检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用与流程

文档序号:19419317发布日期:2019-12-14 01:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法,其特征在于,所述方法包括:根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物,采用所述引物对待测样品dna进行扩增,若检测扩增产物中含有特异性dna片段,则所述待测样品含有布鲁氏菌野毒株。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述布鲁氏菌减毒活疫苗株包括a19、s2、m5、s19或rev.1中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述引物包括如下(a)-(c)中的一种或多种:

(a)a19-f:5’-gggaggagggcagttgtt-3';

a19-r:5'-gccaccgcattccgataa-3';

(b)s2-f:5-’ggcggcacaagaggaact-3’;

s2-r:5'-gcgggtacgccttgattg-3';

(c)m5-f:5’-attcccatgactgaagaaca-3’;

m5-r:5’-taacgcttccctcgattt-3’。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,(a)引物扩增产物的大小为254bp;和/或,

(b)引物扩增产物的大小为300bp;和/或,

(c)引物扩增产物的大小为207bp。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述扩增包括普通pcr扩增、qpcr扩增、rpa扩增或lamp扩增。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,采用多重pcr的方式进行检测。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述待测样品来源于布鲁氏菌减毒活疫苗株的被接种体,所述被接种体的接种时间为4-90天。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述被接种体包括牛、羊、猪、犬或人。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,所述待测样品为血液、奶样或组织。

10.如权利要求1-9任一项所述的方法在如下(i)-(iii)中的应用:

(i)鉴别布鲁氏菌减毒活疫苗株和布鲁氏菌野毒株;

(ii)检测待测样品是否感染布鲁氏菌;

(iii)鉴别待测样品所感染的布鲁氏菌的类型。


技术总结
本发明提供了一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用,涉及生物技术领域,本发明提供的检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法,根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物,再采用所述引物对待测样品DNA进行PCR扩增,根据检测结果进行判断。该方法根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物,即设计得到的引物用于扩增的是缺失基因中的一部分或全部片段,因此,该引物在有效扩增出野毒株基因的基础上不会扩增到减毒活疫苗株基因,能够准确、有效地对布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株进行区分,普适性广,特异性强,且准确率高。

技术研发人员:贺笋;何传雨;任立松;李延涛;赵海龙;刘梦志;吴冬玲
受保护的技术使用者:天康生物股份有限公司
技术研发日:2019.10.11
技术公布日:2019.12.13
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