本发明属微生物领域，具体是涉及一种用于缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应的植物乳杆菌及其应用。
背景技术：
食物过敏主要是指过敏原进入人体后，机体对之产生异常免疫反应，导致机体生理功能的紊乱和(或)组织损伤，进而引发一系列临床症状。容易引起食物过敏的食品主要有8种，它们是花生、牛奶、鸡蛋、面粉、黄豆、果仁、鱼以及水生贝壳类动物食品等，多数为高蛋白食品。其中β-乳球蛋白是婴儿牛乳过敏症的主要致敏原蛋白，可引起婴幼儿胃肠道疾病，诱发皮炎或哮喘等疾病，严重影响人们生活质量。牛乳过敏严重危害儿童健康，已引起了全球的广泛关注。目前对食物过敏的治疗策略仍以排除致敏食物为主，但该方法效果欠佳,会在很大程度上限制婴儿或儿童的营养摄入。
植物乳杆菌作为肠道革兰氏阳性益生菌，可调节肠道菌群平衡，促进肠道免疫系统成熟，维持机体的免疫平衡，其所特有的免疫调节作用可能对防治包括食物过敏在内的一些过敏性疾病具有一定作用。
本发明的申请人之前分离到的植物乳杆菌zdy2013于2014年4月28日保存于武汉市中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccm2014170。并发明该植物乳杆菌zdy2013极耐酸耐胆盐，能在胃肠液中保持较高的存活率，并能抑制食源性致病菌的增长。此外，还能调节肠道菌群多样性，改善宿主胃肠道健康，但是，鉴于胃肠道疾病的复杂性和多样性，所述植物乳杆菌zdy2013在具体胃肠道疾病的治疗功能还一无所知。
技术实现要素：
本发明的目的之一是提供植物乳杆菌zdy2013的新应用。
为实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：
一种用于缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应乳杆菌及其应用，其活性成分为植物乳杆菌zdy2013，于2014年4月28日保存于武汉市中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctccm2014170。
一种用于缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应乳杆菌及其应用：其应用于制备药物、保健品、或食品方面。
一种用于缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应乳杆菌及其应用：所述食品为饮料、酸奶、或果冻。
一种用于缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应乳杆菌及其应用：所述制备药物、保健品、或食品采用的植物乳杆菌菌剂剂量为1×1010cfu/kg。
一种用于缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应乳杆菌及其应用：具体的制备方法为：
(1)植物乳杆菌zdy2013在mrs液体培养基37±1℃厌氧培养24±2h，得到达到稳定期的菌体，所述植物乳杆菌zdy2013的保藏号为cctccm2014170；
(2)离心收集步骤(1)中菌体，用无菌1×pbs洗涤2-4次；
(3)用无菌1×pbs调整步骤2)所得菌体浓度到1-2×109cfu/ml；
(4)向上述所得菌体中加入适宜辅料制成的药物或食物或保健品。
本发明的有益效果：
本发明的发明人对之前所获得的植物乳杆菌zdy2013经过大量的研究，发现所述植物乳杆菌zdy2013具有缓解β-乳球蛋白诱导的过敏反应，调节机体的免疫应答，维持机体的免疫平衡，提高肠道屏障功能，改善过敏的表观症状，有效缓解β-乳球蛋白诱导的过敏性疾病。
附图说明
图1不同组血清ige含量的变化。
图2不同组小鼠结肠组织he染色切片。
图3不同组小鼠转录调控因子表达。
图4不同组小鼠肠道屏障相关蛋白表达。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例，相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如sambrook等人，分子克隆：实验室手册(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1
菌体的活化
将保存于甘油中的植物乳杆菌zdy2013旋涡混匀后吸取10μl涂布于mrs固体培养基中，37℃厌氧培养24h，挑取单菌落接种于4ml液体mrs培养基中，37℃厌氧培养24h，按1％接种量接种于10mlmrs液体培养基中，37℃厌氧培养24h，达到稳定期。
mrs培养基配制：蛋白胨5g/l，牛肉膏5g/l，胰蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，葡萄糖20g/l，无水乙酸钠5g/l，柠檬酸氢二胺2g/l，磷酸氢二钾2g/l，硫酸镁0.58g/l，硫酸锰0.25g/l，吐温-801ml/l，ph6.3±0.1，121℃、15分钟灭菌
实施例2
植物乳杆菌菌剂的制备
将活化好的处于稳定期的植物乳杆菌zdy2013离心，收集新鲜菌体，用无菌1×pbs洗涤3次，用无菌1×pbs调菌体浓度到109cfu/ml，制成实验所需菌剂，备用。
实施例3
β-乳球蛋白过敏小鼠模型的构建及实验设计
配制β-乳球蛋白过敏原，每隔一周腹腔注射一次过敏原，共免疫四次，每次0.2ml/只，构建致敏小鼠模型，同时在造模后的第二天开始灌胃植物乳杆菌zdy2013菌剂，按10ml/kg，每周给药4次，对致敏组小鼠灌胃pbs，治疗结束后，摘眼球取血并处死小鼠，剖取回肠末段及全结肠。生理盐水迅速冲干净，标本于10％福尔马林溶液浸泡，做he染色。剩余部分结肠保存至rna保护液，-80℃保存备用。
实验结果：
(1)本发明菌剂明显降低血清ige的含量
经过灌胃植物乳杆菌zdy2013菌剂治疗后，治疗组小鼠较致敏组小鼠血清ige的含量明显的降低，如说明书附图1所示，治疗结束后，益生菌菌剂治疗组小鼠血清ige的含量虽然没有降低至正常组的水平，但相较于致敏组有显著的降低。说明本发明可有效缓解因过敏引起的ige含量升高的问题。
(2)本发明菌剂显著改善小鼠病理学情况
将不同组小鼠结肠组织制成病理学切片，致敏组小鼠结肠组织与空白对照组进行对比，从说明书附图2可以看出，致敏组肠粘膜上层有部分损伤、部分杯状细胞的结构严重破坏。本发明组(植物乳杆菌菌剂治疗组)肠粘膜结构完整，无明显的炎性细胞浸润，隐窝结构比较完整。
说明了本发明菌剂可有效缓解β-乳球蛋白致敏小鼠的结肠组织炎症情况，具有提高肠道屏障的功效。
(3)本发明菌剂显著调节转录调控因子的表达
将保存于-80℃的结肠组织进行rna提取，反转录操作后，检测转录调控因子t-bet、gata-3的表达水平。
由说明书附图3可以看出，本发明组(植物乳杆菌组)小鼠较致敏组小鼠转录调控因子的表达水平得到显著调节，上调了th1相关转录调控因子t-bet表达水平，并下调了th2相关转录调控因子gata-3表达水平。说明了本发明菌剂可通过调节转录调控因子表达水平，维持机体th1/th2平衡，达到缓解过敏的目的。
(4)经过灌胃植物乳杆菌zdy2013菌剂治疗后，治疗组小鼠较致敏组小鼠相比肠道屏障相关的蛋白的表达水平有明显的改善，由说明书附图4可以看出，本发明组(植物乳杆菌组)小鼠较致敏组小鼠claudin-1和occludin-1的表达水平显著增加。说明本发明组(植物乳杆菌组)可通过提高肠道屏障功能，降低肠道通透性，达到减轻过敏反应的功效。
以上仅为本发明的具体实施例，并不以此限定本发明的保护范围；在不违反本发明构思的基础上所作的任何替换与改进，均属本发明的保护范围。