆剂、软凝胶、栓剂以及灌肠剂。主题核酸或重组表达载体组合物也可被配制成水性、非水性或混合介质中的悬浮液。水性悬浮液还可包含增加该悬浮液的粘度的物质，这样的物质包括例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。所述悬浮液还可含有稳定剂。
包含主题核酸或重组表达载体的制剂可以是脂质体制剂。如本文所用，术语“脂质体”是指由以一个或多个球形双层形式排列的两性脂质构成的囊泡。脂质体是具有由亲脂性材料形成的膜和含有待递送的组合物的水性内部的单层或多层囊泡。阳离子脂质体是可与带负电荷的dna分子相互作用以形成稳定复合物的带正电荷的脂质体。认为ph值敏感性或带负电荷的脂质体囊封dna而非与其复合。阳离子脂质体和非阳离子脂质体两者均可用于递送主题核酸或重组表达载体。
脂质体还包括“空间稳定的”脂质体，其是如本文所用的指包含一种或多种专门化脂质的脂质体的术语，当并入脂质体中时所述脂质导致相对于缺少此类专门化脂质的脂质体而言的增加的循环寿命。空间稳定脂质体的实例是脂质体的囊泡形成脂质部分中的一部分包含一种或多种糖脂或者利用一种或多种亲水性聚合物(如聚乙二醇(peg)部分)衍生化的脂质体。脂质体及其用途进一步描述于美国专利号6,287,860中，所述美国专利以引用的方式整体并入本文。
本公开的制剂和组合物还可包含表面活性剂。表面活性剂在药品、制剂和乳液中的使用在本领域中是熟知的。表面活性剂及其用途进一步描述于美国专利号6,287,860中。
在一个实施方案中，包含各种渗透增强剂以实现核酸的有效递送。除了帮助非亲脂药物扩散穿过细胞膜以外，渗透增强剂还增强亲脂药物的渗透性。渗透增强剂可归类为属于以下物种广泛类别中的一种：即，表面活性剂、脂肪酸、胆汁盐、螯合剂和非螯合非表面活性剂。渗透增强剂及其用途进一步描述于美国专利号6,287,860中，所述美国专利以引用的方式整体并入本文。
用于口服施用的组合物和制剂包括粉末或颗粒、微粒、纳米颗粒、于水或非水性介质中的悬浮液或溶液、胶囊、凝胶胶囊、囊剂、片剂或小片剂。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或结合剂可为需要的。合适的口服制剂包括其中主题反义核酸与一种或多种渗透增强剂、表面活性剂和螯合剂结合施用的那些。合适的表面活性剂包括但不限于脂肪酸和/或其酯或盐、胆汁酸和/或其盐。合适的胆汁酸/盐和脂肪酸及其用途进一步描述于美国专利号6,287,860中。同样合适的是渗透增强剂(例如脂肪酸/盐)与胆汁酸/盐组合的组合。一种示例性的合适组合是月桂酸、癸酸和udca的钠盐。其他渗透增强剂包括但不限于聚氧乙烯-9-月桂基醚和聚氧乙烯-20-鲸蜡醚。合适的渗透增强剂还包括丙二醇、二甲亚砜、三乙醇胺、n,n-二甲基乙酰胺、n,n-二甲基甲酰胺、2-吡咯烷酮及其衍生物、四氢糠醇以及azonetm。
调节t细胞活性的方法
本公开提供了一种选择性地调节表位特异性t细胞的活性的方法，所述方法包括使所述t细胞与本公开的多聚体多肽接触，其中使所述t细胞与本公开的多聚体多肽接触选择性地调节所述表位特异性t细胞的活性。在一些情况下，所述接触在体外发生。在一些情况下，所述接触在体内发生。在一些情况下，所述接触离体发生。
在一些情况下，例如，当靶t细胞是cd8+t细胞时，所述多聚体多肽包含i类mhc多肽(例如，β2-微球蛋白和i类mhc重链)。在一些情况下，例如，当靶t细胞是cd4+t细胞时，所述多聚体多肽包含ii类mhc多肽(例如，ii类mhcα链；ii类mhcβ链)。
当本公开的多聚体多肽包含为活化多肽的免疫调节多肽时，使t细胞与多聚体多肽接触活化表位特异性t细胞。在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对癌细胞上存在的表位具有特异性的t细胞，并且使所述表位特异性t细胞与多聚体多肽接触增加t细胞针对癌细胞的细胞毒性活性。在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对癌细胞上存在的表位具有特异性的t细胞，并且使所述表位特异性t细胞与多聚体多肽接触增加所述表位特异性t细胞的数量。
在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对病毒感染的细胞上存在的表位具有特异性的t细胞，并且使所述表位特异性t细胞与多聚体多肽接触增加t细胞针对所述病毒感染的细胞的细胞毒性活性。在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对病毒感染的细胞上存在的表位具有特异性的t细胞，并且使所述表位特异性t细胞与多聚体多肽接触增加所述表位特异性t细胞的数量。
当本公开的多聚体多肽包含为抑制性多肽的免疫调节多肽时，使t细胞与多聚体接触抑制表位特异性t细胞。在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对自身抗原中存在的表位具有特异性的自身反应性t细胞，并且所述接触降低自身反应性t细胞的数量。
治疗方法
本发明提供了一种选择性地调节个体中的表位特异性t细胞的活性的方法，所述方法包括向所述个体施用可有效选择性地调节个体中的表位特异性t细胞的活性的量的本公开的多聚体多肽或一种或多种编码所述多聚体多肽的核酸。在一些情况下，本公开的治疗方法包括向有此需要的个体施用一种或多种重组表达载体，所述重组表达载体包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列。在一些情况下，本公开的治疗方法包括向有需要的个体施用一种或多种mrna分子，所述mrna分子包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列。在一些情况下，本公开的治疗方法包括向有需要的个体施用本公开的多聚体多肽。
本公开提供了一种选择性地调节个体中的表位特异性t细胞的活性的方法，所述方法包括向个体施用有效量的本公开的多聚体多肽或一种或多种核酸(例如，表达载体；mrna等)，所述核酸包含编码所述多聚体多肽的核苷酸序列，其中所述多聚体多肽选择性地调节所述个体中的表位特异性t细胞的活性。选择性地调节表位特异性t细胞的活性可治疗个体的疾病或病症。因此，本公开提供了一种治疗方法，所述治疗方法包括向有需要的个体施用有效量的本公开的多聚体多肽。
在一些情况下，免疫调节多肽是活化多肽，并且所述多聚体多肽活化表位特异性t细胞。在一些情况下，所述表位是癌症相关表位，并且所述多聚体多肽增加对所述癌症相关表位具有特异性的t细胞的活性。
本公开提供了一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向个体施用有效量的本公开的多聚体多肽或一种或多种核酸(例如，表达载体；mrna等)，所述核酸包含编码所述多聚体多肽的核苷酸序列，其中所述多聚体多肽包含为癌症表位的t细胞表位，并且其中所述多聚体多肽包含刺激性免疫调节多肽。在一些情况下，多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时减少所述个体中的癌细胞的数量的量。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，与在施用所述多聚体多肽之前或在不施用所述多聚体多肽的情况下所述个体中的癌细胞的数量相比，使所述个体中的癌细胞的数量减少至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的量。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时使个体中的癌细胞的数量减少至不可检测水平的量。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时降低所述个体中的肿瘤质量的量。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，与在施用所述多聚体多肽之前或在不施用所述多聚体多肽的情况下所述个体中的肿瘤质量(或肿瘤体积)相比，使所述个体中的肿瘤质量(或肿瘤体积)降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的量。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时增加所述个体的存活时间的量。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，与不施用所述多聚体多肽的个体的预期存活时间相比，使所述个体的存活时间增加至少1个月、至少2个月、至少3个月、3个月至6个月、6个月至1年、1年至2年、2年至5年、5年至10年或超过10年的量。
在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对病毒感染的细胞上存在的表位具有特异性的t细胞，并且使所述表位特异性t细胞与多聚体多肽接触增加t细胞针对所述病毒感染的细胞的细胞毒性活性。在一些情况下，所述表位特异性t细胞是对病毒感染的细胞上存在的表位具有特异性的t细胞，并且使所述表位特异性t细胞与多聚体多肽接触增加所述表位特异性t细胞的数量。
因此，本公开提供了一种治疗个体中的病毒感染的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的本公开的多聚体多肽或一种或多种包含编码所述多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，其中所述多聚体多肽包含为病毒表位的t细胞表位，并且其中所述多聚体多肽包含刺激性免疫调节多肽。在一些情况下，多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时减少所述个体中的病毒感染的细胞的数量的量。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，与在施用所述多聚体多肽之前或在不施用所述多聚体多肽的情况下所述个体中的病毒感染的细胞的数量相比，使所述个体中的病毒感染的细胞的数量减少至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的量。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时使个体中的病毒感染的细胞的数量减少至不可检测水平的量。
因此，本公开提供了一种治疗个体中的感染的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的本公开的多聚体多肽或一种或多种包含编码所述多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，其中所述多聚体多肽包含为病原体相关表位的t细胞表位，并且其中所述多聚体多肽包含刺激性免疫调节多肽。在一些情况下，多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时减少所述个体中的病原体的数量的量。例如，在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，与在施用所述多聚体多肽之前或在不施用所述多聚体多肽的情况下所述个体中的病原体的数量相比，使所述个体中的病原体的数量减少至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的量。在一些情况下，本公开的多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时使个体中的病原体的数量减少至不可检测水平的量。病原体包括病毒、细菌、原生动物等。
在一些情况下，所述免疫调节多肽是抑制性多肽，并且所述多聚体多肽抑制所述表位特异性t细胞的活性。在一些情况下，所述表位是自身表位，并且所述多聚体多肽选择性地抑制对所述自身表位具有特异性的t细胞的活性。
本公开提供了一种治疗个体中的自身免疫病症的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的本公开的多聚体多肽或一种或多种包含编码所述多聚体多肽的核苷酸序列的核酸，其中所述多聚体多肽包含为自身表位的t细胞表位，并且其中所述多聚体多肽包含抑制性免疫调节多肽。在一些情况下，多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，与在施用所述多聚体多肽之前或在不施用所述多聚体多肽的情况下所述个体中的自身反应性t细胞的数量相比，使自身反应性t细胞的数量减少至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的量。在一些情况下，多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时减少所述个体中的th2细胞因子的产生的量。在一些情况下，多聚体多肽的“有效量”是当以一个或多个剂量施用至有需要的个体时，改善所述个体中与自身免疫疾病相关的一种或多种症状的量。
如上所述，在一些情况下，在实施主题治疗方法中，将本公开的多聚体多肽作为多肽本身施用至有需要的个体。在其他情况下，在实施主题治疗方法中，将一种或多种包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列的核酸施用至有需要的个体。因此，在其他情况下，将本公开的一种或多种核酸，例如本公开的一种或多种重组表达载体施用至有需要的个体。
制剂
在上文描述了合适的制剂，其中合适的制剂包含药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，合适的制剂包含：a)本公开的多聚体多肽；和b)药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，合适的制剂包含：a)核酸，所述核酸包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列；和b)药学上可接受的赋形剂；在一些情况下，所述核酸是mrna。在一些情况下，合适的制剂包含：a)第一核酸，所述第一核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽的核苷酸序列；b)第二核酸，所述第二核酸包含编码本公开的多聚体多肽的第二多肽的核苷酸序列；以及c)药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，合适的制剂包含：a)重组表达载体，所述重组表达载体包含编码本公开的多聚体多肽的核苷酸序列；和b)药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，合适的制剂包含：a)第一重组表达载体，所述第一重组表达载体包含编码本公开的多聚体多肽的第一多肽的核苷酸序列；b)第二重组表达载体，所述第二重组表达载体包含编码本公开的多聚体多肽的第二多肽的核苷酸序列；以及c)药学上可接受的赋形剂。
在上文描述了合适的药学上可接受的赋形剂。
剂量
合适的剂量可由主治医师或其他合格的医务人员基于各种临床因素而确定。如在医学领域中众所周知，用于任一个患者的剂量取决于许多因素，包括患者的大小、体表面积、年龄、待施用的具体多肽或核酸、患者的性别、施用时间和途径、一般健康状况以及目前正在施用的其他药物。本公开的多聚体多肽可以每个剂量介于1ng/kg体重与20mg/kg体重之间，例如介于0.1mg/kg体重至10mg/kg体重之间，例如介于0.5mg/kg体重至5mg/kg体重之间的量施用；然而，设想低于或高于此示例性范围的剂量，特别是考虑到上述因素。如果方案是连续输注，那么其也可在每分钟每千克体重1μg至10mg的范围内。
在一些情况下，本公开的多聚体多肽的合适剂量是0.01μg至100g/kg体重、0.1μg至10g/kg体重、1μg至1g/kg体重、10μg至100mg/kg体重、100μg至10mg/kg体重或100μg至1mg/kg体重。本领域的普通技术人员可基于所测量的施用的药剂在体液或组织中的滞留时间和浓度容易地估算出给药的重复率。在成功治疗后，可能希望使患者进行维持疗法以预防疾病状态的复发，其中本公开的多聚体多肽以维持剂量施用，所述维持剂量在0.01μg至100g/kg体重、0.1μg至10g/kg体重、1μg至1g/kg体重、10μg至100mg/kg体重、100μg至10mg/kg体重或100μg至1mg/kg体重的范围内。
技术人员将易于了解剂量水平可随特定多聚体多肽、症状的严重程度和受试者对副作用的敏感性而变。给定化合物的优选剂量可由本领域的技术人员通过多种方式容易地确定。
在一些实施方案中，施用多剂量的本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体的施用频率可根据多种因素(例如症状的严重程度等)中的任一种而变化。例如，在一些实施方案中，每月一次、每月两次、每月三次、每隔一周(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一天(qod)、每天(qd)、每天两次(qid)或每天三次(tid)施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。
本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体的施用持续时间，例如，施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体的时间段可根据多种因素(例如患者反应等)中的任一种而变化。例如，可在约一天至约一周、约两周至约四周、约一个月至约两个月、约两个月至约四个月、约四个月至约六个月、约六个月至约八个月、约八个月至约1年、约1年至约2年或约2年至约4年或更长范围内的时间段内施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。
施用途径
使用适合于药物递送的任何可用的方法和途径(包括体内和离体方法以及全身和局部施用途径)来将活性剂(本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体)施用至个体。
常规和药学上可接受的施用途径包括肿瘤内、肿瘤周围、肌内、气管内、颅内、皮下、皮内、局部施加、静脉内、动脉内、直肠、鼻、口服和其他肠内和肠胃外施用途径。如果需要，可将施用途径组合，或根据多聚体多肽和/或所需作用进行调整。可以单剂量或多剂量施用本公开的多聚体多肽或本公开的核酸或重组表达载体。
在一些实施方案中，静脉内施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。在一些实施方案中，肌内施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。在一些实施方案中，局部施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。在一些实施方案中，肿瘤内施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。在一些实施方案中，肿瘤周围施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。在一些实施方案中，颅内施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。在一些实施方案中，皮下施用本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体。
在一些实施方案中，静脉内施用本公开的多聚体多肽。在一些实施方案中，肌内施用本公开的多聚体多肽。在一些实施方案中，局部施用本公开的多聚体多肽。在一些实施方案中，肿瘤内施用本公开的多聚体多肽。在一些实施方案中，肿瘤周围施用本公开的多聚体多肽。在一些实施方案中，颅内施用本公开的多聚体多肽。在一些实施方案中，皮下施用多聚体多肽。
可使用任何可用的常规方法和适于递送常规药物的途径(包括全身或局部途径)将本公开的多聚体多肽，本公开的核酸或本公开的重组表达载体施用至宿主。通常，本发明所考虑的施用途径包括但不必限于肠内、肠胃外或吸入途径。
除了吸入施用以外的肠胃外施用途径包括但不必限于局部、透皮、皮下、肌内、眶内、囊内、脊柱内、胸骨内、肿瘤内、肿瘤周围和静脉内途径，即除了通过消化道以外的任何施用途径。可进行肠胃外施用以实现本公开的多聚体多肽、本公开的核酸或本公开的重组表达载体的全身或局部递送。当希望全身性递送时，施用通常涉及药物制剂的侵入性或全身性吸收的局部或粘膜施用。
适于治疗的受试者
适于用本公开的方法治疗的受试者包括患有癌症的个体，包括已被诊断为患有癌症的个体、已针对癌症治疗但未能对所述治疗有反应的个体以及已针对癌症治疗并且最初有反应、但随后对所述治疗变得难治的个体。适于用本公开的方法治疗的受试者包括具有感染的个体(例如，病原体感染，如细菌、病毒、原生动物等)，包括已被诊断为具有感染的个体和已针对感染治疗但未能对所述治疗有反应的个体。适于用本公开的方法治疗的受试者包括具有细菌感染的个体，包括已被诊断为具有细菌感染的个体，以及已针对细菌感染治疗但未能对所述治疗有反应的个体。适于用本公开的方法治疗的受试者包括具有病毒感染的个体，包括已被诊断为具有病毒感染的个体，以及已针对病毒感染治疗但未能对所述治疗有反应的个体。适于用本公开的方法治疗的受试者包括患有自身免疫疾病的个体，包括已被诊断患有自身免疫疾病的个体，以及已针对自身免疫疾病治疗但未能对所述治疗有反应的个体。
实施例
提出以下实施例以便向本领域的普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完全公开和说明，并且不意图限制本发明人看待其发明的范围，也不意图表示以下实验是进行的全部或仅有的实验。虽然已尽力确保所用数字(例如量、温度等)的准确性，但仍应考虑一些实验误差和偏差。除非另外指明，否则份数是重量份，分子量是重均分子量，温度以摄氏度计，并且压力在大气压下或接近大气压。可使用标准缩写，例如，bp，碱基对；kb，千碱基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对；nt，核苷酸；i.m.，肌内的(肌内地)；i.p.，腹膜内的(腹膜内地)；s.c.，皮下的(皮下地)等。
实施例1：具有变体cd80的syntac多肽的产生和表征
产生了syntac多聚体多肽，其中使第一多肽(“syn289”)与第二多肽(“syn290”、“syn291”、“syn292”、“syn293”、“syn294”、“syn295”或“syn296”)异二聚化。
syn289从n-末端至c-末端依次包含：a)卵白蛋白(ova)t细胞表位；b)β2m多肽。
syntac的第二多肽包含mhci类重链；因此，所述第二多肽被称为syntac的“重链”(h链)。第二多肽从n-末端至c-末端依次包含：a)cd80胞外结构域；b)mhci类重链；以及c)igg2afc多肽。存在于syn290中的cd80胞外结构域多肽是野生型cd80胞外结构域(seqidno:1)。存在于syn291、syn292、syn293、syn294、syn295和syn296中的cd80胞外结构域多肽与野生型cd80胞外结构域相比包含单个氨基酸取代。所述单个氨基酸取代列于表1中。
表1
第一和第二多肽链经由所述第一多肽的β2m多肽中的cys-12和所述第二多肽的mhci类重链的cys-236彼此二硫键连接。
将所得syntac异二聚体在体外与卵白蛋白特异性t细胞一起在0、1、3.17、10.01、31.65和100nmsyntac的浓度下培养3天。对照包括：a)单独培养基；b)佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma)和离子载体a23187；c)抗cd3抗体和抗cd28抗体。
在3天后，测定培养基中ifn-γ、il-2、il-6和tnf的浓度。此外，测定卵白蛋白特异性t细胞的存活力和卵白蛋白特异性t细胞的增殖。
数据描绘于图14至图19中。
如图14至图19中所示，包含变体cd80多肽的syntac多肽诱导il-2(细胞适应性细胞因子)的产生；诱导细胞毒性细胞因子tnfα和ifn-γ的产生；并且还诱导表位特异性t细胞的增殖并增强其存活力。
实施例2：cd80/syntac的体内作用
将包含人乳头瘤病毒(hpv)e7抗原肽和本公开的cd80k86a变体(在图20中称为“cue:cd80(k86a)”)的syntac以2.5mg/kg通过腹膜内(ip)注射到带有侧腹移植的hpv+tc-1肺癌的小鼠中而施用。作为对照，将磷酸盐缓冲盐水(pbs)施用至携带相同肿瘤的小鼠。如图20中所示，与用pbs处理的小鼠相比，用cue:cd80(k86a)处理的小鼠的肿瘤体积减小。
虽然本发明已经参考其特定实施方案进行了描述，但是本领域技术人员应理解，可在不脱离本发明的真实精神和范围下进行各种变化且可取代等效物。此外，可进行许多修改以使特定情况、材料、物质组成、方法、一个或多个方法步骤适于本发明的目标、精神和范围。所有此类修改均意图处于所附权利要求的范围内。
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