一株肠杆菌株及其在合成2,3-丁二醇中的应用的制作方法

文档序号:21817613发布日期:2020-08-11 21:30阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一株肠杆菌,该菌株命名为肠杆菌kosakoniacowaniilt-1,菌株已于2017年12月29日保藏在“中国典型培养物保藏中心”,保藏号为cctccno:m2017850。

2.权利要求1所述肠杆菌在制备2,3-丁二醇的应用。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,包括如下步骤:

(1)菌株活化:

(2)种子培养:

(3)发酵培养:将步骤(2)中种子液接种到发酵培养基,发酵42~84h,可得含有2,3-丁二醇的发酵液;

所述发酵培养基包括如下组分:碳源80~140g/l,氮源4~8g/l,金属盐1~2.5g/l,ph值7.0~7.2,余量为水;

所述碳源为甘油、葡萄糖、乳糖的任意一种或几种的组合;所述氮源为牛肉膏、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、黄豆粉、小麦胚芽粉、花生饼粉、酵母粉中的任意一种或几种的组合;金属盐为硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸锰、氯化钙、硝酸钠中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)中,菌株活化的培养条件如下:

将肠杆菌k.cowaniilt-1接种到斜面培养基上,24~36℃静置培养24~36h,再次挑取单菌落划线到种子培养基上,24~36℃培养24~36h,得到活化菌种备用;

斜面培养基:蛋白胨20g/l,酵母粉5g/l,氯化钠10g/l,琼脂粉20g/l,自来水配制,调整ph值至7.0~7.2,121℃灭菌20min;

固体种子培养基:碳源10~30g/l,氮源4~8g/l,金属盐1.0~2.5g/l,琼脂粉20g/l,余量为水,ph7.0~7.2。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)中,种子培养包括如下步骤:将活化菌种接种到液体种子培养基中,温度24~36℃,震荡培养24~48h,得到发酵种子液;

液体种子培养基:碳源10~30g/l,氮源4~8g/l,金属盐1.0~2.5g/l,余量为水,ph7.0~7.2。

6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,所述发酵的温度为28~38℃。

7.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,所述发酵,其特征在于摇瓶接种量为1~10%;发酵罐接种量为1~30%;发酵罐发酵方式为分批补料法。

8.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述2,3-丁二醇的提取方法如下:取发酵液,离心除去菌体,进行减压蒸馏获得2,3-丁二醇体积分数为30%~50%的浓缩液,然后加入与浓酸也等体积的k2hpo4质量分数为45%的k2hpo4/乙醇溶液,形成双相体系,取上相中的溶液进行蒸馏,得到2,3-丁二醇。

9.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,2,3-丁二醇的粗提取方法为盐析萃取法。


技术总结
本发明公开了一株肠杆菌Kosakonia cowanii,菌株号LT‑1,已保藏于中国典型培养物保藏中心,登记入册的保藏号为CCTCC No:M 2017850,保藏日期为2017年12月29日。本发明还公开了肠杆菌在合成2,3‑丁二醇中的应用。该菌株以葡萄糖为碳源,酵母粉为氮源发酵合成2,3‑丁二醇的产量可达到42.56~212.49g/L。本发明的优点在于,发酵合成2,3‑丁二醇所使用的菌株为:肠杆菌K.cowanii LT‑1,该菌株的发酵特点在于,发酵合成2,3‑丁二醇产量高,副产物少,不仅降低了生产成本而且还有利于2,3‑丁二醇的纯化。本发明所述操作方法简单,成本较低,极具工业化推广应用前景,同时为2,3‑丁二醇的生物合成提供一种新工艺。

技术研发人员:吴凌天;卢成慧;杜悦;黎宇航;吴金男;徐悦;石悦
受保护的技术使用者:常熟理工学院
技术研发日:2019.02.02
技术公布日:2020.08.11
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