一种体外模拟细胞因子释放对间接靶细胞表型影响的方法与流程

文档序号:26013481发布日期:2021-07-23 21:34阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种在体外模拟crs对其它细胞影响的系统,具有上层隔室和下层隔室,上下层隔室之间通过微孔膜隔开,其特征再于上层隔室中a细胞b细胞共培养,在下层隔室中放入c细胞。

2.如权利要求1所述的系统,其特征在于:

a细胞选自靶向cd123cd19,cd20,cd22,bcma,muc-1之一的car-t细胞。

3.如权利要求1或2所述的系统,其特征在于:b细胞为a细胞所对应靶细胞,为靶抗原阳性细胞或靶抗原阴性细胞,选自以下细胞或细胞系之一:白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肝癌、肺癌、肾癌的细胞系及原代细胞,或人体正常组织原代细胞系及原代细胞。

4.如权利要求3所述的系统,其特征在于:b细胞为阳性对照组或实验组,选自人白血病细胞系molm-13、原代aml细胞、原代aml-2、原代aml-3。

5.如权利要求1所述的系统,其特征在于:c细胞选自在细胞因子释放综合症中参与或受影响的单核细胞,巨噬细胞,t细胞,b细胞,平滑肌细胞,基质细胞,肿瘤细胞。

6.如权利要求5所述的系统,其特征在于:c细胞为间接靶细胞,选自huvec,pbmcs,cd34+g-pbmcs。

7.如权利要求1所述的系统,其特征在于:微孔膜的孔径小于3μm。

8.使用如权利要求1-7之一模拟crs对其它细胞影响的系统的方法,其特征在于包括以下步骤:

1)将a细胞与b细胞在上层隔室共孵育;

2)在下层隔室中加入需要研究的c细胞;

3)共孵育一定时间后,收集下层c细胞进行表型的检测,收集培养基进行细胞因子检测或冻存备用。

9.如权利要求7所述的使用方法,其特征在于:

a细胞为t细胞,通过采集人外周血获得并通过淋巴细胞分离液分离得到pbmcs,pbmcs通过cd3/cd28磁珠活化,并在x-vivo-15+10%fbs,il-250iu/ml条件下培养。

10.如权利要求7所述的使用方法,其特征在于:

a细胞选自靶向cd123cd19,cd20,cd22,bcma,muc-1之一的car-t细胞。

11.如权利要求7所述的使用方法,其特征在于:b细胞为a细胞所对应靶细胞,为靶抗原阳性细胞或靶抗原阴性细胞,选自以下细胞或细胞系之一:白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肝癌、肺癌、肾癌的细胞系及原代细胞,或人体正常组织原代细胞系及原代细胞。

12.如权利要求11所述的使用方法,其特征在于:b细胞为阳性对照组或实验组,选自人白血病细胞系molm-13、原代aml细胞、原代aml-2、原代aml-3。

13.如权利要求7所述的使用方法,其特征在于:c细胞选自在细胞因子释放综合症中参与或受影响的单核细胞,巨噬细胞,t细胞,b细胞,平滑肌细胞,基质细胞,肿瘤细胞。

14.如权利要求13所述的使用方法,其特征在于:c细胞为间接靶细胞,选自huvec,pbmcs,cd34+g-pbmcs。


技术总结
本发明为一种体外模拟细胞因子释放对间接靶细胞表型影响的方法,涉及免疫细胞研究领域,特别是CAR‑T细胞与其对应靶细胞共孵育时其细胞因子对间接靶细胞表型影响的体外研究。CRS体外模型是在Corining Transwell 12孔板(0.4μm孔径,12mm底面积)中,上层隔室加入CART细胞(A细胞)和对应靶细胞(B细胞),下层12孔板中加入间接靶细胞(C细胞,包括HUVEC,PBMCs,CD34+磁珠分选后的G‑PBMCs)。小于0.4μm孔径物质可自由通过(如细胞因子),而细胞无法自由通过,从而模拟CAR‑T细胞与肿瘤细胞接触时释放细胞因子对HUVEC等间接靶细胞表型的影响。

技术研发人员:张斌;孙耀;赵龙
受保护的技术使用者:中国人民解放军总医院第五医学中心
技术研发日:2020.01.22
技术公布日:2021.07.23
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