一种制备雷酚新内酯和异雷酚新内酯的方法与流程

本发明属于医药化工领域，涉及天然产物的制备，具体涉及一种从雷公藤的根中制备活性天然产物的方法。

背景技术：

雷公藤(tripterygiumwilfordiihook.f.)系卫矛科雷公藤属木质藤本植物，又名黄腊、藤黄藤、断肠草、黄藤木等，分布于中国的南部及长江流域南和西南地区，除此之外韩国和日本也有分布，被用来治疗疼痛、关节痛、发烧、发热和炎症。

雷公藤二萜醌、雷公藤萜a、雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯为雷公藤根中的化学成分，其中，雷酚新内酯、异雷酚新内酯为结构非常接近的同分异构体，化学结构如下。

现有方法在制备上述化学成分时需要多次使用硅胶柱层析，步骤繁琐。

因此，有必要开发一种步骤简单、适于工业化生产的方法从雷公藤的根中分离纯化雷公藤二萜醌、雷公藤萜a、雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种从雷公藤的根中制备活性天然产物的方法。

本发明目的通过下述技术方案实现：

一种制备雷酚新内酯和异雷酚新内酯的方法，包括：

步骤1、总提取物的制备与脱脂

取雷公藤干燥根粉碎，用95％乙醇回流提取，抽滤，滤液减压浓缩至无醇味，等体积石油醚脱脂，收集水溶液。

步骤2、大孔树脂制备粗品

以nka-9大孔树脂为吸附树脂，采用湿法将预处理的树脂装入吸附柱中，将上述水溶液上样于nka-9大孔树脂，先用15％乙醇洗脱10个柱体积，再用68％乙醇洗脱，收集第13个柱体积的68％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥得混合粗品。

步骤3、混合粗品的hsccc分离纯化

应用高速逆流色谱分离纯化混合粗品中的雷酚新内酯和异雷酚新内酯，色谱条件如下：以体积比为8:7:7:6的正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂系统，以下相为固定相，上相为流动相，以等体积比的上相、下相混合溶剂为样品溶剂，转速850r/min，流速3ml/min，温度25℃，检测波长220nm；上样，根据色谱图收集雷酚新内酯、异雷酚新内酯对应的流份，分别浓缩干燥即得雷酚新内酯和异雷酚新内酯。

优选地，步骤1中，1kg雷公藤干燥根用95％乙醇25l回流提取3次，每次2h。

优选地，步骤2中，洗脱流速为8ml/min。

优选地，步骤3中，上样浓度10mg/ml。

优选地，步骤3中，上样量10ml。

有益的效果：

本发明方法制备的雷酚新内酯、异雷酚新内酯的纯度分别高达98.2％、98.7％；该方法对雷公藤干燥根中雷酚新内酯、异雷酚新内酯的制备回收率分别高达76.5％、93.6％。

附图说明

图1为雷公藤二萜醌和雷公藤萜a混合粗品的hsccc分离纯化色谱图；

图2为雷酚内酯、雷酚新内酯和异雷酚新内酯混合粗品的hsccc分离纯化色谱图。

具体实施方式

一、试验材料

收集卫矛科雷公藤属雷公藤tripterygiumwilfordiihook.f.的根，洗净阴干备用。

nka-9大孔树脂购于南开大学化工厂，预处理后备用。具体预处理方法为：用乙醇反复浸泡洗涤，直至乙醇洗出液透明无色，再依次用体积分数2％的盐酸和质量分数5％的氢氧化钠进行洗涤，最后用蒸馏水洗至中性。

hsccc-300c高速逆流色谱、tbp-5002恒压恒流泵、dc-0506低温恒温槽、tbd-2000紫外检测器均为上海同田生物技术股份有限公司产品。

二、试验方法和结果

1、总提取物的制备与脱脂

取雷公藤干燥根5kg粉碎，用95％乙醇25l回流提取3次，每次2h，抽滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，等体积石油醚脱脂3次，收集水溶液。

2、大孔树脂制备粗品

以nka-9大孔树脂为吸附树脂，采用湿法将预处理的树脂装入吸附柱中(树脂高100cm，柱内径为10cm)，以2ml/min的流速将上述水溶液上样于nka-9大孔树脂，先用15％乙醇洗脱10个柱体积，再用68％乙醇洗脱，洗脱流速为8ml/min，分别收集第12、13个柱体积的68％乙醇洗脱液，分别浓缩、冷冻干燥得雷公藤二萜醌和雷公藤萜a的混合粗品以及雷酚内酯、雷酚新内酯和异雷酚新内酯的混合粗品。

3、雷公藤二萜醌和雷公藤萜a混合粗品的hsccc分离纯化

应用高速逆流色谱分离纯化雷公藤二萜醌和雷公藤萜a混合粗品中的雷公藤二萜醌、雷公藤萜a，色谱条件如下：以体积比为7:6:7:5的正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂系统，以下相为固定相，上相为流动相，以等体积比的上相、下相混合溶剂为样品溶剂，转速850r/min，流速3ml/min，温度25℃，检测波长220nm，上样浓度10mg/ml，上样量10ml；根据色谱图(图1)收集雷公藤二萜醌、雷公藤萜a对应的流份，分别浓缩干燥即得雷公藤二萜醌、雷公藤萜a。

经检测，雷公藤二萜醌、雷公藤萜a的纯度分别为98.1％、98.4％；上述方法对雷公藤干燥根中雷公藤二萜醌、雷公藤萜a的制备回收率分别为85.3％、86.8％。

4、雷酚内酯、雷酚新内酯和异雷酚新内酯混合粗品的hsccc分离纯化

应用高速逆流色谱分离纯化雷酚内酯、雷酚新内酯和异雷酚新内酯混合粗品中的雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯，色谱条件如下：以体积比为8:7:7:6的正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水作为两相溶剂系统，以下相为固定相，上相为流动相，以等体积比的上相、下相混合溶剂为样品溶剂，转速850r/min，流速3ml/min，温度25℃，检测波长220nm，上样浓度10mg/ml，上样量10ml；根据色谱图(图2)收集雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯对应的流份，分别浓缩干燥即得雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯。

经检测，雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯的纯度分别为99.4％、98.2％、98.7％；上述方法对雷公藤干燥根中雷酚内酯、雷酚新内酯、异雷酚新内酯的制备回收率分别为92.3％、76.5％、93.6％。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种制备雷酚新内酯和异雷酚新内酯的方法，包括：步骤1、取雷公藤干燥根粉碎，用95％乙醇回流提取，抽滤，滤液减压浓缩至无醇味，等体积石油醚脱脂，收集水溶液；步骤2、以NKA‑9大孔树脂为吸附树脂，采用湿法将预处理的树脂装入吸附柱中，将上述水溶液上样于NKA‑9大孔树脂，先用15％乙醇洗脱10个柱体积，再用68％乙醇洗脱，收集第13个柱体积的68％乙醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥得混合粗品；步骤3、混合粗品的HSCCC分离纯化，两相溶剂系统为体积比为8:7:7:6的正己烷‑乙酸乙酯‑乙醇‑水。本发明方法制备的雷酚新内酯、异雷酚新内酯的纯度分别高达98.2％、98.7％；该方法对雷公藤干燥根中雷酚新内酯、异雷酚新内酯的制备回收率分别高达76.5％、93.6％。

技术研发人员：胡辉;何存银;徐小波
受保护的技术使用者：胡辉
技术研发日：2018.12.24
技术公布日：2019.02.22