一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用与流程

文档序号:19160186发布日期:2019-11-16 01:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种展示cyhv-2膜蛋白的重组杆状病毒,其特征在于,orf25在杆状病毒表面的展示通过将orf25的胞外区与杆状病毒acmnpvgp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现,重组杆状病毒为载体表达的orf25融合蛋白的氨基酸序列为seqidno:3。

2.一种展示cyhv-2膜蛋白的重组杆状病毒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1、从感染cyhv-2的组织匀浆中提取总dna作为模板,以seqidno:1和seqidno:2为引物,扩增orf25的胞外区基因片段;

步骤2、将获得的pcr产物用bamhi和ecori双酶切,克隆到pqbd表达载体,获得重组质粒pqbd-orf25;

步骤3、用pqbd-orf25和线性化的acmnpvbacmidqbac-iii共转染sf9昆虫细胞,转染后5天收集p0代重组病毒;继续扩增,获得高滴度重组病毒;

步骤4、将重组杆状病毒稀释至滴度为4×103tcid50/ml,将2cm大小的异育银鲫放入其中浸浴2小时进行免疫。

3.权利要求1所述展示cyhv-2膜蛋白的重组杆状病毒在防控cyhv-2的感染疫苗制备过程中的应用。


技术总结
本发明公开了一种展示CyHV‑2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用,ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现,重组杆状病毒为载体表达的ORF25融合蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNO:3。本发明以截短的CyHV‑2糖蛋白ORF25为抗原基因,构建重组杆状病毒,成功将ORF25展示在病毒表面。用该重组病毒转导鲫鱼细胞,ORF25在鲫鱼细胞表达并展示在细胞表面。以该重组病毒作为CyHV‑2疫苗对异育银鲫进行浸泡免疫,攻毒试验表明该重组杆状病毒免疫可以对CyHV‑2感染提供83.3%的相对保护率。

技术研发人员:陈红英;曹志伟;南昊;许晓东
受保护的技术使用者:西北农林科技大学
技术研发日:2019.08.07
技术公布日:2019.11.15
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