本发明属于生物化工领域，具体涉及一种从γ-氨基丁酸发酵液中高效除去谷氨酸的方法。
背景技术：
γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid，gaba)是哺乳动物体内主要的抑制性神经递质，具有多种生理功能，如安神、降血压和利尿等。可作为生物活性因子应用于食品、医药和饲料工业。已批准为新资源食品(卫生部2009年第12号公告)。也是合成2-吡咯烷酮和尼龙4的前体，在化工领域用途广泛。
乳酸菌是通常认为安全的微生物，与人和动物的生命活动息息相关，在食品、医药等领域具有重要地位。产gaba肠道乳酸菌据信通过肠-脑轴参与调控神经性疾病。gaba益生化合成逐步受到关注，是未来的发展方向。
然而，产gaba乳酸菌的筛选、gaba发酵过程优化与监测、产物分离等工作涉及大量繁复的测定工作；获得高纯度的产物，也是gaba发酵需要解决的问题。这些工作的共同点是，需要分离其中的底物谷氨酸。hplc、氨基酸分析仪和气相色谱等方法，在定量前需通过色谱柱对产物进行分离。
本发明提出了一种廉价、高效地去除发酵液中谷氨酸的新方法。本发明的核心是一种新型试剂的应用；以及基于该试剂的反复沉淀-溶解操作，使谷氨酸-gaba的相互作用逐步减弱，最终完全分离gaba与谷氨酸。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种从γ-氨基丁酸发酵液中高效除去谷氨酸的方法，以克服现有技术中的需要进行复杂、繁琐的测定工作。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种从γ-氨基丁酸发酵液中高效除去谷氨酸的方法，通过以下方法实现的：
1)第一轮沉淀：将2.85ml试剂a加入到0.15ml混合发酵液样品中，充分震荡混匀，室温静置2min，然后加入5μl试剂b，充分混合后静置3分钟沉淀谷氨酸，6000×g离心3min，回收上清液，有一些γ-氨基丁酸与谷氨酸发生了共沉淀；
2)第一轮溶解：在上述沉淀中加入75μl纯水，超声处理5min，使与谷氨酸共沉淀的γ-氨基丁酸完全溶解，大部分谷氨酸留在沉淀里面，仍然有少量谷氨酸与γ-氨基丁酸共同溶解出来，因此有必要再次对溶出液进行沉淀；
3)第二轮沉淀：先后加入2.925ml试剂a与5μl试剂b，操作方法同上述步骤1)，完全沉淀与gaba共溶解的谷氨酸，离心后，回收上清液，上清液中只含γ-氨基丁酸；谷氨酸得以完全沉淀，只有微量的γ-氨基丁酸与谷氨酸发生了共沉淀；
4)第二轮溶解：步骤3)中只有微量的γ-氨基丁酸与谷氨酸发生了共沉淀，为了保障γ-氨基丁酸完全溶出，且谷氨酸完全不溶出，本步骤在沉淀中加入1ml谷氨酸排斥试剂，所述排斥试剂为：试剂a：h2o,17:3(v/v)，超声处理2min，使γ-氨基丁酸完全溶解，而谷氨酸完全留在沉淀里面，离心回收上清液，丢弃沉淀。
所述试剂a为:乙醇:乙酸乙酯为2:1(v/v)；试剂b为1m醋酸锌水溶液。
本发明的有益效果：
1、本发明可以完全回收gaba，可以除去谷氨酸，涉及常规操作，采用普通易得的试剂，除谷氨酸效果好，效率达到100％；
2、无需经过hplc、氨基酸分析仪和气相色谱等测定中间步骤。
具体实施方案
实施例1
1)第一轮沉淀：将2.85ml试剂a加入到0.15ml混合发酵液样品中，充分震荡混匀，室温静置2min，然后加入5μl试剂b，充分混合后静置3分钟沉淀谷氨酸，6000×g离心3min，回收上清液，有一些γ-氨基丁酸与谷氨酸发生了共沉淀；
2)第一轮溶解：在上述沉淀中加入75μl纯水，超声处理5min，使与谷氨酸共沉淀的γ-氨基丁酸完全溶解，大部分谷氨酸留在沉淀里面，仍然有少量谷氨酸与γ-氨基丁酸共同溶解出来，因此有必要再次对溶出液进行沉淀；
3)第二轮沉淀：先后加入2.925ml试剂a与5μl试剂b，操作方法同上述步骤1)，完全沉淀与gaba共溶解的谷氨酸，离心后，回收上清液，上清液中只含γ-氨基丁酸；谷氨酸得以完全沉淀，只有微量的γ-氨基丁酸与谷氨酸发生了共沉淀；
4)第二轮溶解：步骤3)中只有微量的γ-氨基丁酸与谷氨酸发生了共沉淀，为了保障γ-氨基丁酸完全溶出，且谷氨酸完全不溶出，本步骤在沉淀中加入1ml谷氨酸排斥试剂，所述排斥试剂为：试剂a：h2o,17:3(v/v)，超声处理2min，使γ-氨基丁酸完全溶解，而谷氨酸完全留在沉淀里面，离心回收上清，丢弃沉淀。
所述试剂a为:乙醇:乙酸乙酯为2:1(v/v)；试剂b为1m醋酸锌水溶液。
将除去谷氨酸后的实施例1进行检测，检测其上清液的谷氨酸含量，γ-氨基丁酸的回收率，结果见表1
表1