一种牛磺熊去氧胆酸的制备方法与流程

本申请是“一种牛磺熊去氧胆酸的制备方法”的分案申请，原申请的申请日为2015年12月21日，原申请的申请号为201510761902.1。

本发明涉及一种医药原料药及其制备方法，具体公开了一种牛磺熊去氧胆酸的制备方法。

背景技术：

牛磺熊去氧胆酸化学名为2-[[(3α，5β，7β)-3，7-二羟基-24-氧代胆甾烷-24-基]氨基]乙烷磺酸二水合物，结构式如下：。

牛磺熊去氧胆酸是天然熊胆的有效成分，有着多种生理药理作用，主要用于固醇性胆囊结石、胆汁郁积性肝病、胆汁反流性胃炎等。临床研究发现，牛磺熊去氧胆酸与熊去氧胆酸相比，溶石速度快、全溶提高、且无明显不良反应。由于天然资源和动物保护的限制，药用牛磺熊去氧胆酸主要通过化学半合成法得到。目前市场上主要以鹅去氧胆酸为原料合成熊去氧胆酸，但通过此途径制备获得的熊去氧胆酸不可避免的含有一定量的鹅去氧胆酸，导致在牛磺熊去氧胆酸的制备过程中，会产生一定量的杂质牛磺鹅去氧胆酸。而牛磺鹅去氧胆酸具有一定的毒性，能使人体内谷氨酰转移酶(alt)升高，引起细胞凋亡而造成严重的肝组织损伤。

到目前为止，高纯度牛磺熊去氧胆酸的制备方法有以下报道：

申请号cn201110459028.8的专利文献报道了一种高纯度牛磺熊去氧胆酸的制备方法：第一步将熊去氧胆酸溶于n’n-二甲基甲酰胺或者二甲亚砜，加入胺类化合物（n-羟基丁二酰亚胺或n-羟基邻苯二甲酰亚胺）、缩合剂和4-二甲氨基吡啶，在室温下搅拌反应，得到活化酯反应液a；第二步将活化酯反应液a加入到牛磺酸钠盐水溶液中反应，水溶液洗涤、酸化后得到产品，含量99%，收率85%。该方法第一步熊去氧胆酸由于在体系中完全溶解，在缩合剂的条件下会自身缩合副反应；同时第二步反应体系中含有水，活化酯反应液a在水中会产生水解反应，影响收率，且该方法对具有肝脏毒性的异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸并没有进行有效控制。

申请号为cn201010552339.4的专利文献报道了以熊去氧胆酸为原料，经过与氯甲酸酯反应得到混合酸酐溶液，再与牛磺酸钾或钠水溶液反应得到牛磺熊去氧胆酸盐，再经过脱盐纯化和重结晶得到牛磺熊去氧胆酸，纯度99.6%，其中牛磺鹅去氧胆酸含量0.3%~0.6%，其它最大单杂含量0.05%。该方法用到的氯甲酸酯多为化学管制品或剧毒品，使用不方便且不易储存；同时，中间体为活泼酸酐，反应活性强，副反应多，粗品纯度不高。

综上所述，现有牛磺熊去氧胆酸的合成过程中，由于合成方法副反应多，粗品纯度不高，大多未能对异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸进行有效控制；或者需要在合成过程中引入管制品或剧毒品，才能实现对异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸的有效控制，但不适用于工业化生产。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种高纯度牛磺熊去氧胆酸的制备方法，该制备方法成本低、操作简单可控、产品收率和纯度高、且异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸可以得到有效控制，工艺环保并适于工业化生产。

本发明的合成路线如图1所示：步骤（1）：室温下将熊去氧胆酸和酚类化合物加入氯代烷烃有机溶剂中，降温至10-20℃，加入缩合剂，滴加完毕，在5-45℃下保温反应至完全，过滤后浓缩滤液得到粗品，重结晶后得到熊去氧胆酸酚酯精制品如式（ⅱ）所示；步骤（2）：在50-80℃下，将熊去氧胆酸酚酯精制品与牛磺酸盐加入有机醇溶剂中反应完全，降至室温后过滤，滤饼溶于水中，以酸调节ph值至1.0-3.0，搅拌析晶得到牛磺熊去氧胆酸。

进一步，步骤（1）中所述酚类化合物的取代基r为氢原子、硝基或丙酰基。更进一步，步骤（1）中所述酚类化合物的取代基r优选为丙酰基。

进一步，步骤（1）中所述氯代烷烃有机溶剂选自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿中一种或多种。

更进一步，步骤（1）中所述氯代烷烃有机溶剂优选为二氯甲烷。

进一步，步骤（1）中所述缩合剂为n,n’-二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-基碳二亚胺盐酸盐。

进一步，步骤（1）中所述熊去氧胆酸、酚类化合物、缩合剂的投料摩尔比例为1.0:1.0:1.0~1.0:2.0:2.0。

更进一步，步骤（1）中所述熊去氧胆酸、酚类化合物、缩合剂的投料摩尔比例为1.0:1.0:1.0。

进一步，步骤（2）中所述有机醇溶剂选自正丁醇、乙醇、甲醇中一种或多种。

更进一步，步骤（2）中所述有机醇溶剂优选为正丁醇

进一步，步骤（2）中所述牛磺酸盐为牛磺酸钾盐或牛磺酸钠盐。

进一步，步骤（2）中所述熊去氧胆酸酚酯精制品与牛磺酸盐的投料摩尔比为1:1.2~1:5。

更进一步，步骤（2）中所述熊去氧胆酸酚酯精制品与牛磺酸盐的投料摩尔比为1:3。

本发明由于采用上述技术方案，带来了意想不到的效果：

1）本专利方法通过对步骤（1）熊去氧胆酸酚酯进行重结晶去除异构体杂质鹅去氧胆酸酚酯，步骤（2）在正丁醇体系中反应去除异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸，特别是后续的正丁醇反应体系可以有效的将牛磺鹅去氧胆酸及其他杂质去除，致使异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸在最终产品中未检出，获得高纯度的牛磺熊去氧胆酸。

2）步骤（2）中牛磺熊去氧胆酸的制备在非水溶剂正丁醇中进行，避免了中间体发生水解副反应，提高了反应的收率。

3）步骤（1）使用n,n'-二环己基碳二亚胺直接缩合得到活性酯中间体，避免使用化学剧毒品氯甲酸酯，同时提高了反应的操控性。

4)步骤（1）使用氯代烷烃有机溶剂，由于原料熊去氧胆酸在该类溶剂中溶解度有限，缩合反应过程为边溶解边反应，另一个反应原料酚类化合物保持大过量的状态，避免产生熊去氧胆酸自身缩合副反应，获得的产品收率、纯度更高。

5)取代的苯酚类试剂的引入，使以熊去氧胆酸为原料制备得到牛磺熊去氧胆酸的整个过程，实现用hplc进行有效的量化控制。

上述各优点使得本发明中的方法成本低廉；避免了使用化学管制品或昂贵的缩合试剂；生产过程从无法监控状态变为生产过程可控，大大增加了生产工艺的可控性；同时操作和后处理简单，产品收率和纯度高，同时可以很好的控制其异构体杂质牛磺鹅去氧胆酸，更适合工业化大生产。

附图说明

图1为本发明牛磺熊去氧胆酸的合成路线。

图2为熊去氧胆酸酚4-丙酰基酚酯的hplc分析谱图。

图3为熊去氧胆酸酚4-丙酰基酚酯的核磁共振氢谱图。

图4为牛磺熊去氧胆酸的hplc分析谱图。

图5为牛磺熊去氧胆酸的核磁共振氢谱图。

图6为牛磺熊去氧胆酸对照品的核磁共振氢谱图。

具体实施情况

以下通过实施例进一步说明本发明。

实施例一

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸20.0g(50.9mmol)和苯酚4.79g(50.9mmol)加入100ml二氯甲烷中，搅拌降温至10-20℃。缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷溶液，滴加完毕，30-45℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物22.68g，收率95.0%。

上述油状物以乙腈重结晶，得到白色黏状物，直接用于下一步反应。

室温下，将牛磺酸钾12.55g(76.4mmol)和上述油状物加入正丁醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，tlc(乙酸乙酯：石油醚=1:1)监控，反应完全。反应体系降温至室温，过滤干燥得白色固体23.53g。然后将白色固体加入至110ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至1.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体22.16g,总收率81.2%(纯度99.7%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.04%。

实施例二

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸10.0g(25.4mmol)和对硝基苯酚3.90g(28.0mmol)加入80ml二氯甲烷中，搅拌降温至15℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷溶液，滴加完毕，5-20℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物12.03g，收率92.0%。

上述油状物以乙腈重结晶，得到白色黏状物，直接用于下一步反应。

室温下，将牛磺酸钾6.28g(38.2mmol)和上述油状物加入正丁醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，

反应体系降温至室温，过滤干燥得白色固体12.23g。然后将白色固体加入至60ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至3.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体10.82g,总收率79.3%(纯度99.6%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.05%。

实施例三

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸50.0g(127.4mmol)和4-羟基苯丙酮21.04g(140.1mmol)加入200ml二氯甲烷中，搅拌降温至15℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷溶液，滴加完毕，30-45℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物65.63g。

上述油状物加入乙腈中重结晶，得到牛磺熊去氧胆酸4-丙酰基酚酯白色固体65.03g，收率97.3%，纯度99.6%。

室温下，将牛磺酸钾30.53g(0.19mol)和上述白色固体加入正丁醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，反应体系降温至室温，过滤干燥得白色固体65.21g。将后将白色固体加入至100ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体58.27g,总收率85.4%(纯度99.9%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.04%。

实施例四

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸10.0g(25.5mmol)和4-羟基苯丙酮4.21g(28.0mmol)加入50ml二氯甲烷中，搅拌降温至15℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷溶液，滴加完毕，20-35℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物13.09g。

上述油状物加入乙腈中重结晶，大量白色固体析出，过滤干燥得到白色固体12.76g收率97.5%，纯度99.6%。

室温下，将牛磺酸钾5.99g(36.5mmol)和上述白色固体加入甲醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，

反应体系降温至室温，过滤干燥得白色固体11.89g。上述白色固体加入至100ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体10.72g,总收率78.6%(纯度99.7%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.04%。

实施例五

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸10.0g(25.5mmol)和4-羟基苯丙酮4.21g(28.0mmol)加入50ml二氯甲烷中，搅拌降温至15℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷溶液，滴加完毕，20-30℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物13.15g。

上述油状物加入乙腈中重结晶，大量白色固体析出，过滤干燥得到白色固体12.86g收率97.8%，纯度99.3%。

室温下，将牛磺酸钾6.04g(36.8mmol)和上述白色固体加入乙醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，反应体系降温至室温，过滤干燥得白色固体13.17g。然后将白色固体加入至100ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体11.08g,收率81.2%(纯度99.5%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.04%。

实施例六

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸10.0g(25.5mmol)和4-羟基苯丙酮4.21g(28.0mmol)加入50ml二氯甲烷中，搅拌降温至10-20℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺和4-二甲基氨基吡啶的二氯甲烷溶液，滴加完毕，20-30℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物13.10g。

上述油状物加入至乙腈中重结晶，大量白色固体析出，过滤干燥得到白色固体12.73g收率97.2%，纯度99.3%。

室温下，将牛磺酸钠5.39g(36.4mmol)和上述白色固体加入正丁醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，反应体系降温至室温，过滤干燥得白色固体12.87g。然后将白色固体加入至100ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体11.04g,收率80.9%(纯度99.7%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.04%。

实施例七

熊去氧胆酸4-丙酰基酚酯的制备

室温下，将熊去氧胆酸10.0g(25.5mmol)和4-羟基苯丙酮4.21g(28.0mmol)加入50ml二氯甲烷中，搅拌降温至10-20℃。

10-20℃下，缓慢滴加1-(3-二甲氨基丙基)-3-基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的二氯甲烷溶液，滴加完毕，20-30℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物14.10g。

上述油状物加入至乙腈中重结晶，大量白色固体析出，过滤干燥得到白色固体13.05g收率97.6%，纯度99.1%。

实施例八

熊去氧胆酸4-丙酰基酚酯的制备

室温下，将熊去氧胆酸10.0g(25.5mmol)和4-羟基苯丙酮8.42g(56.0mmol)加入50ml二氯甲烷中，搅拌降温至10-20℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺的二氯甲烷溶液，滴加完毕，10-20℃反应2小时后，过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物16.23g。

上述油状物加入乙腈中重结晶，大量白色固体析出，过滤干燥得到白色固体13.18g收率98.6%，纯度95.3%，其中4-羟基苯丙酮4.2%。

实施例九

牛磺熊去氧胆酸的制备

按实施例三方法合成得到熊去氧胆酸4-丙酰基酚酯12.67g(24.1mmol)与牛磺酸钾39.66g(240.1mmol)加入至正丁醇中，80℃反应6小时后降温至室温，过滤干燥得白色固体39.78g。上述白色固体加入至100ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体10.76g，收率83.2%(纯度99.5%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.05%。

实施例十

牛磺熊去氧胆酸的制备

按实施例三方法合成得到熊去氧胆酸4-丙酰基酚酯13.01g(24.8mmol)与牛磺酸钾4.07g(24.8mmol)加入至正丁醇中，40℃反应6小时后tlc反应未完全。延长反应时间至10小时，仍有少量原料，反应放弃。

实施例十一

牛磺熊去氧胆酸的制备

按实施例三方法合成得到熊去氧胆酸4-丙酰基酚酯10.25g(19.5mmol)与牛磺酸钾4.81g(29.3mmol)加入至正丁醇中，回流反应(115℃)4小时后降温至室温，过滤干燥得淡黄色固体9.42g。上述淡黄色固体加入至100ml水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌浅黄色固体析出，过滤，干燥得到浅黄色固体8.08g,收率77.2%(纯度97.9%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.16%。

实施例十二

牛磺熊去氧胆酸的制备

室温下，将熊去氧胆酸4.0kg(10.19mol)和4-羟基苯丙酮1.53kg(10.19mol)加入16l二氯甲烷中，搅拌降温至15℃。

10-20℃下，缓慢滴加n,n’-二环己基碳二亚胺2.10kg（10.19mol）的二氯甲烷溶液滴加完毕，20-30℃反应2小时后过滤，除去不溶物，滤液浓缩得到浅黄色油状物5.67kg。

上述油状物加入至乙腈中重结晶，大量白色固体析出，过滤干燥得到白色固体5.18kg(9.9mol)，收率96.9%，纯度99.6%。其hplc图谱及核磁氢谱见图2和图3。

室温下，将牛磺酸钾4.84kg(29.6mol)和上述白色固体加入正丁醇中，搅拌。加热至80℃，并保温反应6小时后，降温至室温，过滤干燥得白色固体5.26kg。然后将白色固体加入至11l水中，搅拌溶解完全。滴加浓盐酸调节ph值至2.0。搅拌白色固体析出，过滤，干燥得到白色固体4.58kg,总收率86.7%(纯度99.9%，hplc)，牛磺鹅去氧胆酸未检出，最大未知单杂0.05%。其hplc图谱及核磁氢谱见图4和图5。且本品核磁氢谱谱图图5与对照品核磁氢谱图6谱图比较基本一致，结构正确。

以上内容是结合具体的修选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。